Práctica 1

PRÁCTICA No.
GERMINACIÓN DE SEMILLAS DE TOMATE DE ÁRBOL EN TIERRA E IN VITRO
INTRODUCCIÓN
Las semillas resultan de la doble fecundación de la oósfera y de los núcleos polares por
dos espermatozoides contenidos en un grano de polen. Consecuentemente una semilla consta del
embrión (2n) y del endospermo (3n), además de la cubierta o testa que es 2n pero tiene origen
exclusivamente materno. El embrión está formado por el eje embrionario (epicótilo, hipocótilo,
nudo cotiledonario y radícula) que representa la futura planta en miniatura y los cotiledones (uno
en mococotiledoneas y dos en dicotiledóneas). El endospermo constituye un tejido de reserva
que es usado por la plántula en germinación como fuente de energía. En algunas semillas que
carecen de endospermo, los cotiledones se engrosan y asumen las funciones de reserva.
Las semillas germinan cuando se las coloca en un ambiente con condiciones adecuadas
de temperatura y humedad. El primer evento en este proceso es la imbibición, que ocurre por el
ingreso de agua con el consiguiente hinchamiento de la semilla y ruptura de la testa. Lo primero
en emerger es la radícula y luego el hipocotilo que aparece doblado a manera de un gancho y que
al enderezarse eleva los cotiledones sobre el suelo (germinación epigea). Algunas semillas
carecen de hipocotilo y los cotiledones quedan dentro del suelo (germinación hipogea). Durante
la germinación tienen lugar procesos metabólicos de activación de enzimas y acumulación de
hormonas.
Algunas semillas no germinan inmediatamente y requieren de cierto tiempo hasta
completar los procesos de maduración o eliminar inhibidores de crecimiento acumulados en las
cubiertas seminales. En estos casos se dice que las semillas están durmientes. Otras requieren de
tratamientos especiales como un período de frío o de escarificación. Finalmente, las semillas
almacenadas por períodos largos, pierden la viabilidad y ya no germinan más.
Aunque el suelo es el ambiente natural para la germinación de las semillas, en ocasiones,
se requiere hacerlo in vitro. El éxito de las diversas modalidades de cultivo in vitro depende de la
posibilidad de mantener absoluta asepsia en el interior del recipiente que contiene el medio de
cultivo y el segmento de tejido o las semillas que darán origen a las nuevas plantas. En ocasiones
es difícil, si no imposible, lograr una desinfección adecuada del segmento vegetal a introducir en
el medio de cultivo, ya sea porque está extremadamente contaminado o porque es excesivamente
sensible a los desinfectantes. En tales casos, una práctica sensata es germinar semillas (que son
más fáciles de desinfectar) in vitro, para luego utilizar el tejido generado en dichas condiciones
para las aplicaciones que interese.
Otra razón para germinar semillas in vitro es la incapacidad de algunas de ellas para
hacerlo en condiciones naturales, tal es el caso de las semillas de las orquídeas que requieren de
una simbiosis con micorrizas para germinar en la naturaleza. Semillas inmaduras (rescate de
embriones) también encuentran condiciones favorables de germinación in vitro. Algunas veces
se puede encontrar también que la germinación resulta acelerada cuando se la realiza in vitro en
comparación con las condiciones externas.
OBJETIVOS
- Germinar semillas de tomate de árbol en suelo e in vitro

- Determinar el porcentaje y tiempo de germinación de semillas de tomate y naranjilla en
suelo e in vitro.
- Comparar el porcentaje y tiempo de germinación entre las semillas germinadas en suelo e
in vitro.
MATERIALES
 Bandejas de plástico
 Semilleros de plástico
 Papel absorbente
 Tierra abonada (humus)
 Semillas de tomate de árbol
 Agua potable
 Plastic wrap
 Pinzas
 Cajas de Petri estériles
 Alcohol 70%
 Hipoclorito de sodio 2.5%
 Tween 20
 Mechero
 Cámara de flujo laminar
 Frascos de vidrio con medio MS
METODOLOGÍA
Siembra de semillas en suelo

1. Colocar el semillero de plástico dentro de una de las bandejas plásticas y éstas sobre la
mesa del invernadero
2. Tapar los orificios del fondo del semillero con un trozo de papel absorbente
3. Llenar los pozos del semillero con tierra de humus cernida
4. Rociar agua sobre la tierra en el semillero
5. Usando una pinza, colocar una semilla de tomate de árbol, en cada sitio, a una
profundidad aproximada de 3 mm.
OJO: anotar cuántas semillas se siembran en cada sitio.
6. Cubrir con tierra cada una de las semillas
7. Agregar agua en la bandeja plástica hasta cubrir su fondo
8. Cubrir con plástico los semilleros por 3 días
OJO: revisar todos los días, si está seco humedecer
9. A los 3 días retirar el plástico del semillero
10. Mantener húmedo el semillero durante todo el experimento y hacer observaciones
permanentes del material vegetal.
11. Cuando las semillas hayan germinado, registrar el tiempo transcurrido desde la siembra y
contar el número de plántulas obtenidas y relacionarlo con el número de semillas
sembradas para calcular el porcentaje de germinación.
Siembra de semillas in vitro
Dentro de la cámara de flujo laminar:

1. Colocar las semillas por 3 minutos en alcohol 70%
2. Lavarlas en agua destilada estéril
3. Transferirlas por 15/20 minutos a hipoclorito de sodio 2.5% + 4-5 gotas de Tween 20
4. Realizar 4-5 lavados en agua destilada estéril
5. Sembrarlas en medio de cultivo MS con pinzas flameadas (15-20 semillas / frasco)
6. Incubar en el cuarto de cultivo
7. Realizar observaciones periódicas para determinar el tiempo y porcentaje de
germinación. Adicionalmente realizar observaciones y registrar la contaminación del
material vegetal.
Anexo No. 1: Composición del medio de cultivo de Murashige & Skoog 1962.
Macronutrientes
MS mg/L Solución Stock g/L (10x)
NH4NO3 1650.0 16.5
KNO3 1900.0 19.0
CaCl2.2 H2O 440.0 4.4
MgSO4.7 H2O 370.0 3.7
KH2PO4 170.0 1.7
Micronutrientes
H3BO3 6.2 0.62
MnSO4. H2O 22.3 2.23
ZnSO4.7 H2O 8.6 0.86
KI 0.83 0.083
Na2MoO4.2 H2O 0.25 0.025
CoCl2.6H2O 0.025 0.0025
CuSO4.5 H2O 0.025 0.0025
Orgánicos
Acido nicotínico 1.0 0.02
Tiamina HCl 0.1 0.002
Piridoxina HCl 1.0 0.02
Mio Inositol 100.0 2
Glicina 2.0 0.04
Quelato de Hierro
(Fe-EDTA)
Na2EDTA 37.3 3.72
FeSO4.7H2O 27.8 2.78

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