TEMARIOCOMPLETO

TEMAS 1-10
BIOLOGÍA
MOLECULAR Y
CITOGENÉTICA
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA
El laboratorio de
citogenética y cultivo
celular
1
/ 1. Introducción y contextualización práctica 3
/ 2. ¿Qué es un laboratorio de citogenética y cultivo celular? 4
/ 3. Instalaciones 4
/ 4. Caso práctico 1: “Equipos de conservación” 5
/ 5. Organigrama 5
/ 6. Área de procesado y bandeado 6
/ 7. Área de microscopía y digitalización de imágenes 6
/ 8. Personal y funciones 7
/ 9. La Genética Médica 7
/ 10. Catálogo de pruebas de citogenética de un hospital 8
/ 11. Caso práctico 2: “Cómo detectar alteraciones cromosómicas” 9
/ 12. Programas de formación 10
/ 13. Gestión de la calidad 11
/ 14. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad 12
/ 15. Bibliografía 12
© MEDAC ISBN: 978-84-18864-26-1

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Conocer qué es un laboratorio de citogenética y cultivo celular.
Distinguir qué diferencias hay entre estos dos tipos de laboratorio.
Tomar contacto con la organización e instalaciones de dichos laboratorios.
Aprender las funciones del personal de laboratorio.
Comprender la importancia de la gestión de la calidad en los laboratorios de

citogenética y cultivo celular.
/ 1. Introducción y contextualización práctica

Todo técnico de Anatomía Patológica y Citodiagnóstico necesita diferenciar
claramente el laboratorio de citogenética del de biología molecular y, del
mismo modo, distinguir la sección de citogenética propiamente dicha de la
de cultivo celular o tisular. En esta unidad nos centraremos en conocer las
partes y funciones de estas últimas, las cuales cumplen una función crucial
en el diagnóstico de cromosomopatías (alteraciones cromosómicas).
A continuación, vamos a plantear un caso práctico a través del cual podremos

aproximarnos de forma práctica a la teoría de este tema.
Escucha el siguiente audio, donde planteamos la contextualización práctica.

Encontrarás su resolución en el apartado «Resumen y resolución del caso
práctico de la unidad».
Fig. 1. Cultivos celulares
Audio intro. Un estudio de cariotipo

https://bit.ly/3eT60pM
TEMA 1. EL LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVO CELULAR
Biología molecular y citogenética /4
/ 2. ¿Qué es un laboratorio de citogenética y cultivo

celular?
El laboratorio de citogenética y cultivo celular es una instalación especializada dentro de los laboratorios de biología
molecular. Actualmente, ha cobrado tal relevancia que precisa de un laboratorio especializado para sus técnicas.
Cuenta, a su vez, con dos secciones bien diferenciadas:
• Laboratorio de cultivos celulares: para conseguir el crecimiento de células eucariotas en medios artificiales
hasta que son detenidas en mitosis.
• Laboratorio de citogenética: donde se realizan los estudios de cromosomas metafásicos (recuerda que los
estudiaremos en la unidad 7).
Sus implicaciones clínicas las veremos en unidades siguientes, principalmente relacionadas con el diagnóstico de
cromosomopatías.
Audio 1. El laboratorio de citogenética y

cultivo celular
https://bit.ly/3eQdIky
/ 3. Instalaciones
En un laboratorio de citogenética y cultivos celulares deben distinguirse tres salas:
1. Sala de cultivos o zona estéril
Es la sala que requiere de mayor higiene y asepsia, es decir, debe estar libre de gérmenes, pues en ella se realizan
los cultivos celulares, que se contaminan muy fácilmente (los hongos y bacterias que puedan contaminarlos crecen
con mayor facilidad que las células del paciente, impidiendo que estas últimas se desarrollen).
Lo ideal es que se encuentre aislada y que cuente con cabinas de flujo laminar, una ligera presión positiva, aire
filtrado y temperatura regulada. Todo ello con el objetivo de garantizar la asepsia de las técnicas.
2. Salas de técnicas generales
Es una sala (pueden ser diversas) en la que la esterilidad ya no es primordial. En ella se encuentra el equipamiento
y los recursos para realizar las técnicas generales del laboratorio, es decir, el resto de técnicas excepto los cultivos
celulares, como por ejemplo: cariotipos, tinciones, técnicas de citogenética molecular, etc. En ella se distingue una
zona oscura para las técnicas de fluorescencia. Puede dividirse en secciones bien diferenciadas para cada tipo de
técnica.
3. Sala de frío
Instalaciones frigoríficas o con congeladores y equipos de criogenia para conservar las muestras.
Sabías que...
Las incubadoras de CO2 nos ofrecen las condiciones ambientales óptimas
para el correcto desarrollo de los cultivos celulares.
/5 MEDAC · Instituto Oficial de Formación Profesional
/ 4. Caso práctico 1: “Equipos de conservación”

Planteamiento: A la hora de comprobar que contamos con todo el equipamiento necesario para montar un laboratorio
de citogenética y cultivos celulares, necesitamos conocer si disponemos del equipo adecuado de conservación de
muestras y reactivos.
Nudo: La cuestión es, ¿qué equipos de conservación se precisan en dicho laboratorio?
Desenlace: En estos laboratorios se debe contar con tanques de nitrógeno líquido, ya que permiten conservar las
muestras durante años porque se mantienen por debajo de los -100º C. En cambio, para los reactivos, con neveras y
congeladores de laboratorio ya será suficiente para conservarlos. Los cultivos celulares se mantienen menos tiempo
en los congeladores debido a que no alcanzan temperaturas tan bajas como los tanques de nitrógeno líquido, donde
la congelación es más rápida y el tamaño de los cristales de hielo formados es menor, dañando menos la estructura
celular.
Por supuesto, para proteger las células del duro proceso de congelación, los medios de cultivo deben llevar
incorporados un crioprotector como dimetilsulfóxido al 10 % o glicerol.
/ 5. Organigrama
Consiste en un esquema que refleja la jerarquía que existe entre los diferentes integrantes del personal de un
laboratorio, así como el flujo de trabajo e información que se establece sobre los procedimientos que en él se
desarrollan. De esta manera, se refleja cuál es el grado de responsabilidad de cada profesional y con qué otros
miembros está en contacto directo.
En la cúspide encontramos un director de laboratorio o jefe de servicio, cuya función es coordinar el resto de
secciones y trabajadores del laboratorio. También atiende directamente a los clientes y pacientes si es preciso,
realiza la validación de las técnicas y calibración del instrumental del laboratorio (si es necesario), y relaciona
diferentes técnicas que se usan en un protocolo común. Sus funciones se resumen en coordinar y garantizar la
calidad de las pruebas.
Inmediatamente por debajo del director de laboratorio o jefe de servicio,

tenemos al coordinador de área o jefe de sección. Estos se disponen en cada
Jefe de servicio
sección, controlando los procedimientos y el personal correspondiente a unas
muestras o técnicas determinadas, supervisando así los procesos analíticos y
realizando labores de valoración de los estudios mediante la elaboración de
informes. Sus funciones son validar las técnicas y coordinar al personal humano Jefe de área
responsable de las mismas.
Por debajo de este, tenemos al coordinador técnico, encargado de supervisar

a los técnicos que reciben y procesan las muestras, así como de la gestión del Coordinador técnico
stock de los productos del laboratorio. Coordina directamente a los técnicos de
laboratorio.
Técnicos
Finalmente, tenemos a los técnicos, que son quienes habitualmente realizan
las técnicas y procedimientos, aunque no son los únicos, ya que algunas
técnicas las realizan los facultativos por la experiencia requerida para ello o por Fig. 2. Organización general de un
la responsabilidad que acarrea su procesado. laboratorio hospitalario
/ 6. Área de procesado y bandeado

Corresponde al área inmediatamente próxima a la sección de cultivos celulares, es decir, al área de técnicas generales.
Recordemos que los cultivos se debían preparar en una zona estéril. Una vez están listos, debemos procesar las
muestras, se llevan a esta zona para ello. Aquí se realizará el procesado de los cromosomas a partir del sacrificio
celular del cultivo y la extensión del mismo en un portaobjetos, para posteriormente realizar la tinción con colorantes
específicos como orceína y Giemsa u otras técnicas como el bandeo cromosómico.
El bandeo es otra de las técnicas que se desarrollan en esta sección, y supone un tipo particular de tinción donde
se da color a diferentes bandas claras y oscuras en los brazos del cromosoma. Estas bandas sirven para distinguir
anomalías en los cromosomas, ya que existe un código para referirnos a cualquier banda o subbanda obtenida por
esta técnica. Por supuesto, cada banda contiene unos genes concretos.
Las regiones se enumeran a partir del centrómero.
/ 7. Área de microscopía y digitalización de imágenes

Esta zona pertenece a la sección de técnicas generales. Se contempla como parte de la zona en la que se procesan
las muestras, aunque es una sección diferente, ya que previamente hemos procesado las muestras y han quedado
dispuestas para ser evaluadas por el facultativo.
El facultativo debe emitir un informe y, para facilitar su trabajo y realizar un registro de las muestras, es preferible
contar con un sistema de digitalización de imágenes. Esto permite al facultativo visualizar las muestras de una manera
más sencilla y, a su vez, conservar un gran banco de imágenes de cara a futuras revisiones, docencia o investigación.
El mundo de la microscopía es muy amplio y existen diferentes variedades de microscopios. En el laboratorio de

citogenética se emplean los microscopios ópticos, tanto los de luz transmitida (digamos, el convencional) como
los de luz reflejada (por ejemplo, los microscopios de fluorescencia).
La muestra se prepara mediante los procesos de fijación, deshidratación, inclusión, corte y tinción para poder
observarse al microscopio. Estos procesos se deben realizar en muestras incluidas en parafina, generalmente para
el laboratorio de anatomía patológica, mientras que, en otros campos como la citología o la citogenética, basta con
fijar y teñir la muestra.
Una vez la muestra está debidamente procesada, pasa a ser observada al microscopio y, mediante un software
específico, se almacena en la base de datos de un ordenador. Los softwares específicos permiten almacenar, analizar
y editar las imágenes.
En el tema correspondiente del módulo Técnicas Generales de Laboratorio se ahondará más sobre los diferentes
tipos de microscopía y digitalización de imágenes.
Sabías que...
Una de las grandes ventajas de la digitalización de imágenes ha sido
poder compartirlas con otros profesionales en cualquier parte del mundo.
/ 8. Personal y funciones
Como hemos explicado en el apartado de Organigrama, en el laboratorio de citogenética tendremos distintos
profesionales que realizarán una función específica.
Distinguiremos, fundamentalmente, entre técnicos y facultativos.
Los técnicos realizan las técnicas de cultivo, procesado, tinción y montaje de las muestras, así como otras labores
auxiliares en su servicio relacionadas con el stock y la elaboración de listados de productos empleados, agotados, etc.
En resumen, se encargan de realizar las técnicas del laboratorio.
Los facultativos, en cambio, no realizan las técnicas, sino que se encargan de que el aparataje esté debidamente
calibrado (también pueden realizarlo los técnicos) y de valorar las técnicas realizadas. Avalan que los resultados sean
fiables bajo su criterio y emiten informes que después otros profesionales
clínicos necesitan para poder hacer diagnósticos concretos. En muchas
ocasiones, el diagnóstico ya viene planteado desde el mismo laboratorio por
el facultativo en cuestión.
Aunque hay algunas excepciones y variaciones, el personal técnico está

formado por técnicos superiores en Anatomía Patológica y Citodiagnóstico
o Laboratorio Clínico y Biomédico; por otro lado, los facultativos son
Médicos, Farmacéuticos, Químicos, Bioquímicos o Biólogos que acceden por
oposición al puesto de F.E.A., acrónimo de Facultativo Especialista de Área.
Habitualmente son Analistas Clínicos o Bioquímicos Clínicos. Fig. 3. Técnicos especialistas en laboratorio
/ 9. La Genética Médica
La Genética Médica es la rama de la genética que se encarga del diagnóstico de las alteraciones producidas en los
genes. Dentro de esta ciencia se encuentra la citogenética, pues su misión es diagnosticar cromosomopatías en los
pacientes. Aun así, la Genética Médica engloba otras técnicas y ramas de la biología molecular, como las técnicas
de PCR, clonación y secuenciación de ADN (que estudiaremos en próximas unidades) para encontrar alteraciones y
mutaciones en el material genético.
Cada vez cobran más importancia las secciones de genética médica en los hospitales, no solo como parte del
laboratorio especializado en técnicas de biología molecular y citogenética, sino también como unidades médicas
donde se ofrece asesoramiento y consejo genético. Es decir, en ellos se estudian las familias en las que hay
probabilidades de padecer patologías genéticas porque existen antecedentes o viceversa (a partir de una patología
genética diagnosticada se buscan antecedentes que hayan podido pasar desapercibidos en la familia).
Genética Médica
Consejo Genética Consulta Médica Pruebas de Biología Molecular y

Citogenética
Fig. 4. Principales funciones del servicio de Genética Médica

/ 10. Catálogo de pruebas de citogenética de un

hospital
En un hospital regional debe haber un laboratorio orientado a la genética, la biología molecular y la citogenética y
cultivos celulares. En ellos, se realizan los procedimientos que ya hemos descrito, destacando, sobre todo, aquellos
enfocados a poder observar al microscopio óptico el cariotipo mediante su tinción o mediante fluorescencia para
resaltar regiones concretas de los mismos (una vez han sido marcados con sustancias fluorescentes).
Como ya estudiaremos en unidades posteriores, el cariotipo es el complemento cromosómico de un individuo

que viene definido por las características morfológicas y numéricas de sus cromosomas (la máxima expresión del
empaquetamiento del ADN) en metafase mitótica, mientras que la hibridación fluorescente in situ (FISH) es una
técnica basada en la detección y localización de una secuencia de ADN específica en un cromosoma.
Para poder tener una idea más representativa de los procesos que se desarrollan en un laboratorio de citogenética,
observad la imagen. Es un catálogo de los procedimientos que se realizan en el Hospital Central de Asturias, el cual
se puede consultar de manera libre a través del siguiente enlace:
http://www.hca.es/huca/web/contenidos/websdepartam/Cartera%20Laboratorios/citogenetica.pdf
Fig. 5. Catálogo de pruebas del laboratorio de citogenética del Hospital Central de Asturias
/ 11. Caso práctico 2: “Cómo detectar alteraciones

cromosómicas”
Planteamiento: Tras haber conocido más a fondo los cromosomas y los procesos que se realizan en un laboratorio
de citogenética y cultivos celulares, ya debemos saber cómo se detectan las alteraciones cromosómicas.
Nudo: Así pues, ¿qué pasos llevaríamos a cabo para realizar el análisis de un cariotipo en un laboratorio de citogenética
y cultivos celulares?
Desenlace: Lo primero sería recibir la muestra biológica, por ejemplo, de sangre, y cultivarla en medios de cultivo
apropiados para el crecimiento de la misma. Estos medios se enriquecen con nutrientes, hormonas y factores de
crecimiento para que las células eucariotas (en este caso linfocitos) crezcan y se desarrollen sin problemas, todo ello
en condiciones controladas de humedad, temperatura, etc. Cuando las células han crecido y se han desarrollado, se
detiene la división celular y se añade cloruro potásico (KCl) para que las células se hinchen, esto hará que se observen
mejor al microscopio. Finalmente, solo queda preparar una extensión en un portaobjetos, teñirla y estudiarla.
Toma de muestra
Cultivo celular
Detención de división celular
Adición de KCl
Extensión en portaobjetos
Tinción
Observción al microscopio
Fig. 6. Esquema del procesamiento

cromosómico
Biología molecular y citogenética / 10
/ 12. Programas de formación

En cualquier laboratorio clínico se trabaja con muestras humanas, las cuales deben procesarse con la mayor
profesionalidad, eficacia y eficiencia posible, para lo cual el personal debe estar perfectamente capacitado.
Es fundamental que todo profesional que trabaje en el laboratorio esté acreditado como tal y es muy recomendable
que, además, cuente con formación continuada para ampliar conocimientos y especializarse en secciones o
técnicas concretas.
Además de esto, el laboratorio debe contar con protocolos normalizados de trabajo (PNT), los cuales el Instituto
Nacional de Seguridad y Salud en el Trabajo define como:
«...documentos escritos que describen la secuencia específica de operaciones y métodos que deben aplicarse en
el laboratorio para una finalidad determinada. Proporcionan una manera única según la cual deberá realizarse la
operación cada vez que se repita en el laboratorio. Son los documentos complementarios al Manual de Calidad cuya
finalidad fundamental es establecer cómo, quién, y cuándo debe realizarse una actividad allí prevista.»
Los laboratorios deben contar con un programa de formación para tener a sus empleados actualizados en el
uso de sus aparatos y en las nuevas técnicas que puedan introducirse, así como en posibles variaciones de las ya
empleadas. Es decir, mantenerlos reciclados.
Otro aspecto importante, es formar debidamente a las nuevas incorporaciones o a los técnicos en sus prácticas de
formación profesional (FCT), de manera que pasen por etapas en las que las responsabilidades crezcan gradualmente
hasta que adquieran las destrezas necesarias para dominar ellos mismos las técnicas o la sección en cuestión.
PNT
Procesos Normalizados de Trabajo actualizados.
Formación continuada
Cursos reglados, sesiones de actualización,
congresos, seminarios, etc.
Alumnos/trabajadores en prácticas
Evaluación de las competencias y responsabilidades,
en orden creciente; primero tutelados y
finalmente de manera autónoma.
Tabla. 1. Programas de formación.

/ 11 MEDAC · Instituto Oficial de Formación Profesional
/ 13. Gestión de la calidad

Pese a no ser uno de los aspectos más llamativos a la hora de trabajar en un laboratorio, es el más importante. La
calidad es la confianza que tenemos en que unos resultados son fieles a la realidad. De esta manera, un laboratorio
con un alto nivel de calidad nos proporciona la seguridad y la tranquilidad de saber que sus resultados son de
confianza y el F.E.A. (Facultativo Especialista de Área) podrá elaborar informes fiables para que el clínico emita
diagnósticos acertados.
Se distinguen tres fases en la calidad de un laboratorio:
• Fase preanalítica
Contempla todos aquellos procesos desde que se solicita la muestra hasta que se pone a disposición del procesado de
la misma, es decir: la solicitud del análisis, la toma de la muestra, el envío al laboratorio, su codificación y etiquetado
y su almacenaje.
En esta fase, los responsables son todos aquellos que participan en dichos procesos: médico solicitante, cirujanos y
enfermeros, celadores y técnicos de laboratorio.
• Fase analítica
Corresponde a todas las técnicas mediante las que se procesa la muestra. Contempla un método de trabajo
estandarizado (PNT), unos aparatos calibrados y una higiene y seguridad en el trabajo apropiados. Esta fase es
responsabilidad del técnico.
• Fase postanalítica
Aquellos procesos que implican informar de los datos obtenidos en el laboratorio, es decir, elaborar informes claros,
sin que quepa en ellos duda alguna, presentados en las unidades de medida que corresponda y con la confidencialidad
que se requiere. La gestión de residuos del laboratorio también se considera de la fase postanalítica. En esta fase la
responsabilidad se divide entre el técnico y el F.E.A.
Fase preanalítica
Toma de las muestras,
traslado y registro en el
laboratorio
Fase analítica
Procedimientos
analíticos
Fase postanalítica
Informe de los
resultados y gestión de
residuos
Fig. 7. Fases de la gestión de calidad en un

laboratorio
/ 14. Resumen y resolución del caso práctico de la

unidad
En esta unidad hemos conocido que existen dos secciones en los laboratorios de citogenética: la de citogenética
propiamente dicha y la de cultivos celulares. Estos últimos son muy delicados, pues requieren de una especial asepsia,
debido a la facilidad con la que sufren contaminaciones y crecen microorganismos como bacterias y hongos en lugar
de las células de estudio. Por ello, se divide en el área estéril, para los cultivos; el área de procesado de muestras, para
el resto de las técnicas; y el área de frío, para mantener refrigeradas y así poder conservar los reactivos y muestras.
A su vez, en los laboratorios encontramos una clara jerarquía, con el jefe de servicio (para coordinar el laboratorio),
el jefe de área (para coordinar su sección), el coordinador técnico (para coordinar a los técnicos) y los técnicos (para
realizar los procedimientos); todo ello en el contexto de un ambiente de trabajo con los debidos planes de formación
para mantener actualizado a su equipo de trabajadores y unos estrictos controles de calidad que garanticen la
fiabilidad de los resultados obtenidos.
Resolución del caso práctico de la unidad
Para realizar un estudio citogenético, la muestra en cuestión tiene que recorrer un largo camino hasta que se elabora
su informe correspondiente.
Primero, un enfermero o médico debe extraer la muestra. Un celador la debe etiquetar correctamente y la debe
enviar al laboratorio. Hasta aquí la fase preanalítica, que depende de los médicos, enfermeros y celadores. Una vez
en el laboratorio, se procede a su codificación para que sea totalmente confidencial. A continuación, pasa a la zona
estéril, donde se cultivan las células en las condiciones apropiadas. Llegado el momento, el cultivo pasa a la zona
de procesado, donde se realizan la extensión de la misma y su tinción convencional (fluorescente o bandeado)
para pasar después a ser montada y observarse al microscopio. Hasta aquí la fase analítica, a cargo de los técnicos.
Finalmente, el F.E.A. la evalúa y emite el informe pertinente que llega hasta el médico solicitante de dicha prueba,
finalizando la última etapa del control de calidad, la fase postanalítica.
/ 15. Bibliografía
Caparrós Mota, M., Cuenca Pardo, J. B. y Sipán Sarrión, M. C. (2016). Biología molecular y citogenética. Madrid: Paraninfo.
Martí Veciana, A. (1999). «NTP 508: Aseguramiento de la calidad en los laboratorios de higiene industrial: procedimientos normalizados de trabajo (PNT)».
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. Recuperado de:
https://www.insst.es/documents/94886/327064/ntp_508.pdf/ae8328ac-ec17-4a04-b7de-24b4442a14d2
Mérida F. J. y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Módulo III: biología molecular y citogenética. Madrid: Médica
Panamericana.
Gómez-Aguado, F., Lorenzo Luque, M. I., Simón Luis, F. y Hernández Giménez, B. (2015). Biología molecular y citogenética. Barcelona: Altamar.
Ponsoda Ayala, M. (2015). Técnicas generales de laboratorio. Madrid: Paraninfo.
El laboratorio de
biología molecular
2
/ 2. ¿Qué es un laboratorio de biología molecular? 4
3.1. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I 5
3.2. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II 5
3.3. Salas pre-PCR 5
3.4. Salas post-PCR 6
/ 4. Caso práctico 1: “Equipo básico” 7
/ 5. Funciones 8
/ 6. Recepción e identificación de la muestra 8

6.1. Registro, cultivo y almacenamiento de la muestra 9
/ 7. Técnicas básicas que se realizan en el laboratorio 9
/ 8. Caso práctico 2: “Limpieza, mantenimiento y calibración” 10
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Conocer qué es un laboratorio de citogenética y cultivo celular.
Distinguir qué diferencias hay entre estos dos tipos de laboratorio.
Tomar contacto con la organización e instalaciones de dichos laboratorios.
Aprender las funciones del personal de laboratorio.
Comprender la importancia de la gestión de la calidad en los laboratorios de

citogenética y cultivo celular.

Del mismo modo que en la unidad anterior estudiamos el laboratorio
de citogenética, en esta nos centraremos en el laboratorio de biología
molecular. En él, la piedra angular de las técnicas es la Polimerase Chain
Reaction (reacción en cadena de la polimerasa) o PCR, donde partimos de
mínimas copias de ADN para conseguir más y, así, poder hacer lecturas y
análisis del material genético. Esto no permite identificar microorganismos y
células gracias a que amplificamos su material genético hasta hacerlo legible
para las máquinas que lo registran.


práctico de la unidad». Fig. 1. Micropipetas
Audio intro. El laboratorio de Biología

Molecular
https://bit.ly/2xcwCBo
TEMA 2. EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
/ 2. ¿Qué es un laboratorio de biología molecular?

Es un laboratorio dedicado a las técnicas de la Biología Molecular, que son aquellas que estudian fundamentalmente
a los ácidos nucleicos como el ADN, siendo la principal la PCR.
Los laboratorios de Biología Molecular se centran en la PCR, por lo que esta técnica será la que marcará su
organización y estructura.
Recordad que la PCR es una técnica que permite amplificar el material

genético de una muestra para poder analizarla, ya que el que contiene la
muestra de la que partimos es insuficiente para analizarlo.
Del mismo modo que ocurría con los laboratorios de Citogenética, el flujo
de trabajo debe ser unidireccional desde que se reciben las muestras hasta
que se interpretan los resultados. Asimismo, encontramos que debe haber
dos secciones bien diferenciadas en este tipo de laboratorios: una con los
procedimientos previos a la PCR, y otra con los que la incluyen, junto con los
procedimientos posteriores a la misma. Fig. 2. Técnicos trabajando con micropipeta
/ 3. Instalaciones
Atendiendo al punto anterior, estas son las dos secciones bien diferenciadas con las que cuenta un laboratorio de
biología molecular:
• Sección pre-PCR.
• Sección post-PCR.
En la primera se llevan a cabo todos los procedimientos previos a la realización de la PCR, que consisten en la preparación
de los reactivos y productos que se van a emplear y en la extracción del material genético a partir de la muestra.
La segunda sección comprende la realización de la propia PCR, así como la lectura de los resultados.
Es importante separar las zonas estériles o «limpias» de las no estériles o «sucias» para evitar la contaminación
de las muestras.
Recuerda...
El laboratorio de biología molecular se distingue del de citogenética
porque realiza una técnica fundamental de la biología molecular: la PCR.
3.1. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I
Instrumento Función
Termociclador Alterna ciclos de diferente temperatura en una muestra
Separa las sustancias según su carga eléctrica, ya que estas
Electroforesis en gel se desplazan por el gel hacia un polo cargado eléctricamente
o permanecen inmóviles si no presentan carga eléctrica
Permite trabajar en condiciones de seguridad, aislando al
Cabina de bioseguridad
personal y las muestras de contaminantes ambientales
Realiza lecturas de absorbancia para estimar
Espectrofotómetro
la concentración de una sustancia
Autoclave Esteriliza empleando vapor
Tabla. 1.Equipo básico de un laboratorio de biología molecular I
3.2. Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II
Instrumento Función
Mantiene una cantidad de agua a una
Baño termostático
temperatura regulable pero constante
Congelador Congela las muestras y productos
Define el orden en el que se encuentra la secuencia
Secuenciador de ADN
de los nucleótidos de un ácido nucleico
Permite manejar volúmenes muy pequeños,
Micropipeta
del orden de microlitros
Separación de muestras de diferente densidad
Centrífuga
gracias a la acción giratoria de gran velocidad
Tabla. 2.Equipo básico de un laboratorio de biología molecular II
3.3. Salas pre-PCR

Las salas previas a la PCR se dividen, a su vez, en dos secciones:
1. Sala para la preparación de reactivos
Es la primera sala de la sección pre-PCR. Donde se van a preparar todos los reactivos y productos que emplearemos
en la PCR.
Por supuesto, es una zona limpia y el material debe estar libre de cualquier contaminación que pudiera interferir
como, por ejemplo, ADN bacteriano.
Se recomienda que tenga una ligera presión positiva, así como que se trabaje en cabinas de bioseguridad. Que
tenga presión positiva significa que haya más presión dentro de la sala que fuera, por lo que cuando se abra una
puerta, el aire saldrá de la habitación, en lugar de entrar, evitando así que se contamine con gérmenes externos.
2. Sala de extracción de ADN
Es la segunda y última sala de la sección pre-PCR. En esta sala se recibe la

muestra y se prepara mediante el empleo de determinados reactivos que
veremos en unidades posteriores, para proceder a la extracción del ADN de
las células que se quiere amplificar .
Se recomienda que tenga presión negativa, es decir, que haya menor

presión en la sección que en el exterior, por lo que, si se abre una
puerta, ventana o conducto, el aire no saldrá hacia el exterior de la sala,
evitando así la dispersión de contaminantes hacia salas adyacentes. Del
mismo modo que el caso anterior, también se asegura la asepsia en la
técnica al trabajar en cabinas de bioseguridad.
Fig 3. Ejemplo
3.4. Salas post-PCR

Como ocurría con las salas previas a la PCR, estas también se dividen en dos secciones bien diferenciadas, aunque
habitualmente puedan formar parte de la misma
1. Sala de realización de la PCR
En ella se realiza la PCR. Es la primera sala dentro de la sección post-PCR. Es una zona sucia, puesto que se trabaja
con muestras genéticas. Para evitar contaminaciones cruzadas, debe existir presión negativa.
2. Sala post-PCR o de análisis
Esta es la segunda y última sala de la sección pos-PCR. En ella se realiza la electroforesis y la lectura de geles, técnicas
que estudiaremos más adelante cuando veamos la unidad de PCR. Su función es la lectura de los resultados de la PCR.
Idealmente deberían realizarse en una sala oscura (para poder hacer la lectura de los resultados que son luminiscentes,
como se aprecia en la imagen 4) que puede ser complementaria a la sala post-PCR y compartir espacio con la
microscopía de fluorescencia. También se considera una sala sucia cuya presión debe ser negativa.
Fig. 4. Electroforesis en gel de agarosa

/ 4. Caso práctico 1: “Equipo básico”

Planteamiento: para familiarizarnos con el laboratorio de Biología Molecular, nos piden enumerar el equipamiento
básico para el mismo.
Nudo: ¿cuáles son los instrumentos y aparatos básicos de los que precisa un laboratorio de biología molecular?
Recuerda que está principalmente enfocado a la realización de la PCR.
Desenlace: el equipo básico, mínimo e indispensable para un laboratorio de biología molecular, se compone de:
• Termociclador.
• Equipos para realizar electroforesis en gel.
• Documentador de geles.
• Cabina de bioseguridad o de flujo laminar.
• Espectrofotómetro.
• Autoclave.
• Incubadores para cultivos celulares y estufas para cultivos bacteriológicos.
• Baño termostático.
• Placa térmica para hibridaciones.
• Centrifugas y microcentrífugas.
• Equipos de frío (neveras y congeladores)
• Pipetas automáticas, recambios de las mismas y otras herramientas similares para el manejo de las muestras.
Secuenciadores.
• Otros reactivos y equipo específicos de extracción de ácidos nucleicos.
Termociclador
Instrumento que realiza ciclos de temperatura
de tiempos y grados programables.
Baño termostático
Instrumento que mantiene agua a una
temperatura constante en el tiempo.
Tabla. 3.Diferencias entre termociclador y baño termostático

/ 5. Funciones
Las funciones del laboratorio de Biología Molecular consisten en apoyar a los médicos clínicos realizando pruebas
de biología molecular y citogenética necesarias para el diagnóstico de la patología molecular. Como ya hemos
comentado, la PCR es la prueba principal de este servicio.
Estas pruebas determinarán el material genético que contiene la muestra de estudio: si se encuentra ADN o ARN
vírico o bacteriano y, si es el caso, el diagnóstico de infecciones víricas, que es uno de sus principales usos. También
se puede amplificar material genético de pacientes para estudiar patologías genéticas.
Hay que recordar que la asepsia es muy importante cuando trabajamos con ADN, porque la más mínima
contaminación nos ofrecerá resultados que no coinciden con el estado real de la muestra del paciente.
Por supuesto, el laboratorio tiene otras utilidades, como la investigación o la Medicina Forense, pero la que más nos
interesa a nosotros la función relativa al diagnóstico de enfermedades.
Audio 1. Transcriptasa inversa

https://bit.ly/3eUDXGS
/ 6. Recepción e identificación de la muestra

En todos los laboratorios de un hospital, tanto en los de análisis clínicos como en los de anatomía patológica,
las muestras deben seguir estrictos protocolos para minimizar los posibles errores en su transcurso por las
instalaciones del centro hospitalario. Es lo que se conoce como la fase preanalítica en el control de calidad, de la que
ya hablamos en la unidad anterior
Cuando una muestra llega al servicio del laboratorio, debe estar bien etiquetada o identificada con los datos
del paciente. A su vez, si contiene más de un bote, deben estar perfectamente enumerados y debe aclararse qué
muestra contiene cada bote. De lo contrario, los resultados de muestras muy parecidas pueden confundirse. Solo
hay que imaginar dos muestras del mismo órgano, en una de las cuales se halla una lesión cancerosa y en la otra no.
Si se genera confusión, las repercusiones pueden ser muy serias.
Una vez se recibe la muestra, se registra en un sistema de archivos físicos o informático (principalmente
informático) y se codifica. Es decir, se le proporciona un código que será su principal identificación. El objetivo es
que la muestra sea confidencial y no recorra todo el proceso analítico y postanalítico con los datos personales del
paciente en cuestión.
Por supuesto, una vez se recibe la muestra, hay que comprobar que los datos del paciente en la hoja de petición de
laboratorio coinciden con los de la muestra.
Una vez registrada en la base de datos y debidamente codificada, pasa al circuito correspondiente de análisis.
Recuerda...
Al laboratorio, llegan muestras de diferentes servicios. Al recibirlas, pueden
venir con un volante de petición, cuyos datos debemos comprobar.
6.1. Registro, cultivo y almacenamiento de la muestra

El registro de las muestras debe hacerse en una base de datos, preferentemente informatizada.
Evidentemente, este registro debe limitarse al personal responsable de la gestión del laboratorio y a los técnicos
que necesiten averiguar datos concretos sobre la muestra, como su código, para realizar sus funciones. Por ejemplo,
si los resultados de una muestra no son claros o han sufrido algún error, podemos localizar en el almacén la muestra
original del paciente para repetirle las pruebas oportunas.
Es importante recalcar que, cuando se reciben las muestras, suelen hacerse alícuotas, es decir, se divide la muestra
original en otras más pequeñas para dejar una parte almacenada, por si debieran repetirse técnicas sobre ella.
Así, las partes de la alícuota que no se van a emplear o, sencillamente, cuando hay que guardar una muestra,
esta se lleva hasta un almacén. En él, las muestras se clasifican por categorías para que su identificación y
acceso sean sencillos. Por supuesto, debe ser un almacén con acceso
restringido al personal que lo gestione o que deba acceder a dichas
muestras para su procesado.
En función del laboratorio y de la legislación vigente de la región, comunidad

o país, las muestras se almacenarán durante un tiempo prudencial hasta
que, pasado dicho periodo, se eliminan respetando los protocolos de
gestión de residuos que se aplican al laboratorio en cuestión.
Cuando se almacenan muestras de ADN purificadas, debe hacerse en frío, en

neveras para usarse en pocos días, o en congeladores para usos posteriores.
En cambio, el ARN debe almacenarse siempre en congeladores, entre otras Fig. 5. Diferentes tipos de almacenamiento de
razones, por ser más inestable que el ADN. muestras
/ 7. Técnicas básicas que se realizan en el laboratorio

Aunque nos hemos centrado en la PCR, este no es el único procedimiento que se desarrolla en un laboratorio de
Biología Molecular.
Las principales técnicas que se realizan en el ámbito sanitario son:
• Técnicas de extracción de ácidos nucleicos: para extraer el ADN de las células.
• Técnicas de PCR: amplificar el ADN de una muestra.
• Técnicas de electroforesis en gel: para leer los resultados de la prueba.
• Técnicas de visualización de los resultados de la electroforesis en

gel: para poder interpretar los resultados.
• Técnicas de hibridación con sonda: para marcar el ADN y poder

estudiar estas regiones marcadas.
• Técnicas de secuenciación del ADN.
• Técnicas de clonación del ADN.

Fig. 6. Material diverso para técnicas de
Cada una de las diferentes técnicas será explicada con detalle en su biología molecular. Principalmente PCR y
unidad correspondiente. electroforesis en gel
/ 8. Caso práctico 2: “Limpieza, mantenimiento y

calibración”
Planteamiento: calibrar los instrumentos supone desarrollar determinadas pruebas que confirmen que realizan
medidas precisas. Para ello, se comparan las medidas realizadas con patrones estándar conocidos. Entonces, la
medida del instrumento debe darnos el resultado que, a priori, conocemos.
Nudo: vamos a realizar una calibración muy sencilla, la de micropipetas. Tenemos que realizar medidas de volúmenes
y compararlas con patrones fiables.
Desenlace: lo primero que vamos a hacer es tarar un recipiente en una balanza previamente calibrada y que nos
garantice medidas fiables. Posteriormente, tomaremos un volumen concreto de agua destilada con la micropipeta y
lo depositaremos en el recipiente tarado en la balanza.
Si convertimos el peso del agua a volumen, ya que la densidad del agua es 1 g/mL, podremos conocer el volumen
que hemos depositado en el recipiente. Si la micropipeta está calibrada, nos dará un resultado muy aproximado al
que obtenemos en la balanza.
El procedimiento se debe repetir 10 veces, ya que en cada micropipeteo habrá variaciones de volumen. Si alguna
de estas 10 mediciones se sale de unos valores predefinidos por el fabricante (que determinan el margen de
error aceptable para considerar el instrumento calibrado), debemos calibrar la micropipeta con las herramientas
oportunas y siguiendo las instrucciones que nos facilite el fabricante, volviendo a repetir el proceso antes descrito.
Densidad del agua

1 g/dl
Baño termostático
Pesar el agua pipeteada.
Si coinciden el volumen medido con el

peso, atendiendo a la densidad del agua, la
micropipeta estará correctamente calibrada.
Fig. 7. Esquema sobre la realización del calibrado de micropipetas.

/ 9. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad

En esta unidad hemos conocido en qué consiste un laboratorio de biología molecular y los procesos que en él se
llevan a cabo.
Es fundamental destacar la PCR como la prueba más importante de este tipo de laboratorio. Tanto es así que es la
que lo define y, además, lo divide en dos secciones bien diferenciadas: la pre-PCR y la post-PCR. Por otro lado, es
importante identificar que en las salas «limpias» se trabajará con una presión positiva, mientras que en las «sucias»
se trabajará con una negativa.
A cualquier muestra que llegue al laboratorio se le asignará un código y se realizarán alícuotas, reservando el resto
de la muestra en un almacén específico donde se conservará durante un periodo de tiempo prudencial, por si hubiera
que rescatar más material para repetir la prueba inicial o para realizar nuevas pruebas diferentes a las ya efectuadas.
La muestra que nos han mandado al laboratorio llega primero al registro. Aquí se le asignará un código, se registrará
en la base de datos y se realizarán alícuotas para enviar una a procesar y el resto al almacén.
El primer lugar que visitará la muestra será la sala de extracción de ácidos nucleicos, ya que solo nos interesa el
material genético para realizar una PCR.
A continuación, pasará a la sala donde se realiza la PCR. En ella se dispone del instrumental preciso para llevar a
cabo la técnica.
Finalmente, llegará a la sala de electroforesis donde podemos encontrar otra sección
/ 10. Bibliografía
Mérida F. J. y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Módulo III: biología molecular y citogenética. Madrid: Médica
Panamericana.
Martí Veciana, A. (1999). «NTP 508: Aseguramiento de la calidad en los laboratorios de higiene industrial: procedimientos normalizados de trabajo (PNT)».
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. Recuperado de:
https://www.insst.es/documents/94886/327064/ntp_508.pdf/ae8328ac-ec17-4a04-b7de-24b4442a14d2
Ruiz Morer, R. (2006). «Recomendaciones para la calibración de material volumétrico en el laboratorio clínico». Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular. Química Clínica, 25(2), pp. 104-110.
Universitat de Valéncia, Facultat de Química, Comisión Seguridad Laboratorios. «Medidas de seguridad en el laboratorio». Recuperado de: https://www.uv.es/
qflab/2019_20/descargas/normas_seguridad/normSeFac0809Cast.pdf
Esterilización en el
laboratorio. Normas y
técnicas
3
/ 2. ¿Qué entendemos por esterilización? 4
/ 3. Tipos de esterilización 4
/ 4. Caso práctico 1: “Antibióticos y fungicidas” 5
/ 5. Otros conceptos básicos sobre higiene 5
/ 6. Normativa de manipulación del material estéril 6
/ 7. Técnica aséptica 7
8.1. Cabinas de seguridad biológica 8
8.2. Procedimiento de trabajo en cabinas de seguridad biológica 8
/ 9. Caso práctico 2: “Aire acondicionado” 9
/ 10. Fuentes de contaminación 9
© MEDAC 978-84-18864-26-1
Definir los conceptos de limpieza, desinfección y esterilización.
Conocer las técnicas para trabajar en condiciones ideales de higiene.
Comprender la importancia de la técnica aséptica.
Conocer los protocolos en caso de contaminación.

La importancia de esta unidad reside en que, en los laboratorios de biología
molecular y citogenética, el resultado depende completamente de la correcta
manipulación aséptica de las muestras, especialmente en los cultivos
celulares. Por ello, conoceremos cómo se realizan estas técnicas de manera
adecuada, respetando la higiene ideal y asegurando evitar la contaminación
de las muestras, que alteraría los resultados de los análisis que desarrollemos.
A continuación, vamos a plantear un caso a través del cual podremos


Fig. 1. Señal de riesgo biológico
Audio intro. Higiene en el laboratorio

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TEMA 3. ESTERILIZACIÓN EN EL LABORATORIO. NORMAS Y TÉCNICAS
/ 2. ¿Qué entendemos por esterilización?

En lo que se refiere a higiene del laboratorio, tenemos que conocer tres conceptos que, ordenados de menor a mayor
higiene, son: limpieza, desinfección y esterilización.
La limpieza contempla, simplemente, la eliminación de la suciedad adherida a los materiales, sin atender a la
eliminación de microorganismos. Aun así, es primordial que el material esté
limpio, pues la suciedad porta formas de vida microbianas.
La desinfección va un paso más allá, ya que consiste en la eliminación de la

mayor parte de formas de vida microbianas (o, al menos, las patógenas). Sin
embargo, a la desinfección habitualmente se le escapan esporas y formas de
vida microbianas resistentes.
La esterilización, en cambio, supone la erradicación total de toda forma de

vida microbiana, incluso las esporas y formas de vida microbiana resistentes. Fig. 2. Esterilización de material en autoclave
/ 3. Tipos de esterilización
Hay dos formas principales de esterilización a través de métodos físicos. Se ejecutan mediante el uso de calor o de
radiaciones ionizantes.
Calor
Es el más empleado. Es muy eficaz porque la mayoría de los seres son sensibles
a las altas temperaturas. El inconveniente es que muchos materiales también lo
son, y se destruyen o alteran, como los plásticos. Se distinguen dos tipos de calor:
• Húmedo: emplea vapor. Es el caso de los autoclaves. Es el más

eficiente, ya que necesita menos temperatura para esterilizar que el
calor seco.
• Seco. Distinguimos 3 tipos según la fuente de calor:
• Hornos: para material no inflamable y resistente al calor. Fig. 3. Autoclave
• Flameados: exponemos un objeto o parte del mismo a una llama.

Muy empleado en las asas de siembra de microbiología.
• Incineradores: para el material desechable, ya que se incinera

dentro de un contenedor biológico.
Radiaciones ionizantes
Se emplean generalmente rayos gamma. Son útiles para esterilizar material

sensible al calor. Requiere, por supuesto, de instalaciones protegidas frente
a radiación, así como un equipo emisor de radiación gamma mediante la
descomposición de isótopos radiactivos. Fig. 4. Horno o estufa de secado
Audio 1. Diferentes métodos de

desinfección
https://bit.ly/3cNWfYa
/ 4. Caso práctico 1: “Antibióticos y fungicidas”

Planteamiento: la esterilidad es primordial en los laboratorios de biología molecular y citogenética, ya que
la contaminación de los cultivos provoca que no crezcan las células que deben crecer. Por ello, el empleo de
antibióticos y fungicidas en los medios de cultivo celular es importante para evitar el crecimiento de hongos y
bacterias que lo contaminen. Algunos de los más empleados son la Penicilina, la Gentamicina (antibióticos) y la
Anfotericina-B (antifúngico).
Nudo: en nuestro caso, un cultivo celular se ha contaminado con un microorganismo que debería ser sensible al
antibiótico que contenía dicho cultivo. ¿Qué ha podido pasar?
Desenlace: tras investigarlo, descubrimos que nuestro nuevo compañero, que aún no domina la esterilización (pues
no la ha realizado en el material de laboratorio), solo ha limpiado el material. En consecuencia, formas resistentes al
antibiótico consiguieron sobrevivir y han podido desarrollarse y contaminar nuestros cultivos.
Fig. 5. Antibiograma en el que en el cultivo de la izquierda se

aprecian discos impregnados de antibiótico, y un halo de inhibición
del crecimiento bacteriano, más grande cuanto más sensibles son las
bacterias a dicho antibiótico.
/ 5. Otros conceptos básicos sobre higiene

Asepsia: ausencia de agentes biológicos en material inerte. También consiste en impedir que microorganismos
patógenos colonicen una superficie.
Antisepsia: inactivación del crecimiento y actividad o destrucción de microorganismos presentes en piel y mucosas
de seres vivos, no sobre instrumental.
¡Recuerda! La asepsia busca evitar la contaminación mientras que la antisepsia pretende eliminar la contaminación
ya presente.
Bactericida: sustancia que es capaz de eliminar bacterias.
Bacteriostático: sustancia que inhibe el crecimiento de bacterias.
Biocida: sustancias que, de algún modo, alteran o destruyen microorganismos

patógenos.
Infestación: invasión de un organismo por parásitos, que pretenden

sobrevivir a costa del huésped que parasitan.
Infección: invasión de un organismo por parte de virus o bacterias. En este caso,

no pretenden sobrevivir a costa de su huésped y pueden llegar a causar la muerte. Fig. 6. Imagen al microscopio de Taenia
solium, parásito intestinal del hombre
/ 6. Normativa de manipulación del material estéril

Atendiendo a los estándares y recomendaciones de la Unidad Central de Esterilización del Ministerio de
Sanidad, destacamos:
Manipulación
• El material estéril debe manipularse con las manos limpias y secas o con guantes limpios, no tras haberlos
empleado en otras actividades.
• Nuestra ropa debe encontrarse en perfectas condiciones de limpieza.
Transporte
• Los carros deben ser de fácil limpieza, de superficie plana y lisa. Se recomienda que sean de aluminio o
plásticos termorresistentes.
• Transportar el material en carros adecuados según el volumen de material y nunca llevar el material estéril
pegado a la ropa.
• Es importante tener carros asignados a cada unidad. Estos pueden ser abiertos, protegidos o cerrados.
Almacenamiento
• Lugar separado de zonas contaminadas.
• De fácil limpieza, con paredes lisas.
• Zona suficientemente amplia y de acceso restringido.
• Se recomiendan muebles con ruedas para poder retirarlos de las paredes para proceder a su limpieza.
• Muebles siempre ordenados y limpios.
• Los contenedores deben colocarse de tal forma que se identifique fácilmente su contenido y caducidad.
• Los materiales se ordenan por grupos homogéneos y en sentido vertical, si es posible.
• Los paquetes se deben situar al menos a 25 cm del suelo y a 40 cm del techo.
• Las condiciones ambientales deben ser las idóneas.
• Antes de colocar cualquier producto en el almacén, o antes de su uso, debe comprobarse que cumple las
exigencias de material estéril.
Fig.7. Material esterilizado

/ 7. Técnica aséptica
El correcto cumplimiento de las normas de laboratorio es lo que garantiza la no contaminación del material.
Entre ellas, encontramos algunas tan básicas como:
• Lavado frecuente de manos.
• Empleo de batas desechables.
• Correcta limpieza de nuestra bata de laboratorio.
• Empleo exclusivo de material estéril.
• Trabajo con superficies e instrumentos desinfectados o esterilizados.
• En algunas secciones, disponer de llama para flambear instrumental que queremos esterilizar.
• Trabajar, siempre que sea posible, en cabinas de flujo laminar, las

cuales estudiaremos detalladamente en apartados posteriores.
• Transportar el material estéril debidamente cerrado desde su almacén

hasta la zona de trabajo y solo abrirlo en el momento de usarlo.
• En zonas donde se requiera esterilidad, restringir la entrada a todo el

personal que no deba trabajar allí.
• Depositar el material desechable en su contenedor correspondiente. Fig. 8. Técnico trabajando en cabina de flujo
laminar
/ 8. Instalaciones
Las instalaciones del laboratorio (vistas en las dos unidades anteriores) deben contar con una exquisita limpieza.
Incluso las zonas «sucias» deben limpiarse rigurosamente.
Para ello, es importante que todas las instalaciones se barran y frieguen con desinfectantes químicos apropiados;
paredes y techo incluidos, si es posible. Es imprescindible que no quede suciedad ni polvo de ningún tipo, mucho
menos en zonas de trabajo. Por ello, hay que asegurarse de que tanto mesas, sillas, paredes, esquinas, suelo,
ordenadores, equipos de trabajo y todo el material, así como las propias instalaciones, estén libres de suciedad y se
encuentren debidamente desinfectados.
El instrumental que se emplee y que no precise esterilidad puede lavarse en lavadores automáticos o a mano. En
el caso de lavarlo a mano, debe hacerse con una escobilla y con una pequeña cantidad de jabón o detergente (sin
abusar de estos) y con agua corriente, aunque el último aclarado debe darse con agua destilada. Esto evitará que
se depositen sales y metales en el material.
Aquel instrumental que deba esterilizarse pasará, en la mayoría de los casos, al autoclave, habitualmente en
envoltorios individuales. En el caso de ser sensibles a la humedad, puede emplearse el horno; si no resisten el calor,
los esterilizaremos mediante radiaciones ionizantes, aunque este último proceso normalmente se realiza en unidades
externas al laboratorio. Recuerda que hay materiales que no resisten la humedad, como el papel o diversos plásticos.
8.1. Cabinas de seguridad biológica

Son un instrumento fundamental en los laboratorios de microbiología y biología molecular y citogenética. Su función
es proteger a los trabajadores de aerosoles con potencial infectivo.
Proporcionan seguridad frente al material infeccioso, pero no incluye el riesgo por sustancias radiactivas,
tóxicas o corrosivas.
Dentro de estas cabinas de seguridad se produce una corriente de aire, de forma que se extrae el aire del local,
expulsando fuera una parte y recirculando otra por la cabina, aunque existen diferentes modelos. Cuentan con
filtros HEPA (filtros especiales que pueden retener partículas de micras de tamaño) para evitar corrientes que disipen
los microorganismos de la cabina hacia el resto del laboratorio. Existen 3 tipos de cabinas de seguridad biológica:
• Cabinas de clase I: Es una cabina que trabaja a presión negativa. El aire tiene una entrada frontal y se expulsa
al exterior en su totalidad.
• Cabinas de clase II: En este tipo de cabina, no solo se pretende proteger al trabajador del material manipulado,
sino también de la contaminación externa. Para ello, cuenta con un flujo de aire filtrado estéril descendente,
un flujo laminar vertical. En ellas, parte del aire se recircula al área de trabajo mientras que otra parte se
elimina. Ambos deben ser filtrados mediante el uso de filtros HEPA. Existen dos clases dentro del tipo II:
• Clase II A: el 70 % del aire es recirculado al área de trabajo, mientras que un 30 % es extraído.
• Clase II B: el 70 % del aire es extraído, mientras que un 30 % es recirculado al área de trabajo.
• Cabinas de clase III: Aíslan completamente la zona de trabajo del laboratorio. Habitualmente, un panel
frontal cierra herméticamente la cabina y el trabajador manipula las muestras a través de guantes de goma
incorporados en dicho panel frontal.
8.2. Procedimiento de trabajo en cabinas de seguridad biológica

Según el NTP 233 (Notas Técnicas de Prevención), el procedimiento de trabajo en cabinas de seguridad biológica
es el siguiente:
• Movimientos lentos de brazos y manos.
• No realizar las maniobras muy cerca de la superficie de trabajo.
• Evitar salpicar o golpear los filtros HEPA.Se recomienda poner en marcha la cabina entre 15 y 30 minutos antes
de su utilización y dejarla funcionando 15 minutos después de su uso, o volver a usarla y conectar luz UV.
• Desinfectar con alcohol isopropílico de 70% la superficie de trabajo antes de depositar el material de trabajo.
• Esperar 2-3 minutos antes de comenzar a trabajar, una vez se haya depositado material de trabajo
en su interior.
• No introducir material innecesario.
• No colocar objetos entre el filtro y el área de trabajo.
• Al terminar de trabajar en la cabina, desinfectar con alcohol de 70%.
Recuerda...
Antes de comenzar, comprueba que tienes todos los EPI y que has
informado a tus compañeros de que vas a trabajar en la cabina de
bioseguridad.
/ 9. Caso práctico 2: “Aire acondicionado”

Planteamiento: entre nuestras funciones de limpieza, está la de mantener desinfectadas las superficies de trabajo y
parte del material que no precisa esterilidad (el que sí la requiere pasa a ser esterilizado). En cambio, el resto de las
instalaciones lo limpia y desinfecta el servicio de limpieza, que a menudo está infravalorado y olvidado.
No sabemos muy bien por qué, pero en un cultivo celular hemos encontrado contaminación bacteriana del género
Legionella. Todo el material había sido debidamente desinfectado y esterilizado, las superficies de trabajo también
y, por supuesto, los instrumentos empleados como la incubadora.
Nudo: entonces, ¿cómo ha podido contaminarse el cultivo celular?
Desenlace: hay partes en el laboratorio que escapan a nuestra atención. Habitualmente son los filtros de agua,
los aires acondicionados, algunos recovecos y esquinas de muebles, etc. El personal de limpieza que se encarga
de mantener el laboratorio limpio ha descuidado el mantenimiento del mismo por continuas huelgas y protestas
debidas a sus precarias condiciones laborales. Para evitar ceder a sus peticiones, los técnicos han tenido que limpiar
el laboratorio, pero han olvidado una zona importante: el aire acondicionado, que es primordial para mantener
las condiciones de temperatura apropiadas, pero también acumula suciedad y con ella gérmenes, los cuales han
infectado los cultivos y han echado a perder todo el proceso que habíamos realizado.
Fig. 9. Suciedad en el aire acondicionado
/ 10. Fuentes de contaminación

Después de hablar de la importancia de mantener el laboratorio libre de toda contaminación, vamos a explicar qué
es la contaminación y de dónde puede proceder.
Contaminación es toda aquella sustancia o energía que altera la pureza o condiciones normales de una cosa o medio.
Es decir, en nuestro caso, son sustancias y microorganismos que no deberían estar en el laboratorio.
La principal fuente de contaminación son los propios técnicos, a causa de unas manos mal lavadas, de los aerosoles
y de la saliva que proyectan al hablar y estornudar, y de otra serie contaminantes que arrastran en sus zapatos y
prendas de vestir. De esta manera, portan al laboratorio gérmenes y sustancias que contaminan el instrumental
y las instalaciones.
Por ello, no se debe salir nunca del laboratorio con la bata puesta ni se deben olvidar los protocolos de lavado de
manos. Igualmente, siempre deben llevarse todos los EPI que correspondan.
Recuerda...
Es de vital importancia lavarse las manos correctamente para evitar
contaminar tanto las muestras como los materiales del laboratorio.

unidad
En esta unidad, hemos expuesto la necesidad de mantener condiciones ideales de higiene y limpieza en el laboratorio,
que permitan una correcta técnica aséptica para evitar la contaminación del instrumental y las muestras.
Así, es importante conocer que el método más empleado de esterilización es el autoclave. Es imprescindible distinguir
esterilización de desinfección, ya que el primero supone la erradicación total de microorganismos, mientras que el
segundo no contempla la eliminación de formas de vida microbianas resistentes ni esporas.
Para garantizar un trabajo seguro con muestras que puedan contaminarse o que puedan contaminar, tenemos
las cabinas de seguridad biológica, donde se crean barreras mediante corrientes de aire para que las muestras no
contaminen el laboratorio o a la inversa (que estas no se contaminen con elementos del mismo). Estas barreras varían
en función del tipo de cabina. Es crucial seguir unas normas adecuadas de trabajo en ellas para garantizar su eficacia.
Por supuesto, recordad que todo en el laboratorio, tanto los instrumentos como las instalaciones, debe estar
perfectamente limpio y desinfectado, es decir, deben limpiarse y desinfectarse bien todas las superficies de trabajo,
suelos, paredes, techos (si es posible), equipamiento y material.
Antes de proceder a realizar el cultivo, comprobamos que todo está limpio y ordenado y que contamos con todos
los instrumentos necesarios, en su respectivo almacén, debidamente higienizados y esterilizados (en aquellos
que lo requieran).
Nos acercamos a la cabina de bioseguridad. En este caso, al tratarse de un cultivo celular, queremos evitar que se
contamine con agentes del laboratorio, por lo que la cabina que emplearemos es de clase II. La encenderemos 15-
30 minutos antes de comenzar a trabajar. Pasado este tiempo, la desinfectaremos con alcohol de 70% y dejaremos
en su interior solo el material imprescindible. Pasados 2-3 minutos realizaremos el procedimiento con cuidado, sin
movimientos bruscos y evitando obstruir el filtro HEPA. Cuando acabemos, volveremos a desinfectar la cabina con
alcohol de 70% y la dejaremos otros 15 minutos encendida antes de apagarla. En cuanto al material empleado, se
depositarán los residuos en sus contenedores pertinentes, mientras que el material reutilizable pasará a su limpieza
y posterior esterilización.
/ 12. Bibliografía
Arrufat, T. Taller: esterilización de material sanitario en atención primaria. Recuperado de:
https://www.aragon.es/documents/20127/674325/04-2-Taller_4.pdf/c9e87264-a088-385b-f67a-d02db5e901e0
Comisión de Ética de Investigación. (2014). «Niveles de Bioseguridad en laboratorios». Universidad de Murcia. Recuperado de:
https://www.um.es/web/comision-etica-investigacion/experimentacion/niveles-de-bioseguridad
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. NTP 233. (1989). «Cabinas de seguridad biológica». Recuperado de: https://www.insst.es/
documents/94886/327166/ntp_233.pdf/75da9925-4f91-4bf3-877f-e2c9c39ecbd1
Ministerio de Sanidad, Política Social e Igualdad. (2011). Unidad central de esterilización. Estándares y recomendaciones. Recuperado de: •
https://www.mscbs.gob.es/organizacion/sns/planCalidadSNS/docs/EERR/Central_de_Esterilizacion.pdf
Seguridad en el
laboratorio. Uso
eficiente de los
recursos
4
/ 2. Normativa general de seguridad 4

2.1. Protocolo de seguridad del personal 4
2.2. Manipulación de muestras y productos químicos 5
/ 3. Caso práctico 1: “Riesgo por exposición a agentes biológicos” 6
/ 4. Protocolo de actuación en caso de emergencia 6
/ 5. Gestión de residuos 8
5.1. Procedimiento de eliminación de residuos químicos 9
5.2. Residuos biosanitarios 10
5.3. Procedimiento de eliminación de residuos biosanitarios 12
/ 6. Uso eficiente de los recursos 12
/ 7. Caso práctico 2: “Señalización de riesgos” 13
© MEDAC ISBN: 978-84-18864-26-1

Identificar los riesgos y peligros potenciales en un laboratorio.
Aprender a evitar accidentes en el laboratorio.
En caso de accidente, conocer los procedimientos adecuados para socorrer a las

víctimas.
Conocer cómo se deben gestionar los residuos en un laboratorio.

La seguridad es un aspecto fundamental a la hora de trabajar en un laboratorio. Existen normas y protocolos que
se deben cumplir para asegurar que ningún trabajador se exponga (más de lo inevitable) a sufrir ningún tipo de
accidente. Aun así, es probable que ocurran y, por ello, se planifican también
procedimientos de actuación específicos para accidentes químicos, físicos o
biológicos.
Otro punto que debe conocerse es la gestión de los residuos de un laboratorio,

para cuidar el medioambiente y evitar que se produzcan accidentes en su
eliminación. La gestión de los residuos, por tanto, está íntimamente ligada
a la seguridad.


Encontrarás su resolución en el apartado «Resumen y resolución del caso Fig. 1. Trabajadora colocándose EPI
Audio intro. Medidas de seguridad en el

laboratorio
https://bit.ly/3eSfX6Y
TEMA 4. SEGURIDAD EN EL LABORATORIO. USO EFICIENTE DE LOS RECURSOS
/ 2. Normativa general de seguridad

Aunque cada laboratorio presenta unos riesgos determinados en función de la naturaleza de su trabajo, todos
tiene algunos riesgos en común. Con el objetivo de evitar que se produzcan accidentes, se plantean normativas de
seguridad para los trabajadores de laboratorios, de forma que, trabajen donde trabajen, todos deben cumplir unas
mínimas normas de higiene y seguridad. Después, cada laboratorio, según los riesgos específicos a los que expongan
sus trabajadores, tomará medidas adicionales, en caso de ser necesarias.
Cada laboratorio debe contener una serie de normas, recogidas en una

normativa de seguridad, que deberán cumplir todos sus trabajadores. Lo
normal es que se disponga, además, de un equipo de prevención de riesgos
laborales o de un comité de salud y seguridad. Asimismo, es responsabilidad
del director del laboratorio desarrollar la gestión del material de prevención
de riesgos laborales.
Muchas de las normas que estas normativas recogen ya son conocidas como,
por ejemplo: no comer ni beber en el laboratorio, no llevar joyas ni bisutería,
no correr ni realizar movimientos bruscos, emplear equipos de protección Fig. 2. Equipos de protección individual en el
individual (EPI), etc. laboratorio
2.1. Protocolo de seguridad del personal

Como comentamos en el apartado anterior, la seguridad depende, en gran medida, de los buenos hábitos y del
correcto comportamiento del personal del laboratorio. Otros factores que también influyen son el estado del
material o el mantenimiento de los aparatos. Pero en última instancia, el factor humano es el que determina que se
produzca o no un accidente.
Merecen especial atención los equipos de protección individual o EPI. Son aquellos atuendos y protecciones que
evitan que los trabajadores se expongan de manera directa a los diversos agentes biológicos, físicos o químicos que
existen en su trabajo.. De todos modos, estos no disminuyen el riesgo de accidente, el cual se reduce mediante otras
medidas preventivas como buenos hábitos y conductas en el puesto de trabajo, o revisiones periódicas del material
y los instrumentos que empleen los trabajadores.
Por ello, todos los trabajadores deben cumplir unas normas mínimas para trabajar en el laboratorio:
• Lo primero es entrar al laboratorio sin mochilas, bolsas, bolsos, maletines ni otros objetos similares. Esto evita
que se vuelquen o caigan cosas de las mesas por accidente.
• El pelo debe traerse recogido; relojes, joyas y bisutería quitados; ropa cómoda que permita un movimiento
natural y no emplear lentes de contacto.
• Cada trabajador debe llevar, como mínimo, una bata de laboratorio, e ir añadiendo otros equipos de protección
según la labor que vaya a realizar (por ejemplo, guantes, gafas de laboratorio o mascarilla).
• Las manos deben lavarse al entrar y al salir del laboratorio, así como antes y después de cada operación.
• Nadie tendrá permitido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.
• No se debe llevar ningún producto a la boca ni a la nariz.
• Las heridas deben ir debidamente cubiertas.

TEMA4.SEGURIDADENELLABORATORIO.USOEFICIENTEDELOSRECURSOS
2.2. Manipulación de muestras y productos químicos

Como en el laboratorio trabajaremos con productos químicos o biológicos peligrosos, la forma en que los manejemos
será crucial para mantener una buena seguridad.
Deberemos, por lo tanto:
• Contar con la ficha de seguridad de todos los reactivos que vayamos a emplear.
• Tener identificado el producto que vamos a utilizar, conociendo o leyendo sus pictogramas de peligrosidad.
• Trabajar en ambientes adaptados, por ejemplo, en cabinas (si empleamos productos peligrosos) o en zonas
aisladas para realizar trasvases de productos químicos.
• Manipular cuidadosamente todos los recipientes. Por supuesto, evitar agarrar varios a la vez, llevarlos bajo el
brazo, pegados al cuerpo, etc.
• Debe existir una buena ventilación, y debemos evitar dejar los envases destapados.
• Comprobar la calidad de los productos químicos, así como la idoneidad de los EPI. Esto es importante, ya que
los EPI se adaptan según el trabajo que se vaya a realizar.
• Preparar todos los productos que emplearemos antes de comenzar a trabajar.
• Evitar que los reactivos estén próximos a focos de ignición o puntos de calor.
• Almacenar los productos químicos atendiendo a sus características.
Fig. 3. Arriba, pictogramas de peligrosidad de los productos químicos.

Abajo, normas de almacenamiento de diferentes productos químicos.
/ 3. Caso práctico 1: “Riesgo por exposición a agentes

biológicos”
Planteamiento: En un laboratorio de microbiología, uno de tus compañeros se siente muy incómodo con los equipos
de protección individual, por lo que decide que hoy no se pondrá los guantes.
Tu compañero es muy cuidadoso e intenta no contaminarse, pero es difícil trabajar seguro sin EPI cuando manejas
muestras microscópicas, ya que la contaminación no puede verse a simple vista. Sin darse cuenta, roza ligeramente
la muestra que está trabajando con la yema del dedo.
Además, de manera instintiva, se rasca la nariz, porque siente picores y no

quiere estornudar sobre las muestras. De modo que se ha pasado la mano
por la cara. Como era de esperar, al día siguiente tu compañero no acude al
trabajo porque tiene fiebre, diarrea, vómitos y calambres abdominales.
Nudo: ¿Qué ha podido suceder?
Desenlace: Cuando se obtienen los resultados de la muestra que manejó,

aparece contaminación por Salmonella. De esta forma, tu compañero se
ha infectado y sufre salmonelosis, ya que ha estado expuesto a este agente Fig. 4. Salmonella vista al microscopio
biológico sin las medidas de protección adecuadas. electrónico
/ 4. Protocolo de actuación en caso de emergencia

Por muchas medidas que tomemos, siempre que haya un trabajador habrá riesgos y peligro, lo que se traduce en
que, antes o después, se dará una situación de emergencia debida a un accidente, fenómeno natural o catástrofe.
Fig. 5. Protocolo interno de actuación ante incendio de la UNED.

Lo primero de todo y lo más importante es mantener la calma, ya que sea cual sea la gravedad de la situación,
un estado de nerviosismo no nos ayudará a gestionar adecuadamente el procedimiento de auxilio y socorro o de
evacuación. Por lo que el problema podría convertirse en una situación verdaderamente grave.
Lo normal es que se dé un aviso, tras el cual se reciben unas instrucciones, atendiendo a protocolos específicos de
socorro y auxilio (caso de accidente de un trabajador) o de evacuación (caso de una situación de emergencia). En
un accidente se debe atender a los lesionados según se especifique en los protocolos, mientras que, en el caso de una
evacuación, es necesario abandonar las instalaciones de manera ordenada por la salida de emergencia más cercana,
teniendo en cuenta los siguientes puntos:
• Las puertas se cierran sin llave, procurando no dejar a nadie dentro.
• Los equipos eléctricos deben quedar apagados.
• No se deben obstaculizar entradas ni salidas, no se deben emplear ascensores y se debe utilizar la parte
externa de las escaleras para no obstaculizar el paso a los equipos de emergencia.
• No se debe recoger material personal, salvo que sea imprescindible.
• Procurar ayudar en la evacuación de discapacitados y minusválidos.
• Salir del edificio de manera ordenada, evitando correr y, si hubiera

humo, hacerlo agachados y con la boca tapada. En caso de que se
prendiera la ropa, hay que tirarse al suelo y rodar. Fig. 6. Acrónimo PAS: Protege, Avisa y Socorre
Incendio pequeño
Se debe apagar el fuego con un extintor adecuado. No debemos utilizar agua si se ha prendido un disolvente. De
ser posible, retirar todos los reactivos inflamables de alrededor. En caso de que sea factible, se puede extinguir
tapándolo con un recipiente del tamaño apropiado.
Incendio grande
Hay que aislar el fuego (mantener ventanas y puertas cerradas). Intentar extinguirlo con extintores adecuados. Si no
es posible, presionad la alarma de incendios, avisad a los equipos de emergencia y evacuad el edificio.
Quemaduras
Si son de primer grado, bastará con aplicar agua fría unos 10-15 minutos. Para aliviarla podemos emplear una
compresa y crema. Si son más graves, no emplear pomadas grasas y espesas y acudir a un médico inmediatamente.
Cortes
En primer lugar, deben lavarse bien con agua corriente durante un mínimo de 10 minutos. Valorar si existen restos
de cristales o material cortante para eliminarlos. Si deja de sangrar, lavar con agua y jabón y taparlo con una venda o
apósito. Si no se detiene la hemorragia, hay que cubrir la herida, presionarla y acudir a un médico inmediatamente.
Audio 1. La regla PAS

https://bit.ly/3aC0vIZ
Recuerda...
Es esencial que el personal de laboratio sepa actuar en casos de
emergencia, además de conocer las técnicas básicas de primeros auxilios.
Derrame de productos químicos en la piel
Deben lavarse inmediatamente con agua, durante un mínimo de 15 minutos. Si el fregadero fuera insuficiente,
emplear la ducha de seguridad o el lavaojos. Tras el lavado, si el agente que cae en la piel es ácido, neutralizar con
bicarbonato de sodio; si es básico, con ácido bórico o ácido acético al 1%. Secar y cubrir la zona afectada con una
pomada de ácido tánico y acudir al médico lo antes posible.
Ingestión de productos químicos
Lo primero es comunicar el caso a los servicios sanitarios y a los responsables del laboratorio. No provocar el vómito
si ha ingerido ácidos y álcalis fuertes; en caso contrario, se le puede provocar bebiendo un vaso de agua tibia con
bicarbonato o sal. En cualquier caso, le daremos un litro de agua para beber, para diluir el tóxico. Si tenemos un
antídoto disponible, por supuesto se lo daremos. También podemos emplear «antídotos universales» como claras
de huevo en un litro de agua, que protegen la mucosa gástrica. Además, el accidentado permanecerá en posición de
defensa si está inconsciente y, en cualquier caso, bien abrigado.
Inhalación de productos químicos
Conducir a la persona a una zona bien ventilada, con aire fresco. No suministrar oxígeno si no estamos cualificados para
ello. Practicar respiración boca a boca si presenta dificultades respiratorias. Precisar atención médica lo antes posible.
Recuerda...
Hay que tener especial cuidado con los porductos químicos, ya que
pueden provocar un daño considerable en nuesto cuerpo.
/ 5. Gestión de residuos
Todo aquel material ya empleado, inservible, contaminado y desechable debe gestionarse como un residuo. Esto
consiste en eliminarlo de una u otra forma, atendiendo a su naturaleza.
Residuos químicos
Normalmente no se eliminan por el desagüe. Se depositan, tras ser empleados, en recipientes específicos atendiendo
a su pH o atendiendo a si son disolventes halogenados o no halogenados; estas distinciones son importantes ya que,
por ejemplo, los compuestos halogenados son más tóxicos que los no halogenados.
Residuos radiactivos
Por su naturaleza radiactiva, deben almacenarse en una instalación aislada y protegida frente a la radiación, donde
se podrán recuperar si son residuos de almacenamiento temporal, o se eliminarán por personal especializado si son
residuos de almacenamiento definitivo.
Residuos biosanitarios
Se gestionan de una manera similar a los residuos químicos, desechándolos enseguida en recipientes específicos
y evitando que se acumulen. Cuando son infectocontagiosos, se depositan en recipientes opacos, de capacidad
limitada a 60-70 litros y con una identificación clara de «material infeccioso». En el caso de ser restos cadavéricos,
será un servicio funerario o forense el encargado de eliminarlos y, en el caso de restos animales, se encargará un
servicio veterinario.
En el caso de los residuos urbanos y del material fungible (material no reutilizable que se desecha inmediatamente
tras su uso), se gestionan mediante las normas básicas de reciclaje que se aplican a cualquier domicilio.
Fig. 7. Tabla con diferentes tipos de residuos de laboratorio.
5.1. Procedimiento de eliminación de residuos químicos

Aunque lo normal es depositar los residuos químicos en envases específicos que después serán eliminados, también
pueden desecharse por el desagüe. Esta es una medida excepcional que debe contar con el tratamiento previo de la
muestra, en función de la naturaleza de la misma.
La Nota Técnica de Prevención (NTP) 276 del Instituto Nacional de Seguridad y Salud en el Trabajo (INSST) recoge
un listado de productos químicos y comunica cómo deben tratarse antes de verterlos por el desagüe o eliminarlos
(por ejemplo, se emplean sustancias básicas como el bicarbonato o el carbonato sódicos para los ácidos). También
nos indica cómo incinerar algunos residuos químicos o qué procedimientos debemos realizar para recuperar otros
que puedan aprovecharse tras su uso.
En el caso de los residuos radiactivos, como hemos visto en el apartado anterior, deben almacenarse en lugares
protegidos y aislados frente a la radiación, siguiendo unos protocolos de gestión adaptados a sus propiedades físico-
químicas y a la semivida de desintegración de dichos residuos. Todos estos protocolos los gestiona el Consejo de
Seguridad Nuclear (CSN).
Añadir un exceso de carbonato de sodio y

Sales inorgánicas: agua. Dejar en reposo (24h). Neutralizar con
ácido clorhídrico 6M y echar al desagüe.
Tratar con una sustancia reductora y

Oxidantes:
neutralizar. Echar al desagüe.
Añadir bicarbonato sódico y agua. Dejar en

Reductores:
reposo (2h). Neutralizar. Echar al desagüe.
Tratar con (CIO)2 Ca (disolución alcalina).

Cianuros:
Dejar en reposo (24h). Echar al desagüe
Alcalis cáusticos y amoníaco: Neutralizar. Verter al desagüe
Haluros de ácidos orgánicos: Añadir bicarbonato sódico y agua. Echar al desagüe.
Añadir una disolución de cloruro férrico con agitación.

Sulfuros inorgánicos:
Neutralizar carbonato de sodio. Echar al desagüe.
Añadir sobre agua en un recipiente grande,

quemar el hidrocarburo que se desprende. Dejar
Carburos:
en reposo (24h). Echar el líquido por el desagüe.
Tirar a un vertedero el precipitado sólido.
Tabla 1. Ejemplos de tratamiento de productos químicos previo a su eliminación.
5.2. Residuos biosanitarios

Son todos aquellos derivados de la actividad sanitaria. Atendiendo al NTP 372 del INSST, dentro de los residuos
biosanitarios distinguimos cuatro grupos:
Residuos sanitarios asimilables a residuos municipales o de tipo I
Son los mismos residuos que se generan en cualquier otro lugar, como papel, cartón, material de oficina, etc. No
precisan de ninguna particularidad en su gestión.
Residuos sanitarios no específicos o de tipo II
En este caso, se precisan medidas de prevención en su manipulación, recogida, almacenamiento y transporte, pero
únicamente en el centro sanitario. Incluyen material contaminado con sangre, secreciones o excreciones, tales como
vendajes, yesos, material de curas, etc.
Residuos sanitarios específicos o de riesgo o de tipo III
Requieren medidas de prevención en su manipulación, recogida, almacenamiento, transporte, tratamiento y

eliminación, tanto dentro como fuera del centro sanitario. Pueden presentar un peligro para la sanidad pública.
Se subclasifican en:
• Residuos sanitarios o infecciosos.
• Residuos anatómicos.
• Sangre y hemoderivados en forma líquida.
• Agujas y material punzante y cortante.
• Vacunas vivas y atenuadas.
Residuos tipificados en normativas singulares o de tipo IV
La gestión de estos residuos está sometida a requerimientos especiales, tanto dentro como fuera del centro
sanitario. Incluyen:
• Residuos citostáticos.
• Restos de sustancias químicas.
• Medicamentos caducados.
• Aceites minerales y sintéticos.
• Residuos con metales.
• Residuos radiactivos.
• Restos anatómicos humanos con entidad.
Similares a residuos
Tipo I No precisan gestión especial
domésticos
Gestión especial salvo su

Yesos, curas,
Tipo II tratamiento y eliminación. Solo
vendajes, etc.
dentro del centro sanitario
Gestión especial incluidos su

Restos anatómicos,
Tipo III tratamiento y eliminación. Dentro
agujas, sangre, etc.
y fuera del centro sanitario
Medicamentos
Gestión especial incluidos su
citostáticos, residuos
Tipo IV tratamiento y eliminación. Dentro
con metales,
y fuera del centro sanitario
radiactivos, etc.
Tabla 2. Tipos de residuos y sus características principales.

5.3. Procedimiento de eliminación de residuos biosanitarios

Como en el apartado anterior, siguiendo la NTP 372 del INSST, los residuos de los grupos II y III se deben recoger en
recipientes que deben ser opacos, resistentes, asépticos en su exterior, con un volumen no superior a 70 litros y
con un cierre hermético que no pueda abrirse de forma accidental. En el caso de los residuos cortantes y punzantes,
el recipiente debe ser rígido. Si se trata de residuos citostáticos, deben recogerse en contenedores de un solo uso, de
polietileno o poliestireno, para su incineración completa.
Por supuesto, hay que asegurarse de que cada recipiente esté debidamente identificado.
En el caso de la sangre y de los hemoderivados, salvo en el caso de enfermedades no endémicas de España y cultivos
líquidos de microbiología, pueden eliminarse por el desagüe conectado a la red de saneamiento del centro sanitario.
Sobre su almacenamiento, los residuos sanitarios se

pueden almacenar un periodo máximo de 72 horas,
ampliable a 1 semana si el almacén dispone de un
sistema de refrigeración que no sobrepase los 4º C.
Los residuos del grupo II, fuera del centro, se tratarán y

eliminarán como residuos asimilables a los municipales.
Los del grupo III pueden incinerarse en hornos
específicos o ser eliminados como residuos asimilables
a los municipales, siempre que hayan sido debidamente
esterilizados. En el caso de residuos citostáticos, se
neutralizan químicamente o se incineran. Fig. 8. Recipiente para residuos sanitarios cortantes y punzantes
/ 6. Uso eficiente de los recursos

Como cualquier empresa, el laboratorio cuenta con recursos limitados. Por ello, es imprescindible usarlos de la
forma más eficiente sin perder eficacia. Esto supone emplear la menor cantidad de recursos posible obteniendo el
mejor resultado.
Además, el uso eficiente de los recursos implica discernir qué pruebas nos ofrecen mejores resultados para una
misma determinación, ya que existen diferentes métodos para realizar cada prueba. Para ello, se cuenta con las
curvas ROC (Receiver Operator Characteristic Curves), que comparan la sensibilidad (valor mínimo que puede
detectar la prueba) y la especificidad (probabilidad de que al detectar un valor se corresponda con una patología
específica) de una prueba para valorar cuál presenta mayor exactitud, es decir, cuál acierta con mayor probabilidad
que un paciente enfermo realmente está enfermo o que un paciente sano está realmente sano. Estos conceptos se
estudiarán con mayor detenimiento en el módulo de Técnicas Generales de Laboratorio de esta misma titulación.
En lo que corresponde a los trabajadores de un laboratorio, deben estar constantemente actualizados sobre los
medios y las pruebas que ofrezcan mayor eficiencia y efectividad, para poder aprovechar siempre al máximo los
recursos disponibles en el laboratorio.
Sensibilidad El valor mínimo de un parámetro que puede medir una prueba
Grado de relación entre un hallazgo de

Especificidad
laboratorio y una patología asociada
Valor predictivo Probabilidad de que, si el test da positivo,

positivo la persona esté realmente enferma
Valor predictivo Probabilidad de que, si un test da negativo,

negativo la persona esté realmente sana
Tabla 3. Algunas definiciones básicas sobre pruebas diagnósticas
/ 7. Caso práctico 2: “Señalización de riesgos”

Planteamiento: es necesario conocer los riesgos del laboratorio, pero estos
son numerosos y sería demasiado exigente pedir a los trabajadores que los
conocieran todos, por eso nos ayudamos de señales que nos indican los
diferentes peligros potenciales. Por ejemplo, los pictogramas de los reactivos
o las señales de riesgo por electrocución en los equipos eléctricos.
Un compañero nos llama por teléfono y nos pide que declaremos como
testigos que en una zona del laboratorio no hay ningún cartel que ponga
«caídas a distinto nivel», ya que nuestro compañero tuvo un tropiezo con un
escalón que no vio entre dos salas hace una semana.
Nudo: la caída le ha producido un importante esguince y quiere demandar al

laboratorio. ¿Crees que tiene derecho?
Desenlace: Efectivamente, para eso existe un departamento de prevención

de riesgos laborales o un servicio de salud laboral, para evitar accidentes.
Los peligros y riesgos deben estar debidamente señalizados y, en el caso
de que haya un accidente, los pertinentes responsables deberán responder Fig. 9. Pictograma de riesgo por caída a
ante el mismo. distinto nivel

Tras estudiar esta unidad vemos que los riesgos en los laboratorios son múltiples. Por lo tanto, deben conocerse, al
igual que las medidas específicas para disminuir la probabilidad de sufrirlos. Para ello, contamos con normas muy
concretas de comportamiento, equipos de protección individuales y protocolos para poder atender a los lesionados
en caso de accidente.
A su vez, debemos conocer los diferentes residuos que pueden generarse en un laboratorio (urbanos, químicos,
biosanitarios y radiactivos), cada uno de ellos con una gestión propia y específica para evitar no solo que afecten a
los trabajadores del centro sanitario, sino también al medioambiente y a individuos del exterior.
Las medidas de seguridad y protocolos de actuación en caso de accidente las planteará un servicio específico, como
el de prevención de riesgos laborales o salud laboral, quedando además bajo la responsabilidad del director de
laboratorio la correcta gestión de los distintos planes de prevención.
En el caso que se ha planteado en el audio, lo que haríamos sería lo siguiente:
• Quitarnos relojes, joyas y bisutería.
• Lavarnos las manos, recogernos el pelo y ponernos los EPI.
• Evitaríamos comer, beber y fumar dentro del laboratorio.
• Nos moveríamos con cuidado, sin movimientos bruscos y sin llevar mochilas, bolsos ni bolsas.
• Trabajaríamos en cabinas de seguridad cuando empleáramos reactivos que así lo requiriesen.
• Portaríamos las muestras y reactivos bien sujetos con las manos, sin llevarlos bajo el brazo o pegados al
cuerpo.
• Seguiríamos al pie de la letra todos los protocolos de seguridad e higiene laborales.

/ 9. Bibliografía
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. NTP 432. «Prevención del riesgo en el laboratorio. Organización y recomendaciones generales». Recuperado
de: https://www.insst.es/documents/94886/326962/ntp_432.pdf/7c638266-9fd3-43a0-9794-ffc0df696894
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. NTP 276.
«Eliminación de residuos en el laboratorio: procedimientos generales». Recuperado de:
https://www.insst.es/documents/94886/327166/ntp_276.pdf/99241f92-8c26-400b-9cc6-909f6e19aece
Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. NTP 372. «Tratamiento de residuos sanitarios». Recuperado de: https://www.ucm.es/data/cont/docs/3-
2013-02-18-4-TRATAMIENTO%20DE%20RESIDUOS%20SANITARIOS.pdf
Martín Biosca, Y. «Operaciones básicas en análisis químico, farmacéutico y medioambiental». Proyecto financiado por el Vicerectorat de Convergència Europea i
Qualitat de la Universitat de València. Recuperado de:
https://www.uv.es/gammmm/Subsitio%20Operaciones/index.htm
Mérida, F. J. y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Módulo III: biología molecular y citogenética. Madrid: Médica
Panamericana.
Unidad Básica de Prevención - Salud Laboral. Hospital Donostia. Osakidetza. «Prevención de riesgos asociados a productos químicos». Recuperado de:
https://www.euskadi.eus/informacion/publicaciones/web01-s2oga/es/adjuntos/GuiaSL08c.pdf
Unidad de Prevención de Riesgos Laborales de la Universidad de Burgos. «Qué hacer en caso de accidente: primeros auxilios». Recuperado de: https://www.
ubu.es/unidad-de-prevencion-de-riesgos-laborales/prevencion-de-riesgos-laborales/recomendaciones-sobre-riesgos/recomendaciones-en-laboratorios/
recomendaciones-para-practicas-en/que-hay
Genética y
citogenética. Los
ácidos nucleicos
5
/ 2. Genética y citogenética 4
/ 3. El concepto de los nucleótidos y los nucleósidos 4
/ 4. Caso práctico 1: “Ácidos nucleicos en tinciones de anatomía patológica”5
/ 5. La composición de los nucleótidos y los nucleósidos 5
/ 6. Las funciones de los nucleótidos y los nucleósidos 6
/ 7. Propiedades físicas de los ácidos nucleicos 7
/ 8. Ácidos nucleicos: ADN 7

8.1. Ácidos nucleicos: funciones del ADN 8
/ 9. Ácidos nucleicos: ARN 8
/ 10. Empaquetamiento del ADN 9
/ 11. Formas de presentación del ADN 9
/ 12. Modelos alternativos de ADN 10
/ 13. Caso práctico 2: “La utilidad de conocer las propiedades

de los nucleótidos y ácidos nucleicos” 10
© MEDAC ISBN: 978-84-18864-26-1

Conocer los principales conceptos de Biología Molecular y Citogenética.
Aprender qué son los nucleótidos.
Comprender cómo se estructuran los ácidos nucleicos.
Conocer las propiedades de los ácidos nucleicos y su utilidad en las diferentes

técnicas de laboratorio.

La Biología Molecular se encarga de estudiar, desde la perspectiva molecular, los procesos que se desarrollan en los
seres vivos.
Aplicado al ámbito clínico, surge el Diagnóstico Molecular, cuyo cometido es evidenciar diferentes moléculas y sus
características en las muestras biológicas, con el objetivo de detectar enfermedades.
Se trata de una ciencia con un gran impacto en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, el cáncer, las
enfermedades cromosómicas, así como en diferentes test como pruebas de paternidad/maternidad, medicina
forense e investigación. También destaca su importancia en la producción agrícola y la biotecnología.
Por ello, surge en los laboratorios clínicos como un nuevo servicio, que está destinado al diagnóstico molecular.
Las diferentes subespecialidades del análisis clínico contaban con técnicas

y procedimientos que ya empleaba la biología molecular en sus técnicas
diagnósticas, hasta que cobraron tanta importancia que se han consagrado
como una especialidad propia del servicio de análisis clínicos.


práctico de la unidad». Fig. 1. Técnico usando una micropipeta
Audio intro. Propiedades del ADN

https://bit.ly/3eJFeQK
TEMA 5. GENÉTICA Y CITOGENÉTICA. LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
/ 2. Genética y citogenética
La Genética es una rama de la biología que se encarga de estudiar cómo se transmiten entre generaciones los
caracteres, que son hereditarios. Además, estudia también los genes, que son los fragmentos de ADN que portan la
información para un carácter en particular.
La Citogenética es el campo de la genética que se encarga del estudio de la estructura, función y comportamiento
de los cromosomas.
Por lo tanto, es importante no confundirlas, puesto que una forma parte de

la otra. En este sentido, la Genética una disciplina que abarca otras muchas
ramas como, por ejemplo:
• Herencia mendeliana: estudia los patrones de herencia de los

caracteres en la reproducción sexual.
• Genética molecular: estudia los procesos moleculares relacionados

con la transmisión de información genética.
• Epigenética: estudia cómo los genes se expresan (o no) en función

del medio.
• Genética poblacional: la genética aplicada a cómo encontramos los Fig. 2. Diferencias entre genética y
diferentes caracteres distribuidos en una población. citogenética
/ 3. El concepto de los nucleótidos y los nucleósidos

Los nucleótidos son un tipo de biomoléculas presentes en todas las células y virus, y son las piezas fundamentales
que forman los ácidos nucleicos o polinucleótidos.
Los ácidos nucleicos, por su parte, son cadenas de polímeros formados por nucleótidos. Los más famosos son el ADN
y el ARN, que codifican la información que la célula necesita para crear proteínas. Se encuentran en el núcleo de
células eucariotas y libres en el citoplasma de las procariotas, en una zona conocida como nucleoide.
Las bases nitrogenadas que forman parte de los nucleótidos principales que conforman ADN y ARN son Adenina
(A), Timina (T), Guanina (G), Citosina (C) y Uracilo (U), este último exclusivo del ARN, que sustituye a la Timina.
Además, son complementarios, estableciendo las relaciones Adenina – Timina, Adenina – Uracilo, y Guanina –
Citosina.
Estas bases nitrogenadas se clasifican también en bases púricas (derivadas de la purina: adenina y guanina), y bases
pirimidínicas (derivadas de la pirimidina: citosina, timina y uracilo).
/ 4. Caso práctico 1: “Ácidos nucleicos en tinciones de

anatomía patológica”
Planteamiento: hemos realizado una tinción histológica con Hematoxilina-Eosina y nuestros resultados indican que
los núcleos se han teñido con hematoxilina (un colorante básico), mientras que los citoplasmas lo han hecho con
eosina (un colorante ácido).
Nudo: en nuestro cuaderno de prácticas tenemos que explicar por qué los núcleos se tiñen con hematoxilina. Para
ello, debemos atender a la naturaleza química de los nucleótidos y a la del colorante en cuestión.
Desenlace: la respuesta es que los nucleótidos tienen una naturaleza ácida, ya que se componen de ácido fosfórico.
Por lo tanto, las estructuras compuestas por estas sustancias serán ácidos, como el ADN o el ARN. Por eso se
conocen como ácidos nucleicos (ácidos del núcleo). Como si de polos opuestos se tratara, la hematoxilina (que es
básica) se unirá a su complementario, que son las estructuras celulares ácidas como en el caso del núcleo.
/ 5. La composición de los nucleótidos y los nucleósidos

Los nucleósidos están formados por una molécula de azúcar (ribosa para ARN y desoxirribosa para ADN) unida a
una base nitrogenada. Cuando estos se unen a uno, dos o tres grupos fosfato, pasan a ser nucleótidos.
¡Recuerda! Nucleósidos SIN fosfato y nucleótidos CON fosfato.
La nomenclatura de los mismos es sencilla:
NUCLEÓTIDO NUCLEÓTIDO NUCLEÓTIDO

NUCLEÓSIDO
BASE CON 1 GRUPOS CON 2 GRUPOS CON 3 GRUPOS
CON RIBOSA
FOSFATO FOSFATO FOSFATO
Adenosina
Adenosina Adenosina
Adenina Adenosina monofosfato
difosfato (ADP) trifosfato (ATP)
(AMP)
Guanosina
Guanosina Guanosina
Guanina Guanosina monofosfato
difosfato (GDP) trifosfato (GTP)
(GMP)
Citidina
Citidina difosfato Citidina trifosfato
Citosina Citidina monofosfato
(CDP) (CTP)
(CMP)
Uridina
Uridina difosfato Uridina trifosfato
Uracilo Uridina monofosfato
(UDP) (UTP)
(UMP)
Tabla 1. Nomenclatura de ribonucleósidos y ribonucleótidos

NUCLEÓTIDO NUCLEÓTIDO NUCLEÓTIDO

NUCLEÓSIDO CON
BASE CON 1 GRUPOS CON 2 GRUPOS CON 3 GRUPOS
DESOXIRRIBOSA
FOSFATO FOSFATO FOSFATO
Desoxidenosina
Desoxidenosina Desoxidenosina
Adenina Desoxiadenosina monofosfato
difosfato (dADP) trifosfato (dATP)
(dAMP)
Desoxiguanosina
Desoxiguanosina Desoxiguanosina
Guanina Desoxiguanosina monofosfato
difosfato (dGDP) trifosfato (dGTP)
(dGMP)
Desoxicitidina
Desoxicitidina Desoxicitidina
Citosina Desoxicitidina monofosfato
difosfato (dCDP) trifosfato (dCTP)
(dCMP)
Desoxitimidina
Desoxitimidina Desoxitimidina
Timina Desoxitimidina monofosfato
difosfato (dTDP) trifosfato (dTTP)
(dTMP)
Tabla 2. Nomenclatura de desoxirribonucleósidos y desoxirribonucleótido
Video 1. “Diferencias entre nucleótido y

nucleósido”
https://bit.ly/3oMKf1n
/ 6. Las funciones de los nucleótidos

y los nucleósidos
Las funciones de los nucleótidos son principalmente servir para formar los
ácidos nucleicos, que serán los encargados de almacenar y gestionar la
información genética del organismo.
Pero estas no son sus únicas funciones. Destacan, además, por emplearse
como moneda de cambio energética. Es el caso del ATP, que se fosforila Fig. 3. Esquema de fosforilación y
y desfosforila según las necesidades de la célula, almacenando y liberando desfosforilación del ADP/ATP
energía, respectivamente.
También participan como mensajeros intracelulares. Es el caso del AMP cíclico (AMPc). Estas moléculas envían
señales por el interior de la célula para regular procesos metabólicos y genéticos.
Otra función que cabe destacar es que también forman coenzimas, que son sustancias no proteicas que participan
en las reacciones químicas catalizadas por enzimas (proteínas encargadas de facilitar que se produzcan reacciones
químicas que, de lo contrario, tardarían mucho en producirse de manera espontánea).
Audio 1. “EL ATP: la moneda de cambio”

https://bit.ly/3eWCSOP
/ 7. Propiedades físicas de los ácidos nucleicos

A continuación, se describen las principales propiedades físicas de los ácidos nucleicos:
• Densidad: supone el peso de un volumen en particular de la sustancia. En el caso de los ácidos nucleicos, la
densidad es directamente proporcional a la cantidad de G-C que contengan. Una utilidad de esta propiedad
es, además de conocer la mayor o menor estabilidad de la molécula, poder identificar un organismo, ya que
cada uno tiene una relación característica de G-C.
• Absorbancia: consiste en la cantidad de radiación electromagnética que una solución es capaz de absorber. El
ADN tiene un máximo de absorbancia de radiación UV característico a 260 nm, lo que permite su identificación
mediante técnicas espectrométricas.
• Desnaturalización: también denominada fusión, es el fenómeno de separación de la doble hélice de ADN. La

desnaturalización requiere energía, ya que supone deshacer enlaces entre bases complementarias de las dos
hebras de ADN. Se produce, sobre todo, frente al calor y pH básicos. Cuanto mayor sea la cantidad de uniones
G-C, mayor será la energía requerida para llevar a cabo la desnaturalización; esto sucede porque las bases G-C
se unen mediante triples enlaces, lo que fortalece la unión de las dos cadenas de ADN.
• Renaturalización: también conocido como hibridación, es el proceso inverso a la desnaturalización, es decir,

la unión de las dos cadenas independientes de ADN en una doble hélice. Esta propiedad está directamente
relacionada con la cantidad de veces que se repiten las diferentes secuencias del ADN: cuantas más veces se
repita la misma secuencia de nucleótidos en una hebra de ADN, mayor probabilidad habrá de que coincida
con su secuencia complementaria en la otra hebra.
Ambos procesos, desnaturalización y renaturalización, son fundamentales en diversas técnicas como la hibridación
in situ, donde se precisa separar las hebras de ADN para localizar secuencias de nucleótidos concretas y después
volverlas a juntar.
/ 8. Ácidos nucleicos: ADN

El ADN o ácido desoxirribonucleico es el polímero que forman los desoxirribonucleótidos de A, T, G y C. Es decir,
cuando estas moléculas se unen formando una cadena, el resultado es el ADN. Cuidado con el uracilo, que solo forma
parte del ARN, no del ADN.
Se unen entre ellas mediante enlaces de grupos fosfatos, llamados fosfodiéster, entre los carbonos 5’ de un nucleótido
y 3’ de otro o viceversa.
Una hebra de ADN se une a otra complementaria que contiene las bases nitrogenadas a las que se unirán las
suyas, formando una doble hélice que es dextrógira (gira a la derecha) y plectonémica (no se pueden separar sus
hebras sin desenrollarse). Ambas hebras, además, son antiparalelas, ya que en una los enlaces fosfodiéster se forman
en sentido de carbono 5’ al 3’; y en la otra, del carbono 3’ al 5’, como se puede apreciar en la imagen.
Estas uniones entre bases nitrogenadas (A-T y G-C) se realizan mediante puentes de hidrógeno en un plano
perpendicular al eje de rotación de la doble hélice.
Esta estructura fue descrita por primera vez por Watson y Crick en 1953, gracias también a la inestimable ayuda de
Rosalind Franklin.
Recuerda...
En el ADN se ensamblan las desoxirribosas con los grupos fosfato.
Además, cada base nitrogenada se empareja con su complementaria.
8.1. Ácidos nucleicos: funciones del ADN

La principal función del ADN es contener la información sobre todos los caracteres que definen al organismo
Estos caracteres están representados en la unidad de información genética denominada gen. Un gen es la secuencia
de nucleótidos, dentro del ADN, que aporta la información necesaria para sintetizar una proteína.
Cada 3 bases nitrogenadas codifican un aminoácido. El conjunto de estas 3 bases se denomina triplete, y todos los
tripletes necesarios para formar una proteína entera suponen un gen.
El ADN, para poder repartirse equitativamente entre las células hijas, se duplica en un proceso denominado
replicación. De esta manera, se transmite la información genética entre generaciones de células y organismos,
siendo esta una de sus funciones principales.
Del mismo modo, el ADN no se transcribe directamente en proteínas, primero se hace una copia en otro ácido
nucleico, el ARN, mediante un fenómeno que se conoce por transcripción. Esto es debido a que las proteínas
se sintetizan en el citoplasma, pero el ADN no sale del núcleo: es preciso que alguien transporte la información
genética de un lugar a otro (el ARN)
Ya en el citoplasma, al proceso por el cual se «traduce» la secuencia de nucleótidos de este ARN en aminoácidos se
denomina traducción, que consiste en seguir las instrucciones que indica el ARN para ordenar los aminoácidos que
formarán la nueva proteína.
En la siguiente unidad se explicarán con detalle estos procesos.
/ 9. Ácidos nucleicos: ARN

EL ARN es el otro ácido nucleico que vamos a estudiar. Es imprescindible conocer su estructura y funciones, ya que
participa directamente en la expresión génica.
Su composición es similar al ADN, solo que esta molécula la forman los ribonucleótidos, y no encontramos T, sino U.
Su estructura, además, es fundamentalmente monocatenaria y lineal, aunque forma algunas horquillas, que son
pliegues donde se producen uniones entre sus bases nitrogenadas (A-U y G-C).
Existen 3 variedades de ARN con interés para la expresión génica.
• ARN mensajero (ARNm): es el ARN que copia directamente la secuencia de nucleótidos del ADN a traducir.
Es el más abundante en las células.
• ARN ribosómico (ARNr): tiene funciones que aún no están claramente identificadas, si bien se sabe que es
necesario para formar los ribosomas y ayuda en la unión de estos al ARNm para su traducción.
• ARN transferente (ARNt): su utilidad consiste en adaptar el complejo ARNm-ribosoma para el acoplamiento
de un aminoácido específico en la cadena polipeptídica que estos formen. En las células existe, al menos, un
ARNt específico para cada uno de los 20 aminoácidos proteinogénicos. Tiene una característica forma de
«hoja de trébol» que posteriormente se pliega con forma de «L».
En la estructura del ARNt apreciamos cuatro regiones con bases nitrogenadas apareadas, 3 bucles (hojas del trébol)
de bases sin aparear y una zona lineal (tallo del trébol) de bases también sin aparear.
De estas estructuras, dos sobresalen del resto, por ser comunes en todos los ARNt, que son:
• Un brazo aceptor: siempre con la secuencia CCA en el extremo 3’, el cual transporta el aminoácido específico
para sintetizar la proteína.
• Un anticodón: es el triplete que diferencia los distintos ARNt. Indica, además, el aminoácido que se unirá al
ARNt. Se encuentra en el brazo opuesto al brazo aceptor.
/ 10. Empaquetamiento del ADN

El ADN es una molécula tremendamente larga. Tanto, que el ADN contenido en una célula, estirado completamente,
podría alcanzar la luna.
Por ello, la célula ha desarrollado un sofisticado método para almacenarlo dentro del núcleo, ya que se trata de un
compartimento relativamente pequeño para albergar una molécula de estas dimensiones
El ADN se enrolla en unas proteínas conocidas cono histonas. Estas forman octámeros (paquetes de 8 moléculas),
sobre los cuales el ADN se entrelaza, generando una estructura llamada nucleosoma. De nuevo, estos se organizan
en espirales y pliegues sobre sí mismos, creando estructuras más complejas, hasta enrollarse completamente,
dando lugar a la cromatina de los cromosomas.
El cromosoma es la estructura que forma el ADN enrollado en las histonas, es decir, es la estructura final de la
cromatina. De esta manera, cuando la célula va a dividirse, condensa la cromatina en los cromosomas y, así, puede
repartirlos entre las células hijas.
Sabías que...
El ADN es una macromolécula que necesita un sistema de almacenamiento
súpereficiente para poder introducirse en el reducido espacio del núcleo.
/ 11. Formas de presentación del ADN

Hasta aquí hemos visto qué es el ADN, cuál es su estructura y cómo se condensa en cromatina para formar los
cromosomas. Pero este es el paradigma de modelo de ADN en humanos. En la naturaleza, el ADN puede presentarse
de diversas formas y no siempre cumple estas reglas. Aquí tienes algunos ejemplos de cómo podemos encontrar esta
molécula tan particular:
• Formado por una sola hebra: ADN monocatenario (ADNmc):
• Puede tener forma lineal, como ocurre en las familias de virus

Parvoviridae.
• Puede tener forma circular, característico de la familia de virus

Hepadnaviridae.
• Formado por dos hebras de ADN:
• Puede tener forma lineal, como en el virus del Herpes.
• O forma circular, como ocurre, por ejemplo, en las mitocondrias. Fig. 4. ADN mitocondrial (ADN circular)
• Asociado a proteínas histonas: es típico de las células eucariotas.
• Asociado a otras proteínas no histónicas o a ARN: propio de procariotas.
• En los virus puede asociarse a proteínas del virus o a histonas de la célula parasitada.
/ 12. Modelos alternativos de ADN

Al igual que ocurría con las formas de presentación del ADN, que podían asociarse o no a histonas, y presentar una
o dos hebras de ADN, también encontramos que puede adoptar diferentes estructuras
La más destacada es el modelo de la doble hélice, que se corresponde con el ADN-B, pero también existen otras
diferentes, como las que se muestran a continuación.
• ADN-B: el ya conocido modelo de la doble hélice descrito por Watson

y Crick.
• ADN-A: no es una estructura que se observe in vivo, pero cuando la

humedad relativa baja del 75 %, el ADN-B adquiere esta conformación.
También es la propia del ARN bicatenario y de los híbridos de ARN-
ADN.
• ADN-Z: es una estructura que se ve favorecida ante la alternancia

de purinas y pirimidinas en la secuencia de nucleótidos, por ejemplo:
CGCGCG. De las tres estructuras mostradas, es la única levógira (cuyo
sentido del giro es hacia la izquierda). Fig. 5. Modelos de ADN
/ 13. Caso práctico 2: “La utilidad de conocer las

propiedades de los nucleótidos y ácidos nucleicos”
Planteamiento: hemos descubierto en el laboratorio que los ácidos nucleicos de diferentes especies tienen densidades
diferentes. Esto es lógico, ya que cada especie tendrá mayor o menor número de bases nitrogenadas y proteínas.
Pero, estudiando más a fondo, averiguamos que a mayor cantidad de uniones G-C, la densidad es mayor y, además,
la molécula es más estable
Nudo: ¿cómo puede explicarse este fenómeno?
Desenlace: Tenemos que averiguar por qué sucede esto. Para ello, decidimos estudiar la parte más simple de los
ácidos nucleicos: los nucleótidos. Al ampliar la información sobre estos, averiguamos que A-T forman dos puentes de
hidrógeno mientras que G-C forman tres. A su vez, nos llama la atención un dato sobre las propiedades fisicoquímicas
de las diferentes bases nitrogenadas:
Las densidades de las bases nitrogenadas son las siguientes:
• Guanina 2,2 g/cm3.
• Citosina 1,55 g/cm3.
• Guanina + Citosina = 3,75 g/cm3.

• Adenina 1,6 g/cm3.
• Tiamina 1,23 g/cm3.
• Adenina + Timina = 2, 83 g/cm3
Así, hemos podido comprobar que la unión G-C tiene mayor densidad que A-T, por lo que es comprensible que,
a mayor cantidad de este emparejamiento, mayor sea la densidad. A su vez, al formar 3 puentes de hidrógeno, se
precisa un mayor aporte de energía, porque hay más enlaces que deshacer.
ADN Densidad (g/cm3) % (G – C)

Polímero A – T 1,675 0
Diplococcus pneumoniae 1,700 42
Escherichia coli 1,710 51
Serratia marcescens 1,716 55
Mycobacterium phlei 1,732 73
Tabla 3. Diferencias entre las densidades del ácido nucleico de diferentes especies, atendiendo a su contenido
en G+C

unidad
A lo largo de la unidad hemos visto que los nucleótidos son los «ladrillos» que construyen los ácidos nucleicos. Estos
son las moléculas que portan la información génica de todos los caracteres de los seres vivos.
Así, los ácidos nucleicos se unen de manera complementaria (A-T, A-U y G-C) para aparear las hebras de ADN que
conforman su doble hélice.
Conociendo las propiedades del ADN, como su absorbancia a 260 nm o cómo se desnaturaliza con el calor y los
álcalis, podemos encontrar la forma de acceder a ellos para modificar y marcar los genes, que son las secuencias de
bases nitrogenadas que codifican proteínas concretas.
Otro ácido nucleico importante es el ARN, que porta la información del ADN al citoplasma para que los ribosomas
puedan sintetizar las proteínas.
Tras pensarlo bien, le respondemos a nuestro tutor que la doble hélice se desenrolla en presencia de un pH básico
porque, en estas condiciones, la concentración de hidrógeno del medio habrá disminuido, por lo que las bases
nitrogenadas cederán algunos de sus hidrógenos al medio.
De esta manera, no podrán formar los puentes de hidrógeno y, por ende, no podrán enlazarse con la hebra de ADN
complementaria, ya que, como hemos visto, las bases nitrogenadas complementarias de dos hebras de ADN se unen
mediante puentes de hidrógeno para mantener las hebras unidas.
Una vez estén separadas, ya tendremos disponibles las diferentes secuencias de nucleótidos.
Fig. 6. Esquema
/ 15. Bibliografía
Farfán M. J. (2015). «Biología molecular aplicada al diagnóstico clínico». Revista Médica Clínica Las Condes, 26(6), pp.788-793. Recuperado de: https://doi.
org/10.1016/j.rmclc.2015.11.007
García Gregorio, M., Papí, M. A. y Furió Egea, J. (2009). Biología, 2 bachillerato. Guía didáctica. Paterna: ECIR
Rodwell, V. W., Bender, D. A., Botham, K. M., Kenelly, P. J. y Weil, P. A. (2015). Harper Bioquímica ilustrada. México: McGraw-Hill.
Universidad Complutense de Madrid. «Estructura de los ácidos nucleicos». Recuperado de:
https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/02-Estructura%20de%20los%20%C3%A1cidos%20nucl%C3%A9icos.pdf
Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular. Tema 3: conformación del DNA. Recuperado de: https://www.sebbm.es/BioROM/contenido/av_bma/
apuntes/T3/dnaaz.htm
Duplicación del
material genético.
Etapas de la síntesis
proteica
6
/ 2. El proceso de replicación 4
/ 3. La síntesis de proteínas 5
/ 4. Caso práctico 1: “Edición o corrección del ARN” 5
/ 5. La transcripción 6
/ 6. Generalidades sobre la traducción 6

6.1. Fases de la traducción 8
/ 7. Endonucleasas de restricción 8
/ 8. Otras enzimas asociadas a los ácidos nucleicos I 9

8.1. Otras enzimas asociadas a los ácidos nucleicos II 9
/ 9. Importancia en las técnicas de manipulación y análisis

de moléculas de ADN 10
/ 10. Un ejemplo destacado de la utilidad de las técnicas

de biología molecular 11
/ 11. Caso práctico 2: “Antibióticos inhibidores de la síntesis

de proteínas” 11
© MEDAC 978-84-18864-26-1
Conocer los procesos por los cuales el ADN se autoperpetúa.
Aprender cuáles son las enzimas que participan en la replicación del ADN.
Identificar los elementos y las partes que intervienen en la síntesis de proteínas.
Comprender la importancia de estos fundamentos para entender cómo funcionan

las técnicas de análisis de ácidos nucleicos.

En este tema, aprenderemos los procesos por los cuales el ADN se duplica y replica en moléculas de ARN, que serán
las encargadas de transportar el mensaje genético a los ribosomas para la síntesis proteica.
La relevancia de esta unidad radica en la gran utilidad de conocer

estos procesos para poder manipularlos y poder, asimismo, analizar y
modificar los ácidos nucleicos con fines diagnósticos, terapéuticos y de
producción industrial.


práctico de la unidad». Fig. 1. Polirribosoma visto al microscopio
electrónico
Audio intro. Síntesis proteica

https://bit.ly/2yEgSr7
TEMA 6. DUPLICACIÓN DEL MATERIAL GENÉTICO. ETAPAS DE LA SÍNTESIS PROTEICA
/ 2. El proceso de replicación
La replicación del ADN es el proceso a través del cual esta molécula se duplica. Lo podríamos definir como la copia
del ADN «materno» para formar 2 moléculas de ADN «hijas», idénticas a su progenitora y, por lo tanto, idénticas
entre sí.
Existen unas características comunes a procariotas y eucariotas:
• Es semiconservativa: en cada molécula hija, una de las hebras procede del ADN original que se ha replicado;
pero la otra cadena es de nueva síntesis.
• La replicación comienza en puntos de inicio concretos, donde el ADN se desenrolla, formando una estructura
de bucle. Sus extremos se denominan horquillas de replicación.
• Es bidireccional: tiene lugar en ambas hebras a la vez, y en cada una se dirige hacia los extremos.
• Es semidiscontinua: desde el punto donde comienza a replicarse, tiene dos sentidos que tomar en la misma
hebra: en el sentido 5’-3’, la replicación es normal (hebra conductora), pero en el sentido 3’-5’ lo hace de
manera discontinua, formando los conocidos fragmentos de Okazaki.
En este proceso, primero se separan las dos hebras de ADN en un punto concreto. Partiendo de ese punto central, se
sintetizarán las nuevas cadenas hacia cada extremo del ADN, es decir, en el sentido de las horquillas de replicación.
A continuación, se produce la replicación mediante las polimerasas (enzimas que sintetizan ácidos nucleicos, las
estudiaremos en el apartado 8).
En el punto donde comienza la replicación, se añade un cebador (secuencia corta de ARN), que actúa como «señal»
para que dé comienzo la replicación. Cuando el sentido es 5’-3’, actúan normalmente partiendo del cebador inicial,
pero si es 3’-5’, necesitan varios cebadores repartidos por la hebra de ADN que se va a replicar (sintetizando el nuevo
ADN entre los cebadores). Así es como están formados los fragmentos de Okazaki, mediante cadenas híbridas de
ARN (cebador) y ADN (nueva hebra sintetizada).
Recuerda que el proceso mediante el cual se separan las hebras del ADN se conoce como fusión o desnaturalización
y que, cuando se vuelven a emparejar, hablamos de hibridación o renaturalización.
Recuerda...
Existen unas características comunes entre procariotas y eucariotas.
/ 3. La síntesis de proteínas
Es el proceso mediante el cual un gen codifica un polipéptido o proteína. Se distinguen dos etapas:
1. La información se transcribe del ADN (que no puede abandonar el núcleo celular) al ARN (que sí puede
hacerlo). La transcripción la estudiaremos en el apartado 5.
2. La información se traduce del ARN a la proteína. La traducción la estudiaremos en el apartado 6.
Esta relación direccional es conocida como dogma central de la biología molecular.
Así, el primer paso nos permite trasladar la información genética (en el ADN) a un vehículo (el ARN) que pueda
transportarla hasta los verdaderos productores de proteínas. Esto es preciso porque el ADN no abandona el núcleo
celular, ya que se trata de una molécula demasiado grande e importante para hacerlo.
Este ARN se conoce como ARN mensajero (ARNm).
El ARNm podrá salir del núcleo, donde los ribosomas se unirán a él y comenzará la síntesis de proteínas con la ayuda
del ARN transferente (ARNt). El ARNt transportará el aminoácido específico para la secuencia de 3 nucleótidos
(triplete) que corresponda en el ARNm. Los ribosomas se encargarán de formar los enlaces peptídicos entre los
diferentes aminoácidos, y así es como se traduce la información genética en proteínas.
/ 4. Caso práctico 1: “Edición o corrección del ARN”

Planteamiento: El ARN, al igual que el ADN, sufre también ciertos procesos de edición o corrección. De hecho,
hay un fenómeno que se conoce como edición del ARN, donde este se modifica una vez se ha transcrito desde la
molécula de ADN
Nudo: Como no deja de tratarse de mutaciones, nos interesa conocer y estudiar este proceso, ya que las repercusiones
de las mismas pueden ser importantes. ¿Cuál crees que puede ser una de sus principales consecuencias? Recuerda
que una de las moléculas de ARN que sufre esta edición es el ARN mensajero.
Desenlace: Efectivamente, la edición del ARNm altera la secuencia de

nucleótidos que se va a traducir en el orden que deben llevar los aminoácidos
de una proteína. En consecuencia, puede producirse una proteína anómala
que, en el mejor de lo casos, será afuncional, y, en el peor, provocará una
enfermedad grave, como algún tipo de cáncer. Por ello, es importante
conocer este proceso y sus consecuencias para realizar diagnósticos
tempranos de enfermedades importantes.
Es primordial no confundir la edición del ARN con la maduración del ARN,

ilustrado en la figura de la derecha, siendo este último un proceso natural y Fig. 2. Maduración del ARN mensajero
necesario para la transcripción.
/ 5. La transcripción
La transcripción en es un proceso, que tiene lugar en el núcleo, por el cual la secuencia de nucleótidos del ADN se
copia a una molécula de ARN mensajero.
Este proceso es asimétrico, ya que solo una de las hélices de DNA se usa como molde. El ARN recién transcrito se
denomina precursor y debe madurar. La copia no es exactamente igual, debido a que en el ARN no existe la timina,
por lo que en su lugar debe colocarse un uracilo. Aunque se tenga que dar este cambio, la información no se altera
de ninguna forma.
El fragmento de ADN constituye la llamada unidad de transcripción, que se compone de tres partes: el promotor (no
se transcribe, solo indica donde debe comenzar el proceso y la hélice adecuada), la secuencia codificadora del ARN
(parte que se copia a ARN) y el terminador (también se copia a ARN e indica el final de la transcripción).
Para que la transcripción se de en el lugar adecuado, existen unas secuencias específicas, denominadas promotores
eucarióticos, que son reconocidas por las ARN polimerasas (tres en eucariotas) y los factores transcripcionales.
• El promotor eucariótico, en eucariotas son tres RNA polimerasas que transcriben diferentes genes. El
encargado de los genes que codifican las proteínas es la ARN polimerasa II, que cuenta con los siguientes
elementos:
• Caja TATA: secuencia de siete pares de bases que se encuentran

en prácticamente todos los genes de las células eucariotas. Su
secuencia es TATAAAA y se localiza a una distancia de 30 pares
de bases antes del punto de inicio de la transcripción.
• Caja CAAT: su secuencia normal es GGCAATCT y se encuentra

unos 100 pares de bases antes del punto de inicio. Fig. 3. Transcripción del ADN en ARN.
• Intensificadores: modulan la transcripción a distancia para que los genes se expresen en el momento más
adecuado. Las ARN polimerasas no se unen a ellos, pero son necesarios. Su localización es variada.
• Factores transcripcionales: proteínas que facilitan la unión de la ARN polimerasa al ADN. Pueden ser
generales (necesarios para que se produzca la transcripción) o específicos (influyen en la eficacia de la tasa
de transcripción).
/ 6. Generalidades sobre la traducción

La traducción consiste en sintetizar proteínas atendiendo a las instrucciones que contiene el ARNm.
De hecho, conocemos como código genético al orden que existe entre las bases nitrogenadas del ARNm y la
secuencia de aminoácidos en que este derivará.
Como ya sabéis, tres nucleótidos codifican un determinado aminoácido. Esto es lo que se conoce como tripletes o
codones. De esta manera, cada codón solo equivale a un aminoácido concreto, aunque un aminoácido puede ser
codificado por diferentes codones. Por ello, se conoce que el código genético está «degenerado».
Audio 1. Los ribosomas

https://bit.ly/2yFuP8e
Hay cuatro codones especiales, estos son:
• AUG: además de codificar la Metionina, inicia la secuencia de traducción.
• UAA, UAG y UGA: indican el final de la traducción.
Primera letra U C A G Tercera letra

Cys
Phe
Tyr UGU
UUU
Ser UAU UGC
UUC U
UCU UAC
C
U UCC ALTO
Leu A
UCA ALTO UGA
UUA G
UCG UAA
UUG
UAG Trp
UGG
His
Leu
Pro CAU Arg
CUU U
CCU CAC CGU
CUC C
C CCC CGC
CUA A
CCA Gln CGA
CUG G
CCG CAA CGG
CAG
lle
Asn Ser
AUU
Thr AAU AGU
AUC U
ACU AAC AGC
AUA C
A ACC
A
ACA Lys Arg
Met G
ACG AAA AGA
AUG
AAG AGG
Asp
Val
Ala GAU Gly
GUU U
GCU GAC GGU
GUC C
G GCC GGC
GUA A
GCA Glu GGA
GUG G
GCG GAA GGG
GAG
Tabla. 1. Código genético

6.1. Fases de la traducción

El proceso de traducción consta de tres fases:
1. Fase de iniciación.
Todo comienza con la subunidad menor de un ribosoma unida a un ARNt con el aminoácido Metionina. Entonces,
llega la molécula de ARNm y la unidad menor se desplaza por él hasta que alcanza un codón AUG. Una vez ocurre
esto, la subunidad mayor del ribosoma llega y se ensambla a la subunidad menor. Esta subunidad mayor tiene tres
localizaciones (E, A y P), y el ARNt inicial queda ubicado en la localización «P».
2. Fase de elongación.
Al sitio «A» se une un nuevo ARNt con el correspondiente aminoácido (según el siguiente codón en el ARNm).
Entonces, la subunidad mayor se desplaza, pasando el ARNt del sitio «P» al «E», y el del «A» al «P», mientras que
entre los dos aminoácidos se forma un enlace peptídico gracias a una enzima catalizada en la subunidad mayor
del ribosoma. A continuación, la subunidad menor se desplaza en el mismo sentido que lo había hecho la mayor,
desechando el primer ARNt que ya se ha separado de su aminoácido. Así queda de nuevo un ARNt con su aminoácido
en el sitio «P», dejando «E» y «A» libres, para que, a continuación, otro ARNt traiga un nuevo aminoácido al sitio
«A» y se vuelva a repetir este proceso.
3. Fase de terminación.
El ribosoma llega a una de las secuencias de terminación, donde en lugar de acoplarse un aminoácido lo hacen
proteínas conocidas como factores de terminación. Es aquí cuando se desprende la cadena polipeptídica y se separa
el ARNm de la subunidad menor, y esta, a su vez, de la mayor.
Este proceso no lo lleva a cabo habitualmente un único ribosoma, sino que lo realizan varios ribosomas simultáneamente.
Recuerda...
Todo comienza con la subunidad menor de un ribosoma unida a un ARNt
con el aminoácido Metionina.
/ 7. Endonucleasas de restricción
Las endonucleasas de restricción son enzimas bacterianas que cortan la molécula de ADN bicatenario en secuencias
específicas, cortas, de unos 4-8 pares de bases y generalmente palindrómicas (se leen igual del derecho que del revés).
Cada endonucleasa reconoce unos sitios de restricción concretos, dianas de restricción, siendo cada enzima diferente
dependiendo de la especia bacteriana. En bacterias estas enzimas son un mecanismo de defensa frente al ADN vírico.
Se pueden clasificar en endonucleasas que generan bordes cohesivos y en las que producen bordes romos:
• Endonucleasas que generan bordes romos: cortan de manera simétrica el ADN, es decir, cortan las dos hebras
a la misma altura en cada extremo.
• Endonucleasas que generan bordes cohesivos: el corte es asimétrico. En cada hebra se corta a una altura
diferente.
Los extremos cohesivos son más útiles en clonación, ya que se mantienen juntos los fragmentos de ADN con mayor
facilidad para que las enzimas ligasas los puedan unir, siendo más difícil para estas cuando los extremos son romos.
Las utilidades al dominar esta técnica son innumerables:
• Por ejemplo, esto nos permite cortar secuencias concretas de ADN, que contienen genes específicos, para
trasladarlos a otros organismos.
• En el ámbito sanitario, se emplean para determinar mutaciones

o alteraciones en los cromosomas, pues se cortan regiones
específicas de los mismos y se valora que tengan el tamaño
adecuado (ya que, si los fragmentos de ADN son menores de lo
esperado, significa que el paciente ha sufrido una deleción, es
decir, una pérdida de material genético).
• También podemos usar enzimas específicas para mutaciones

conocidas, de tal manera que si aparece un fragmento de ADN
mayor al que cabría esperar en una mutación, es debido a que el
paciente está sano.
Las enzimas de restricción se nombran con tres letras en cursiva, según la

especie bacteriana de origen, y un número romano que corresponde al orden
en el que se han ido aislando. Si encontramos una cuarta letra en mayúscula, Figura 4. Enzima de restricción que genera
es para concretar una cepa específica de dicha bacteria. bordes cohesivos
/ 8. Otras enzimas asociadas a los ácidos nucleicos I

Aunque las enzimas de restricción cobran una importancia notable en las técnicas de biología molecular, no hay que
olvidar otras de gran interés, que son necesarias para llevar a cabo estos procedimientos. Entre todas se pueden
realizar diversas ediciones del material génico.
• Ligasas: son enzimas encargadas de unir los enlaces entre un grupo fosfato y un nucleótido, es decir, de unir
dos fragmentos de una hebra de ADN o ARN. Se conocen fundamentalmente cuatro tipos, estando la ligasa
tipo 1 implicada en la replicación, y las tipo 2, 3 y 4 en la reparación del ADN.
• Polimerasas: se encargan de sintetizar cadenas de polinucleótidos a partir de una hebra molde. Añaden los
nucleótidos complementarios a los de la cadena que emplean de referencia. Siguen el sentido 5’-3’ como, por
ejemplo, ocurre en la replicación del ADN.
8.1. Otras enzimas asociadas a los ácidos nucleicos II

Transcriptasas inversas o retrotranscriptasas: realizan el proceso inverso a la transcripción. Sintetizan una cadena
de ADN a partir de una cadena molde de ARN. El ADN que se produce se conoce como ADN copia (ADNc).
Es propio de los retrovirus, que transcriben su material genético (ARN) a ADN para incorporarlo en la célula huésped.
Estas enzimas son fundamentales para poder amplificar ARN, porque no puede realizarse mediante las técnicas de
PCR habituales (técnica para realizar copias de ADN, no de ARN; se estudiará con más profundidad en la unidad 14),
por lo que este se transcribe a ADN (conocido como ADNc), que sí se puede amplificar mediante PCR. En este caso,
hablamos de una RT-PCR.
Topoisomerasas: su función es reducir la tensión a la que se ven sometidas las hebras de ADN bicatenario en las
regiones próximas a las horquillas de replicación.
/ 9. Importancia en las técnicas de manipulación y

análisis de moléculas de ADN
Las diferentes técnicas de manipulación y análisis de ADN tienen como finalidad diagnosticar enfermedades y
aprovechar los procesos de la biología molecular para nuestro beneficio.
El análisis cromosómico nos permite diagnosticar alteraciones morfológicas y numéricas de los cromosomas, tales
como la trisomía del 21 o el Síndrome de Down.
Otras técnicas, como las ya citadas con enzimas de restricción, nos permiten manipular fragmentos de ADN para
incorporarlos a nuevos organismos y permitir que estos produzcan sustancias que nos interesen, como el caso de la
E. coli productora de insulina.
La PCR es una técnica imprescindible en Biología Molecular que amplifica una cantidad, que en principio es
insuficiente, de ADN para poder ser analizada (obteniendo, entonces, la cantidad suficiente).
Con otras técnicas de secuenciación y análisis de ADN podemos conocer secuencias conocidas de nucleótidos
que sean características de diferentes especies de microorganismos, facilitándonos de esta manera el
diagnóstico microbiológico.
Por supuesto, estas técnicas también se emplean mucho en análisis de

paternidad y en Medicina Forense.
Podríamos resumir las utilidades de la Biología Molecular como las siguientes:
• Diagnóstico de enfermedades.
• Producción industrial en Biotecnología.
• Análisis de perfiles de expresión génica.
• Identificación de microorganismos patógenos.
• Detección de genes asociados a enfermedades genéticas y a cáncer.
• Pruebas de paternidad.
Fig. 5. Prueba de ADN para identificación de
• Identificación de individuos en Medicina Forense. sospechoso en escena del crimen
/ 10. Un ejemplo destacado de la utilidad de las técnicas

de biología molecular
La biotecnología consiste en aprovechar los procesos de la biología molecular
para nuestro beneficio.
Vamos a ver una de las mayores utilidades que tiene la manipulación de los
ácidos nucleicos, la producción industrial de insulina.
La insulina es una proteína que sintetizan las células de los islotes Beta del
páncreas. Estas producen la insulina porque, en su ADN, tienen los codones
correspondientes para que se sinteticen los aminoácidos en el orden
apropiado que forma la molécula polipeptídica de insulina.
Así, aislamos de una célula pancreática el fragmento de ADN que codifica la

molécula de insulina, es decir, el gen de la insulina, gracias a la acción de las
endonucleasas de restricción.
A continuación, extraemos un plásmido (fragmento de ADN bacteriano) y

se ensambla el gen de la insulina en el plásmido mediante la acción de las Fig. 6. Producción de insulina mediante
ADN ligasas, consiguiendo así que una bacteria produzca insulina humana. biotecnología
/ 11. Caso práctico 2: “Antibióticos inhibidores de la

síntesis de proteínas”
Planteamiento: existe una serie de medicamentos que empleamos para eliminar las infecciones bacterianas. Se trata
de los antibióticos. Es un grupo muy heterogéneo en lo que se refiere a su composición química y mecanismo
de acción, que tienen como función común tratar las infecciones bacterianas. Al tomar unos grupos concretos de
antibióticos, las bacterias mueren. Esto se debe a que no pueden desarrollar su metabolismo normal.
Algunos antibióticos impiden que puedan sintetizar las proteínas adecuadas para su correcto funcionamiento y, de
este modo, no matan directamente al germen, pero impiden su desarrollo, crecimiento y reproducción. Se conocen
por ello como bacteriostáticos.
Nudo: ¿qué puede ocurrir en las bacterias para que estos antibióticos impidan la síntesis proteica?
Desenlace: estos medicamentos se dirigen a los ribosomas que, como ya sabes, son los orgánulos celulares encargados
de realizar la síntesis proteica. Algunos inhibirán a la subunidad mayor, mientras que otros lo harán con la menor,
provocando que la bacteria no pueda sintetizar proteínas y limite su crecimiento y desarrollo. De tal manera, se
podrá controlar y solucionar la infección.

unidad
Tras estudiar esta unidad, es fundamental conocer la replicación, es decir, la capacidad que tiene el ADN para
duplicarse, así como la forma en que lo realiza, con la ayuda de cebadores de ARN que incorporan las primasas y con
la síntesis de cadenas nuevas gracias a las ADN Polimerasas.
Además, cabe destacar el concepto de «fragmentos de Okazaki», que son cadenas discontinuas entre cebadores de
ARN que posibilitan trabajar a las polimerasas en el sentido correcto.
La transcripción permitirá al ADN copiar la información que porta en el ARN para, así, llevar la secuencia de bases a
los ribosomas y convertirla en una secuencia de aminoácidos, en el proceso conocido como traducción.
Conociendo estos procesos y las enzimas que intervienen, podemos manipular los ácidos nucleicos para cortar,
pegar y transcribir secuencias concretas de ácidos nucleicos, es decir, genes, en nuestro beneficio.
Para poder producir calcitonina en el laboratorio, necesitamos una maquinaria tan precisa y sofisticada, que solo la
poseen las propias células. Por ello, vamos a tomar las células del tiroides y las vamos a cultivar en el laboratorio.
Nuestra finalidad será extraer el fragmento de ADN que codifica para la síntesis de la calcitonina, es decir, queremos
aislar el gen de la calcitonina.
Para ello, deberemos emplear enzimas de restricción específicas que cortarán el ADN en los puntos apropiados para
poder aislar la secuencia de bases del gen que estamos buscando.
Una vez tengamos el gen separado del ADN, lo introduciremos en otra célula, por ejemplo, en la bacteria Escherichia
coli: extraeremos un plásmido de la misma (fragmento de ADN) donde encaje nuestro gen para la calcitonina,
uniremos ambos fragmentos con la ayuda de las ADN ligasas y lo reincorporaremos de nuevo a la bacteria. De esta
manera, habremos conseguido que la E. coli produzca calcitonina para nosotros.
/ 13. Bibliografía
Khan Academy. «Genética molecular». Recuperado de: https://es.khanacademy.org/science/high-school-biology/hs-molecular-genetics
RNA Editing. Recuperado de: https://www.sciencedirect.com/topics/biochemistry-genetics-and-molecular-biology/rna-editing
Universidad de Cantabria. «Replicación del ADN». Recuperado de: https://ocw.unican.es/pluginfile.php/879/course/section/967/Tema%25207B-Bloque%2520I-
Replicacion.pdf
Fundamentos básicos
de los cromosomas
7
/ 2. Niveles de complejidad del ADN: los cromosomas 4
/ 3. Componentes y estructura de los cromosomas 4
/ 4. Clasificación de los cromosomas 5
/ 5. Autosomas y cromosomas sexuales 5
/ 6. Heterocromatina y eucromatina 6
/ 7. El ciclo celular 6
/ 8. Cariotipos 7
8.1. Usos 7
/ 9. Caso práctico 1: “Observación de cromosomas metafásicos” 8
/ 10. Diferencias entre cromosomas X e Y 8
/ 11. Caso práctico 2: “Reparación de los daños en el ADN” 9
/ 12. Mitosis 9
/ 13. Meiosis 10
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Conocer qué son los cromosomas.
Aprender la nomenclatura cromosómica.
Conocer la importancia del estudio de los cromosomas.

Cuando hablamos de citogenética debemos mencionar los cromosomas.
Estos son la máxima expresión del empaquetamiento del ADN. De esta
manera, la información genética consigue condensarse en estructuras
concretas que la célula puede manejar y de la que puede disponer con gran
comodidad y versatilidad a la hora de repartir el material genético entre las
células hijas.
Esta unidad pretende enseñar al alumno la información relativa a los los

cromosomas, así como la importancia de su estudio para la citogenética.

aproximarnos de forma práctica a la teoría de este tema. Fig.1 Reconstrucción por ordenador de
cromosomas en metafase
Escucha el siguiente audio donde planteamos la contextualización práctica.
Audio intro. Alteraciones en los

cromosomas
https://bit.ly/2VVoc9W
TEMA 7. FUNDAMENTOS BÁSICOS DE LOS CROMOSOMAS
/ 2. Niveles de complejidad del ADN: los cromosomas

Los cromosomas forman estructuras visibles durante la división celular, como resultado de un mayor grado de
condensación de la cromatina. Es una representación del sustrato morfológico del ADN y de las proteínas asociadas.
Se distinguen dos tipos: los cromosomas somáticos, autosomas u homólogos y los cromosomas sexuales,
heterocromosomas o gonosomas.
El número de cromosomas varía de una especie a otra, pero dentro de una misma especie el número de cromosomas
es constante en todos los individuos. El ser humano tiene 46 cromosomas, de los cuales 22 parejas son autosomas
o cromosomas homólogos (cada una de las cuales porta los genes ordenados en la misma secuencia) y después
cuenta con otra pareja de cromosomas, conocidos como cromosomas sexuales, que definen el sexo del individuo.
El ADN en las células procariotas está disperso en el citoplasma. Sin embargo, en las células eucariotas, está dentro
del núcleo, debido a que se compacta y organiza a través de su plegamiento alrededor de las histonas (proteínas
globulares que forman octámeros). Este empaquetamiento, a su vez, forma estructuras globulares que se llaman
nucleosomas. Esta estructura de proteínas y ADN se denomina cromatina y es fundamental para compactar el ADN
y que pueda caber dentro del núcleo.
De cara a la división celular, la cromatina se condensa hasta alcanzar su máximo grado de compactación, formando
los cromosomas.
Audio 1. Número de cromosomas

https://bit.ly/2KBd3pw
/ 3. Componentes y estructura de los cromosomas

El cromosoma, como hemos comentado en el apartado anterior, es la máxima expresión de la condensación del
ADN, junto a las histonas. Una vez se completa esta compactación, obtenemos una estructura característica, con
forma de «X», en la que quedan dos parejas de brazos a cada lado de un centro. Esta estructura no es exactamente
igual en todos los cromosomas, ya que algunos tienen mayor o menor asimetría entre la longitud de sus brazos
(solo tienes que ver la imagen del apartado posterior para conocer diferentes tipos de cromosomas atendiendo a su
forma, según la posición del centrómero).
Las partes que constituyen el cromosoma son:
• Cromátidas: cada una de las dos mitades que quedan al separar longitudinalmente un cromosoma (es decir,
si lo cortamos a través de su eje mayor).
• Cromátidas hermanas: se denomina así a las dos copias idénticas de cada cromátida que se producen durante
la replicación del ADN y que se encuentran unidas por el centrómero, formando un cromosoma.
• Brazo corto (p): extremidad menor de un cromosoma.
• Brazo largo (q): extremidad mayor de un cromosoma.
• Centrómero: lugar de unión entre los diferentes brazos.
• Cinetocoro: punto de unión para los microtúbulos al cromosoma (los microtúbulos son proteínas fibrilares
que permiten desplazar los cromosomas durante la división celular).
• Telómero: extremo de cada brazo (ya sea largo o corto).

/ 4. Clasificación de los cromosomas

Hemos visto que se distinguen los cromosomas por ser somáticos o sexuales. Pero, además, se pueden clasificar
según su forma. Para esto debemos atender a la posición de su centrómero, según el cual los cromosomas recibirán
diferentes nomenclaturas.
Así, dependiendo de la posición relativa de las cromátidas hermanas con el centrómero, distinguimos:
• Metacéntrico: el centrómero queda aproximadamente a la mitad del cromosoma, dejando dos pares de
brazos de la misma longitud.
• Submetacéntrico: el centrómero queda más desplazado hacia un

extremo que hacia el otro, lo que deja dos parejas de brazos desiguales,
siendo unos claramente más largos que otros.
• Subtelocéntricos o acrocéntricos: el centrómero está muy desplazado

hacia un extremo, dejando una pareja de brazos muy largos y otra de
brazos muy cortos. Habitualmente se pueden ver estructuras como
el tallo y los satélites.
• Telocéntricos: el centrómero se encuentra en un extremo del Fig. 2. Clasificación de cromosomas según la

cromosoma, dejando solo una pareja de brazos. posición de su centrómero
/ 5. Autosomas y cromosomas sexuales

Los autosomas son todos los cromosomas excepto los cromosomas X e Y, que son los cromosomas sexuales. Son
similares para todos los individuos de la misma especie, salvo las diferencias genéticas propias de cada individuo o
las alteraciones morfológicas y numéricas que puedan presentar. Se numeran, en el ser humano, por parejas desde
el 1 hasta el 22. La pareja 23 correspondería a los cromosomas sexuales.
Los cromosomas sexuales son la pareja de cromosomas que define la sexualidad del individuo. Hay de dos tipos, X
e Y. Grosso modo, el cromosoma Y es una versión atrófica del cromosoma X.
El varón se define por tener un cromosoma X y otro Y, por lo que heterogamético.
La mujer, por su parte, tiene dos cromosomas X, por tanto, es homogamética.
Dos de las alteraciones más típicas de estos cromosomas son el síndrome de Turner, donde se produce una
monosomía del cromosoma X (45,X), y el síndrome de Klinefelter, que es debido a una trisomía de los cromosomas
sexuales (47,XXY).
/ 6. Heterocromatina y eucromatina
Una vez conocemos qué es la cromatina, sabiendo que es la condensación del ADN al unirse a histonas y proteínas
no histónicas, vamos a conocer qué tipos de cromatina podemos encontrar en el núcleo, ya que la cromatina no es
homogénea, sino que puede presentarse de dos formas distintas.
Heterocromatina:
Es la que normalmente se encuentra más condensada y, por ello, inactiva. Aparece sobre todo alrededor de la
membrana nuclear y del nucléolo. Puede dividirse, a su vez, en dos tipos diferentes de heterocromatina:
• Heterocromatina facultativa: según las necesidades de la célula,

puede descondensarse y convertirse en eucromatina para transcribir
la información genética.
• Heterocromatina constitutiva: no se descompacta. Permanece en su

grado de condensación.
Eucromatina:
Se encuentra laxa, ocupando el espacio que deja libre la heterocromatina.

Al no tener el grado de compactación de la anterior, es la que se encuentra Fig. 3. Eucromatina y heterocromatina en el
activa y, por ello, en proceso de transcripción. núcleo de una célula
/ 7. El ciclo celular
El ciclo celular comprende las diferentes fases y procesos que tienen lugar en la célula antes y después de la división
celular. Las fases son las siguientes:
G1: tienen lugar los procesos de transcripción y traducción para sintetizar las proteínas que la célula necesita para
vivir, duplicar sus orgánulos (ya que viene de una división celular) y poder sintetizar su ADN en la siguiente fase. El
momento previo a la fase G1, tras finalizar la división celular, se denomina fase G0.
S: se da la replicación, es decir, se duplica el material genético. Los cromosomas pasan a tener 2 cromátidas
exactamente iguales. ¡Ojo! Recuerda que las cromátidas idénticas son las del mismo cromosoma, pero no tienen por
qué serlo del cromosoma homólogo de cada pareja de cromosomas.
G2: la célula continúa con su crecimiento celular, además de terminar de desarrollar todos los elementos que
empleará en la mitosis.
División celular: la célula se divide, realizando primero la mitosis o meiosis (diferentes formas de división celular que
veremos más adelante) y a continuación la citocinesis, que consiste en el reparto del citoplasma entre las células hijas.
Las fases G1, S y G2 se corresponden con la interfase de la división celular.
Sabías que...
Las células tienen un ciclo vital, el ciclo celular, compuesto por fases que
se suceden y preparan a la célula para multiplicarse.
/ 8. Cariotipos
El cariotipo es el complemento cromosómico de un individuo que viene definido por las características morfológicas
y numéricas de los cromosomas en metafase mitótica.
Para obtenerlo, se realiza una tinción de los cromosomas con colorante, generalmente Giemsa, lo cual permitirá
resaltar su estructura para, posteriormente, visionarlo en el microscopio.
Es necesario extraerlo de células en mitosis. Para ello, se detiene la división celular empleando colchicina.
Otros conceptos importantes relacionados con los cariotipos son:
• Cariograma: es la ordenación de los cromosomas, se disponen en parejas ordenadas según sus tamaños y
posiciones de sus centrómeros.
• Ideograma: representación gráfica de los cromosomas tras aplicar técnicas de bandeo (tinción de sus
diferentes bandas).
• Formula cromosómica: es la descripción del cariotipo en la que se va a especificar el número de cromosomas,

seguido de una coma y especificando los cromosomas sexuales. En el caso de que existiesen aberraciones en
la estructura o en el número de cromosomas, se especificaría separadas de una coma.
Cabe señalar que los conceptos de cariotipo y cariograma habitualmente se emplean indistintamente. En este
sentido, recuerda que el idiograma es una representación gráfica, un dibujo, mientras que el cariograma lo forman
imágenes reales.
8.1. Usos
El cariotipo se representa mediante cariogramas o idiogramas, como hemos estudiado en esta unidad. Ahora bien,
su finalidad es muy sencilla: exponer, de manera clara y ordenada, todos los cromosomas para comprobar que se
ciñen a los estándares de normalidad.
Por ende, se trata de un método diagnóstico que expondrá si los cromosomas se han alterado en cuanto a su
número o estructura.
De esta forma, podríamos encontrar carencia de un cromosoma dentro de

una pareja, carencia de parejas completas, tres cromosomas en lugar de dos
para un cromosoma en particular, o alteraciones en los brazos de los mismo
que evidencien que se ha perdido material genético.
Son muy empleados en los laboratorios de citogenética, ya que son la base

del diagnóstico de aneuploidías, es decir, de alteraciones cromosómicas.
También se les aplican técnicas de fluorescencia, tinciones y bandeos, que

estudiaremos en unidades posteriores, para destacar regiones concretas Fig. 4. Hibridación Fluorescente In Situ (FISH)
de los mismos. de un cariotipo
/ 9. Caso práctico 1: “Observación de cromosomas

metafásicos”
Planteamiento: en el laboratorio realizaremos la observación con microscopio de cromosomas metafásicos con el
fin de elaborar un cariotipo. Para ello, nos dan un protocolo que consiste en cultivar la muestra con estimulantes de
la mitosis y, transcurrido un tiempo, añadir colchicina.
Nudo: ¿qué finalidad pueden tener estos dos productos?
Desenlace: para poder visualizar los cromosomas es preciso tenerlos

disponibles. El ADN se encuentra formando la eucromatina y la
heterocromatina en el núcleo, por lo que no podríamos verlos directamente.
La primera solución propuesta, un estimulante de la mitosis, tiene como
finalidad que las células comiencen la división celular. El segundo producto,
por el contrario, pretende detenerla en el momento preciso en el que los
cromosomas estén completamente formados, esto es, en la metafase. De Fig. 5. Cromosomas metafásicos teñidos con
esta manera, podremos teñirlos y visualizarlos al microscopio. Giemsa vistos al microscopio óptico
/ 10. Diferencias entre cromosomas X e Y

Como ya sabéis, los cromosomas X e Y son los cromosomas sexuales, los que definen el sexo de un individuo, XY
para el varón y XX para la mujer. El reparto se hace en proporción 1:1 ya que, al heredar los cromosomas de los
padres, de la madre siempre se heredará un cromosoma X, mientras que del padre puede recibir uno X o uno Y, con
un 50 % de probabilidad, por lo que un individuo tiene las mismas probabilidades de ser varón o mujer.
La diferencia más notable es que el cromosoma Y es mucho más pequeño

que el cromosoma X, por lo que habrá muchos genes que solo existan en
este cromosoma X y no en el Y. En los varones, ellos se expresarán en su
totalidad, porque no existirán conflictos con genes homólogos en el otro
cromosoma sexual, el X. A estos genes del cromosoma X, que no existen en
el cromosoma Y, se les denomina genes ligados al cromosoma X.
Por este motivo, en el caso de enfermedades de genes ligados al cromosoma

X, los genes recesivos se comportan como dominantes en los hombres,
ya que no se puede contrarrestar o inhibir su expresión con la de un gen
dominante en otro cromosoma X.
El cromosoma Y contiene los genes que determinan el sexo masculino,

además de otros. Fig. 6. Cromosomas X e Y
/ 11. Caso práctico 2: “Reparación de los daños en el

ADN”
Planteamiento: cuando se sintetizan o hibridan las cadenas de ADN, cada nucleótido se empareja con su
correspondiente complementario. Esto sucede en la inmensa mayoría de los casos. Sin embargo, en ocasiones, se
aparean bases que no son complementarias. Esto genera un «error» en el ADN.
Ejemplo de esto sería si se enfrentan la A de una cadena con la G de la otra; en este caso, es necesario arreglar este
error, ya que podríamos producir errores en la codificación de proteínas que podría resultar en la no síntesis de dicha
proteína, en la síntesis de una proteína defectuosa o, en el peor de los casos, en la síntesis de una proteína patológica.
Nudo: ¿cómo se resuelve este error?
Desenlace: la ADN Polimerasa, ante un error en la adición de nucleótidos, mediante el proceso de Revisión, lo elimina
y continúa añadiendo el correspondiente, ya que también tiene actividad exonucleasa. En el caso de que se le escape,
un grupo de proteínas reconoce el nucleótido nuevo mal colocado y lo eliminan, junto con bases nitrogenadas
adyacentes. Posteriormente, la ADN Polimerasa rellena el hueco con los nucleótidos que faltan y las ADN ligasas
sellan el nuevo fragmento.
/ 12. Mitosis
Es el proceso de división celular. Una célula reparte equitativamente su material genético entre las dos células hijas(si
no hay alteraciones en el proceso). La mitosis comprende las siguientes fases:
• Interfase: no pertenece a la mitosis propiamente dicha, ya que es el periodo entre distintas mitosis.
• Profase temprana: se comienza a condensar el ADN.
• Profase: se condensa el ADN para formar la cromatina y las cromátidas. Los centrosomas se separan mientras
van formando el huso mitótico, que es una red de túbulos proteicos por el que se desplazarán los cromosomas
dentro de la célula.
• Prometafase: la envoltura nuclear desaparece y los cromosomas ya formados se unen al huso mitótico
por el cinetocoro.
• Metafase: los cromosomas se disponen en el ecuador de la célula, unidos al huso mitótico por el cinetocoro.
• Anafase: se retraen los husos mitóticos, repartiendo a cada polo celular una cromátida de cada cromosoma.
• Telofase: se reconstruyen los núcleos celulares y se descondensan los cromosomas.
• Citocinesis: se reparte el citoplasma y los orgánulos celulares, dividiendo la célula original en dos células hijas,
cada una con la mitad del material genético.
Hay que destacar que cada célula hija tendrá la misma dotación cromosómica que la célula original.
Recuerda...
La mitosis es el método de reproducción celular en el que una célula
reparte equitativamente su material genético entre las dos células hijas.
/ 13. Meiosis
Es otra forma de división celular, exclusiva de las gónadas (ovarios y testículos). Se diferencia de la mitosis en que,
en esta, se producen células genéticamente idénticas, mientras que en la meiosis hay diversidad genética entre
generaciones celulares. En este caso, se produce una primera división donde los cromosomas en parejas intercambian
información entre homólogos y se reparte el material genético; de esta manera, las células hijas tienen solo un
cromosoma de cada tipo, en lugar de una pareja. La segunda división es una mitosis normal. Las fases de la primera
división meiótica son:
• Profase: se comienza a condensar el ADN y se compone de distintas fases, que son:
• Leptoteno: los cromosomas homólogos se comienzan a emparejar.
• Zigoteno: los cromosomas homólogos se aparean (sinapsis).
• Paquiteno: los cromosomas homólogos intercambian fragmentos de ADN (entrecruzamiento

cromosómico).
• Diploteno: los cromosomas homólogos quedan ligeramente separados, salvo por los lugares donde
intercambiaron información genética (quiasmas).
• Diacinesis: los cromosomas se siguen condensando.
• Continúan metafase, anafase, telofase y citocinesis.
En este caso, las células hijas reciben, tras la primera división meiótica, la mitad de la dotación cromosómica de
la célula original, es decir: de una célula diploide obtenemos dos células haploides. Del mismo modo que antes, la
segunda división meiótica (al ser igual que una mitosis) dotará a las células hijas de la misma dotación cromosómica
que la célula original.

unidad
Los cromosomas son la condensación del material genético con diferentes tipos de proteínas, entre las cuales
destacan las histonas para formar la cromatina. En función de dónde quede el centrómero de dichos cromosomas,
recibirán una nomenclatura u otra. Se distinguen, a su vez, 23 parejas de cromosomas en el ser humano, de las cuales
22 son parejas autosomas y una última pareja son los cromosomas sexuales, que definen el sexo del individuo, varón
para la combinación XY y mujer para la combinación XX.
La cromatina, a su vez, se puede dividir en heterocromatina (compacta) y eucromatina (laxa).
También hemos visto las fases del ciclo celular donde la célula, tras dividirse, sufre un crecimiento y desarrollo
de sus orgánulos citoplasmáticos, duplica su ADN, ultima los detalles de la mitosis y, entonces, se produce la
división nuevamente.
Destaca, además, el cariograma o idiograma, que son representaciones de la dotación cromosoma de un individuo,
es decir, de su cariotipo, muy útiles en el diagnóstico de cromosomopatías.
Ante las evidentes sospechas de una malformación por alteraciones genéticas, los médicos solicitan un cultivo de
células sanguíneas de la madre para reqalizar un cariograma. Quieren valorar que no haya alteraciones numéricas o
estructurales de los cromosomas del niño.
La caracterización de los cromosomas mitóticos metafásicos, ordenados por parejas y bandeados con una tinción de
Giemsa, nos ofrece el cariograma del niño, que resulta tener una aneuploidía.
En este caso, presenta una trisomía del cromosoma 13, causante de estas malformaciones. Así, se confirman las
sospechas de los médicos gracias al diagnóstico citogenético.
/ 15. Bibliografía
Citogenética clínica. Recuperado de:
http://biomodel.uah.es/citogene/horwitz/cytogen3.htm
Khan Academy. «Genética molecular». Recuperado de: https://es.khanacademy.org/science/high-school-biology/hs-molecular-genetics
Universidad Complutense de Madrid. «El cromosoma eucariótico». Recuperado de: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/04-El%20
cromosoma%20eucari%C3%B3tico.pdf
Universidad de Vigo. «La célula, 4. El núcleo, cromatina». Recuperado de: https://mmegias.webs.uvigo.es/5-celulas/4-cromatina.php
MSD Manual. Genes y cromosomas. Recuperado de: https://www.msdmanuals.com/es-es/hogar/fundamentos/gen%C3%A9tica/genes-y-cromosomas
Los cultivos celulares.

Técnicas de
obtención
8
/ 2. ¿Cómo podemos obtener cromosomas? 4
/ 3. Tipos de cultivos celulares 4

3.1. Cultivos celulares primarios: tipo 5
3.2. Cultivos celulares primarios: muestras 5
/ 4. Caso práctico 1: “Diagnóstico citogenético posnatal” 6
/ 5. Tipos de técnicas de cultivo celular: técnicas de subcultivo 7
/ 6. Procedimientos de conservación de células 7
/ 7. Técnicas de sacrificio y recogida celular: disgregación celular 8
/ 8. Determinación del número y viabilidad celular 9

8.1. Recuento celular en cámara y contadores electrónicos 9
/ 9. Métodos de tinción 10
/ 10. Contaminación de cultivos celulares 10
/ 11. Caso práctico 2: “Contaminación de los cultivos celulares” 11
© MEDAC 978-84-18864-26-1
Conocer qué son los cultivos celulares.
Distinguir entre los diferentes tipos de cultivos celulares.
Conocer las características y manejo de cada uno de los diferentes tipos de

cultivos celulares.

Realizar cultivos celulares implica preparar el material de estudio para su posterior procesado. Se trata de una parte
trascendental en el análisis citogenético que debe realizarse con la mayor seguridad y precisión posible, ya que
cualquier error que se genere en las muestras en esta parte del estudio arruinará todo el proceso.
Una vez se haya completado con éxito el cultivo celular, se procederá a

realizar las diferentes técnicas de análisis cromosómicos para el estudio
de anomalías numéricas o estructurales que manifiesten patologías en los
diferentes cribados y diagnósticos.


Encontrarás su resolución en el apartado «Resumen y resolución del caso Fig. 1. Placas con medios enriquecidos para
práctico de la unidad». cultivo celular
Audio intro. Contaminación de cultivo

celular
https://bit.ly/2VX0J89
TEMA 8. LOS CULTIVOS CELULARES. TÉCNICAS DE
/ 2. ¿Cómo podemos obtener cromosomas?

Por supuesto, los cromosomas los obtendremos de las células eucariotas.
En un laboratorio de análisis clínico o de anatomía patológica de un hospital se estudian muestras humanas, las
cuales se prepararán en el laboratorio de citogenética para poder estudiar sus cromosomas.
Como ya vimos en unidades anteriores, el ADN se encuentra en el núcleo, formando la cromatina, una compleja
asociación de proteínas y ácidos nucleicos que tiene en el núcleo celular una forma dispersada. Al tener forma
dispersada, es imposible estudiar estos cromosomas, por lo que tenemos
que procurar que las células los condensen y nos los presenten en un
formato mucho más compacto y manejable. Es el caso de los cromosomas
metafásicos (en la segunda fase mitótica).
Para ello, inducimos la mitosis de las células con un mitógeno para,

después, detener su ciclo celular con colchicina (entre otros) e
hincharlas con una solución hipotónica de cloruro potásico. De esta
manera, creamos el momento ideal del ciclo celular para observar los
cromosomas y, como las células también están hinchadas, podemos
verlos mejor. Fig. 2. Cromosomas en metafaser
Sabías que...
Para obtener cromosomas, debemos tomar una muestra y llevarla al
laboratorio. En este caso, sangre periférica extraída mediante venopunción.
/ 3. Tipos de cultivos celulares

Hay diferentes tipos de cultivos celulares, entre los cuales los cultivos celulares primarios son los más empleados en
el laboratorio.
Cultivo celular primario
Son células disgregadas, es decir, que se han separado o bien unas de otras, o bien del tejido donde estaban
contenidas, gracias a procesos mecánicos o enzimáticos, pero sin perder la capacidad de crecer y desarrollarse.
Quedan en suspensión y, cuando han crecido lo suficiente y necesitan más espacio (momento que se conoce como
confluencia), debemos transferirlas a un nuevo medio, proceso denominado subcultivo o pase.
Explantes primarios
Son muestras de órganos que se colocan en placa de Petri u otros soportes y se bañan en medio de cultivo. Las células
de la periferia del tejido crecen sin problema porque reciben todos los nutrientes necesarios, pudiendo entonces
migrar y expandirse, pero no así el resto, que están aisladas del medio de cultivo.
Órganos
Es similar al explante primario, con el mismo inconveniente del crecimiento celular. La ventaja es que conserva la
arquitectura celular del tejido in vivo, pero para cada estudio habitualmente es necesario realizar un nuevo explante.
Cultivos histotípicos y organotípicos
Son cultivos que pretenden imitar a los tejidos (histotípicos) de un único tipo celular cuando consiguen una gran
densidad celular, o a los órganos (organotípicos) cuando consiguen diferentes tipos celulares que se relacionan entre
ellos, imitando a la estructura y función del órgano original.
Fig. 3. Diferentes tipos de cultivos celulares.
3.1. Cultivos celulares primarios: tipo

Como hemos explicado anteriormente, los cultivos celulares primarios son los más empleados en citogenética. Del
mismo modo que existen diferentes cultivos celulares, dentro de los primarios también encontramos distintos tipos,
que son:
Cultivo en monocapa
Las células se disponen sobre el soporte sólido que

las contiene. De hecho, es primordial que estén bien
adheridas a este medio para proliferar. Se emplea en la
mayoría de cultivos salvo en las células sanguíneas.
Cultivo en suspensión
Al contrario que el anterior, las células se encuentran

dispersas en un medio líquido. Empleado en células
sanguíneas, tumorales y células madre.
Según el tipo de célula estudiada, se precisará un tipo

de medio de cultivo u otro. Estos deben llevar factores
de crecimiento, antibióticos, nutrientes y estimuladores
de la mitosis, es decir, sustancias para provocar su
crecimiento y desarrollo. Fig. 4. Diferentes tipos de cultivo celular primario.
3.2. Cultivos celulares primarios: muestras

Del mismo modo que los cultivos se pueden disponer de diversas formas, tal como hemos estudiado, también
tendremos diferencias importantes en las muestras cuyos cultivos realizaremos. Las tres más empleadas en
citogenética son:
Sangre periférica
Para obtener linfocitos. Consiste en el análisis de células somáticas del cuerpo, es decir, en estudiar el cariotipo de las
células que componen nuestro organismo. Una de sus desventajas es que necesitan el empleo de agentes mitógenos
pero, a cambio, se realizan en 2-3 días, es decir, a corto plazo.
Líquido amniótico
En este caso no se precisan mitógenos pero, por el contrario, requieren 2-3 semanas, de modo que son a largo plazo.
Biopsia corial
Su finalidad es el diagnóstico prenatal precoz mediante el análisis de una muestra procedente de las vellosidades
coriónicas, ya que se pueden detectar anomalías antes que en las muestras de líquido amniótico, aunque estas
muestras son más limitadas que las otras dos estudiadas, permiten tener mayor margen de maniobra en caso de la
necesidad de un aborto.
Fig. 5. Diferentes técnicas de tomas de muestras para estudio citogenético. Imagen izquierda:
venopunción para toma de sangre periférica. Imagen central: amniocentesis para obtención de
líquido amniótico. Imagen derecha: biopsia corial
/ 4. Caso práctico 1: “Diagnóstico citogenético

posnatal”
Planteamiento: aunque en los países desarrollados los cribajes prenatales de
aneuploidías (alteraciones en el número de cromosomas) están a la orden
del día, no siempre se cumplen por parte de todas las gestantes. En múltiples
ocasiones, son personas que vienen del extranjero y no han seguido estos
protocolos de screening. Otras veces, son personas en riesgo de exclusión
social, con situaciones socioeconómicas desfavorables o, simplemente,
personas que no muestran interés en estas revisiones obstétricas.
En el caso que se plantea, un pediatra detecta que uno de los niños que ha
nacido en su guardia presenta algunos rasgos morfológicos que muestran
una predisposición a una alteración cromosómica. Nos informan que, por el Fig 6. Bebé con rasgos de Síndrome de Down.
motivo que sea, la gestante no ha cumplido con su programa de screening de
malformaciones y aneuploidías.
Nudo: ¿qué crees que procederá en esta situación?
Desenlace: primero hay que confirmar si hay alteración cromosómica. Para

ello, se realizará un diagnóstico postnatal. En él, se estudian los cromosomas
de pacientes que ya han nacido, independientemente de su edad (aunque
son estudios que se realizan habitualmente en gente joven). Hay que realizar
una extracción y cultivo de sangre periférica para, posteriormente, realizar
el procesamiento necesario y valorar sus cromosomas.
Una vez llevado a cabo el procedimiento que nos concierne en este

caso, se diagnostica una trisomía del 21 en el niño. Fig 7. Cariotipo de dicho bebé.
/ 5. Tipos de técnicas de cultivo celular: técnicas de

subcultivo
Una vez realizamos un cultivo celular primario, sus células comienzan a proliferar. Llega un momento en el que el
soporte en el que se encuentran (el medio de cultivo), se les queda pequeño. Entonces el crecimiento se detiene,
ya que las células están en estrecho contacto y no pueden acceder a los recursos del medio de los que precisan. Este
momento se denomina confluencia.
Al igual que ocurre con las plantas cuando sus raíces ocupan toda la tierra disponible, hay que «trasplantar» estas
células, lo que se realiza reubicándolas en un nuevo medio de cultivo, proceso conocido como pase o subcultivo.
Para ello, si las células están formando una monocapa, se disgregan y se trasladan a un nuevo soporte con medio de
cultivo. En cambio, si se encuentran en suspensión, basta con diluirlas en un nuevo medio de cultivo. De esta manera,
permitimos que puedan seguir creciendo.
A cada uno de estos nuevos traslados se les conoce como línea celular. Con ellas obtenemos una mayor cantidad de
células, aunque es frecuente que predomine la línea celular dominante y que el cultivo sea más cada vez homogéneo
en lo que se refiere a sus tipos celulares.
Por otra parte, los cultivos seguirán creciendo hasta que se alcance la senescencia, que es el momento en que las
células no pueden dividirse más por acortamiento de sus telómeros.
Cultivo celular Crecimiento
Subcultivo Confluencia
Fig. 8. Esquema del proceso de cultivo y subcultivo celulares.
Audio 1. Subcultivos
https://bit.ly/2KBlxN7
/ 6. Procedimientos de conservación de células

Una vez tengamos material que no vamos a utilizar en el momento o que, sencillamente, deba almacenarse (como
en el caso de las alícuotas), debemos proceder a su conservación. El método más empleado es la criopreservación.
Habitualmente, los cultivos celulares se mantienen a – 80º C para conservarse por periodos mayores a 24 horas o a
– 20º C si se quieren conservar por menos tiempo. Para preservar las muestras durante largos periodos de tiempo,
se congelarán en nitrógeno líquido a -196º C.
Para ello, se sustituye el medio de cultivo por un medio de suero que lleva dimetilsulfóxido (DMSO), un crioprotector
para las células. Además, es importante que exista una densidad celular concreta para realizar la criopreservación,
concretamente de 1·106 células/ml.
Por supuesto, cada muestra que se criopreserva debe ir bien etiquetada, de

tal manera que sea fácilmente identificable. Si es un subcultivo, debemos
indicar el número de subcultivo al que corresponde, la fecha en que se ha
conservado y otros detalles que se considere necesario aportar en relación a
las técnicas realizadas.
Posteriormente, es importante que la descongelación se realice siguiendo Fig. 9. Tanque de criopreservación con
protocolos estrictos para que no suponga un riesgo para las células del cultivo. nitrógeno líquido
/ 7. Técnicas de sacrificio y recogida celular:

disgregación celular
Se trata de separar las células entre ellas y también de la matriz del tejido al que están unidas. Las células sanguíneas y
de líquidos biológicos ya se encuentran dispersas y no precisan disgregación, pero el resto de muestras normalmente
contienen células inmersas en tejido conjuntivo o unidas entre ellas, por eso es necesario procesarlas de esta manera.
Esta técnica se puede realizar por medio de tres métodos diferentes, y lo más habitual es que se combinen varios de
ellos. Estos son:
Métodos mecánicos
Sencillamente, se destruyen y raspan los tejidos para que se liberen las diferentes células de la matriz que las contiene.
No es el método más eficiente.
Métodos químicos
Su objetivo es evitar el correcto funcionamiento de las moléculas de adhesión celular (integrinas y cadherinas),
que necesitan cationes (iones positivos) para ser efectivas. Las muestras se tratan con quelantes como el EDTA
(«secuestran» los cationes para que las moléculas de adhesión sean afuncionales).
Métodos enzimáticos
Muy empleado y efectivo. Emplea enzimas proteolíticas (que digieren proteínas) que deshacen las proteínas que
mantienen las células adheridas a la matriz celular. Por supuesto, según el tejido, se emplearán unas enzimas u otras.
Es muy común llevar a cabo el proceso de tripsinización que emplea la enzima tripsina.
Fig. 10. Esquema de las principales uniones intercelulares.

/ 8. Determinación del número y viabilidad celular

Es fundamental averiguar si las células son o no viables, es decir, comprobar qué células están vivas y cuáles muertas.
El procedimiento es muy sencillo: basta con realizar una tinción vital. Consiste en un proceso donde el colorante tiñe
las células que están muertas y deja intactas las que están vivas, que se verán blancas o incoloras. El azul tripán es
un colorante muy empleado en este proceso.
Posteriormente, se cuenta el número de células viables y no viables por

unidad de volumen, habitualmente por mL, en un hemocitómetro, entre
los cuales el más empleado es la cámara de Neubauer. Este instrumento
es similar a un portaobjetos, pero está graduado para contar las células
en cuadrículas de mm2, poder averiguar la densidad citológica por mm2 y
después trasladar los resultados a su equivalente en unidad de volumen.
Existen otras técnicas para determinar el número de células, pero esta es

la que más se utiliza entre los instrumentos manuales. Estudiaremos esta
técnica en el siguiente apartado de la unidad.
Fig. 11. Tinción con azul tripán donde se
Por otra parte, cabe destacar que existe también una gran variedad de observan células teñidas (no viables) y células
aparatos electrónicos para el contaje celular. incoloras (viables)
8.1. Recuento celular en cámara y contadores electrónicos

El recuento celular que hemos visto en el apartado anterior puede realizarse de dos maneras: en contadores
electrónicos, que realizan el recuento atendiendo a diferentes propiedades físico-químicas de las células, tales como
su densidad, su resistencia al paso de una corriente eléctrica o su absorbancia en espectrofotometría; o manual en
hemocitómetros, como la ya mencionada cámara de Neubauer.
La cámara de Neubauer funciona de la siguiente manera: el recuento puede hacerse en el cuadrado central o en los
cuatro cuadrados de las esquinas. Hay que tener en cuenta que la muestra, una vez puesto el cubreobjetos, queda
hundida a 0’1 mm; si a esto le sumamos que cada uno de los 5 cuadrados mencionados tiene unas dimensiones de 1
mm x 1 mm, nos deja un volumen en cada cuadrado de 0’1 mm3, que equivale a 0’1 microlitros o 10-4 mL.
Si empleamos el cuadrado central, solo tendremos que contar todas las células que tengamos y multiplicarlo por
10.000 (para pasar el número de células de 0,1 microlitro a 1 mL).
Si contamos los cuatro cuadrados de las esquinas,

entonces podemos hallar la densidad celular dividiendo
el número de células contadas en los cuatro cuadrados
entre 4 y, a continuación, multiplicándolo de nuevo por
10.000, ya que son cuatro áreas donde hemos contado,
cada una de las cuales tiene 0,1 microlitro de volumen,
siendo 1 mililitro 10.000 veces mayor.
Por último, si la densidad celular de la muestra es muy

elevada, se debe hacer una dilución y multiplicar el
resultado anterior por el factor de dilución. Fig. 12. Cámara de recuento celular tipo Neubauer.
Enlaces de interés...
En el siguiente video podrás ver cómo se realiza el recuento de
células en cámara de Neubauer. https://www.youtube.com/
watch?v=G0wmfyn3hqA
/ 9. Métodos de tinción
La tinción es una de las técnicas más empleadas en los laboratorios. Esta pone de manifiesto estructuras celulares
que se adhieren a un colorante. De esta manera, las células, que de otra forma son incoloras, toman el color de
aquellas sustancias que son afines a las estructuras correspondientes.
Los colorantes, según su afinidad, los podemos clasificar en:
• Ácidos: con apetencia por estructuras básicas, como proteínas del citoplasma. Un ejemplo de este tipo es la
eosina.
• Básicos: con apetencia por estructuras ácidas, como el ADN del núcleo. Un ejemplo de este tipo es la hematoxilina.
• Neutros: tiñen estructuras tanto básicas como ácidas. Un ejemplo de este tipo es el azul de metileno.
• Indiferentes o hidrofóbicos: del mismo modo que los anteriores se unían

por interacciones electrostáticas, estos sencillamente se disuelven en
los tejidos como, por ejemplo, en las grasas. Es el caso del Sudán III.
Existen otras tinciones que se emplean para teñir estructuras o tejidos concretos,
como puede ser la tinción de PAS para mucopolisacáridos o las tinciones con
nitrato de plata para tejidos específicos como el sistema nervioso.
En el laboratorio de biología molecular y citogenética un colorante muy empleado

es el azul tripán, que hemos estudiado en el apartado 8, para valorar la viabilidad
celular. En este caso, el colorante penetra en las células muertas, cuya membrana Fig. 13. Corte histológico de cerebro teñido con
permite su paso y las colorea, dejando a las vivas incoloras. nitrato de plata
/ 10. Contaminación de cultivos celulares

Ya hemos hablado de la importancia que tienen las medidas de higiene en los laboratorios de citogenética y cultivos
celulares. Esto se debe a que los cultivos son muy fácilmente contaminables, lo cual nos puede obligar a descartarlos
y a tener que realizarlos de nuevo. Así, es responsabilidad de los trabajadores del laboratorio asegurar que el riesgo
de contaminación sea mínimo, para evitar perder tiempo y material de trabajo.
Los contaminantes más característicos son:
Bacterias: se detectan muy bien al microscopio, ya que se aprecian cocos,

bacilos, etc. y, además, generan otros cambios como turbidez o alteraciones
del pH.
Levaduras: también son muy fáciles de ver al microscopio, donde las

podemos distinguir por tener forma ovalada o redonda; producen turbidez y
alteran el pH, alcalinizándolo.
Mohos: se detectan muy bien al microscopio o, incluso, a simple vista. Fig. 14. Cultivos celulares contaminados por
Forman estructuras filiformes, es decir, con forma de filamentos alargados. bacterias
Micoplasma: no son fáciles de detectar, no generan cambios de pH, ni

turbidez, aunque se pueden ver gránulos oscuros en los citoplasmas.
Normalmente se detectan por fluorescencia o técnicas de biología molecular
como PCR o marcaje con sonda de ADN ribosomal de micoplasma.
Virus: también son muy difíciles de detectar sin tener que recurrir a técnicas
de biología molecular, aunque pueden producir signos característicos en las Fig. 15. Cultivos celulares contaminados por
células del cultivo, como las inclusiones dentro de núcleo celular. levaduras
/ 11. Caso práctico 2: “Contaminación de los cultivos

celulares”
Planteamiento: estamos trabajando en el laboratorio y vemos que, en la sala donde se realizan los cultivos, nuestros
compañeros no siempre llevan puesta la mascarilla, a veces trabajan sin la bata y entran a la sala con la misma ropa
que traían de la calle. Por la desconfianza que nos genera esto, cogemos algunos de los cultivos que están realizando
y los observamos a microscopio. En uno de ellos encontramos la imagen
adjunta a la derecha.
Nudo: ¿qué ha podido pasar? ¿Qué medidas requiere esta situación ahora?
Desenlace: lo que acabamos de ver es una contaminación del cultivo

celular por hongos. Se detecta fácilmente porque presentan estructuras
características en forma de hilos. Evidentemente, se ha producido un caso de
contaminación por no seguir las medidas de seguridad e higiene establecidas.
Ahora lo que corresponde es, simplemente, añadir antifúngicos como Fig. 16. Cultivos celulares observados al
Anfotericina B o Nistatina e intentar «limpiar» el cultivo para no tener microscopio. La flecha amarilla señala unas
que repetirlo. estructuras sospechosas

unidad
Los cultivos celulares pueden provenir de diferentes muestras, ya sean órganos, tejidos o suspensiones celulares,
entre los cuales estos últimos son los más empleados. Para el diagnóstico prenatal emplearemos muestras de líquido
amniótico o de una biopsia corial, mientras que para el postnatal podemos emplear sangre periférica. Los cultivos
celulares primarios se pueden realizar en monocapa o en suspensión, y cuando ya no disponen del suficiente espacio
para crecer, deben trasladarse a un nuevo cultivo, pasando a denominarse líneas celulares.
Para la disgregación de las células, cuando están unidas entre ellas o a la matriz del tejido del cual provienen, se
emplean métodos mecánicos, químicos o enzimáticos.
Si no vamos a trabajar con los cultivos, deben refrigerarse a temperaturas de – 20º C a – 80º C, dependiendo
del tiempo que necesitemos preservarlos. Para preservar las muestras durante largos periodos de tiempo, se
congelarán en nitrógeno líquido a -196º C.
Otro aspecto fundamental es evitar la contaminación de las muestras (que fácilmente pueden colonizarse por
bacterias, hongos y virus), estudiar la viabilidad de los cultivos con la tinción azul tripán y hacer recuento de células
viables en contadores electrónicos o hemocitómetros, como la cámara de Neubauer.
A continuación, podemos ver el esquema-resumen del tema.
Cultivos celulares
Tipos Crecimiento Conservación Recuento y viabilidad Contaminación
Órganos Confluencia cuando - 20º C para <24 h Tinción azúl tripán y

necesitan un pase recuento en cámara
de Neubauer
Explantes Línea celular - 80º C para >24 h
Bacterias y hongos:
Organotípicos e microscopio, turbidez
histotípicos y cambios en el pH
Cultivos celulares Monocapa Mycoplasma y

primarios virus: técnicas de
biología molecular
y fluorescencia
Suspensión (Mycoplasma)
Fig. 17. Esquema resumen del tema
En este caso, nos encontramos con una contaminación del cultivo debida a una mala técnica aséptica. Estos gránulos
en los citoplasmas sugieren una posible infección por Mycoplasma, por lo que deberemos confirmarlo mediante
técnicas específicas, ya que no muestra signos tan evidentes como la turbidez o la alteración del pH. Por ello,
realizaremos tinciones fluorescentes o técnicas de biología molecular, como la PCR, principalmente.
/ 13. Bibliografía
Academia AMIR. (2019). Manual de Ginecología y Obstetricia. 12ª Edición.
Bikandi, J., San Millán, R. «Cámara de recuento Neubauer improved». Departamento de Inmunología, Microbiología y Parasitología, Facultad de Farmacia,
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http://insilico.ehu.eus/counting_chamber/neubauer_improved.php
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Otero, J. A. (2014). «Tipos de contaminación en cultivos celulares y su prevención». Curso de cultivos celulares avanzados. Universidad de León. Recuperado de:
http://servicios.unileon.es/formacion-pas/files/2014/02/Contaminaciones-y-prevencion.pdf
Sociedad Española de Fertilidad. «Aborto de repetición». Recuperado de:
https://www.sefertilidad.net/docs/biblioteca/recomendaciones/aborto.pdf
Sociedad Española de Fertilidad. «Guía 26: Estudio y tratamiento de las pérdidas gestacionales recurrentes». Recuperado de:
https://www.sefertilidad.net/docs/biblioteca/guiasPracticaClinicas/guia26.pdf
Universidad del País Vasco. Introducción al cultivo celular. Recuperado de:
http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf
Análisis cromosómico.
Obtención de
extensiones
cromosómicas.
Tinción y bandeado
9
/ 2. Técnicas de análisis cromosómico 4
/ 3. Interés del estudio cromosómico 4
/ 4. Caso práctico 1: “Equipos cariotipadores” 5
/ 5. Técnicas de obtención de la muestra, sembrado y cultivo celular 5
/ 6. Técnicas de sacrificio. Inhibidores de la mitosis 6
/ 7. Técnicas de recogida, procesado y extensión de células 6
/ 8. Métodos de tinción y bandeado cromosómico 7
/ 9. Obtención de bandas G, C Y NOR 7
/ 10. Protocolo de tinción de Giemsa 8
/ 11. Protocolo de bandeo G 9
/ 12. Caso práctico 2: “Automatización del análisis citogenético” 9
/ 13. Eliminación de la tinción de los portaobjetos 10
/ 14. Ordenación de los cromosomas humanos 10
© MEDAC 978-84-18864-26-1
Conocer cómo se procesan los cromosomas y las diferentes técnicas empleadas
para ello.
Identificar la utilidad de cada tipo de técnica de análisis cromosómico.
Aprender cómo se obtienen y procesan las muestras para el estudio de los

cromosomas.

Una vez estudiados los cultivos celulares en la unidad anterior, vamos a profundizar en cómo se obtienen los
cromosomas y cómo se llevan a cabo las diferentes técnicas de análisis cromosómico para la observación de posibles
anomalías numéricas o estructurales en el material genético que se debe
estudiar, destacando la tinción, el bandeo o la fluorescencia.
Planteamiento del caso práctico de la unidad


práctico de la unidad». Fig. 1. Cromosomas tratados con bandeo R
Audio intro. Bandeo G

https://bit.ly/3eMZvoN
TEMA 9. ANÁLISIS CROMOSÓMICO. OBTENCIÓN DE EXTENSIONES CROMOSÓMICAS. TINCIÓN Y BANDEADO
/ 2. Técnicas de análisis cromosómico

Como hemos estudiado en las diferentes unidades anteriores, las técnicas de análisis cromosómico nos van a permitir
poner de manifiesto los cromosomas y analizar si presentan algún tipo de anomalía.
Normalmente, se clasifican en dos grandes categorías: anomalías

estructurales, donde se produce alteración del orden o la cantidad de los
genes que portan, y anomalías numéricas, cuando aparecen o desaparecen
cromosomas de la célula.
Existen, a su vez, diferentes técnicas para estudiarlos, ya sea por tinciones,

que les dan color; por bandeo, dejando diferentes bandas de colores; o por
fluorescencia, resaltando estructuras marcadas con colorantes fluorescentes.
Hay que recordar que, junto a los cultivos celulares, el análisis cromosómico
es la principal técnica que se realiza en los laboratorios de citogenética Fig. 2. Cromosomas teñidos con naranja de
destinados al diagnóstico de anomalías cromosómicas. acridina, colorante fluorescente
/ 3. Interés del estudio cromosómico

Ante las diferentes enfermedades que derivan de anomalías cromosómicas, a
los seremos humanos nos resulta interesante realizar este tipo de estudio. Se
practica porque el médico u otro trabajador sanitario advierte en el paciente
anomalías que sugieren este tipo de enfermedades.
En este sentido, el médico responsable realiza el estudio cuando advierte

anomalías congénitas en bebés, alteraciones del correcto desarrollo
psicomotor de los niños, problemas relacionados con el desarrollo sexual de
los adolescentes o patologías similares en adultos, además de infertilidad o
problemas genéticos, como hijos con malformaciones o alteraciones en los
genes.
Estos signos indican que debería realizarse el idiograma o el cariograma,

que estudiamos en la unidad 3. Recuerda que estos conceptos a menudo se
usan indistintamente, pero aluden a diferentes estudios. El primero supone
ordenar representaciones gráficas de los cromosomas uno tras otro, sin
su pareja, en función de su tamaño y tras un bandeado; mientras que el
cariograma los ordena mediante imágenes reales de los mismos, por parejas
y según tamaño o posición del centrómero. Fig. 3. Idiograma.
Audio 1. Los cariogramas e idiogramas

https://bit.ly/3aGFTPI
Sabías que...
Cuando queremos realizar un cariotipo, necesitamos ordenar los
cromosomas por parejas homólogas.
/ 4. Caso práctico 1: “Equipos cariotipadores”

Planteamiento: Cuando vemos en las imágenes de cariogramas los cromosomas ordenados perfectamente según
tamaño, el trabajo para evaluar que no presenten anomalías es muy sencillo, ya que de un simple vistazo podemos
ver todos los cromosomas y su estado.
Nudo: Pero ¿cómo es posible esto? Ya que, cuando se observan al microscopio, están desordenados. ¿De qué manera
se consigue elaborar un informe con los cromosomas ordenados?
Desenlace: Esto se lleva a cabo gracias a los cariotipadores automáticos. Son softwares que se aplican a imágenes
obtenidas por microscopios conectados a un ordenador. De esta manera, el microscopio ofrece una imagen como
la de la imagen 3 izquierda, que al clínico le llevaría mucho tiempo y trabajo ordenar y evaluar, y la convierte en la
imagen 3 derecha. Además, este software corrige los diferentes errores que puedan aparecer, como cromosomas
superpuestos o cruzados.
Fig. 4a. : Imagen obtenido al microscopio Fig. 4b. Cariograma ordenado gracias a un
óptico de cromosomas en metafase. cariotipador.
/ 5. Técnicas de obtención de la muestra, sembrado y

cultivo celular
Las extensiones cromosómicas las vamos a obtener a partir de muestras biológicas tomadas en consulta o en
quirófano. Recuerda que, una vez tomadas, se llevan al laboratorio para realizar un cultivo celular de las mismas, lo
cual permite aumentar la densidad celular de la muestra para posibilitar el estudio cromosómico.
Como ya sabemos, se obtienen por venopunción, en el caso de la sangre periférica; por amniocentesis para el líquido
amniótico o por biopsia para las vellosidades coriales.
La siembra se realiza incorporando la muestra al medio de cultivo, que es un líquido enriquecido con sustancias
para la nutrición y desarrollo y reproducción celular. En el caso de la sangre periférica, en proporción 1/5 o 1/10
(sangre/medio de cultivo). Es recomendable sembrarla por duplicado y de manera independiente, para evitar
contaminaciones y pérdidas de material de estudio.
Es fundamental incubar las muestras con las condiciones óptimas de pH, osmolaridad, temperatura, viscosidad,
tensión superficial y tiempo de incubación.
Una de las muestras más empleadas es la de sangre periférica, que requiere

una temperatura de 37 o C y un tiempo de 24 a 72 horas, al 5 % de CO2.
Es importante recordar que el medio de cultivo debe contener sales, aminoácidos

esenciales, vitaminas, glucosa, moléculas orgánicas con diversos fines como
coenzimas, hormonas y factores de crecimiento, antibióticos y fungicidas. Por
supuesto, también cuentan con mitógenos como la fitohemaglutinina para
estimular la mitosis. En los medios de cultivo se emplea mucho el suero bovino
fetal (FCS), aunque también se emplea suero de humanos. Fig. 5. Incubadora de laboratorio de CO2
/ 6. Técnicas de sacrificio. Inhibidores de la mitosis

En este campo, al hablar de sacrificio, nos referimos a la detención de la mitosis en la metafase. Como en apartados
anteriores, hablaremos de la muestra más frecuentemente estudiada, la sangre periférica.
Para ello, emplearemos sustancias que detienen la mitosis, entre las cuales las más populares son la colchicina y el
Colcemid. Ambos detienen la metafase celular, que es el momento idóneo, ya que los cromosomas se han formado
tras la condensación y empaquetamiento del ADN.
Este producto se añade al cultivo y se deja incubar 30 minutos a 37 o C. Una vez pasado el tiempo, solo se necesita
centrifugar (1 500 rpm 5-10 minutos) la muestra para retirar el sobrenadante (el líquido que sobra en la parte
superior del tubo donde lo realicemos) y volver a provocar la suspensión de las células centrifugadas, que se habrán
quedado en el fondo del recipiente, mediante golpes en el fondo del mismo.
El inhibidor de la mitosis debe añadirse de 90 a 120 minutos antes de que termine el periodo de incubación.
Añadir la muestra al medio de

cultivo
Incubación
120-90 min. previos a terminar la

incubación añadir el inhibidor de
la mitosis
Incubación
Centrifugar y eliminar el
sobrenadante
Resuspender el cultivo
Fig. 6. Esquema del procesamiento del cultivo

celular para extensiones de cromosomas.
/ 7. Técnicas de recogida, procesado y extensión de

células
El siguiente paso consiste en añadir una solución hipotónica al medio, normalmente cloruro potásico, mezclándolo
con la muestra y dejando que actúe durante 20 minutos.
Al encontrarse las células en una solución hipotónica, el agua pasará al interior de las células mediante el mecanismo
de ósmosis. La finalidad es que las células se hinchen para que los cromosomas se separen y, así, poder verlos mejor.
Este paso es delicado y requiere un seguimiento muy estricto de los tiempos y procedimientos, porque las células
podrían quedar muy poco hinchadas y los cromosomas no se verían como es debido o, por el contrario, podrían
hincharse demasiado y romperse, de manera que la muestra tampoco valdría.
Transcurridos estos 20 minutos, se vuelve a centrifugar, como en el apartado anterior, retirando el sobrenadante y
resuspendiendo la muestra de nuevo.
El siguiente paso consiste en fijar la muestra con 5 mL de fijador de Carnoy (tres partes de etanol en una de ácido
acético). Tras 5 minutos, se centrifuga a 1 500 rpm durante 5 minutos y se retira el sobrenadante. Será preciso realizar
2 o 3 lavados más con el fijador, hasta que obtengamos un botón celular (conglomerado de células) blanco y limpio.
Este material ya estará listo para ser extendido en un portaobjetos, que se realiza dejando gotear la suspensión sobre
este. De esta forma, se rompen las células y se dispersan sus cromosomas por el portaobjetos.
Proporciones para la elaboración de 100 mL de solución fijadora Carnoy:
• Fijador de Carnoy 100 mL
• Etanol 75 mL
• Ácido acético 25 mL
/ 8. Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Existen diferentes métodos de tinción:
1. Tinción simple: Un ejemplo es la tinción con orceína, una tinción roja-violácea que tiñe los cromosomas enteros de
un color rosado intenso, pero no permite la diferenciación de la composición de este, como ocurre con las diversas
técnicas de bandeo.
2. Tinción fluorescente: Mediante el empleo de fluorocromos, sustancias que en la microscopía de fluorescencia le

otorgan su característico brillo a la muestra, gracias a la radiación que emite el colorante.
3. Bandeo: Es un tipo de tinción que pondrá de manifiesto diferentes bandas

o regiones específicas de los cromosomas. Existen diferentes tipos, como
los bandeos G, R, Q, C y NOR. Cada uno evidencia un tipo de estructura de
los cromosomas. Así, según la región que se pretende estudiar, se utiliza un
tipo de técnica concreto. Por ejemplo, el bandeo G se emplea mucho en la
elaboración de los cariogramas e idiogramas; el Q es útil para identificar el
cromosoma Y; el C se emplea para estudiar genes que se localizan en regiones
conocidas como heterocromáticas (se verá en el apartado siguiente); y el R
(reverse), que da un resultado de tonos opuestos al bandeo G, es muy útil
para teñir los extremos distales de los cromosomas. Fig. 7. Bandeo G de cromosomas
Sabías que...
Los cromosomas no se pueden ver correctamente si no se realiza en ellos
algún tipo de coloración. La más básica y fundamental es la de Giemsa.
/ 9. Obtención de bandas G, C Y NOR

Bandeo G: Para la obtención de estas bandas, se añade tripsina sumergiendo el portaobjetos en una solución de
esta el tiempo que indique el protocolo y, después, se lava. Posteriormente, se tiñe con Giemsa y se vuelve a lavar
el portaobjetos, para finalmente dejarlo secar. Nos ofrecerá cromosomas con bandas claras y oscuras; estas últimas
serán ricas en A-T. Generalmente se recomienda envejecer las muestras a temperatura ambiente durante varios días
para obtener una mejor definición de las bandas.
Bandeo C: Con esta técnica vamos a conseguir teñir intensamente zonas heterocromáticas. Estas tienen una
cromatina muy condensada y generalmente responde a la zona de los centrómeros. A los cromosomas se les aplica
una solución básica y, a continuación, se tiñen con Giemsa.
Bandeo NOR: En esta técnica las estructuras que teñiremos serán aquellas que se correspondan a genes del ARN
ribosómico. Se encuentran en regiones tallo y satélite de los cromosomas acrocéntricos.
Fig. 8. Partes de un cromosoma acrocéntrico.
/ 10. Protocolo de tinción de Giemsa

La tinción de Giemsa es una de las más empleadas en los laboratorios de Citología, sobre todo para el estudio de las
células sanguíneas, aunque también se emplea para realizar la tinción de los cromosomas.
El protocolo es el siguiente:
1. Colocamos los portaobjetos en una bandeja de tinción.
2. Preparamos la solución colorante y la añadimos a los portaobjetos.
3. Dejamos actuar el colorante durante 7-10 minutos.
4. Desechamos el colorante sobrante (habitualmente en contenedores especiales para colorantes) y lavamos

los portaobjetos dos veces con agua destilada.
5. Dejamos que los portaobjetos se sequen al aire.
6. Preparamos los portaobjetos para su observación al microscopio con medio de montaje y un cubreobjetos.
Los cromosomas se ven de color rosa-fucsia.
Fig. 9. Bandeja de tinción. Fig. 10. Cromosomas teñidos mediante la

tinción de Giemsa
/ 11. Protocolo de bandeo G

Recuerda que el bandeo consiste en teñir los cromosomas, pero distinguiendo zonas más o menos teñidas que forman
el característico patrón en bandas. Dentro de esta técnica, el bandeo G es el más empleado y se usa principalmente
en la elaboración de cariogramas. El protocolo es el siguiente:
1. Envejecimiento de los linfocitos, dejándolos a

temperatura ambiente durante varios días (no es
estrictamente necesario, pero ayuda a diferenciar
mejor las bandas).
2. Tratamiento con tripsina durante 45-90 segundos.
3. Enjuagar rápidamente en solución salina.
4. Sumergir en solución colorante agitando durante 15-

30 segundos.
5. Enjuagar rápidamente en agua estéril. Fig. 11. Cromosomas bandeados mediante bandeo G.
/ 12. Caso práctico 2: “Automatización del análisis

citogenético”
Planteamiento: En el caso práctico anterior, hemos visto que existen cariotipadores automatizados. Estos aparecen
ante la necesidad de automatizar el trabajo en el laboratorio de citogenética por la elevada demanda de trabajo y la
gran cantidad de tiempo que implican estas técnicas.
Nudo: Atendiendo a lo visto en el caso práctico uno, ¿qué equipo necesitaríamos para disponer de un sistema
automatizado de citogenética?
Desenlace: Lo primero que necesitamos es un microscopio, ya que sin él no se pueden ver los cromosomas. Debe
tener:
• El software y hardware apropiados para poder automatizarse en la lectura de los portaobjetos.
• Una cámara fotográfica para captar las imágenes, una vez centradas
y enfocadas.
• Software específico de procesamiento de la imagen.
• Hardware para poder controlar todas las funciones del sistema, como
una CPU y un monitor de alta resolución para poder ver las imágenes.
Diferentes equipos táctiles o analógicos para poder trabajar con la
CPU, como pantalla táctil, teclado, ratón, etc.
• Una base de datos para almacenar las imágenes, archivos e informes

que sean precisos. Fig. 12. Analizador automático de cromosomas
/ 13. Eliminación de la tinción de los portaobjetos

Del mismo modo que podemos teñir las muestras de los portaobjetos, podemos eliminar la tinción siguiendo este
protocolo:
1. Retirar el aceite de inmersión con almohadillas y alcohol.
2. Eliminar el medio de montaje con agua destilada, si es soluble en agua o con un sustituto del xileno (una
sustancia disolvente), si es un montaje permanente.
3. Secar los portaobjetos.
4. Sumergir los portaobjetos en un fijador de ácido etanol-

acético 3:1 de 30 segundos a 5 minutos hasta que deje de
soltar colorante. Si este es incoloro, mantener el tiempo
máximo en el fijador o experimentar cuál es el mejor tiempo
mediante comprobaciones en el microscopio.
Fig 13a. EMedios de Fig 13b. y sustitutos del Xileno
5. Secar el portaobjetos. montaje acuosos
/ 14. Ordenación de los cromosomas humanos

Los cromosomas humanos se ordenan según su tamaño y forma, atendiendo a la posición del centrómero y su
patrón de bandas.
Se han clasificado en 7 grupos distintos denominados con letras en mayúsculas, A, B, C, D, E, F, G y los

cromosomas sexuales.
Como hemos visto en unidades anteriores, el ser humano es diploide, lo que significa que se van a agrupar por
parejas de cromosomas homólogos, proviniendo uno del padre y otro de la madre.
El orden de las parejas de cromosomas, según los grupos, es el siguiente:
• Grupo A: 1, 2 y 3
• Grupo B: 4 y 5
• Grupo C: 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12
• Grupo D: 13, 14 y 15
• Grupo E: 16, 17 y 18
• Grupo F: 19 y 20
• Grupo G: 21 y 22
• Cromosomas sexuales: X e Y Fig. 14. Cromosomas ordenados por grupos en un cariograma


unidad
Ya conocemos la importancia de estudiar los cromosomas para detectar en ellos anomalías numéricas o estructurales.
Para ello, se emplean técnicas como la tinción, el bandeo o la fluorescencia. Obtenidos los cromosomas, se
representan en un cariograma o un idiograma, proceso cada vez más sofisticado mediante el empleo de cariotipadores
automáticos.
Para obtener las muestras, imprescindibles para ver los cromosomas, recurrimos a la sangre periférica por
venopunción o cordocentesis en el diagnóstico prenatal, al líquido amniótico obtenido por amniocentesis o a las
vellosidades coriales obtenidas por biopsia corial. Entonces, las muestras se procesan y cultivan.
Cuando el cultivo presenta el crecimiento adecuado, se procede al sacrificio celular con Colchicina o Colcemid, se
añade una solución hipotónica y se fija la muestra, habitualmente con fijador de Carnoy. El último paso antes de
estudiar los cromosomas al microscopio es realizar una tinción o bandeado, de entre los que destaca el bandeo G
por ser el más empleado. Una vez estudiado el cariotipo, se realiza el cariograma, que ordena los cromosomas en
7 grupos según su forma, tamaño, posición del centrómero y patrón de bandas; queda fuera de estos 7 grupos el
correspondiente a los cromosomas sexuales.
Lo primero que necesitamos preparar es el medio de cultivo, que contendrá sales, nutrientes, hormonas, factores de
crecimiento antimicrobianos y fitohemaglutinina, que es un mitógeno, además de suero bovino fetal (habitualmente).
Para detener la mitosis, necesitaremos Colchicina o Colcemid. A continuación, una solución hipotónica de cloruro
potásico y un fijador, normalmente el fijador de Carnoy, elaborado con etanol y ácido acético. Finalmente, solo
necesitamos los reactivos para el bandeo, que serán tripsina, una solución salina y la solución colorante.
/ 16. Bibliografía
Citogenética clínica. Recuperado de: http://biomodel.uah.es/citogene/horwitz/cytogen1.htm
Panamericana.
Técnicas de análisis
cromosómico:
diagnóstico
citogenético
prenatal
10
/ 2. Diagnóstico citogenético prenatal 4
/ 3. Indicaciones clínicas del diagnóstico prenatal 4
/ 4. Tipos de muestras para el diagnóstico prenatal 5
/ 5. Caso práctico 1: “Cultivo de vellosidades coriales” 5
/ 6. Cultivo de vellosidades coriales 5
/ 7. Cultivo de líquido amniótico 6
/ 8. Cultivo celular de sangre fetal 7
/ 9. Métodos de análisis citogenético 7
/ 10. Ventajas y desventajas de las distintas técnicas citogenéticas 8
/ 11. Caso práctico 2: “El informe en citogenética” 9
/ 12. Técnicas invasivas en diagnóstico prenatal 9
© MEDAC 978-84-18864-26-1
Conocer qué es el diagnóstico prenatal.
Distinguir entre las diferentes muestras para el diagnóstico prenatal, así como
sus ventajas e inconvenientes.
Conocer las utilidades y relevancia clínica del diagnóstico prenatal.

El diagnóstico prenatal se basa precisamente en realizar pruebas diagnósticas a alguien que todavía no ha nacido.
Esto implica una serie de inconvenientes, como el hecho de que no podemos acceder al feto o al embrión sin poner
en peligro su vida. Por suerte, algunos métodos no invasivos como la ecografía nos proporcionan una gran cantidad
de información, pero según el diagnóstico o enfermedad que busquemos, puede quedarse corta. En este aspecto,
la citogenética nos brinda una gran fuente de información, ya que nos
permite conocer cuál será el cariotipo del individuo antes de nacer, no sin
asumir algunos riesgos en la toma de las diferentes muestras requeridas para
realizar el diagnóstico prenatal.


práctico de la unidad». Fig. 1. Feto en el útero materno
Audio intro. “Diagnóstico citogenético

prenatal”
https://bit.ly/3cI97Pu
TEMA 10. TÉCNICAS DE ANÁLISIS CROMOSÓMICO: DIAGNÓSTICO
/ 2. Diagnóstico citogenético prenatal

Durante el embarazo se realizan diferentes estudios para diagnosticar posibles anomalías en el desarrollo del feto.
El más conocido y empleado es la ecografía, que valora la correcta morfología y perfusión (con ecografía Doppler)
del feto, aunque existen también otros indicadores, como algunos marcadores bioquímicos o antecedentes de
alteraciones genéticas en la familia.
Cuando algunas de estas pruebas nos ofrecen valores alterados (indicativos

de que hay un riesgo importante de alteraciones genéticas en el feto) o
ya tenemos hijos con anomalías genéticas, se realizan pruebas invasivas
con el fin de obtener material suficiente para proceder a un diagnóstico
citogenético. Como ya sabes, se quieren obtener células fetales para estudiar
sus cromosomas en metafase.
Una vez que se detectan alteraciones cromosómicas previas al nacimiento,

podemos hablar de diagnóstico prenatal. En el caso de que se hallen
después, corresponderían al diagnóstico postnatal, temática que no nos
concierne en esta unidad. Fig. 2. Ecografía del 2o trimestre
Audio 1. “Cribado prenatal”

https://bit.ly/2xcwDoW
/ 3. Indicaciones clínicas del diagnóstico prenatal

Sin lugar a dudas, debido a los riesgos que acarrea, el diagnóstico prenatal debe estar debidamente justificado.
Se realizará el diagnóstico citogenético prenatal a las mujeres que cumplan con alguno de estos requisitos:
• Hijo previo con alteraciones cromosómicas documentadas.
• Ecografía con signos de una posible malformación fetal o síndrome cromosómico.
• Test combinado del primer trimestre (ecografía + marcadores bioquímicos) con alto riesgo de
cromosomopatías.
• Edad materna mayor o igual a 40 años.
• Padres portadores de alteraciones

cromosómicas.
Los test de screening que se realizan a embarazadas

son test que indican la probabilidad de padecer una
enfermedad, pero que no la diagnostican. Cuando
en uno de estos test se manifiesta un importante
riesgo de patología genética, se procede a realizar las
pruebas diagnósticas. Fig. 3. Principales indicaciones del estudio citogenético prenatal.
/ 4. Tipos de muestras para el diagnóstico prenatal

Antes de proceder al estudio citogenético, como es evidente, necesitamos una muestra con células fetales. El
problema reside en que esto requiere de técnicas invasivas y, cuanto más invasiva sea, mayor riesgo habrá de aborto
o de lesiones en el feto. Las diferentes muestras que se pueden tomar son:
• Vellosidades coriales: Se obtiene realizando una biopsia de vellosidades coriales. Permite un diagnóstico más
precoz que otras técnicas.
• Líquido amniótico: Mediante una punción abdominal se extrae líquido amniótico. Cuanto antes se haga,
mayor riesgo habrá de aborto, que está normalmente en torno al 1 %. Existen además otras complicaciones,
como las infecciones.
• Sangre fetal: En esta ocasión, se punciona la vena del cordón umbilical y se extrae sangre de ella. Es la que
mayor riesgo de complicaciones tiene, ya que hasta en un 50 % de los casos se produce una hemorragia
transplacentaria.
Fig. 4. Técnicas para obtener células fetales.
/ 5. Caso práctico 1: “Cultivo de vellosidades coriales”

Planteamiento: tenemos que hacer un diagnóstico prenatal, pero por la
naturaleza del caso, debe ser lo más precoz posible.
Nudo: ¿qué muestra buscaremos para el estudio citogenético prenatal?
Desenlace: para obtener un diagnóstico precoz, tomaremos muestras de las

vellosidades coriales. Estas son las primeras muestras que podemos tomar,
ya que es una estructura que ya está desarrollada a partir de la décima
semana de embarazo, cuando el cordón umbilical y el líquido amniótico aún
no presentan la cantidad o calidad debidos. Fig. 5. Vellosidades coriales.
/ 6. Cultivo de vellosidades coriales

Dentro de las vellosidades coriónicas encontramos diferentes tipos celulares, como fibroblastos, células endoteliales
y macrófagos inmersos en una abundante matriz intercelular. De estas tres células principales, las que más nos
interesan son los fibroblastos, ya que crecen rápidamente in vitro.
El primer paso es disgregar las células que nos interesan mediante el empleo de tripsina/EDTA para eliminar una
capa de células trofoblásticas (células de la placenta); a continuación, emplearemos la enzima colagenasa, que
digerirá la matriz intercelular.
Posteriormente, se mantiene el cultivo adherido al recipiente en cuestión y se cultivan de 5 a 7 días. Una vez
pasado este tiempo, se trata con Colcemid, sustancia que detendrá la mitosis celular.
A continuación, se produce la hinchazón de las células con una solución hipotónica de citrato de sodio y, entonces,
se procesan para su tinción y análisis.
Fig. 6. Útero con feto y placenta a la izquierda y detalle de vellosidades coriales en placenta a la
derecha.
/ 7. Cultivo de líquido amniótico

En primer lugar, es preciso obtener el líquido amniótico, lo cual se realiza mediante el empleo de largas agujas
destinadas a atravesar el útero. Las muestras se mantienen a temperatura ambiente hasta su procesado. Después,
se resuspenden las células invirtiendo suavemente el recipiente.
A continuación, se centrifuga la muestra. Posteriormente, se aspira el sobrenadante y se añade el medio de cultivo, se

resuspenden las células golpeando suavemente el lateral del tubo y se incuban los cultivos de 24 a 48 horas. Una vez
realizado este proceso, se añade nuevamente medio de cultivo precalentado y se incuban 2 días para, transcurrido
este tiempo, cambiar los cultivos a nuevos recipientes y añadir de nuevo medio de cultivo para volver a cultivar.
Al 5o día de incubación, en un microscopio invertido, se valora el crecimiento celular de los cultivos, que ya pueden
presentar actividad mitótica (si no fuera así, se pueden mantener en incubación hasta 9 días). Una vez presentan
actividad mitótica y el crecimiento es el adecuado, se añade Colcemid y, después, una solución hipotónica para su
posterior fijación y tinción.
Mantener la muestra a Centrifugación y aspiración del

Resuspensión celular Resuspensión celular
temperatura ambiente sobrenadante
Adición de medio de cultivo

Incubación 2 días Incubación 24-48 h Resuspensión celular
precalentado
Cambio de recipiente y adición Al 5o día valoración al microscopio Adición de soluición hipotónica

Adición de Colcemid
de nuevo medio de cultivo invertido
Tinción Fijación
Fig. 7. Esquema de cultivo de líquido amniótico

/ 8. Cultivo celular de sangre fetal

Una vez obtenida la sangre se añade heparina, una sustancia anticoagulante, para que la sangre con la que
trabajemos sea sangre heparinizada. Esta se incorpora a los medios de cultivo, se tapa el tubo y se mezcla bien. Se
incuban a 37 oC de 48 a 96 horas. Después, se añade Metotrexato un día antes de la recolección y se incuban a 37
oC de nuevo. Después, el mismo día de la recolección, se añade timidina y se sigue incubando.
Treinta minutos antes de la recolección se añade Colcemid y se deja

incubando a 37 oC. Se centrifugan los cultivos y se retira el sobrenadante.
Se añade KCl para hinchar las células y se resuspende el cultivo celular, como
hemos visto en apartados anteriores. Se añade el fijador, se mezcla bien y se
centrifuga otra vez.
Posteriormente, se retira el sobrenadante, se añade fijador de nuevo y se

centrifuga una vez más.
Finalmente, el sedimento celular que obtenemos puede llevarse al Fig. 8. Corte transversal de cordón umbilical
portaobjetos. La recolección se llevará a cabo cuando veamos al microscopio donde se aprecian las 2 arterias umbilicales
que el crecimiento del cultivo celular es el adecuado. superiores, y la vena umbilical inferior
/ 9. Métodos de análisis citogenético

Existen diferentes métodos para estudiar los cromosomas. Estos son los más utilizados:
• Tinción: En sus comienzos se teñían simplemente los cromosomas, todos de manera uniforme, lo que solo
permitía ordenarlos por parejas en función de tamaño y morfología. Actualmente, es un método en desuso.
• Bandeo: A partir de 1971 se comienzan a realizar

bandeos, los cuales ya nos permiten diferenciar
distintas bandas, claras y oscuras o fluorescentes
y no fluorescentes, dentro de cada cromosoma.
Las más empleadas en el diagnóstico citogenético
son las bandas G (estudiadas en unidades
anteriores).
• FISH (Fluorescent in situ hybridization): Esta

técnica consiste en marcar una secuencia
de ADN con un fluorocromo (colorante
fluorescente) y adherirla a la región de
ADN que queramos estudiar, que serán
complementarias. Se desnaturaliza primero
el ADN con calor y luego se hibrida con la
secuencia marcada, que se llama sonda.
Después, se observa en un microscopio de
fluorescencia. Fig. 9. SKY-FISH.
Cuando se realiza con diferentes fluorocromos se denomina SKY-FISH, multi-FISH o cariotipo multicolor o espectral,
aunque se emplea solo en investigación.
Recuerda...
La hibridación del ADN consiste en unir sus dos cadenas complementarias;
por su parte, desnaturalizarlo implica separarlas.
Otros métodos también muy empleados en el estudio de los cromosomas son:
• CGH (Comparative Genomic Hybridization): Se realiza una hibridación entre el ADN de una muestra a
estudiar (marcada con un fluorocromo rojo) y el de un individuo sano (marcado con un fluorocromo verde),
uniéndose en proporción 1:1, de tal manera que cada hebra de ADN se une con una hebra complementaria
de un individuo sano; así, los cromosomas o ADN que estén sanos tendrán la misma proporción de verde
que de rojo, dando lugar a un color amarillo homogéneo. Si hay pérdida de material genético de la muestra
aparecerán regiones verdes y, si hay ganancia, rojas.
• CGH array: Es una evolución del CGH donde, en lugar de cromosomas

en metafase, se emplean «chips», que son dispositivos de vidrio,
plástico o silicona que contienen pequeños fragmentos de ADN. El
fundamento sigue siendo el mismo, comparar ADN a estudiar con
ADN control para detectar pérdidas o ganancias de material genético
empleando tinciones fluorescentes.
• SNP array: SNP son las siglas de Single Nucleotide Polymorphism y

supone una variación en una única base nitrogenada. Son chips, como
en el caso anterior, pero en este se busca es detectar estos mínimos
cambios en el genoma. Fig. 10. Chips de ADN
/ 10. Ventajas y desventajas de las distintas técnicas

citogenéticas
Entre las diferentes técnicas de análisis citogenético hay que valorar coste, equipo necesario y precisión.
Habitualmente, las técnicas más económicas y con menor equipo imprescindible son las tinciones. El problema es
que su precisión es muy limitada; de hecho, han sido sustituidas por el bandeo cromosómico. Esta técnica de bandeo
requiere un proceso más complejo que precisa de un mayor entrenamiento del personal, pero ofrece nuevos límites
diagnósticos que superan notablemente los de la tinción convencional.
En el caso de las tinciones fluorescentes, tenemos que emplear material fluorescente y debemos realizar los estudios
en una sala de microscopía de fluorescencia. Esto
incrementa el coste de las técnicas, ya que requiere,
además, de instalaciones específicas, pero genera
nuevas posibilidades diagnósticas, como ocurre con la
CGH.
Finalmente, los dispositivos de microarray para CGH y

SNP son las técnicas más precisas que hemos visto, pero
también son las que más incrementan el precio, aunque
nos permiten identificar alteraciones genéticas mínimas
(el array SNP detectan cambios en un solo nucleótido),
cosa que el cariotipo habitual no consigue, ya que
detecta alteraciones genéticas de millones de pares
de bases. Por supuesto, no hay que olvidar otros datos
como la sensibilidad, especificidad, reproducibilidad de
la técnica, etc. Fig. 11. Hibridación genómica comparativa (CGH)
/ 11. Caso práctico 2: “El informe en citogenética”

Planteamiento: de cara a transmitir la información obtenida en las diferentes pruebas de laboratorio, necesitamos
elaborar un informe genético para que, tanto el clínico solicitante, como el paciente, puedan recibir de un modo
ordenado y sistemático la información sobre los hallazgos obtenidos en el laboratorio.
Nudo: se ha de elaborar un informe citogenético donde se incluya la información esencial que necesitan tanto el
médico solicitante como el paciente. ¿Cómo se elabora este informe?
Desenlace: antes que nada, deben figurar los datos personales del paciente, así como los datos profesionales
referentes tanto al servicio, cita y petición, como los del médico o médicos implicados en el procedimiento. Al
tratarse de un estudio citogenético, deben indicarse claramente las pruebas y procedimientos realizados junto a su
justificación, así como el tipo de muestra que se ha estudiado y, por supuesto, los resultados obtenidos con todos los
detalles posibles, en sus correspondientes unidades de medida y con las representaciones gráficas necesarias para
facilitar su comprensión. Finalmente, debe figurar la interpretación de los datos obtenidos y un diagnóstico claro, si
lo hubiera, además de la justificación de las técnicas peligrosas realizadas, si fuera el caso.
Informe en citogenética
Datos personales del paciente
Datos referentes al servicio y al médico responsable
Pruebas y procedimientos realizados
Justificación de la prueba realizada
Tipo de muestra estudiada
Resultados obtenidos
Interpretación de los datos y diagnóstico
Imágenes y gráficos
Tabla. 1. Datos del informe en citogenética.
/ 12. Técnicas invasivas en diagnóstico prenatal

Hay diferentes técnicas para obtener material de estudio para el diagnóstico citogenético prenatal. Cada una
presenta unas ventajas y unos inconvenientes; por ello, se emplean en función de cada caso y siempre bajo el criterio
del médico responsable. Las principales técnicas invasivas son:
• Biopsia corial: Se toma una muestra del trofoblasto de dos maneras: por vía transcervical, a través
del cuello del úter; o por vía transabdominal, atravesando el abdomen. Este tipo de técnica permite
realizar estudios citogenéticos, moleculares y bioquímicos.Es la técnica principal para estudiar el
cariotipo fetal antes de la semana 15 de gestación. Nos ofrece un resultado válido en el 99% de las ocasiones,
con un alto grado de precisión. El 1% restante (el que no es fiable) suele deberse a contaminación, fracaso del
cultivo o resultados citogenéticos confusos.
El mayor inconveniente de esta técnica es la posibilidad de pérdida de la gestación, aunque esto ocurre en 1 de
cada 100-150 casos, de manera similar a como sucede en la amniocentesis, pero por ello no es menos segura,
siempre que la lleven a cabo personal experimentado. Otra posible complicación es la infección aguda, pero
esta presenta una probabilidad menor al 0,5%.
• Amniocentesis: Supone una punción abdominal para llegar a la cavidad uterina y extraer líquido amniótico.
Hay que distinguir entre dos tipos de amniocentesis: la precoz, que se realiza entre las semanas 11 y 14,
también conocida como la del primer trimestre; y la clásica, que se practica a partir de la semana 15 o del
segundo trimestre.
Su precisión a la hora del diagnóstico prenatal está por encima del 99%, siendo además raros los fracasos del
cultivo celular. En cuanto a los riesgos, la pérdida fetal se ha estimado habitualmente en un 1%, pero estos
datos se obtienen antes de contar con la ecografía de alta resolución. Actualmente, se considera que tiene
un riesgo similar al de la biopsia corial.
Evidentemente, es posible producir lesiones en el feto con la aguja, pero solo se conocen algunos casos
descritos donde esto haya tenido lugar (aunque sí se ha comprobado su relación con un pequeño aumento en
las complicaciones del tercer trimestre de embarazo).
Fig. 12. Amniocentesis.
Otra técnica invasiva en el diagnóstico prenatal es la cordocentesis. Consiste en obtener sangre fetal a partir del
cordón umbilical. Es la técnica invasiva más difícil. De hecho, en algunos casos es imposible; por ejemplo, cuando el
feto tapa la zona de inserción de la placenta. En caso de no poder realizar esta técnica, se puede puncionar la vena
umbilical en su tramo por el interior del hígado o puncionar directamente el ventrículo derecho, pero presentan
mayor riesgo de pérdida fetal.
Muchas de las enfermedades que se diagnostican con cordocentesis ya pueden hacerse también por amniocentesis
o biopsia corial, gracias a los avances en las técnicas de biología molecular. Además, un inconveniente importante es
que no podemos obtener sangre fetal antes de la semana 18. Sin embargo,
es una técnica imprescindible para completar el estudio del feto cuando se
trata de enfermedades hematológicas. La cordocentesis es importante para
el estudio del cariotipo fetal cuando la sospecha de cromosomopatía aparece
tarde, por ser una técnica que ahorra tiempo frente a las demás, o resuelve
dudas en diagnósticos generados mediante las otras técnicas.
Si el operador es experto, la pérdida fetal se encuentra entre el 1 y el 3%,

valores similares al resto de técnicas. Sí es muy común que se produzca una
hemorragia, aunque es rara la muerte por esta causa. Una complicación
frecuente es la bradicardia (frecuencia cardíaca por debajo de los valores
normales) y otra rara, pero grave, es la trombosis del vaso que ha puncionado. Fig. 13. Cordocentesis.
Sabías que...
El estudio citogenético prenatal debemos tomar muestras de vellosidades
coriales, del líquido amniótico o de la vena del cordón umbilical.

El diagnóstico prenatal consiste en detectar anomalías fetales antes del nacimiento, empleando ecografía,
marcadores bioquímicos y citogenéticos. Generalmente, estas técnicas se desarrollan cuando hay antecedentes
de enfermedades genéticas en la familia, cribados prenatales con alto riesgo de cromosomopatías o indicios de
malformaciones en el feto.
Las muestras que se van a manejar son la vellosidad corial (obtenida por biopsia corial), el líquido amniótico
(obtenido por amniocentesis) y la sangre fetal (obtenida por cordocentesis). Cada una de estas muestras tiene un
protocolo de procesamiento y cultivo diferente. Una vez se cultivan los tejidos, contamos con diferentes técnicas
para su análisis: tinción, bandeo, FISH, CGH y arrays de CGH y SNP.
Fig. 14. Esquema resumen del tema.
Se solicita el diagnóstico citogenético prenatal ante la sospecha de que el feto pueda tener una alteración cromosómica
importante, teniendo en cuenta que, además, la familia tiene antecedentes de enfermedad cromosómica grave, por
ello, se solicita la prueba para descartar que el feto haya heredado dicha anomalía.
Ante una gestante en la semana 14 de embarazo, la técnica de elección es la biopsia corial. Si por el motivo que fuere
decidimos sustituir esta técnica por otra, podemos realizar una amniocentesis precoz o una cordocentesis, aunque,
por regla general, la cordocentesis será la última elección, por acarrear mayor dificultad y riesgo.
/ 14. Bibliografía
Academia AMIR. (2019). Manual de Ginecología y Obstetricia. 12ª Edición.
Arsham, M. S., Barch, M. J. y Lawce, H. J. (eds.). (2017). The AGT cytogenetics laboratory manual. Hoboken: Wiley Blackwell.
Breman, A. & Patel, A. (2012) “Preparation of Chorionic Villus Samples for Metaphase Chromosome Analysis and Chromosomal Microarray Analysis”. Current
Protocols in Human Genetics, 75(1). Recuperado de: https://doi.org/10.1002/0471142905.hg0803s75
Minehart Miron, P. (2012). “Preparation, Culture, and Analysis of Amniotic Fluid Samples”. Current Protocols in Human Genetics, 75(1). Recuperado de:
https://doi.org/10.1002/0471142905.hg0804s74
Rodríguez-Rivera, M. Técnica de CGH-array. Laboratori de citogenética molecular. Servei de patología. Hospital del Mar. Recuperado de: https://www.seap.es/
documents/228448/531163/02_Rodriguez.pdf

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TEMAS 1-10

/ 2. ¿Qué es un laboratorio de citogenética y cultivo celular? 4

/ 4. Caso práctico 1: “Equipos de conservación” 5

/ 6. Área de procesado y bandeado 6

/ 7. Área de microscopía y digitalización de imágenes 6

/ 10. Catálogo de pruebas de citogenética de un hospital 8

/ 11. Caso práctico 2: “Cómo detectar alteraciones cromosómicas” 9

/ 12. Programas de formación 10

/ 13. Gestión de la calidad 11

/ 14. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad 12

© MEDAC ISBN: 978-84-18864-26-1

Distinguir qué diferencias hay entre estos dos tipos de laboratorio.

Tomar contacto con la organización e instalaciones de dichos laboratorios.

Aprender las funciones del personal de laboratorio.

Comprender la importancia de la gestión de la calidad en los laboratorios de

/ 1. Introducción y contextualización práctica

A continuación, vamos a plantear un caso práctico a través del cual podremos

Escucha el siguiente audio, donde planteamos la contextualización práctica.

Fig. 1. Cultivos celulares

Audio intro. Un estudio de cariotipo

/ 2. ¿Qué es un laboratorio de citogenética y cultivo

Audio 1. El laboratorio de citogenética y

1. Sala de cultivos o zona estéril

2. Salas de técnicas generales

/ 4. Caso práctico 1: “Equipos de conservación”

Nudo: La cuestión es, ¿qué equipos de conservación se precisan en dicho laboratorio?

Inmediatamente por debajo del director de laboratorio o jefe de servicio,

Por debajo de este, tenemos al coordinador técnico, encargado de supervisar

/ 6. Área de procesado y bandeado

Las regiones se enumeran a partir del centrómero.

/ 7. Área de microscopía y digitalización de imágenes

El mundo de la microscopía es muy amplio y existen diferentes variedades de microscopios. En el laboratorio de

Distinguiremos, fundamentalmente, entre técnicos y facultativos.

Aunque hay algunas excepciones y variaciones, el personal técnico está

Consejo Genética Consulta Médica Pruebas de Biología Molecular y

Fig. 4. Principales funciones del servicio de Genética Médica

/ 10. Catálogo de pruebas de citogenética de un

Como ya estudiaremos en unidades posteriores, el cariotipo es el complemento cromosómico de un individuo

/ 11. Caso práctico 2: “Cómo detectar alteraciones

Detención de división celular

Fig. 6. Esquema del procesamiento

/ 12. Programas de formación

Tabla. 1. Programas de formación.

/ 13. Gestión de la calidad

Se distinguen tres fases en la calidad de un laboratorio:

Fig. 7. Fases de la gestión de calidad en un

/ 14. Resumen y resolución del caso práctico de la

Resolución del caso práctico de la unidad

/ 2. ¿Qué es un laboratorio de biología molecular? 4

/ 4. Caso práctico 1: “Equipo básico” 7

/ 6. Recepción e identificación de la muestra 8

/ 7. Técnicas básicas que se realizan en el laboratorio 9

/ 8. Caso práctico 2: “Limpieza, mantenimiento y calibración” 10

/ 9. Resumen y resolución del caso práctico de la unidad 11

Distinguir qué diferencias hay entre estos dos tipos de laboratorio.

Tomar contacto con la organización e instalaciones de dichos laboratorios.

Aprender las funciones del personal de laboratorio.

Comprender la importancia de la gestión de la calidad en los laboratorios de

/ 1. Introducción y contextualización práctica

A continuación, vamos a plantear un caso práctico a través del cual podremos