BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

El laboratorio de
biología molecular

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 / 1. Introducción y contextualización práctica 3

/ 2. ¿Qué es un laboratorio de biología molecular? 4

/ 3. Instalaciones 4
3.1. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I 5
3.2. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II 5
3.3. Salas pre-PCR 5
3.4. Salas post-PCR 6

/ 4. Caso práctico 1: “Equipo básico” 7

/ 5. Funciones 8

/ 6. Recepción e identificación de la muestra 8

6.1. Registro, cultivo y almacenamiento de la muestra 9

/ 7. Técnicas básicas que se realizan en el laboratorio 9

/ 8. Caso práctico 2: “Limpieza, mantenimiento y calibración” 10

/ 9. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad 11

/ 10. Bibliografía 11

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 Conocer qué es un laboratorio de citogenética y cultivo celular.

Distinguir qué diferencias hay entre estos dos tipos de laboratorio.

Tomar contacto con la organización e instalaciones de dichos laboratorios.

Aprender las funciones del personal de laboratorio.

Comprender la importancia de la gestión de la calidad en los laboratorios de

citogenética y cultivo celular.

/ 1. Introducción y contextualización práctica

Del mismo modo que en la unidad anterior estudiamos el laboratorio
de citogenética, en esta nos centraremos en el laboratorio de biología
molecular. En él, la piedra angular de las técnicas es la Polimerase Chain
Reaction (reacción en cadena de la polimerasa) o PCR, donde partimos de
mínimas copias de ADN para conseguir más y, así, poder hacer lecturas y
análisis del material genético. Esto no permite identificar microorganismos y
células gracias a que amplificamos su material genético hasta hacerlo legible
para las máquinas que lo registran.

A continuación, vamos a plantear un caso práctico a través del cual podremos

aproximarnos de forma práctica a la teoría de este tema.

Escucha el siguiente audio, donde planteamos la contextualización práctica.

Encontrarás su resolución en el apartado «Resumen y resolución del caso
práctico de la unidad». Fig. 1. Micropipetas

Audio intro. El laboratorio de Biología

Molecular
https://bit.ly/2xcwCBo
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Biología molecular y citogenética /4

/ 2. ¿Qué es un laboratorio de biología molecular?

Es un laboratorio dedicado a las técnicas de la Biología Molecular, que son aquellas que estudian fundamentalmente
a los ácidos nucleicos como el ADN, siendo la principal la PCR.

Los laboratorios de Biología Molecular se centran en la PCR, por lo que esta técnica será la que marcará su
organización y estructura.

Recordad que la PCR es una técnica que permite amplificar el material

genético de una muestra para poder analizarla, ya que el que contiene la
muestra de la que partimos es insuficiente para analizarlo.

Del mismo modo que ocurría con los laboratorios de Citogenética, el flujo
de trabajo debe ser unidireccional desde que se reciben las muestras hasta
que se interpretan los resultados. Asimismo, encontramos que debe haber
dos secciones bien diferenciadas en este tipo de laboratorios: una con los
procedimientos previos a la PCR, y otra con los que la incluyen, junto con los
procedimientos posteriores a la misma. Fig. 2. Técnicos trabajando con micropipeta

/ 3. Instalaciones
Atendiendo al punto anterior, estas son las dos secciones bien diferenciadas con las que cuenta un laboratorio de
biología molecular:

• Sección pre-PCR.

• Sección post-PCR.

En la primera se llevan a cabo todos los procedimientos previos a la realización de la PCR, que consisten en la preparación
de los reactivos y productos que se van a emplear y en la extracción del material genético a partir de la muestra.

La segunda sección comprende la realización de la propia PCR, así como la lectura de los resultados.

Es importante separar las zonas estériles o «limpias» de las no estériles o «sucias» para evitar la contaminación
de las muestras.

Recuerda...
El laboratorio de biología molecular se distingue del de citogenética
porque realiza una técnica fundamental de la biología molecular: la PCR.
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3.1. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I

Instrumento Función
Termociclador Alterna ciclos de diferente temperatura en una muestra
Separa las sustancias según su carga eléctrica, ya que estas
Electroforesis en gel se desplazan por el gel hacia un polo cargado eléctricamente
o permanecen inmóviles si no presentan carga eléctrica
Permite trabajar en condiciones de seguridad, aislando al
Cabina de bioseguridad
personal y las muestras de contaminantes ambientales
Realiza lecturas de absorbancia para estimar
Espectrofotómetro
la concentración de una sustancia
Autoclave Esteriliza empleando vapor

Tabla. 1.Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I

3.2. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II

Instrumento Función
Mantiene una cantidad de agua a una
Baño termostático
temperatura regulable pero constante
Congelador Congela las muestras y productos
Define el orden en el que se encuentra la secuencia
Secuenciador de ADN
de los nucleótidos de un ácido nucleico
Permite manejar volúmenes muy pequeños,
Micropipeta
del orden de microlitros
Separación de muestras de diferente densidad
Centrífuga
gracias a la acción giratoria de gran velocidad

Tabla. 2.Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II

3.3. Salas pre-PCR

Las salas previas a la PCR se dividen, a su vez, en dos secciones:

1. Sala para la preparación de reactivos

Es la primera sala de la sección pre-PCR. Donde se van a preparar todos los reactivos y productos que emplearemos
en la PCR.

Por supuesto, es una zona limpia y el material debe estar libre de cualquier contaminación que pudiera interferir
como, por ejemplo, ADN bacteriano.

Se recomienda que tenga una ligera presión positiva, así como que se trabaje en cabinas de bioseguridad. Que
tenga presión positiva significa que haya más presión dentro de la sala que fuera, por lo que cuando se abra una
puerta, el aire saldrá de la habitación, en lugar de entrar, evitando así que se contamine con gérmenes externos.
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Biología molecular y citogenética /6

2. Sala de extracción de ADN

Es la segunda y última sala de la sección pre-PCR. En esta sala se recibe la

muestra y se prepara mediante el empleo de determinados reactivos que
veremos en unidades posteriores, para proceder a la extracción del ADN de
las células que se quiere amplificar .

Se recomienda que tenga presión negativa, es decir, que haya menor

presión en la sección que en el exterior, por lo que, si se abre una
puerta, ventana o conducto, el aire no saldrá hacia el exterior de la sala,
evitando así la dispersión de contaminantes hacia salas adyacentes. Del
mismo modo que el caso anterior, también se asegura la asepsia en la
técnica al trabajar en cabinas de bioseguridad.
Fig 3. Ejemplo

3.4. Salas post-PCR

Como ocurría con las salas previas a la PCR, estas también se dividen en dos secciones bien diferenciadas, aunque
habitualmente puedan formar parte de la misma

1. Sala de realización de la PCR

En ella se realiza la PCR. Es la primera sala dentro de la sección post-PCR. Es una zona sucia, puesto que se trabaja
con muestras genéticas. Para evitar contaminaciones cruzadas, debe existir presión negativa.

2. Sala post-PCR o de análisis

Esta es la segunda y última sala de la sección pos-PCR. En ella se realiza la electroforesis y la lectura de geles, técnicas
que estudiaremos más adelante cuando veamos la unidad de PCR. Su función es la lectura de los resultados de la PCR.

Idealmente deberían realizarse en una sala oscura (para poder hacer la lectura de los resultados que son luminiscentes,
como se aprecia en la imagen 4) que puede ser complementaria a la sala post-PCR y compartir espacio con la
microscopía de fluorescencia. También se considera una sala sucia cuya presión debe ser negativa.

Fig. 4. Electroforesis en gel de agarosa

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/ 4. Caso práctico 1: “Equipo básico”

Planteamiento: para familiarizarnos con el laboratorio de Biología Molecular, nos piden enumerar el equipamiento
básico para el mismo.

Nudo: ¿cuáles son los instrumentos y aparatos básicos de los que precisa un laboratorio de biología molecular?
Recuerda que está principalmente enfocado a la realización de la PCR.

Desenlace: el equipo básico, mínimo e indispensable para un laboratorio de biología molecular, se compone de:

• Termociclador.

• Equipos para realizar electroforesis en gel.

• Documentador de geles.

• Cabina de bioseguridad o de flujo laminar.

• Espectrofotómetro.

• Autoclave.

• Incubadores para cultivos celulares y estufas para cultivos bacteriológicos.

• Baño termostático.

• Placa térmica para hibridaciones.

• Centrifugas y microcentrífugas.

• Equipos de frío (neveras y congeladores)

• Pipetas automáticas, recambios de las mismas y otras herramientas similares para el manejo de las muestras.
Secuenciadores.

• Otros reactivos y equipo específicos de extracción de ácidos nucleicos.

Termociclador
Instrumento que realiza ciclos de temperatura
de tiempos y grados programables.
Baño termostático
Instrumento que mantiene agua a una
temperatura constante en el tiempo.

Tabla. 3.Diferencias entre termociclador y baño termostático

 TEMA 2. EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Biología molecular y citogenética /8

/ 5. Funciones
Las funciones del laboratorio de Biología Molecular consisten en apoyar a los médicos clínicos realizando pruebas
de biología molecular y citogenética necesarias para el diagnóstico de la patología molecular. Como ya hemos
comentado, la PCR es la prueba principal de este servicio.

Estas pruebas determinarán el material genético que contiene la muestra de estudio: si se encuentra ADN o ARN
vírico o bacteriano y, si es el caso, el diagnóstico de infecciones víricas, que es uno de sus principales usos. También
se puede amplificar material genético de pacientes para estudiar patologías genéticas.

Hay que recordar que la asepsia es muy importante cuando trabajamos con ADN, porque la más mínima
contaminación nos ofrecerá resultados que no coinciden con el estado real de la muestra del paciente.

Por supuesto, el laboratorio tiene otras utilidades, como la investigación o la Medicina Forense, pero la que más nos
interesa a nosotros la función relativa al diagnóstico de enfermedades.

Audio 1. Transcriptasa inversa

https://bit.ly/3eUDXGS

/ 6. Recepción e identificación de la muestra

En todos los laboratorios de un hospital, tanto en los de análisis clínicos como en los de anatomía patológica,
las muestras deben seguir estrictos protocolos para minimizar los posibles errores en su transcurso por las
instalaciones del centro hospitalario. Es lo que se conoce como la fase preanalítica en el control de calidad, de la que
ya hablamos en la unidad anterior

Cuando una muestra llega al servicio del laboratorio, debe estar bien etiquetada o identificada con los datos
del paciente. A su vez, si contiene más de un bote, deben estar perfectamente enumerados y debe aclararse qué
muestra contiene cada bote. De lo contrario, los resultados de muestras muy parecidas pueden confundirse. Solo
hay que imaginar dos muestras del mismo órgano, en una de las cuales se halla una lesión cancerosa y en la otra no.
Si se genera confusión, las repercusiones pueden ser muy serias.

Una vez se recibe la muestra, se registra en un sistema de archivos físicos o informático (principalmente
informático) y se codifica. Es decir, se le proporciona un código que será su principal identificación. El objetivo es
que la muestra sea confidencial y no recorra todo el proceso analítico y postanalítico con los datos personales del
paciente en cuestión.

Por supuesto, una vez se recibe la muestra, hay que comprobar que los datos del paciente en la hoja de petición de
laboratorio coinciden con los de la muestra.

Una vez registrada en la base de datos y debidamente codificada, pasa al circuito correspondiente de análisis.

Recuerda...
Al laboratorio, llegan muestras de diferentes servicios. Al recibirlas, pueden
venir con un volante de petición, cuyos datos debemos comprobar.
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6.1. Registro, cultivo y almacenamiento de la muestra

El registro de las muestras debe hacerse en una base de datos, preferentemente informatizada.

Evidentemente, este registro debe limitarse al personal responsable de la gestión del laboratorio y a los técnicos
que necesiten averiguar datos concretos sobre la muestra, como su código, para realizar sus funciones. Por ejemplo,
si los resultados de una muestra no son claros o han sufrido algún error, podemos localizar en el almacén la muestra
original del paciente para repetirle las pruebas oportunas.

Es importante recalcar que, cuando se reciben las muestras, suelen hacerse alícuotas, es decir, se divide la muestra
original en otras más pequeñas para dejar una parte almacenada, por si debieran repetirse técnicas sobre ella.

Así, las partes de la alícuota que no se van a emplear o, sencillamente, cuando hay que guardar una muestra,
esta se lleva hasta un almacén. En él, las muestras se clasifican por categorías para que su identificación y
acceso sean sencillos. Por supuesto, debe ser un almacén con acceso
restringido al personal que lo gestione o que deba acceder a dichas
muestras para su procesado.

En función del laboratorio y de la legislación vigente de la región, comunidad

o país, las muestras se almacenarán durante un tiempo prudencial hasta
que, pasado dicho periodo, se eliminan respetando los protocolos de
gestión de residuos que se aplican al laboratorio en cuestión.

Cuando se almacenan muestras de ADN purificadas, debe hacerse en frío, en

neveras para usarse en pocos días, o en congeladores para usos posteriores.
En cambio, el ARN debe almacenarse siempre en congeladores, entre otras Fig. 5. Diferentes tipos de almacenamiento de
razones, por ser más inestable que el ADN. muestras

/ 7. Técnicas básicas que se realizan en el laboratorio

Aunque nos hemos centrado en la PCR, este no es el único procedimiento que se desarrolla en un laboratorio de
Biología Molecular.

Las principales técnicas que se realizan en el ámbito sanitario son:

• Técnicas de extracción de ácidos nucleicos: para extraer el ADN de las células.

• Técnicas de PCR: amplificar el ADN de una muestra.

• Técnicas de electroforesis en gel: para leer los resultados de la prueba.

• Técnicas de visualización de los resultados de la electroforesis en

gel: para poder interpretar los resultados.

• Técnicas de hibridación con sonda: para marcar el ADN y poder

estudiar estas regiones marcadas.

• Técnicas de secuenciación del ADN.

• Técnicas de clonación del ADN.

Fig. 6. Material diverso para técnicas de
Cada una de las diferentes técnicas será explicada con detalle en su biología molecular. Principalmente PCR y
unidad correspondiente. electroforesis en gel
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Biología molecular y citogenética / 10

/ 8. Caso práctico 2: “Limpieza, mantenimiento y

calibración”
Planteamiento: calibrar los instrumentos supone desarrollar determinadas pruebas que confirmen que realizan
medidas precisas. Para ello, se comparan las medidas realizadas con patrones estándar conocidos. Entonces, la
medida del instrumento debe darnos el resultado que, a priori, conocemos.

Nudo: vamos a realizar una calibración muy sencilla, la de micropipetas. Tenemos que realizar medidas de volúmenes
y compararlas con patrones fiables.

Desenlace: lo primero que vamos a hacer es tarar un recipiente en una balanza previamente calibrada y que nos
garantice medidas fiables. Posteriormente, tomaremos un volumen concreto de agua destilada con la micropipeta y
lo depositaremos en el recipiente tarado en la balanza.

Si convertimos el peso del agua a volumen, ya que la densidad del agua es 1 g/mL, podremos conocer el volumen
que hemos depositado en el recipiente. Si la micropipeta está calibrada, nos dará un resultado muy aproximado al
que obtenemos en la balanza.

El procedimiento se debe repetir 10 veces, ya que en cada micropipeteo habrá variaciones de volumen. Si alguna
de estas 10 mediciones se sale de unos valores predefinidos por el fabricante (que determinan el margen de
error aceptable para considerar el instrumento calibrado), debemos calibrar la micropipeta con las herramientas
oportunas y siguiendo las instrucciones que nos facilite el fabricante, volviendo a repetir el proceso antes descrito.

Densidad del agua

1 g/dl
Baño termostático
Pesar el agua pipeteada.

Si coinciden el volumen medido con el

peso, atendiendo a la densidad del agua, la
micropipeta estará correctamente calibrada.

Fig. 7. Esquema sobre la realización del calibrado de micropipetas.

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/ 9. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad

En esta unidad hemos conocido en qué consiste un laboratorio de biología molecular y los procesos que en él se
llevan a cabo.

Es fundamental destacar la PCR como la prueba más importante de este tipo de laboratorio. Tanto es así que es la
que lo define y, además, lo divide en dos secciones bien diferenciadas: la pre-PCR y la post-PCR. Por otro lado, es
importante identificar que en las salas «limpias» se trabajará con una presión positiva, mientras que en las «sucias»
se trabajará con una negativa.

A cualquier muestra que llegue al laboratorio se le asignará un código y se realizarán alícuotas, reservando el resto
de la muestra en un almacén específico donde se conservará durante un periodo de tiempo prudencial, por si hubiera
que rescatar más material para repetir la prueba inicial o para realizar nuevas pruebas diferentes a las ya efectuadas.

Resolución del caso práctico de la unidad

La muestra que nos han mandado al laboratorio llega primero al registro. Aquí se le asignará un código, se registrará
en la base de datos y se realizarán alícuotas para enviar una a procesar y el resto al almacén.

El primer lugar que visitará la muestra será la sala de extracción de ácidos nucleicos, ya que solo nos interesa el
material genético para realizar una PCR.

A continuación, pasará a la sala donde se realiza la PCR. En ella se dispone del instrumental preciso para llevar a
cabo la técnica.

Finalmente, llegará a la sala de electroforesis donde podemos encontrar otra sección

/ 10. Bibliografía
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Mérida F. J. y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Módulo III: biología molecular y citogenética. Madrid: Médica
Panamericana.
Gómez-Aguado, F., Lorenzo Luque, M. I., Simón Luis, F. y Hernández Giménez, B. (2015). Biología molecular y citogenética. Barcelona: Altamar.
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Ruiz Morer, R. (2006). «Recomendaciones para la calibración de material volumétrico en el laboratorio clínico». Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
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Universitat de Valéncia, Facultat de Química, Comisión Seguridad Laboratorios. «Medidas de seguridad en el laboratorio». Recuperado de: https://www.uv.es/
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