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    PCR en Tiempo Real

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    Yina Saldaña Garibay
    La PCR en tiempo real es una técnica que permite la amplificación y detección del ADN o ARN de un fragmento de interés en un solo paso, midiendo la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la reacción. Esta técnica se utiliza para diagnosticar la infección por SARS-CoV-2 mediante la detección de tres genes diana en muestras respiratorias de pacientes, lo que permite un análisis rápido y sensible para ayudar en el manejo clínico de la pandemia.

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    PCR en Tiempo Real

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    Yina Saldaña Garibay
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    La PCR en tiempo real es una técnica que permite la amplificación y detección del ADN o ARN de un fragmento de interés en un solo paso, midiendo la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la reacción. Esta técnica se utiliza para diagnosticar la infección por SARS-CoV-2 mediante la detección de tres genes diana en muestras respiratorias de pacientes, lo que permite un análisis rápido y sensible para ayudar en el manejo clínico de la pandemia.

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    PCR EN TIEMPO REAL

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    La PCR en tiempo real es una técnica que permite la amplificación y detección del ADN o ARN de un fragmento de interés en un solo paso, midiendo la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la reacción. Esta técnica se utiliza para diagnosticar la infección por SARS-CoV-2 mediante la detección de tres genes diana en muestras respiratorias de pacientes, lo que permite un análisis rápido y sensible para ayudar en el manejo clínico de la pandemia.

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    La PCR en tiempo real es una técnica que permite la amplificación y detección del ADN o ARN de un fragmento de interés en un solo paso, midiendo la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la reacción. Esta técnica se utiliza para diagnosticar la infección por SARS-CoV-2 mediante la detección de tres genes diana en muestras respiratorias de pacientes, lo que permite un análisis rápido y sensible para ayudar en el manejo clínico de la pandemia.

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    de 53

    PCR EN

    TIEMPO
    REAL
    qPCR o PCR cuantitativa

    Amplificación enzimática de un
    fragmento de interés (DNA)
    localizado entre dos
    oligonucleótidos (cebadores)

    La PCR en tiempo real es una


    técnica que combina la
    amplificación y la detección en un
    mismo paso, al correlacionar el
    producto de la PCR de cada uno de
    los ciclos con una señal de
    intensidad de fluorescencia.
    PCR y qPCR
    PCR: Replicación in vitro
    1. DNA o RNA Molde
    2. dNTPs (ATP, GTP, TTP, CTP) Bloques de construcción
    3. Primers - Cebadores Inciadores 3'-OH
    4. pH Condiciones óptimas
    5. MgCl2 Cofactor
    6. Enzimas Copiador de DNA

    PCR + Post PCR


    qPCR: Replicación
    qPCR: PCR en Tiempo Real
    TaqMan Probes
    ANÁLISIS
    Diagnóstico por RT PCR para COVID 19
    SARS – CoV -2
    ETAPAS DE PROCESO ANALÍTICO DEL DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE SARS-CoV-2

    TOMA DE MUESTRA
    • CONDICIONES DE TRANSPORTE
    • CARACTERÍSTICAS DE LA MUESTRA

    EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEÍCOS


    • EXTRACCIÓN MANUAL
    • EXTRACCIÓN CON EQUIPOS AUTOMATIZADOS
    • SHOCK TÉRMICO

    AMPLIFICACIÓN
    • RT-PCR EN TIEMPO REAL

    ANÁLISIS DE RESULTADOS
    MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEÍCOS

    EXTRACCIÓN MANUAL

    SHOCK TÉRMICO
    Proteinasa K
    REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
    PCR EN TIEMPO REAL
    UN MISMO CANALDE FLURESCENCIA.
    03 MARCADORES O TARGETS: N1 N2 Y RP
    TARGETRP: CONTROLENDÓGENO 03 CANALESDE FLUORESCENCIA: FAM, ROX Y VIC.
    03 MARCADORES O TARGETS: N, ORF, CONTROL
    INTERNO
    CI: CONTROL EXÓGENO
    DISEÑO Y ASIGNACION DE
    MUESTRAS Y TARGET
    ANÁLISIS DATOS CRUDOS
    ANÁLISIS DATOS PROCESADOS
    ANÁLISIS – VALOR DE CORTE

    Treshold: umbral, punto de


    detección
    Ct: ciclo en el que cruza la
    muestra
    ANÁLISIS – MUESTRAS NEGATIVAS
    POSITIVO 17 ORF 27.524107
    RESULTADO CT N1 CT N2 CT RP POSITIVO 17 N 29.621231
    RQ N1 RQ N2 POSITIVO 17 CI 38.576332
    POSITIVO 15.763745 15.623778 24.073036 303.85257 342.78015 POSITIVO 18 ORF 28.605228
    POSITIVO 23.105396 22.656336 23.783358 1.53251 2.14192 POSITIVO 18 N 31.830164
    POSITIVO 25.738333 25.7674 25.004473 0.57597 0.57792 POSITIVO 18 CI 40.14934
    POSITIVO 29.209314 30.15561 23.036858 0.01328 0.00706 POSITIVO 19 ORF 31.63858
    POSITIVO 19 N 33.893147
    POSITIVO 16.209707 15.98487 23.29741 130.29506 155.89394
    POSITIVO 19 CI 35.18669
    POSITIVO 33.167297 33.08003 24.07297 0.00175 0.00191
    NEGATIVO 1 ORF Undetermined
    NEGATIVO Undetermined Undetermined 24.576046 NEGATIVO 1 N Undetermined
    NEGATIVO Undetermined Undetermined 28.158514 NEGATIVO 1 CI 34.2064
    NEGATIVO Undetermined Undetermined 25.592258 NEGATIVO 10 ORF Undetermined
    NEGATIVO Undetermined Undetermined 23.67485 NEGATIVO 10 N Undetermined
    NEGATIVO 10 CI 34.718483

    ANÁLISIS – MUESTRA POSITIVA


    ANÁLISIS – MUESTRA INDETERMINADA

    POSITIVO 27 ORF 34.077026


    NEGATIVO 27 N Undetermined
    POSITIVO 27 CI 37.06139
    ANÁLISIS – REPROCESO

    POSITIVO 27 ORF 32.165283


    POSITIVO 27 N 33.14658
    POSITIVO 27 CI 33.8462

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