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(10) (Fig. 1). Debido a que las Colinas de

Arena son geo-lógicamente jóvenes y
ecológicamente distintas, se prevé que las
poblaciones de ratones ciervos que habitan en la
LA EVOLUCIÓN GENÉTICA zona han evolucionado recientemente y se han
seleccionado fuertemente las adaptaciones a

Vinculando una mutación a este entorno. Un ejemplo de tal adaptación es la

pigmentación. El pelaje dorsal de los ratones

la supervivencia en ratones
ciervos está correlacionado con el color del
sustrato, con los ratones ligeros ocupando las
ligeras Sand Hills (11). La hipótesis principal para

salvajes este cambio fenotípico es la selección para la

cripse contra los depredadores aviares (11-13).
Las diferencias de pigmentación entre los tipos
Rowan D. H. Barrett1*†, Stefan Laurent2†‡, Ricardo Mallarino3,4†§, Susanne P. de hábitat se asocian con múltiples mutaciones
Pfeifer5, Charles C. Y. Xu1, Matthieu Foll6, Kazumasa Wakamatsu7, Jonathan S. en el Agouti (14, 15), un locus que media en

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Duke-Cohan8, Jeffrey D. Jensen5, Hopi E. Hoekstra3 ,4* la producción de pigmento amarillo
(feomelanina) en vertebrados (16, 17) y en
La evolución adaptativa en entornos nuevos o cambiantes puede ser difícil de predecir ratones ciervos, específicamente (13). Así pues,
porque las conexiones funcionales entre el genotipo, el fenotipo y la aptitud física son los ratones ciervos de Sand Hills y el locus de
complejas. Aquí, hacemos estas conexiones explícitas combinando experimentos de Agouti son un sistema útil para probar
campo y de laboratorio en ratones salvajes. Primero estimamos directamente la directamente los mecanismos ecológicos y mo-
selección natural en los rasgos de pigmentación y un locus de pigmentación subyacente, leculares por los que las variantes de secuencias
Agouti, utilizando recintos experimentales de ratones en diferentes colores de suelo. A específicas alteran el fenotipo y, en última
continuación, mostramos cómo una mutación en Agouti asociada a la supervivencia instancia, la aptitud.
causa un color de capa más claro a través de cambios en sus propiedades de unión a las
proteínas. Juntos, nuestros hallazgos demuestran cómo una variante de secuencia altera Selección divergente sobre la
el fenotipo y luego revelan las consiguientes consecuencias ecológicas que impulsan los pigmentación en los recintos

A
cambios en la frecuencia de los alelos de la población, iluminando así el proceso de
evolución por selección natural.

unque un número creciente de estudios adaptación de los rasgos en un vertebrado

experimentales
Para probar explícitamente una selección que
favorezca los fenotipos de pigmentos adaptados
localmente, recogimos 481 ratones salvajes de la
"oscuridad" ancestral y derivamos
sitios "ligeros". A continuación, introdujimos 75 a
genómicos han señalado genes que salvaje. Forjar estas conexiones mecánicas 100 individuos en proporciones iguales sobre la
contribuyen a la evolución fenotípica (1- ayudará a comprender las consecuencias base del sitio de la tapa (es decir, oscuro frente a
3), a menudo los mecanismos ecológicos evolutivas de los cambios ambientales en las claro) en cada uno de los seis recintos de campo
que impulsan la evolución de los rasgos no poblaciones naturales (7, 8). (tres en cada hábitat) que medían 50 m por 50 m
se han puesto a prueba. Por otra parte Aprovechamos la reciente evolución de las y estaban desprovistos de ratones nativos y
Por otra parte, los estudios de campo han poblaciones de ratones ciervos (Peromyscus depredadores terrestres pero abiertos a los
documentado la acción de la selección natural maniculatus), de color criptológico, para depredadores aviares (Fig. 1) (18). Entre estos
sobre los rasgos (4-6), pero los mecanismos investigar las consecuencias genéticas de la individuos fundadores, identificamos diferencias
moleculares que no dependen de ella son selección natural divergente. Las Colinas de significativas en cinco rasgos de pigmentación
típicamente desconocidos. Combinamos un Arena de Nebraska se formaron a partir de cuarzo (brillo dorsal, croma dorsal, brillo ventral,
experimento de campo manipulador a gran escala de color claro hace ~8.000 a 10.000 años (9). Este croma ventral y patrón de la cola) entre los
con pruebas genéticas y bioquímicas de hábitat de dunas difiere del hábitat circundante ratones capturados en sitios oscuros y claros
laboratorio para identificar tanto los en las propiedades físicas, sobre todo en el color (todos los rasgos: P < 0,001) (fig. S1). Fenotipos
mecanismos eco-lógicos como los moleculares del suelo. de los pigmentos
subyacentes

Barrett y otros, Science 363, 499-504 1 de febrero de 1 de 6

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Fig. 1. Sitio experimental y variación ambiental en la región de Sand Hills de Nebraska.

(A) Mapa de Nebraska que muestra la región de Sand Hills (color claro) y la ubicación del experimento del
recinto . (B) Mapa de los recintos replicados (cuadrados) y las ubicaciones de muestreo de los ratones
introducidos en los recintos (estrellas) utilizados en el experimento (tabla S8). Los asteriscos de color azul
claro indican los seis recintos utilizados; no introdujimos ratones en el cuarto recinto en ninguno de los dos
sitios. (C) Los recintos se muestran en el sitio de la luz en el hábitat de Sand Hills (camión para la escala). (D
y E) El hábitat típico se muestra en el sitio de Sand Hills (D, hábitat claro) y fuera de Sand Hills (E, hábitat
oscuro); los recintos muestran el sustrato típico del suelo.

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fueron en gran medida independientes, con de un solo recinto, no se detectó ninguna [~1% de tasas de ataque; (14)]. Además, los
correlaciones débiles y en su mayoría selección direccional significativa en ningún otro búhos son depredadores muy eficaces de los
insignificantes entre los rasgos [coeficiente de rasgo salvo el brillo dorsal (tablas S2 y S3). ratones y pueden des- criminar entre diferentes
determinación (R2) < 0,06 para todos los Tampoco hubo pruebas de selección cuadrática o morfos de color incluso bajo condiciones de luz
rasgos] (tabla S1), lo que sugiere que estos correlacional en los datos (tablas S4 y S5). Por de luna (12). Durante nuestro experimento de
rasgos pueden ser objeto de una selección lo tanto, es probable que la selección natural campo, observamos a los búhos cazando en los
independiente. divergente actuara sobre el brillo dorsal entre antiguos sitios perimentales (ocho observaciones
Utilizando un enfoque de marcaje-recaptura, los dos tipos de ambiente. durante 70 noches). Debido a que los recintos
se hizo un seguimiento de la supervivencia de Trabajos anteriores con ratones modelo de excluyen en gran medida a otros
estos individuos introducidos durante cinco plastilina sugieren que la depredación aviar es alta depredadores, sugerimos que la significativa
períodos de muestreo de dos semanas a lo largo en esta región. as- sociación entre el brillo dorsal y la
de 14 meses, momento en el que la mortalidad supervivencia
alcanzó el 100% en la mayoría de los recintos
(Fig. 2, A y B), similar a las tasas de mortalidad
en el medio silvestre (19). Dado que el error de
muestreo es inversamente proporcional al
número de supervivientes, centramos nuestros
análisis en una comparación entre las
poblaciones colonizadoras (punto de tiempo 0)
y los supervivientes presentes en el punto de
tiempo 1 (~3 meses después del comienzo del

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experimento), cuando las tasas medias de
supervivencia eran del 45%. Independientemente
del origen o fenotipo del muestreo, las tasas
de supervivencia fueron el doble en recintos
oscuros que en recintos claros (60% versus 30%
en el punto de tiempo 1). Los ratones
introducidos en recintos que coincidían con el
tipo de hábitat en el que fueron capturados
originalmente tuvieron una mayor
supervivencia que los ratones no locales (Fig.
2, A y B, y tabla S2) (18), lo que sugiere una
adaptación local de las poblaciones de cada
tipo de entorno.
Para comprobar explícitamente si la
pigmentación puede ser un tributo a la adaptación
local, probamos los cambios en la distribución
de los rasgos de la pigmentación a lo largo del
tiempo. Documentamos una selección
significativa de la pigmentación, que se
manifestó principalmente a través de una
mayor supervivencia de los ratones con
pigmentación dorsal localmente críptica [los
intervalos creíbles bayesianos del 95% del efecto
de la interacción entre la luminosidad dorsal y el
tratamiento experimental sobre la
supervivencia no contienen cero (18)]. (Fig. 2, C
a F, y tablas S2 y S3). En los recintos claros, los
ratones supervivientes eran, en promedio, 1,44
veces más claros en color dorsal que el ratón
medio de las poblaciones fundadoras, mientras
que en los recintos oscuros, el ratón medio era
1,98 veces más oscuro. Los gradientes de
selección lineal para el brillo dorsal fueron
positivos en los tres recintos de sitios claros y
negativos en los tres recintos de sitios oscuros
(prueba t unilateral de gradientes de selección
lineal en recintos claros frente a recintos
oscuros: t = -6,079, df = 2,518, P = 0,015) (tabla
S3). Con la excepción del croma ventral en un

7Departamento
1Museo Redpath
y Departamento de Biología, Universidad de Química, Escuela de Ciencias de la Salud de la Universidad de Salud Fujita, Toyoake, Japón. 8Departamento de
McGill, Montreal, Canadá. 2Escuela de Ciencias de la Vida, Oncología Médica, Instituto de Cáncer y Departamento de Medicina de Dana-Farber, Facultad de Medicina de Harvard,
Escuela Politécnica Federal de Lausana (EPFL), Boston, MA, USA.
Lausana, Suiza. 3Departamento de Biología Orgánica y *Autor corresponsal. Correo electrónico: rowan.barrett@mcgill.ca (R.D.H.B.); hoekstra@oeb.harvard.edu (H.E.H.) †These autores
Evolutiva, Museo de Zoología Comparativa, Universidad contribuyeron igualmente a este trabajo. Dirección ‡Present: Departamento de Desarrollo Comparativo y Genética, Instituto Max
de Harvard, Cambridge, MA USA. 4Departamento de Planck para la Investigación en Fitomejoramiento, Colonia, Alemania. §Dirección actual: Departamento de Biología Molecular,
Biología Molecular y Celular, Instituto Médico Howard Universidad de Princeton, Princeton, NJ, EE.UU.
Hughes, Universidad de Harvard, Cambridge, MA, USA.
5Escuela
de Ciencias de la Vida, Centro de Evolución y
Medicina, Universidad Estatal de Arizona, Tempe, AZ,
6Agencia Internacional
USA. para la Investigación del Cáncer,
Organización Mundial de la Salud, Lyon, Francia.
Fig. 2. Mortalidad y cambio fenotípico en las
poblaciones experimentales. (A y B) Mortalidad
en recintos agrupados en sitios claros (A) y
oscuros (B) durante cinco episodios secuenciales
de selección (18). Las barras representan el
número de individuos sobrevivientes
(independientemente del color del pelaje) en
cada punto temporal. Las líneas negras
representan la proporción de individuos
supervivientes que fueron capturados
originalmente en el tipo de hábitat opuesto al tipo
de recinto en el que fueron colocados (ratones de
hábitat oscuro en recintos claros y ratones de
hábitat claro en recintos oscuros). Se muestran
ratones de colores llamativos en el sustrato típico
de cada sitio experimental. Los recuadros rayados
indican el período de tiempo utilizado en los
análisis de selección. (C y D) Distribucione s de
brillo dorsal en el punto de tiempo 0 (azul) y el
punto de tiempo 1 (rojo) en los sitios claros (C) y
oscuros (D). (E y F) Visualizaciones de selección
sobre el brillo dorsal en los sitios de luz (E) y
oscuridad (F) entre el punto de tiempo 0 y 1. Se
generan gráficos cúbicos de splines a partir de
valores predichos. Las líneas sólidas representan el
spline ajustado, y las líneas punteadas
representan ±1 Bayesiano SE.
es probablemente impulsado por las mayores procedimiento para determinar cuántos SNP se siete SNP también mostraron altos niveles de
tasas de depredación aviar en ratones de espera que muestren cambios significativos sólo diferenciación entre los ratones capturados
pigmentación llamativa. por casualidad. En los recintos de luz, los patrones originalmente en hábitats claros y oscuros (Fig.
de cambio de frecuencia de los alelos en los SNP 4B y tabla S6). Además, un SNP regulador y el
Las consecuencias genéticas de la de Agouti no podían distinguirse de la DSer han sido asociados con señales históricas de
selección sobre la pigmentación neutralidad (Fig. 3C), probablemente debido a selección pos-inmersión en las poblaciones de
Para investigar cómo la selección del brillo dorsal la reducción de la potencia estadística causada Sand Hills (14, 15).
afecta a las frecuencias de los alelos en el locus de por el bajo número de supervivientes. Por el Para comprobar si la selección de cada una de
Agouti, generamos datos de polimorfismo con contrario, en los recintos oscuros, nuestros estas variantes de can- didate podría dar cuenta del
se- quencia enriquecida de (i) una región de 185 resultados rechazan la nula hipótesis, sugiriendo número observado de SNPs con frecuencias de
kb que abarca Agouti y todos los elementos que el número de cambios significativos en la genotipo sesgadas en los supervivientes, volvimos
reguladores conocidos y frecuencia de los alelos es incompatible con un a calcular las distribuciones nulas asignando a cada
(ii) ~2100 regiones de todo el genoma no modelo estrictamente neutro (Fig. 3D). Por lo candidato individualmente como nuestro único
vinculadas, cada una de las cuales tiene una tanto, en los recintos oscuros, encontramos lugar objetivo seleccionado. Después de la
longitud media de 1,5 kb [siguiendo (20)], cambios en la frecuencia de los alelos en el locus de corrección para la prueba del multivolumen, cada
para controlar los efectos demográficos. En Agouti consistentes con la selección, y por lo una de las siete podría explicar el cambio
resumen, hemos se- cotejado a los 481 tanto, los patrones a nivel genético son paralelos al observado en las frecuencias del genotipo en los
individuos y, después de filtrar, hemos cambio observado a nivel fenotípico. supervivientes (Fig. 4C). Por el contrario, un
identificado 2442 y 53.507 sitios variables de Dado que no hay recombinación entre los modelo que utiliza el SNP del conjunto de datos de
alta calidad en o cerca del gen Agouti y del loci en una sola generación, hemos probado control de todo el genoma con el cambio de
genoma, respectivamente. A partir de estos datos, además si el gran número de sitios con cambios frecuencia de alelos más significativo no puede

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observamos mayores cambios en la frecuencia de significativos de frecuencia de alelos en los explicar los patrones observados (fig. S2B). Los
los alelos en Agouti a lo largo del tiempo en la recintos oscuros podría explicarse por análisis del desequilibrio de enlace (LD) de las
luz que en los recintos oscuros, lo que concuerda respuestas correlacionadas en los loci siete variantes de fecha de caducidad identificaron
con una mayor mortalidad en los recintos vinculadas a un número limitado de SNPs en tres bloques de enlace (fig. S2C): dos conjuntos de
iluminados (prueba de suma de rangos de selección (18). A partir de nuestros resultados tres SNPs físicamente próximos y el DSer, este
Wilcoxon: W = 3.497.200, P <0,001) (fig. S2A). de la selección fenotípica, formulamos la último mostrando una LD baja con todos los
Para determinar si los cambios en la hipótesis a priori de que los SNPs asociados con demás SNPs candidatos (fig. 4D). Estos datos
frecuencia de los alelos en Agouti se explican el brillo dorsal deberían ser de selección directa sugieren que cada uno de estos tres bloques de
mejor por se- lección o neutralidad (es decir, ex-ante. Así, para cada uno de los 31 SNPs de unión alberga variantes que responden
mortalidad aleatoria), calculamos, para cada sitio Agouti asociados al brillo dorsal (15), directamente a la selección sobre el brillo dorsal.
de variante de Agouti independientemente, la comparamos las frecuencias del genotipo bajo Así pues, la selección sobre un número limitado
probabilidad de que la distribución de un modelo con y sin selección (18). De éstos, de objetivos genéticos en el locus de Agouti es
frecuencias de genotipo observada en los siete SNP, incluidos seis SNP en o cerca de las probablemente suficiente para provocar cambios
supervivientes represente una muestra regiones reguladoras de Agouti y una sola en la frecuencia de los alelos y un rápido cambio
aleatoria de la población inicial (18). Al cabo supresión de aminoácidos de la serina en la en el fenotipo.
de tres meses, los ratones supervivientes posición de aminoácido 48 en el exón 2 (DSer),
mostraron frecuencias de genotipo no aleatorias tenían un cambio de frecuencia alélica que no Los efectos funcionales y ecológicos
en 353 y 549 polimorfismos de un solo podía explicarse únicamente por el muestreo de de una mutación de supresión en
nucleótido (SNP) en los recintos claros y run- dom (Fig. 4A y cuadro S6). Cuatro de estos Agouti
oscuros, respectivamente (Fig. 3, A y B). Para Para probar el vínculo funcional entre una de
tener en cuenta el gran número de pruebas las variantes de Agouti asociadas a la
realizadas, hemos utilizado un remuestreo supervivencia y la pigmentación, así como para
descubrir el mecanismo mo-lecular causal, nos
centramos en la mutación de aminoácidos DSer
en Agouti. Elegimos esta variante porque el
DSer estaba fuertemente asociado con el brillo
dorsal (R2 = 0,11, P <0,001) (Fig. 5A), mostraba una
firma de selección en las poblaciones del recinto
(Fig. 4A) así como en una población natural
mezclada (15), y mostraba el nivel más alto de
diferenciación genética a través del locus de
Agouti entre los ratones que fueron originalmente
capturados de hábitat claro y oscuro (FST = 0,34)
(Fig. 4B y tabla S6). Para determinar si la
mutación DSer por sí sola tiene un efecto sobre el
color del pelo in vivo, generamos líneas de
coincidencia de ratones de laboratorio
transgénicos (ratones C57BL/6, una cepa sin
expresión endógena de Agouti) portadores del
tipo silvestre (WT) o del ADNc del DSer
Peromyscus Agouti, impulsado constitutivamente
por el promotor Hsp68 (Fig. 5B). Utilizamos el
sistema de la integrasa fC31, que produce
integrantes de una sola copia en el locus H11P3
del cromosoma 11 del ratón para medir
directamente el efecto del DSer de Agouti,
evitando al mismo tiempo la variación causada
por el número de copias, el lugar de inserción o la
orientación de la construcción (21) (fig. S3,A y
B). Usando un espectro-
Fig. 3. Cambio de frecuencia de los alelos en el locus de Agouti. (A y B) Cambio de la frecuencia de los alelos de la moralidad durante el experimento
en los recintos claros (A) y oscuros (B). El eje x representa el cambio en la frecuencia de los alelos para cuantificar las diferencias en el color del
entre las poblaciones colonizadoras iniciales y los supervivientes muestreados después de 3 meses. El eje pelaje, encontramos que los ratones DSer tenían
y representa la probabilidad de la distribución de las frecuencias del genotipo observada en los un pelaje significativamente más claro que los
supervivientes, suponiendo un modelo neutro. Todos los puntos rojos son significativos en el nivel del ratones que llevaban el ADNc del Peromyscus
1%: Los puntos rojos claros son significativos debido a un sesgo en la proporción observada de Agouti del TW (DSer versus WT, prueba de la t de
heterocigotos, mientras que los puntos rojos oscuros exhiben un sesgo en el número observado de dos colas; n = 5, P = 0,001) (Fig. 5C). Así pues, la
homocigotos. (C y D) Distribuciones nulas del número de sitios que se espera muestren un cambio mutación DSer de Agouti tiene por sí sola un
significativo de la frecuencia de los alelos en el nivel del 1% en los recintos claros (C) y oscuros (D). Las efecto mensurable en la pigmentación y en la
líneas rojas verticales representan el número observado de sitios con un cambio significativo en la dirección esperada sobre la base de los datos de
frecuencia de los alelos. la asociación genotipo-fenotipo en la población
natural de Peromyscus