Apuntes Análisis Químico

TEMA 1: INTRODUCCIÓN A LA QUÍMICA ANALÍTICA
No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
DEFINICIÓN
La Química analítica a es una ciencia metrológica que desarrolla, optimiza y aplica herramientas
(materiales, técnicas, metodologías y estrategias), que se concretan en procesos de medida dirigidos
a obtener información (bio)química de calidad, tanto parcial como global sobre materias o sistemas
de diversa naturaleza (química, bioquímica, biológica), en el espacio y en el tiempo, para resolver
problemas científicos, técnicos, económicos y sociales” (Valcárcel, 1999).
El Objetivo principal es la resolución de problemas planteados como consecuencia de la actividad

humana.
Reservados todos los derechos.
• Principio o proceso: Constituye el fundamento de la técnica. Puede ser puramente físico,

químico o fisicoquímico.
• Técnica: Manera en que se utilizan los principios físicos o químicos para la obtención de
información.
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• Método: Es la aplicación concreta de la técnica. Manera de aplicar una técnica para la
identificación o cuantificación de uno o varios analitos en un análisis de muestras.
• Procedimiento: Descripción detallada de un método analítico.
• Protocolo: Conjunto de normas definitivas (especificadas por un organismo oficial) que tienen
que seguirse sin ningún tipo de excepciones cuando se requiere que los resultados analíticos se
empleen para un fin específico.
• Análisis: Proceso que proporciona información física o química sobre los componentes de la
muestra.
• Determinación: Análisis de la muestra para establecer la concentración del analito.

• Identificación: Análisis de una muestra para identificar la presencia de un analito.
• Medida: Determinación experimental de las propiedades químicas o físicas de un analito.
• Análisis cualitativo: Identificación de elementos, iones o compuestos presenten en una muestra.
• Análisis cuantitativo: Determinación de la cantidad presente de uno o más de ellos.
• Análisis estructural: Distribución de los componentes de la muestra,

es decir, su estructura química (distribución espacial de sus
componentes)
EL PROCESO ANALÍTICO
El proceso analítico es el conjunto de etapas sucesivas, realizadas en un

orden preestablecido y mediante manipulaciones bien especificadas que
permiten la caracterización (identificación/determinación) de uno o más
componentes de la muestra.
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Me han encerrado aquí ¿alguien puede leer esto?

PROBLEMA
• Identificación y definición del problema
• Búsqueda bibliográfica de la información.
SELECCIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO

• Tipo de información deseada (cualitativa, cuantitativa y/o estructural)
• Exigencias en la calidad de resultados (exactitud, precisión, etc)
• Características y cantidad de muestra disponible
• Concentración del analito en la muestra (escala de trabajo)
• Presencia y concentración de interferencias.
• Otros aspectos (instrumentación disponible, potencial humano, rapidez, seguridad, coste, etc.)
TOMA Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

• Plan de muestreo: Estrategia a seguir para asegurar una muestra representativa.

• Almacenaje de la muestra
• Transporte de la muestra
MEDIDA
TRATAMIENTO Y EVALUACIÓN DE RESULTADOS
• Evaluación de los resultados.

• Emisión de informes.
• Presentación del informe.

ANÁLISIS EN EL CAMPO FARMACÉUTICO

El graduado en Farmacia debe ser un experto en el medicamento y en su entorno asistencial, y en
análisis relacionados con ciencias de la salud. La aportación de la Química Analítica en ambas áreas
es innegable.
Un importante aspecto del desarrollo, producción, distribución y uso de medicamentos es su análisis. En

la industria farmacéutica debe controlarse cuidadosamente la calidad de los fármacos manufacturados
en forma de tabletas, soluciones, emulsiones,etc. ya que el más ligero cambio en su composición o
pureza puede afectar a su valor terapéutico.
Para la resolución de estos problemas se necesitan métodos de análisis cualitativos y cuantitativos que
aseguren la identidad y pureza del producto.
Durante el desarrollo de un nuevo producto farmacéutico es necesario realizar estudios químicos de la

materia prima, de los intermedios sintéticos, de la misma droga, y del producto final. Estos estudios
deben permitir establecer:
• Los diferentes tipos y niveles de impurezas.
• La velocidad de degradación del producto.
• Los métodos de análisis que permitan su monitorización.
En otros estudios es necesario establecer las propiedades y el valor terapéutico de un fármaco antes
de ser aceptado y puesto a disposición del público. Para establecer el nivel de permisividad de un
fármaco se requiere:
• La determinación de sus productos de descomposición, su toxicidad y sus productos

metabolizados en distintas etapas.

• La realización de análisis clínicos, bromatológicos y toxicológicos forma parte del quehacer
diario de la Química Analítica.
TEMA 2: TOMA, CONSERVACIÓN, TRANSPORTE Y

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
PLAN DE MUESTREO
MUESTREO: Se reduce el tamaño de un objeto (población) a una
cantidad de materia homogénea (muestra) representativa y
manipulable en el laboratorio.

OBTENCIÓN DE UNA MUESTRA REPRESENTATIVA: Identificar
la población ≥ Tomar una muestra bruta ≥ Obtener muestra de
laboratorio
REPRESENTATIVIDAD DE LA TOMA DE MUESTRA: Para que

sea representativa debe:
• Estado físico de la población.
• Heterogeneidad del lugar de la toma de muestra
• Número y tamaño adecuado de porciones tomadas
• Conocimiento de los factores de distorsión (tiempo,

transporte y almacenaje)
¿COMO EVITAR ALTERACIONES EN LA MUESTRA?:

• Proceso de oxidación Selección
contenedor adecuado
• Absorción de humedad Adición de estabilizadores químicos
• Perdida de partículas Congelación para evitar degradación
• Absorción componentes Adsorción sobre fase sólida
ASPECTOS ESTADISCTICOS DE LA TOMA DE MUESTRA:

▪ Ss: Varianza del muestreo, que se calcula a partir de medidas de
una serie de muestras de laboratorio.
▪ Sm: Varianza del método analítico, que se calcula a partir

de medidas repetidas de una sola muestra de laboratorio.
¿CÓMO REDUCIR LOS ERRORES DEL MUESTRE O?:
▪ Tamaño de la muestra adecuado, ya que si es pequeña puede
interferir y si es grande aumentar su coste. En el caso de que
fuera demasiado pequeña, la ecuación no se cumpliría.
▪ Selección del número de muestras de laboratorio, que se

tomará según el intervalo de confianza deseado. Este término
representa la incertidumbre absoluta que se puede tolerar en
un determinado nivel de confianza.
Se puede calcular la incertidumbre relativa, y a partir de ella obtenerse el número de muestras a
analizar.
TOMA DE LA MUESTRA:

TRATAMIENTOS PREVIOS DE LA MUESTRA
• Secado: Las presencias de agua o humedad pueden dar lugar a alteraciones. El secado se
realizará en estufa, y también la liofilización (proceso de secado frio)
• Trituración y homogeneización: Los materiales duros se triturarán en molinos de bolas, y los

materiales blandos en molinos de cuchillas.
• Filtración y centrifugación
• Disolución
• Técnicas de separación extractivas
• Proceso de reconcentración
• Otras técnicas de aislamiento y reconcentración
FILTRACIÓN Y CENTRIFUGACIÓN
OJO! Necesario siempre que partamos de muestras líquidas o gases con partículas en suspensión.

FILTRACIÓN: Debemos seleccionar la naturaleza del filtro (celulosa, teflón, lana de vidrio…; y el
tamaño del poro.
CENTRIFUGACIÓN: Selección de las condiciones (tiempo y revoluciones)
DISOLUCIÓN
MATRIZ INORGÁNICA: DISOLUCIÓN CON ACIDOS O SUS MEZCLAS
• Se utiliza una serie de ácidos o sus mezclas
• La disolución se acelera aumentando

la Tº y la P
• La disolución puede basarse en:

Utilizar hornos microondas,
digestores cerrados herméticamente
en los que aumentar la Tº y acelerar
el proceso, y utilizar frascos abiertos
calentados.
° VENTAJAS: Bajo coste
° DESVENTAJA: Pérdida de compuesto volátil
EJEMPLO
Digestión en horno de microondas
- Se utiliza una bomba (recipiente cerrado herméticamente)

recubierta de teflón.
- Se calienta el contenido a altas Tº y P
° VENTAJAS: Rapidez y no perdida de compuestos volatiles
° DESVENTAJA: No se puede añadir reactivos a la digestión, hay una

cantidad limitada de muestra menor a 1g y problemas de seguridad ya
que puede provocar explosiones.
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MATRIZ INORGÁNICA: DISGREGACIÓN
• Utilizada cuando las muestras solidas
inorgánicas son insolubles en los ácidos o
mezclas.
• Se trata de una fusión de la muestra

mezclada previamente con un sólido o
fundente inorgánico que se elige según
la matriz de la muestra. Esta fusión se
realiza en un crisol, calentando hasta
que la mezcla se funda.
• Una vez fría la masa fundida, se disuelve en el disolvente adecuado para cada caso.
°DESVENTAJA: Se pueden introducir impurezas por la gran cantidad de fundente empleado.
MATRIZ ORGÁNICA: COMPUESTOS INORGÁNICOS

Destrucción de la materia orgánica mediante el empleo de reactivos oxidantes apropiados.
VIA SECA
La muestra se calienta a 550-600ºC en un crisol.

Se utiliza como oxidante el Oxigeno atmosférico.
Puede ser de 3 tipos:
• Sobre llama abierta: La muestra se calienta a la llama en el crisol abierto, hasta que toda la
materia orgánica se ha oxidado a CO2.
° Inconveniente: Perdida de analitos volátiles.
• En tubo de combustión: Calentamiento del tubo de vidrio o cuarzo por el que pasa un gas
portador, este flujo puede retener los analitos volátiles.
• En recipiente sellado: Los productos de la reacción se absorben en un disolvente adecuado

antes de abrir el recipiente de la reacción.
VIA HÚMEDA
La muestra de calienta con ácidos oxidantes (HNO3, HClO4) o sus mezclas.
Se puede llevar a cabo con digestión por microondas empleando una bomba de teflón.
El proceso más importante es: Digestión Kjeldahl ,
Basado en la determinación de proteínas en el contenido de nitrógeno orgánico amoniacal.

MÉTODO DE KJELDAHL
LIXIVIZACIÓN
Este método se utiliza cuando no nos interesa disolver toda la muestra. Cuando queremos determinar
la forma en que se encuentran los metales en un material (suelo, sedimentos, aire…)
Proporciona una información sobre la toxicidad de la muestra mucho mas real que el determinar el
contenido total y sobre todo de la disponibilidad del analito.
METODOLOGIA:
• Se considera el material particulado como divisible en fracciones específicas que pueden ser
extraíbles en disolventes determinados.
• Se realizan extracciones secuenciales de distintos reactivos (agentes extractantes) y diferentes

condiciones.
• Los procesos de extracción son o deben ser comparables a los que tienen lugar en condiciones
naturales en el medio ambiente.
• La capacidad de los agentes extractantes de extraer o lixiviar iones metálicos dependerá de

la asociación del metal a las distintas fracciones de la matriz.
°VENTAJAS: Buena simulación de las condiciones medioambientales a las que un suelo o sedimento
puede estar sometido. Nos puede dar información valiosa sobre las posibilidades de movilidad de los
metales que contiene, y por tanto, suministrar información de gran interés en el campo de la agricultura.
°EJEMPLOS:
• Reactivos propuestos en la extracción secuencial o fraccionada a través del diagrama de
Tessier
• EDTA, ácido acético, ácido nítrico
TECNICAS DE SEPARACIÓN EXTRACTIVAS
PREPARACIÓN DE MUESTRA:
• Disolución de la muestra
• Extracción del analito de una matriz compleja
• Preconcentración del analito
• Conversión química del analito (forma detectable)
• Eliminación /enmascaramiento de interferentes
PRECIPITACIÓN:
• Desproteinización: Precipitación con ácido perclorito, ácido tricloroacetatico

EXTRACCIÓN:
• Proceso mediante el cual se transfiere un analito de una fase a otra
• Depende de la diferencia de solubilidad (S) del analito entre les dos fases.
EXTRACCIÓN LÍQUIDO - LÍQUIDO (LLE)
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Separación de un analito mediante el empleo de un
disolvente orgánico en contacto con una fase acuosa. Se
lleva a cabo entre dos disolventes inmiscibles mediante el
empleo de un embudo de decantación.
°DESVENTAJAS: Gran consumo de disolventes, proceso

largo y tedioso que se lleva a cabo en varias etapas
(extracciones sucesivas)
EXTRACCIÓN LÍQUIDO - LÍQUIDO (LLME)
La extracción tiene lugar en varios microlitros de un
disolvente no soluble en agua (extractante) y una fase
acuosa (fase dadora) que contiene el analito.
MICROEXTRACCIÓN LÍQUIDO - LÍQUIDO

DISPERSIVA (DLLME)
°VENTAJAS: Mínimo consumo de disolvente, se realiza en

una única etapa dando lugar a elevados
rendimientos de extracción debido a la elevada área superficial de las

gotas del disolvente extractante, y sirve para reconcentrar.
MICROEXTRACCIÓN EN GOTA (SDME)

°VENTAJAS: Mínimo consumo de disolventes, se realiza en una única etapa,
alta sensibilidad y precisión, y sirve para preconcentrar.
EXTRACCIÓN SÓLIDO - LÍQUIDO (METODO SOXHLET)
METODOLOGIA: La muestra se coloca en una carcasa porosa y el disolvente recircula continuamente

a través de ella mediante un sistema de destilación - condensación.
La concentración del componente extraído en el recipiente inferior aumenta con el tiempo.
°VENTAJAS:
• Es un método estándar, independiente de la matriz.
• El disolvente y la muestra están en contacto íntimo y repetido hecho que mejora muchísimo la
extracción porque siempre se emplea un disolvente limpio.
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• El disolvente proviene de una condensación, luego es líquido y está
caliente lo que favorece la solubilidad del analito.
• No se requiere filtración posterior, ya que el disolvente orgánico se

evapora quedando sólo el analito.
• Gran capacidad de recuperación.
• Instrumentación simple (bajo coste)
°DESVENTAJAS:
• Temperatura limitada (punto ebullición del disolvente a Patm)
• Tiempo de extracción elevado (12-48h)
• Gran volumen de disolvente (300-500 mL)
• Necesidad de evaporar el disolvente
• Inaplicable a analitos termolábiles, que se descompongan con el calor o reaccionen.

°APLICACIONES: Determinación del contenido de grasa en alimentos.
EXTRACCIÓN SÓLIDO - LÍQUIDO (EXTRACCIÓN ASISTIDA POR MICROONDAS, MAE)

METODOLOGIA: La muestra se coloca junto con el disolvente en un
reactor (recipiente cerrado) y se calienta la mezcla con energía de
microondas.
El extracto se filtra para posteriores tratamientos. Es necesario

optimizar el disolvente a emplear, la Tº, la P, y la potencia de la
radiación.
°VENTAJAS:
• Rápido
• Bajo consumo de disolvente
• Control de todos los parámetros de extracción.
• Se pueden procesar varias muestras a la vez
• Fácil automatización y manejo
°DESVENTAJAS:
• El extracto obtenido debe ser filtrado
• Coste elevado del equipo
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• Puede ser necesario tratamiento posterior
°APLICACIÓN: Extracción de hidrocarburos poli aromáticos, fenoles y pesticidas; de aceites esenciales
en plantas; y lípidos en pescados.
EXTRACCIÓN EN FASE VAPOR

Se emplea para analitos que tienen una P de vapor elevada, es decir, que pueden ser fácilmente
volatilizados y por tanto separados de la matriz.
La extracción se basa en el reparto de los analitos entre la muestra (sólida o líquida) y una fase
gaseosa.

Se emplea para la determinación a niveles trazas y ultra trazas de compuestos orgánicos volátiles.
ESPACIO DE CABEZA (HS)

Existen dos tipos de extracción: Estática y dinámica
ESTÁTICA: La muestra se coloca en una vial dejando un espacio

(espacio de cabeza) suficiente entre la superficie de la misma y el
septum que cierra herméticamente el vial.
El vial se termostatiza a una temperatura adecuada para que los

analitos volátiles pasen a la fase gaseosa.
Finalmente, la fase gaseosa se toma con una jeringa y se inyecta

directamente en el cromatógrafo de gases.
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MÉTODO DE PURGA
METODOLOGIA: Un gas inerte (N, Ar, He) se burbujea en el

seno de la muestra y arrastra a los compuestos volátiles. Los
analitos se retienen en una trampa criogénica o en el sorbente
adecuado. La desorción se lleva a cabo térmicamente.
°VENTAJAS: Determinación de concentraciones muy bajas, y
acople a técnicas cromatográficas.
°DESVENTAJAS: Riesgo por contaminación, ya que el gas

empleado debe ser de elevada pureza, y los compuestos
térmicamente inestables pueden degradarse en la etapa de
desorción.
EXTRACCIÓN EN FASE SOLIDA

Se basa en la diferencia de afinidad que presenta un analito (o la matriz) por una fase sólida o por
la misma muestra líquida (o extracto obtenido).

Al hacer pasar la muestra por una fase sólida (polar, apolar, intercambio iónico…) algunos compuestos
se quedan retenidos, mientras que otros eluden.
Los analitos de interés retenidos se pueden eludir (extraer de la fase sólida) con un pequeño volumen
de disolvente (modalidad de extracción en cartucho).
En las modalidades de microextracción en fase sólida y extracción por agitación con varitas
adsorbentes, los analitos pueden desorberse térmicamente para su posterior análisis.
EXTRACCIÓN CON CARTUCHOS (SPE)

Estas son las etapas:
1. Elección de la fase sólida (sorbente) (viene colocada

en un cartucho de vidrio o polietileno). Dependerá
del analito a retener, de su nivel de concentración y
del disolvente en el que se encuentre.
2. Acondicionamiento del cartucho: Disolvente de

propiedades similares a la muestra. § Carga de la
muestra.
3. Lavado: Eliminación de posibles interferentes.
4. Elución: Los analitos son eluidos con el disolvente

adecuado.
5. ¿¿¿Reutilización de cartucho???
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MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SPME)
La muestra se coloca en un vial cerrado, se perfora el septum y se expone la

fibra a la muestra (espacio de cabeza o a la propia muestra líquida) por
agitación.
El tiempo suele oscilar entre 15-30 min. Una vez retenidos los analitos en la
fibra, se procede a su desorción (térmica o con disolventes)
MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA CON BARRAS AGITADORAS

(SBSE)
La extracción se lleva a cabo en una barra magnética recubierta de material adsorbente
(polidimetilsiloxano).
• Desorción: puede ser térmica (cromatógrafo de gases) o química (pequeño volumen del
disolvente adecuado).

• Presenta las mismas ventajas que la SPME, además de una mayor eficacia en la extracción
(mayor recubrimiento de material adsorbente) permite límites de detección muy bajos.
°APLICACIÓN: hidrocarburos aromáticos, bifenilos policlorados, fenoles…
OTRAS TECNICAS DE SEPARACIÓN EXTRACTIVAS
DERIVATIZACIÓN: Se emplea cuando un analito es difícil de extraer o cuando no se dispone en el

laboratorio de la técnica que permita su determinación final con los límites de detección adecuados.
Consiste en la transformación del analito de forma controlada y cuantitativa en otro compuesto cuyo
análisis resulte más sencillo.
- Ejemplo: reactivos derivatizantes que transformen el analito en un compuesto volátil o que lo

doten de un grupo cromóforo.
PROCESO DE MEMBRANA: Membrana: barrera física entre dos fases para separar especies en
función de su diferente tamaño, forma estructura química.
Modalidades: microfiltración, ultrafiltración, ósmosis inversa, diálisis, etc.
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TEMA 3: EVALUACIÓN DE DATOS, CALIBRACIÓN Y
VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS
ERRORES EN EL ANÁLISI QUÍMICO
Las medidas analíticas, a pesar de realizarse de forma totalmente correcta, están sujetas a
variabilidad por factores debidos al operador, equipo de medida, condiciones ambientales, etc.
Cualquier resultado analítico debe estar acompañado de una estimación → Presencia de errores.
• Errores aleatorios o indeterminados: Impredecibles tanto en magnitud como en signo. Las

causas no se pueden identificar. El efecto acumulado de los errores aleatorios origina la
dispersión de los resultados analíticos. Afecta a la precisión. Como no se pueden identificar,
son difíciles de corregir, están siempre presentes en las medidas experimentales.
• Errores sistemáticos o determinados: Las causas que los provocan se pueden identificar y
tienen un valor definido. Provocan que la media de un conjunto de datos adquiera un valor
diferente del valor real. Afecta a la exactitud. Como se pueden detectar, se pueden corregir
y se han de evitar.

- Personales: Debido al juicio o a la predisposición del analista.
SOLUCIÓN: Ser cuidadosos en los desarrollos experimentales.
- Instrumentales: Del material o instrumento empleado para la medida.

SOLUCIÓN: Mantenimiento correcto y calibrado periódico de los instrumentos.
- Método: Relacionado con la fisicoquímica de los reactivos y reacciones implicadas.

SOLUCIÓN: Análisis de la muestra estándar de referencia.
• Errores brutos o gruesos: Ocurren ocasionalmente, y por lo general son productos de errores
humanos que provocan la aparición de datos atípicos.
EXACTITUD Y PRECISIÓN
EXACTITUDL
Propiedad que evalúa la diferencia entre el valor medio obtenido de las diferentes replicas y el valor
verdadero.
Se evalúa calculando el error.
PRECISIÓN
Propiedad que evalúa la dispersión de los resultados experimentales obtenidos alrededor del valor
medio de éstos.
Se evalúa calculando la desviación estándar.
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PRESENTACIÓN DE RESULTADOS ANALÍTICOS
Si hiciéramos infinitas determinaciones y representáramos la
frecuencia (yi) con la que se repite cada valor de
concentración frente a la concentración (xi), veremos que los
resultados se ajustan a una curva de Gauss o curva normal.
- µ → Valor medio = Coincide con x en el

máximo
- σ → Desviación típica = Distancia des de el
punto de inflexión hasta la vertical
correspondiente a la media.
INTERVALO DE CONFIANZA (POBLACIÓN) Y

EXPRESIÓN DE RESULTADOS

Una gran parte de los resultados individuales de una
población estará en el intervalo [µ  σ] pero no todos.
Estaría bien saber cuántos resultados individuales xi de
la población se encuentran dentro de ese intervalo [µ
± ], es decir, cuál sería la probabilidad de que
cualquier resultado que se obtuviera estuviera dentro
de este intervalo.
Esta probabilidad es equivalente al porcentaje de

datos y de área. Como el intervalo µ ± z σ depende
de σ, cuánto más grande es σ, más dispersos están
entre sí los resultados, es decir más imprecisión
habrá. La desviación estándar σ es una buena
estimación matemática de la imprecisión del análisis.
¿PORQUÉ N-1?
Grados de libertad → Número de resultados independientes (Xi -X) = Número de desviaciones (xi–x)
de cada resultado respecto de la media, empleadas para calcular s, y que son independientes entre
sí. Como la desviación total  (xi-x) es 0, cuando se han calculado N-1 desviaciones, ya se sabe el
valor que falta calcular.
Este valor (x-xi) depende de los otros, ya que la suma de las desviaciones tiene que ser cero. Por lo
tanto, hay N-1 valores independientes, en este caso 7-1 = 6.
La distribución Z solo es válida cuando tenemos un numero infinito de resultados, cuando tenemos un
numero determinado de medidas, tenemos que hacer una corrección con la t de Student.
¿CÓMO INDICAREMOS UN RESULTADO?

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CIFRAS SIGNIFICATIVAS → La desviación estándar se informa con una sola cifra que no sea cero, más
los ceros necesarios para establecer el lugar donde se encuentra la coma decimal.
La primera cifra de la izquierda que

sea distinta de cero se redondea al
entero más próximo.
Ejemplos:  0,0647 → 0,06;  0,27 →

0,3;  48 → 50
Excepción: Cuando la primera cifra que
no es cero es un uno, entonces se escribe
una cifra más (evitar errores superiores
al 5%). Ejemplos:  0,138 → 0,14;
ENSAYOS DE SIGNIFICACIÓN
Formulación de la HIPÓTESIS NULA (H0) → establece que los

parámetros son iguales (es decir, que las diferencias entre los
parámetros no son significativas, sino que son debidas a
variaciones aleatorias).
Si se rechaza H0, se acepta una HIPÓTESIS ALTERNATIVA (H1)

→ que indica que:
- Los parámetros son simplemente distintos: Prueba de

dos colas.
- Uno de ellos es mayor que el otro: Prueba de una cola.
COMPARACIÓN DE VARIANZAS
𝑠12
Criterio de F de Snedecor 𝐹 = 𝑠22
siendo s1 > s2
Estadístico F:
- Distribución asimétrica
- Depende de los g.I del numerador (v1=n1-1) y denominador (v2=n2-2)
PRUEBA DE UNA COLA PRUEBA DE DOS COLAS
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COMPARACIÓN DE UN RESULTADO CON UN VALOR DE REFERENCIA
COMPARACIÓN DE DOS SERIES DE DATOS INDEPENDIENTES
VARIANZAS HOMOGENEAS Reservados todos los derechos.
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VARIANZAS HETEROGENEAS
COMPARACIÓN DE DATOS APAREADOS
- Diseño pretest-posttest, resultados de una serie están emparejados con los de la otra serie.
- Se ordenan y emparejan los resultados de las 2 series de manera que n es el nº de parejas.
- Se calcula la diferencia entre cada pareja, y se obtiene en valor medio de las diferencias

y su desviación típica.
COMPARACIÓN PARA ESTABLECER VALORES ANÓMALOS

Cuando aparece una medida que difiere con brusquedad del resto de una serie, se plantea el
problema de rechazar o mantener ducho dato en la serie.
ERROR RELATIVO Er = (x obtenida por el

método a evaluar – x referencia / x referencia)
x 100 (tenemos que aceptar un criterio para
decir si ese error es aceptable o no. N suele ser
importante si Er es menor del 10%)
COEFICIENTE DE RECUPERACIÓN R = (x obtenida por el método a evaluar/ x añadida por nosotros)

x 100 (tenemos que aceptar un criterio para decir si la recuperación es buena o no. Ese criterio (p. e.
si R > 90% se suele considerar un valor adecuado de R).
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CALIBRACIÓN
Determina la relación entre la respuesta analítica y la concentración del analito. Se determina
comúnmente mediante el empleo de estándares/patrones → Estos se preparan a partir de reactivos
purificados o de reactivos estandarizados por métodos cuantitativos clásicos.
Medir = Comparar → Patrones (composición conocida) → Ecuación calibrado → Recta regresión
RECTA DE CALIBRADO: Se preparan un conjunto de n patrones o estándares con valores de

concentración conocidos, y se utilizan los pares de valores para construir un modelo capaz de predecir
valores de x a partir de valores de y. Caso más simple: relación entre ambas variables es LINEAL.
IMPORTANTE EJERCICIOS CLASE DE MINIMOS CUADRADOS
COEFICIENTE DE DETERMINACIÓN (r2): Indica la bondad del ajuste. Representa el porcentaje de

varianza explicado para el modelo de regresión. Cuanto meno sea la varianza de los residuales, más

se acercará r2 a 1 (diapositiva 8)
La incertidumbre se reduce cuantos más puntos se utilicen en la construcción de la curva, cuantas más
replicas de las muestras se midan y cuando más cerca se encuentre de la concentración.
CARACTERÍSTICAS ANALÍTICAS
EXACTITUD
Propiedad que evalúa la diferencia entre el
valor medio obtenido de los diferentes
replicados y el valor verdadero (real).
Cuanto más próximos son estos valores al

valor verdadero, más exacto es el resultado.
Se evalúa calculando el Error:
PRECISIÓN
Propiedad que evalúa la dispersión de los
resultados experimentales obtenidos
alrededor del valor medio de estos. Se
evalúa calculando la Desviación estándar:
- Repetibilidad: precisión evaluada a partir de una serie de resultados individuales

obtenidos de forma idéntica, mismo operador, misma muestra, mismo instrumento, mismo
laboratorio.
- Reproducibilidad: precisión evaluada bajo condiciones experimentales diferentes,
diferente muestra, diferente operador, diferente laboratorio, diferente instrumento.
SENSIBILIDAD
Medida de la capacidad de un método para distinguir entre dos muestras, es decir,
para distinguir entre dos concentraciones diferentes. Viene determinada por la
pendiente de la recta.
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LÍMITE DE DETECCIÓN (LOD)
És la mínima concentración o
masa de analito que
proporciona una señal en el
instrumento (Slod)
significativamente diferente
de la señal del blanco.
¿Qué es la señal del blanco? ¿De qué depende?
- Todos los métodos instrumentales tienen un grado de ruido asociado con la medición que
limita la cantidad de analito que se puede detectar.
- El ruido se refleja en la precisión de la réplica en blanco o señal de fondo.
- El ruido puede deberse a fluctuaciones en la corriente de un tubo fotomultiplicador,
parpadeo de la llama en un equipo de absorción atómica, etc.
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN (LOQ)

Se define como el nivel de
concentración por encima del
cual se puede proporcionar
resultados cuantitativos con

cierto grado de confianza.
10 𝑆𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
LOQ se puede expresar como: 𝐿𝑂𝑄 = , y la relación 𝐿𝑂𝑄 ≅ 3,3 𝐿𝑂𝐷
𝑚
INTERVALO DINAMICO DE TRABAJO

Intervalo en el cual puede establecerse una relación matemática
entre la señal y la concentración.
Intervalo lineal = Intervalo de concentraciones en que existe una

relación lineal entre la señal y la concentración.
El límite inferior se corresponde con el LOQ
SELECTIVIDAD
Es el grado en el que el método puede medir al analito de interés en las matrices de las muestras que
se analizan sin interferencia de la matriz (incluyendo otros analitos).
Coeficiente de seletividad: Medida de la

sensibilidad de un método para un
interferente dado en comparación con su
sensibilidad para el analito.
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ROBUSTEZ
Método que puede aplicarse a los analitos en una amplia variedad de matrices. Además, mide la
capacidad de un método analítico para resistir pequeños cambios en las condiciones operatorias sin
que su funcionamiento se vea alterado.
- Su evaluación consistirá en identificar las variables que tienen un efecto más crítico sobre
su exactitud, precisión, sensibilidad, etc.
TIPOS DE CALIBRACIÓN
CALIBRACIÓN EXTERNA

¿Errores sistematicos corregibles? → SI → Detección y corrección → Metodo de adición patrón y metodo
del patron interno
METODO DE ADICIÓN PATRON

OBJETIVO: Diagnosticar efecto matriz, calibrado en presencia de error sistemático proporcional.
Calibrado en presencia de muestra.
REQUISITOS: Las señales han de estar en la región lineal; se asume que la disolución sin el analito no
presenta señal. Se asume que la influencia de la matriz es la misma en el analito añadido que en el
analito original de la muestra problema.
DISEÑO EXPERIMENTAL:
- Añadir un volumen o cantidad

constante de muestra
- Añadir diferentes cantidades de
patrón.
- Llevar a un volumen final constante
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¿Cómo se obtiene la concentración de la
muestra?
Calculo de X → El valor de la
concentración del analito en la muestra
corresponde al punto de corte entre la
recta de regresión extrapolada y el eje x.
La concentración de analito en la
disolución se calcula como:
INCONVENIENTES:
• El trabajo experimental es mayor,

puesto que la calibración debe repetirse para cada muestra.
• Se necesita mayor cantidad de muestra que con el calibrado convencional.
• La presencia de efecto matriz depende de la muestra. Si el mismo analito se quiere determinar
en otra muestra, tendremos que volver a evaluar el efecto matriz.
• La desviación estándar y los límites de confianza de las predicciones son bastante mayores

que las obtenidas mediante calibración externa, dado que, al tratarse de un método de
extrapolación, la medida de la muestra se realiza lejos del centroide.
• Si la relación señal-concentración no es lineal, el método de adición de patrón no se puede
aplicar, dado que una curva no puede extrapolarse.
METODO DEL PATRON INTERNO

Cambio significativo en la medida de
una misma disolución en las técnicas
instrumentales en las que el sistema de
introducción de muestra u otras partes
del diseño del instrumento no permiten
una buena repetibilidad de la señal
analítica.
DETECCIÓN: observamos que al repetir

varias veces la lectura de una misma
disolución las señales son
significativamente diferentes.
PATRON INTERNO:
- Sustancia de características físicoquímicas similares a las del analito.

- Debe de poderse detectar la señal del patrón interno de manera independiente en las
condiciones experimentales del análisis.
- No debe causar ningún tipo de interferencia sobre la señal del analito.
¿QUÉ ES LA VALIDACIÓN?
Proceso de documentar o probar que un método analítico proporciona datos analíticos aceptables
para el uso que se propones
24

Se valida para comprobar que el resultado final obtenido representa el contenido real del analito en
las muestras (confianza en los resultados obtenidos - calidad)
Debemos validar:
MUESTRAS: Tiene como fin aceptar las muestras como miembros de la población, admitir las muestras
para las medidas, establecer la autenticidad de las muestras y decidir si es necesario un nuevo
muestreo.
Durante el proceso de validación las muestras se pueden rechazar atendiendo a cuestiones sobre la
identidad o manejo de la muestra, o por tener conocimiento de que la forma de toma de muestra no
fue la adecuada o presenta incertidumbre.
Ejemplo: contaminación en la toma de muestras de sangre como prueba para un análisis forense se
rechazarían las muestras.

DATOS: Dar a conocer los datos con los límites de incertidumbre estadísticamente válidos.
¿CÓMO SE REALIZA LA VALIDACIÓN?

Realizando una evaluación de las características analíticas y comprobando su adecuación a las
necesidades planteadas.
- Precisión (repetibilidad, reproducibilidad, comparación con otro método).

- Exactitud (estudios de recuperación empleando muestras fortificadas, comparación con
otros métodos, uso de materiales de referencia certificados (CRMs)).
- Límite de detección y de cuantificación.
- Selectividad.
- Sensibilidad.
- Intervalo de linealidad.
- Robustez.
Es posible incluir otros parámetros en función del analito y ámbito específico.
¿CUÁNDO ES NECESARIO VALIDAR LOS MÉTODOS DE ANÁLISI?

- Aun siendo un método normalizado
- Un nuevo método desarrollado para una aplicación específica.
- Un método establecido que se utiliza en un laboratorio diferente con una instrumentación
diferente y/o analistas distintos.
- Un método establecido que se ha adaptado a un nuevo problema.
- Un método en el que el control de la calidad interno indica cambios con el tiempo.
25
TEMA 4: ANÁLISIS VOLUMÉTRICO Y GRAVIMÉTRICO
VOLUMETRIAS
INTRODUCCIÓN
VOUMETRÍA: Medida del volumen de un
reactivo de concentración conocida necesario
para reaccionar de forma cuantitativa con un
volumen exactamente conocida de una
disolución problema que contiene una
concentración desconocida.
REQUISITOS DEL ANÁLISI

 Reacción estequiométrica y conocida
 Reacción rápida, con una cinética adecuada
 Reacción cuantitativa (que se complete en un 99,9%)
 Posibilidad de detección del punto final de la valoración (indicador)
 Reacciones selectivas
 Dispone de un reactivo valorante (patrón primario o secundario) de concentración conocida

para poder llevar a cabo la valoración.
CLASIFICACIÓN
ETAPAS
1. Preparación de una disolución de reactivo valorante de concentración perfectamente conocida.
2. Adición de volúmenes conocidos de reactivo valorante (previamente situado en una bureta), a
un volumen conocido de disolución problema (V2) que contiene al analito (A)
3. Obtención del volumen de reactivo valorante necesario para la reacción completa con el
analito A.
4. Calculo de los moles de A presentes en la disolución problema.
5. Determinación de la concentración A en la muestra problema.
26

PATRÓN PRIMARIO
 Elevada pureza
 Estable en contacto con la atmosfera
 Composición no variable con la humedad relativa
 Fácil de secar
 Peso molecular elevado (para disimular los errores en el proceso de pesada)
 Soluble en el medio de valoración,
 Fácil de adquirir y precio asequible
PREPARACIÓN DE LAS DISOLUCIONES DE

PATRONES

PUNTO DE EQUIVALENCIA Y PUNTO FINAL
PUNTO DE EQUIVALENCIA: Momento de una valoración en el que se produce la reacción en
cantidades estequiométricamente equivalentes entre analito y reactivo valorante. Como se conoce la
estequiometria de la reacción, es posible
calcular los moles de analito presentes en la
disolución patrón.
PUNTO FINAL: Momento de una valoración en el que se interrumpe la adición de reactivo valorante
(debido a que el observador ve el viraje de la disolución)
INDICADORES
 Indican el punto final de una valoración.

 Pueden ser de dos tipos:
QUÍMICOS
Sustancias químicas que añadidas a la disolución se valoran conjuntamente con el analito y que nos
permiten detectar de forma visual (cambio de color, turbidez, etc.) que el analito ha reaccionado
cuantitativamente con el reactivo valorante en las proximidades del punto de equivalencia de la
valoración.
INSTRUMENTALES
Se monitoriza durante la valoración alguna propiedad fisicoquímicas relacionada con la variación de
la concentración de analito, agente valorante o producto de la reacción. Dependiendo del tipo de
reacción analítica implicada o de las propiedades de las especies que intervengan se medirá el pH,
el potencial, la absorbancia, etc. • Son más lentos, más precisos y sensibles que los indicadores químicos.
27

ERROR DE VALORACIÓN
Diferencia entre el volumen del punto final y el volumen del punto de equivalencia
- Error sistemático → Debido al consumo de valorante por parte del indicador.

- Error aleatorio → Debido a la forma en
la que el analista percibe el viraje del
indicador.
¿Cómo se estima el error de valoración? Valoración
de un blanco (mismo protocolo de valoración en
ausencia de analito)
CURVA DE VALORACIÓN
Representación gráfica de la variación de una propiedad de la reacción de valoración (pH, potencial,
etc) en función del volumen de reactivo valorante añadido.
En función de la propiedad que se mida, las curvas de valoración pueden ser:

- Lineales: La propiedad que se mide varia de forma lineal con el volumen de reactivo
valorante. [Ej: Absorbancia, conductividad]
- Logarítmicas: La propiedad varia de forma logarítmica con el volumen de reactivo
valorante. [Ej.pH, E,pM]
FACTORES IMPORTANTES DEL ANALISI VOLUMETRICO
 La muestra pesada no debe ser menor de 0,1 g.

 El volumen de valorante consumido debe estar comprendido entre 10-20 mL, dependiendo de
la escala de la bureta. Si el volumen es menor el error de la lectura y de drenaje de la bureta
no será despreciable.
 El volumen de la disolución de analito no debe ser tan grande como para volver a llenar la
bureta para completar la valoración.
 La concentración del reactivo valorante debe seleccionarse de acuerdo con el tamaño de la
muestra y del material que se va a emplear.
 Se debe llevar a cabo la valoración del blanco cuando sea posible.
 El análisis debe fundamentarse en los resultados de al menos tres valoraciones.
GRAVIMETRIA
Cualquier método en el que la señal sea una masa o un cambio de masa
TIPOS
GRAVIMETRIA DE PRECIPITACIÓN
El avalito se sepa de los demás constituyentes de la muestra mediante una reacción de precipitación
cuantitativa en la que el analito (A) se hace reaccionar con el reactivo adecuado (R) . El analito se
28

determina mediante pesada del precipitado formado (P) de composición conocida y relacionado
estequiométricamente.
A + R → P (s)
ETAPAS:
1. Pesada exacta de la muestra (con 4 decimales) y disolución de la misma.

2. Ajuste de las condiciones experimentales para la precipitación. Puede incluir el control de pH,
un cambio de estado de oxidación, un proceso de concentración o dilución de la muestra o una
adición de agentes enmascarantes, etc.
3. Adición de un reactivo precipitante (inorgánico o
orgánico) apropiado para formar un compuesto
insoluble.

4. Separación del precipitado por filtración y lavado.
5. Secado del precipitado, que podrá ser:
- De desecación: Cuando el compuesto obtenido
presenta una estequiometria definida que
permite utilizarlo como forma de pesada, se
realiza un tratamiento térmico a baja Tª
como puede ser la estufa (eliminar
humedad)
- De calcinación: Si el precipitado no reúne las
propiedades adecuadas para ser usado
como roma de pesada, el precipitado se
somete a calcinación en una mufla a Tª
elevadas.
6. Pesada del precipitado y cálculo (determinación
del factor gravimétrico [P.precipitado = P.total – P.peso tara (placa o crisol vacio)]
CONDICIONES
GRAVIMETRIA DE PRECIPITACIÓN
• Baja solubilidad (precipitación cuantitativa) → La cantidad perdida en la filtración y lavado
debe ser despreciable, de forma que no afecte al resultado de la determinación.
• Filtrabilidad → El precipitado debe separarse fácilmente de sus aguas madres, presentando
un tamaño de partícula lo suficientemente grande para no atravesar ni obstruir los poros del
filtro.
• Pureza y estequiometria definida → La reacción de precipitación debe ser selectiva, y originar
un precipitado de elevada pureza.
• Estabilidad térmica → La composición química final debe ser constante y bien definida.
29
GRAVIMETRIA DE VOLATILIZACIÓN
El analito o algún derivado del analito se separa de la muestra en forma de gas.
- Determinación directa → Los vapores se recogen sobre un sorbente adecuado, cuyo

aumento de peso permite cuantificar la cantidad de especie absorbida.
- Determinación indirecta → Se determina el analito a partir de la perdida de peso de la
muestra inicial [ % (m/m) = masa inicial – masa final/masa inicial ]
ELECTROGRAVIMETRIA
El analito se separa de la muestra al depositarse en un electrodo mediante la aplicación de una
corriente eléctrica.
El electrodo se pesa antes y después de la eletrodeposición: el

aumento de nada del electrodo nos informa sobre la cantidad
de analito depositado.

TEMA 5: VOLUMETRIA ÁCIDO BASE Y
DISOLUCIONES AMORTIGUADORAS
CONCEPTOS
El agua es un anfolito o una especie anfiprotica ya que se puede comportar como ácido o como base.
Tendencia de un ácido a ceder protones y de una base a aceptarlos en un disolvente (agua) es una
medida de su fuerza en dicho disolvente.
- Ácidos → Si pKa es pequeño (Ka

grande) ácido fuerte o
moderadamente fuerte
- Si pKa es grande (Ka pequeño)
ácido débil o muy débil
- Bases → Si pKb es pequeño (Kb

grande) base fuerte o
moderadamente fuerte
- Si pKb es grande (Kb pequeño)
base débil o muy débil
30

DISOLUCION AMORTIGUADORA
Una disolución amortiguadora, reguladora o tampón (buffer) es aquella que por su composición admite
dilución de la misma o la adición de pequeñas cantidades de ácidos o bases sin modificar de forma
significativa su valor de pH. Hay 2 tipos:
• Disoluciones de ácido o de bases fuertes a concentraciones relativamente elevadas.

• Disoluciones que contienen un ácido débil y una base conjugada (HA/A-) o una base débil y
su ácido conjugado (B/B+) en concentraciones altas y comparables.
¿Qué cantidad de ácido o base se puede añadir a un tampón sin causar un gran cambio en el pH?
Viene determinada por la capacidad

amortiguadora: Cantidad de ácido o base
fuerte que hay que adicionar a 1 L de
tampón para provocar el cambio en una
unidad de pH. A mayor Beta, más resistente
es el tampón a cambios de pH.
¿Cómo se prepara un tampón en el laboratorio?
- Mezclar las cantidades adecuadas de HA y NaA para obtener el pH.

- Pesar cantidad adecuada de HA o NaA (según se disponga) y añadir ácido o base hasta

el pH deseado.
EJEMPLO: Preparar 1L de tris o,1M de pH 7.6. Se dispone de hidrocloruro de tris sólido y de NaOH
0,1 M (pKa = 8,075)
1. Pesar 0,1 moles de hidrocloruro de tris y disolverlo en aproximadamente 800 mL de agua.

2. Colocar un electrodo de pH y medir el pH.
3. Añadir NaOH hasta que el pH sea de 7,6.
4. Pasar la disolución a un matraz aforado de 1L y enrasar.
CURVA DE VALORACIÓN ACIDO-BASE

Valoración acido base: Se basan en añadir cantidades
medidas de la disolución valorante patrón, que normalmente
suele ser un ácido o una base fuerte, dependiendo de las
propiedades ácido-base del analito a determinar.
Curva de valoración ácido-base: Representación gráfica de la

variación de un parámetro de la disolución, en este caso, el pH
en función del volumen (V).
CONSIDERACIONES
Valoraciones de un ácido débil con una base fuerte
- Disoluciones muy diluidas tienen saltos poco pronunciados y el empleo de indicadores

químicos conlleva un error significativo.
- Cuanto más débil es un ácido el salto es menos pronunciado y en general podemos decir
que ácidos constantes de protonación superiores a 10^7 no se pueden valorar empleando
indicadores químicos.
31

Valoración de bases tripróticas con ácidos fuertes
- Si las constantes no difieren en 10^3 no podemos distinguir puntos de equivalencia

consecutivos.
INDICADORES ACIDO-BASE
TIPOS DE INDICADORES
1. Indicadores conteniendo el grupo de la ftaleína.
2. Indicadores conteniendo el grupo de la sulfonftaleína.
3. Indicadores azo.
4. Indicadores mixtos.
5. Indicadores fluorescentes.
GRUPO DE FTALEINA
 Incoloros en medio acido presentando coloración a pH
básico.
 Poco solubles en agua y solubles en etanol
 EJEMPLO → Fenolftaleína y timol ftaleína
GRUPO DE SULFONFTALEINA
 Derivados sulfonados del grupo ftaleína.
 Se caracterizan por presentar dos cambios de color (uno en disoluciones algo ácidas, y el otro
a pH neutros o moderadamente básicos.
 EJEMPLO → Fenolsulfonftaleína o rojo de fenol
Solo tiene interés el segundo cambio de color (pH 6,4 – 8)
32

INDICADORES AZO
 Viraje mayoritario de color rojo al amarillo al aumentar la basicidad.
 Por lo general vivirán en la zona ácida
 EJEMPLOS → Naranja de metilo, rojo de metilo
INDICADORES MIXTOS
 Se utilizan cuando no se producen cambios nítidos de color.
 Se trata de mezclas de dos indicadores o bien de un indicador y un colorante.
 EJEMPLO → Rojo neutro + azul de metileno.
INDICADORES FLUORESCENTES
 Se utilizan cunado las disoluciones a valorar tienen color y no se puede observar un cambio de
color.

 El final de la valoración se manifiesta con la aparición, desaparición o cambio de la
fluorescencia de la disolución problema sometida a la luz ultravioleta.
INTERVALO DE VIRAJE DEL

INDICADOR
El pH al que cambia de color un
indicador → depende de su
constante de acidez.
Si admitimos que el color de la

disolución de un indicador será
el del HIn cuando su
concentración sea 10 veces
mayor que la de In- , y que
será del color de In- siempre
que la concentración de HIn
sea 10 veces menor que la de
In- → es posible establecer un
rango de pH o intervalo de
viraje del indicador en el que
se podrá observar un cambio
de color:
33
PATRONES PRIMARIOS Y REACTIVOS VALORANTES
Patrones primarios de carácter

básico (para estandarizar
acido)
Patrones primarios de carácter ácido
(para estandarizar bases)
REACTIVOS VALORANTES: Han de

ser estandarizados frente a un patrón
primario. Los ácidos de uso común son:
HCl, HClO4, H2SO4.

Las bases de uso común son: NaOH,
KOH, Ba(OH)2
APLICACIONES
- Determinación de la acidez total
- Determinación de hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos
- Determinación de nitrógeno → amoniacal, nitritos, nitratos y nitrógeno orgánico (Método
Kjeldahl)
- Determinación de grupos funcionales orgánicos → carboxilo, sulfónico, amino, éster,
hidroxilos y carbonilo.
DETERMINACIÓN DE NITROGENO ORGANICO (METODO KJELDAHL)

El nitrógeno está presente en muchas sustancias de interés, como aminoácidos, proteínas, medicamentos
de síntesis, fertilizantes, suelos, colorantes…
El método más usado para la determinación de nitrógeno orgánico es el método Kjeldahl, basado en
una valoración acido-base.
1. Digestión
2. Destilación
3. Valoración
ETAPA 1: Digestión con H2SO4 concentrado caliente
34

ETAPA 2: Adición de NaOh concentrado → Liberación de NH3, el cual es arrastrado por destilación
en corriente de vapor y recogido en disolución de ácido en exceso (HCl). Parte del HCl es neutralizado
con el NH3.
ETAPA 3: Valoración del acido no

consumido con base patrón (NaOH
estandarizado) valoración por
retroceso
TEMA 6: OTRAS VOLUMETRIAS.
SOLUBILIDAD I PRODUCTO DE SOLUBILIDAD
El equilibrio de precipitación es un tipo de equilibrio heterogéneo, que implica la transferencia de
materia entre una fase solida y una fase líquida (o disolución de iones) [MA(s) → M+ + A-].
Solubilidad (S) es la concentración de una sustancia en una disolución saturada a una temperatura
determinada. Se suele expresar en mol L-1 o gL-1

Disolución saturada es aquella disolución que no admite más soluto en su seno a una temperatura
determinada.
En sentido estricto, el producto de solubilidad sería

el producto de las actividades de los iones (aM y
aA), sin embargo, en disoluciones diluidas se puede
expresar en concentraciones.
La expresión del producto de solubilidad cambia en

función de la estequiometría de la reacción:
Además, la expresión del producto de solubilidad (Ks) nos permite extraer las siguientes conclusiones:
DIS. SATURADA DIS. INSATURADA DIS. SOBRESATURADA

Si [M][A-] = Ks Si [M][A-] < Ks Si [M][A-] > Ks
No se puede disolver más Se puede disolver más sólido: Estado metaestable →
sólido, por lo que, si aumenta la puede aumentar la Aparece porque algunas
concentración de iones, se concentración de los iones sin reacciones de precipitación son
produce la precipitación. que se produzca precipitación. lentas: antes o después, tendrá
lugar la precipitación.
Aunque añadamos, se alcanza
el equilibrio P = S
FACTORES QUE AFECTAN A LA SOLUBILIDAD

Algunos afectan al valor de producto de solubilidad, mientras que otros originan un desplazamiento
del equilibrio de precipitación. Son:
35

• Temperatura: El valor de Ks aumenta con la temperatura para la mayoría de las sustancias.
• Fuerza iónica: Si aumenta la fuerza iónica de la disolución por presencia de electrolitos que
no contienen iones comunes con el precipitado, se origina un aumento de solubilidad. Ejemplo:
La solubilidad de AgCl será mayor en una disolución acuosa de KNO3 0,1 M que en agua
pura.
• Efecto de ion común: Se origina al adicionar a la disolución sales cuyos iones son comunes a
los que intervienen en el equilibrio de precipitación. El sistema evoluciona tendiendo a
recuperar el equilibrio: se produce precipitación (disminuye la solubilidad del compuesto)
• Reacciones parásitas: En presencia de reacciones laterales sobre los iones que constituyen el
precipitado, disminuyen uno o ambas concentraciones iónicas, se produce disolución del
precipitado (la solubilidad aumenta).
VOLUMETRIAS DE PRECIPITACIÓN
En las volumetrías de precipitación se aprovecha la reacción de formación de un precipitado (AX), para
determinar la concentración de una especie, A, mediante su reacción con el valorante, X.
Se ha de cumplir que:

- La reacción sea rápida i cuantitativa (Ks pequeña)
- Estequiometria definida y pureza elevada
- Posibilidad de detección del punto final.
Estas valoraciones tienen una aplicación muy limitada, constituyendo las valoraciones de
haluros con plata una de las más importantes.
CURVA DE VALORACION DE PRECIPITACION

Representación gráfica de la variación del
logaritmo cambiado de signo de la
concentración de la especie que se valora,
pA, en función de, volumen (V) de valorante
añadido.
La mayoría de las valoraciones de

precipitación (debido a la disponibilidad de
indicadores) se basan en la determinación de
aniones (analitos, A), empleándose un catión
metálico como agente valorante (p.e.: Ag+).
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑎ñ𝑎𝑑𝑖𝑑𝑎

𝑓 = 𝑓𝑟𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟𝑎𝑑𝑎 =
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑛𝑒𝑐𝑒𝑠𝑎𝑟𝑖𝑎
APLICACIONES DE LAS VOLUMETRIAS DE PRECIPITACIÓN

Una de las limitaciones más importantes de este tipo de valoraciones, es la poca disponibilidad de
indicadores visuales para éstas. Las valoraciones de haluros con plata representan una de las
36

aplicaciones más destacadas de este tipo de valoraciones, donde la detección del punto final se lleva
a cabo mediante indicadores visuales.
Para establecer el punto final se utilizan 3 procedimientos:
A) Método de Mohr → El punto final viene indicado por la precipitación de un compuesto

coloreado.
B) Método de Volhard → El punto final es la formación de un complejo soluble coloreado.
C) Método de Fajans → El punto final se basa en la coloración del precipitado de AgCl
por adsorción de un colorante orgánico (indicadores de adsorción).
MÉTODO DE MOHR
Se utiliza para la valoración directa de
cloruros o bromuros con plata (también
sirve para CN-), utilizando cromato

potásico (K2CrO4) como indicador. Tras el
primer exceso de plata, la aparición de un
segundo precipitado, Ag2CrO4, de color
rojo, indicará el punto final de la
valoración.
Limitaciones:
- Las valoraciones deben efectuarse dentro de un intervalo de pH determinado (pH = 6 –

10’5). Valores de pH > 10,5, provocan que la plata precipite en forma de hidróxido,
mientras que a pH < 6, el cromato pasa a dicromato, por lo que no se observaría el
precipitado de cromato de plata.
- No funciona bien para yoduros (I-) y SCN-; ya que el AgI y AgSCN absorben CrO4 y el
punto final no se observa con claridad.
- Solo es aplicable a cloruros y bromuros, ya que el producto de solubilidad es el adecuado

para que el punto final se pueda hacer coincidir con la aparición del precipitado rojo
Ag2CrO4-.
Aplicaciones:
 Control analítico de cloruros en aguas.
MÉTODO DE VOLHARD
Se utiliza para la valoración directa de plata con tiocianato (SCN-), utilizando una sal de Fe 3+ como
indicador. Se lleva a cabo en medio ácido para evitar la precipitación del hidróxido de Fe3+.
Aplicación
 La aplicación de este método es la

determinación por retroceso de haluros. El
procedimiento consiste en añadir a la muestra un
exceso conocido de una disolución patrón de
AgNo3 y determinar su exceso mediante una
valoración por retroceso con una disolución patrón de NH4SCN.
37
Consideraciones:
- Una ventaja es que se lleva a acabo en medio ácido, y no requiere un control estricto del
pH como en otros métodos de análisis de haluros.
- Este método se puede utilizar para aniones cuya sal de plata sea insoluble en medio ácido,
neutro o ligeramente básico.
MÉTODO DE FAJANS
Se utiliza para la valoración directa de haluros (Cl-, Br-, I-) con plata utilizando indicadores de
adsorción para detectar el punto final.
INDICADORES DE ADSORCIÓN: son colorantes orgánicos de

elevado peso molecular con carácter acido-base débil que
generalmente se encuentran en forma iónica y que pueden ser
adsorbidos en la superficie de un precipitado coloidal,
inmediatamente después del punto final. Su color cambia según se
encuentren libres o adsorbidos en la superficie del sólido.
Los más comunes son:
- Fluoresceína → Verde amarillento – rosa vivo

[aniónico]
- Dicloro fluoresceína → Amarillo – rojo [aniónico]
- Tetrabromofluoresceína → Rosa – rojo intenso
[aniónico]
- Rodamina 6 G → Naranja – violeta [catiónico]
VOLUMETRIA OXIDACIÓN-REDUCCIÓN
PROCEO DE OXIDACIÓN -REDUCCIÓN: Son aquellos en los que se produce una transferencia de
electrones entre las especies implicadas en el mismo.
 OXIDACIÓN: Proceso en el cual una sustancia cede o pierde electrones

 REDUCCIÓN: Proceso en el cual una sustancia acepta o gana electrones
38

 REDUCTOR: Sustancia que pierde electrones,
por tanto, se oxida. Se convierte en una forma
oxidada.
 OXIDANTE: Sustancia que acepta electrones,
por tanto, se reduce. Se convierte en una forma
reducida.
Las formas oxidada y reducida de una sustancia constituyen un sistema conjugado denominado par
redox o sistema redox. Está caracterizado por el número de electrones (n) y su potencial normal o
estándar (E0).
En una reacción redox se han de considerar dos pares

redox diferentes, porque es la suma de dos
semireacciones, una de reducción y otra de oxidación.
En la reacción global se ha de cumplir que el número
de electrones que se ganan son los mismos que los que
se pierden.
POTENCIAL DE UN SISTEMA REDOX

POTENCIAL REDOX: Propiedad física (medida en voltios) que permite evaluar el carácter químico

redox de una sustancia, es decir, su fuerza oxidante (o reductora)
Para poder establecer una escala de potenciales y así determinar unos valores para los potenciales
normales de cada par redox se han de establecer una serie de electrodos de referencia, a los cuales
por convenio se les da un valor de potencial cero en condiciones estándar.
ELECTRODO: Sistema de dos fases que consta de un conductor electrónico (p.e., un metal) y un
conductor iónico (una disolución), en la cual tiene lugar la reacción electroquímica.
POTENCIAL DE ELECTRODO: Medida de la fuerza de oxidación – reducción de un electrodo y se

mide en voltios.
El potencial normal o estándar de cualquier par redox determinado a 25ºC a partir del electrodo
estándar de hidrogeno, son siempre potenciales de reducción: Especies oxidantes mayor potencia y
tendencia a reducción. En cambio, especies reductoras, menor potencial y tendencia a oxidación.
39

EQUACIÓN DE NERNST
Es la expresión más importante de los procesos
redox. Permite determinar el potencial de un par
redox en función de las concentraciones de
especies oxidadas y reducidas.
CONDICIONES PARA LA VALORACIÓN

- Estequiometria definida → Se ha disponer de dos sistemas o pares redox, uno de ellos
corresponderá al analito, y el otro al valorante, que intercambien electrones
estequiométricamente.
- Reacción rápida y cuantitativa → K’ elevada
- Posibilidad de detección del punto final → Indicadores redox, indicadores instrumentales

de tipo potenciométrico.
Los valorantes que podemos utilizar son oxidantes o reductores fuertes, aunque es más frecuente el
empleo de los primeros.
- Oxidimetría: Valoración con oxidantes (MnO4 - , Cr2O7 2-, IO3 - , I2 , Ce4+, etc.)
- Reductimetría: Valoración con reductores (S2O3 2-, Fe2+, etc.)

CURVAS DE VALORACIÓN REDOX
Representación grafica de la variación del potencial redox
del sistema, E, en función del volumen del valorante aádido.
Donde Ox1 es el valorante y Red2 es el analito:
Consideraciones:
- El salto de la curva será mayor

cuanto mayor sea la concentración.
- Cuando una especie posee
diferentes estados de oxidación, en
la curva de valoración podemos
observar diferentes saltos,
- Cabe destacar, que la valoración por mezclas: Será posible cuando esté valorado el
primer analito antes de que empiece la segunda reacción de valoración. Se valorará
primero aquel que tenga mayor ΔE.
DETECCIÓN DEL PUNTO FINAL

Vía instrumental: Potenciometría
Intervalo de transición (zona de viraje) de un

indicador redox: Diferencia de potencial en el que
el indicador manifiesta el cambio de color, y viene
dado por:
40

INDICADORES REDOX
Cubre prácticamente todo el intervalo de potencial adecuado para llevar a cabo los diversos tipos de
volumetrías redox:
APLICACIONES DE LAS VALORACIONES REDOX
VALORACIONES CON PERMANGANATO

Es un oxidante fuerte de color violeta, intenso, que en medio muy ácido (pH < 1) se reduce a Mn2+
(incoloro) según la reacción:
- No es un patrón primario (contiene trazas de MnO2)

- El agua destilada suele contener impurezas orgánicas que reducen algo de MnO4- a
MnO2.
- Su estandarización se suele llevar a cabo con oxalato de sodio (Na2C2O4) en medio
ácido:
Aplicaciones:
VALORACIÓN CON CE4+

Oxidante fuerte con aplicaciones muy similares a las del permanganato:
- El hexanitrocerato (IV) de amonio ((NH4 )2Ce(NO3 )6 ) es un patrón primario: se disuelve

en H2SO4 1M y se puede usar directamente. Otras sales como el Ce(HSO4 )4 , (NH4
)4Ce(SO4 )4 x 2H2O y Ce(OH)4 (menos caras) tienen que ser estandarizadas con
Na2C2O4 ó alambre de hierro.
Aplicaciones: Similares a las del MnO4 - y además valoración de aldehídos, cetonas, alcoholes, y ácidos
carboxílicos →
VALORACIONES CON DICROMATO

Es un oxidante menos fuerte en medio ácido que el permanganato y el Ce4+:
- Es un patrón primario.
41
- Las disoluciones se preparan directamente después de pesar la sal (K2Cr2O7), la cual se
seca previamente a 140º. Las disoluciones son muy estables, y no oxida a tantas sustancias
como el MnO4-
- Detección del punto final → Necesita del empleo de un indicador (por ejemplo, el ácido
difenilaminasulfónico).
Aplicaciones: Valoración de Fe2+:
Valoración indirecta de especies que oxidan el Fe2+ a Fe3+:
VALORACIONES DIRECTAS DE YODO [YODIMETRÍA]
Cuando un analito oxidante se le añade un exceso de I- para producir I2, que luego se valora con
tiosulfato.
Aplicaciones: Determinación de Cu2+, Cl2 en lejías, vitamina C (ácido ascórbico)
Indice de yodo de un aceite /grasa:
- Mide el grado de insaturación (número de dobles enlaces) de los ácidos grasos y ésteres.
- Se determina añadiendo a la muestra un exceso de reactivo halogenado que reacciona
con los dobles enlaces; posteriormente se valora por retroceso el exceso de halógeno que
no ha reaccionado.

- Existen dos métodos: Wijs y Hanus.
- El resultado se expresa como g de I2 por 100g de aceite/grasa
VALORACIONES INDIRECTAS CON YODO (YODOMETRÍAS)
42

TEMA 7: ANÁLISI ELECTROQUÍMICO
El electroanálisis desarrolla técnicas analíticas que emplean el potencial, carga o corriente de una celda
electroquímica para determinar la concentración de analito o para caracterizar la reactividad química de
analitos. Estos métodos se basan en el movimiento de electrones en las reacciones redox.
Aprovechando la ecuación de Nernst relacionaremos la medida de voltaje o corriente con la

concentración de analito. Este tipo de métodos mide como se mueven los electrones dentro de una celda
electroquímica.
Que un compuesto se oxide o se reduzca dependerá de su potencial de reducción: A mayor potencial,

mayor afinidad por los electrones.
CELDAS ELECTROQUÍMICAS

• Electrodo: Solido conductor (metal, carbono o polímero)
 Ánodo → Retira electrones de les especie de la disolución que está en contacto, de
manera que la especie se oxida, produciendo una oxidación.
 Cátodo → Proporciona electrones a la especie en disolución, con la que está en contacto,
de manera que la especie se reduce, produciéndose una reducción.
• Corriente eléctrica: Movimiento de cargas, en el caso de los metales serán electrones, y en
disoluciones iones.
• Diferencia de potencial, tensión o voltaje: Presión que ejercen las cargas empujadas por la fuente
de potencial. Resultado de aplicar una diferencia de potencial entre los puntos del circuito.
• Ley de Ohm: I = E/R, es decir, la resistencia producida por el propio circuito.
• Resistencia: Oposición al flujo.
• Impedancia: resistencia en función de dR/dt. También se cumple i=E/Z (circuitos que
funcionen con corrientes alternas).
• Unidad de corriente: Amperio (A), (C/s) = (Culombio/segundo), 1C=6.24*10^18 cargas
elementares (monocargadas).
• Unidad de resistencia de potencial: Voltios (V).
• Unidad de resistencia e impedancia → Ohmios.
• Campo eléctrico → caída de potencial por unidad de longitud (V/cm). El campo es el mismo en
cualquier punto si el medio es homogéneo.
CELDAS GALVÁNICAS I ELECTROLITICAS
Celda electroquímica: circuito eléctrico formado, por al menos, dos electrodos en contacto, a través de
una disolución iónica, necesaria para que se forme la corriente.
Electrolito: Especie que al disolverse da lugar a iones
- Celda galvánica: capaces de producir una corriente eléctrica aprovechando que está teniendo
lugar una reacción química, termodinámicamente espontánea o favorable. El potencial se genera
espontáneamente, éste se forma en las interfaces entre el electrodo y la disolución.
- Celda electrolítica: en ellas tiene lugar una reacción química no espontánea, que tendrá lugar
gracias a que se aplique un potencial exterior, producido por una fuente externa.
RESPRESENTACIÓN
Puente salino → está constituido por una disolución saturada de cloruro potásico. Permite el paso de
iones y además cierra el circuito. Permite que no se mezclen los productos de las semireacciones, dado
que éstas se encuentran separadas en dos compartimentos diferentes. Además, también permite la
neutralidad eléctrica y la formación de corriente eléctrica, que terminará cuando las especies estén en
equilibrio.
 Zn: electrodo.
 ZnSO2: disolución.
 (a Zn+2 = 0’0100M): actividad.
 II: ánodo y cátodo separados por un puente salino.
 I: electrodo introducido en la disolución.

ELECTRODOS
Indicador o de trabajo: sensible a la concentración de analito, es decir, el que se introduce en la muestra
desconocida y proporciona información.
Electrodo de referencia: tienen un potencial conocido o constante. Se encuentra separado por un puente
salino. Suele estar conectado a un milivoltímetro que ofrecerá mucha resistencia al paso de corriente,
porque interesa que la corriente que pase por este electrodo sea pequeña, para que, de esta manera, no
varíe la concentración de las especies y el potencial sea constante.
Electrodo auxiliar o contraelectrodo: utilizado en técnicas electrolíticas. Tiene una gran superficie. Tiene
la función de soportar la corriente. Formado por un hilo/disco de platino, carbono o depósito de mercurio.
En la voltamperometría es usual utilizar los tres tipos de electrodos. Mientras que en potenciometría se
utilizan los electrodos indicadores y de resistencia.
Cátodo - reducción // Ánodo – oxidación

La ecuación de Nernst me permite relacionar el potencial de la celda con la concentración de cada
una de las especies, de manera que, si ese potencial es función de la concentración de analito, ya
tendré un calibrado. Si tengo un calibrado mido la muestra y extrapolo la medida de la muestra para
calcular su concentración.
COMPONENTES
➢ Necesitamos dos electrodos, uno es el de trabajo o indicador y otro es el contraelectrodo. Yo quiero
medir el potencial del analito, y si pongo uno que sea de referencia que tenga un valor constante y conocido;
y tendré otro que sea el de trabajo, donde voy a medir la diferencia y sabré el potencial del analito solo.
Si juegas con fuego, te fuegas

➢ No siempre tengo el contraelectrodo y a veces se sustituye por dos, el de referencia y el auxiliar, y esos
dos me hacen el contraelectrodo (el de referencia). Eso pasa porque el electrodo de referencia debe tener
un potencial adecuado para que la reacción se forme, entonces si no lo tengo, tengo que compensarlo.
Para eso uso el de referencia, que frente al auxiliar sí me proporciona una medida adecuada y constante.
➢ Disoluciones de oxidante y reductor en los medios adecuados.
➢ El puente salino, que permite la conexión eléctrica y no química.
➢ Dispositivo para medir la corriente o el potencial.
➢ Para hacer el diseño experimental me tengo que fijar en las leyes de la electricidad, la ley de Ohm. Puedo
medir el potencial cuando tengo controlada la corriente o medir la corriente mientras controlo el potencial.
A partir de eso puedo construir un sistema u otro.
POTENCIAL DE UNA CELDA
Según la ecuación de Nernst: el potencial de una celda electroquímica es función de los potenciales estándar
de los dos electrodos y de la composición de la disolución o disoluciones, dependiendo donde estén
introducidos los electrodos, si en una disolución o en dos diferentes.
Potencial normal (medido en condiciones estándar: 25ºC).
El potencial de electrodo aparece en voltios. Si en lugar de

poner el valor de 0’05916, las unidades serían milivoltios.
Para calcular el potencial de la célula es necesario escribir las semireacciones en sentido de la reducción.
La que tiene lugar en el ánodo, tendrá lugar en sentido contrario, es decir, se va a oxidar. Mientras que la
otra semirreacción tendrá lugar en el cátodo, la especie se va a reducir.
TIPOS DE POTENCIALES SEGÚN DISOLUCIONES EMPLEADAS

Potencial de unión líquida: se produce cuando se ponen en
contacto dos disoluciones con diferente concentración, se
desarrolla un potencial a través de la interfaz que las comunica,
este potencial recibe el nombre de potencial de unión líquida.
Se produce por una ruptura del balance cero, de cationes y
electrones, en la interfaz, es decir, los iones se moverán a
diferente velocidad. Esta velocidad será proporcional a la carga
e inversamente proporcional al radio del ion hidratado.
Iones pequeños: están muy hidratados en disolución acuosa, al ser muy pequeños, la capa de hidratación
que les rodea es muy grande. El radio iónico es elevado, por ello, la movilidad será baja. En cambio, los
iones grandes están poco hidratados en disolución acuosa, el radio iónico es pequeño, la movilidad será
alta. La movilidad de las especies crea el potencial.
- El protón y el oxidrilo (H+ y OH-) son pequeños y están muy hidratados, pero, aun así, se
mueven muy rápido, dado que tienen un movimiento particular. Se mueve más rápido el protón
que el oxidrilo.

OJO! Los potenciales calculados y experimentales no proporcionan el mismo valor por las siguientes
causas:
- No se han tenido en cuenta los potenciales de unión líquido.

- La ecuación de Ernst se refiere a actividades y no a concentraciones.
- Otros factores como: La caída óhmica i fenómenos de polarización de los electrodos.
POTENCIOMETRIA
Las técnicas potenciométricas se basan en predecir la concentración a partir del potencial de una celda
electroquímica. La semicelda cuyo cuyo electrodo está sumergido en la disolución de referencia será el
ánodo, mientras que, el electrodo que está sumergido en la disolución problema será el cátodo. La
potenciometría directa no es posible en la práctica, es necesario calibrar con patrones.
Los patrones son disoluciones cuya concentración de analito es conocida.
ELECTRODOS DE REFERENCIA
ELECTRODO ESTANDAR DE HIDROGENO (SHE)

Formado por una esponja de platino platinado,
a través de la cual se hace burbujear hidrógeno
a presión de 1 atm. Está sumergido en una
disolución de protones cuya actividad es 1. El
hidrógeno es una especie reductora. Mantenerlo
a presión de 1 atm es complicado, por ello, no
es un electrodo muy utilizado en
potenciometría. Su importancia se debe porque
se ha utilizado para medir los potenciales
estándar de reducción en potenciales estándar
redox tabulados.
ELECTRODO DE CALOMELANOS SATURADO (SCE) Y NO SATURADO

Electrodo muy utilizado en potenciometría. Contiene cloruro
mercurioso (Hg2Cl2) y mercurio metálico. Tiene un tubo interno que
contiene, por un lado, mercurio metálico (líquido), colocado para
garantizar el contacto con el hilo de platino, y, por otro lado, la pasta de
cloruro mercurioso. Tiene un orificio para ir llenando el puente salino.
La fibra porosa o frita pone en contacto las disoluciones. El electrodo se
encuentra sumergido en una disolución de KCl, en el caso del saturado,
en el fondo del tubo habrá cristales de KCl. En el caso del no saturado,
no habrá cristales.

INCONVENIENTES
- El electrodo no saturado necesita mas mantenimiento que el saturado.
- Cuando la disolución no está saturada, se pierde disolución o se evapora por el orificio por el
que se llena el puente salino.
- No se pueden emplear a Tº mayores de 80ºC (debido a la disminución del mercurio)
- No se pueden utilizar para hacer medidas en disoluciones que contienen precipitantes del cloruro
(Ag+)
- Es necesario el uso de dobles cámaras.
ELECTRODO DE PLATA SATURADO Y NO SATURADO

Como ventaja, que no tienen ninguna fase gas y es menos dependiente
de la temperatura, ya que puede utilizarse a más de 100º

Como inconveniente, que es posible que forme complejos de plata
insolubles, pero ese complejo es más difícil que el problema de la
solubilidad que tiene el otro electrodo.
Al lo largo del proceso se produce un paso de plata metálica a Ag+ y

esto genera un potencial que es constante, y ese potencial es el que
nos sirve para usarlo como AgCl.
OJO! Limitaciones en diapositiva 22
ELECTRODOS INDICADORES
Hay electrodos indicadores de dos clases, los metálicos y los selectivos de iones. Por una parte, los
metálicos pueden ser de primera clase, de segunda clase y redox. Por otra parte, los selectivos de iones
pueden ser se membrana de vidrio, de membrana cristalina, de membrana polimérica o de combinaciones
de membrana.
INDICADORES METALICOS
ELECTRODOS METÁLICOS INDICADORES DE PRIMERA CLASE

Están formados por hilos o barras metálicas sumergidas en disoluciones que contienen iones del mismo
metal que constituye el electrodo: Ag+/Ag o Cu+2/Cu.
Inconvenientes
- Poco selectivos.
- Disolución de metales en medios ácidos:
- Cinética rápida de transferencia de electrones.
- No formar una capa aislante de óxido sobre la superficie.
- Ausencia de interferencias.
Hay nueve metales posibles de primera clase, que son los siguientes: Ag y Hg (resisten a los ácidos) y Bi,
Cd, Cu, Pb, Sn, Tl y Zn (en disolución neutra y en ausencia de oxígeno).
ELECTRODOS METÁLICOS INDICADORES DE SEGUNDA CLASE
Están formados por hilos o barras metálicas sumergidas en disoluciones que contiene iones del mismo
metal que constituye el electrodo, pero no corresponden a una especie química que precipita o compleja
a los iones del metal.
Los electrodos más utilizados de segunda clase:
AG/AGCL
Para los haluros.
EDTA
Constituido por un hilo de mercurio en el interior de un capilar de litio, y en el extremo,
hay una gota de mercurio en suspensión. La disolución en la que se encuentran los
electrodos debe tener una mínima concentración de mercurio. Si la disolución problema
atuviera EDTA, éste formará un complejo junto al mercurio. La concentración de Hg+2,
viene determinada por la constante de equilibrio con el EDTA.
Se utiliza para monitorizar volumetrías de formación de complejos en las que interviene

el EDTA. Se trabaja con mercurio y no con otro metal, porque el complejo formado
por el EDTA y el mercurio es de los más estables y fuertes.
ELECTRODOS INDICADORES REDOX

No son muy útiles para determinaciones analíticas. El electrodo suelen ser hilos o discos de platino de
carbono vitrificado o pasta de carbono. No participa en las semirreacciones, por ello, se utiliza el platino
o el carbono que no reaccionarán. Las semirreacciones se producen entre especies ajenas al material del
electrodo.
Inconvenientes
- Necesidad de conocer la concentración de una de las especies del par.

- Aplicabilidad limitada para valoraciones redox.
INDICADORES SELECTIVOS DE IONES (ISE)

El potencial depende de un determinado ión, aunque en ocasiones es
frecuente que también responden a analito similares, considerando estos
casos como interferencias.
Están formados por una membrana que separa una disolución de

referencia de la la disolución problema. Se desarrolla un potencial sobre
las interfases membrana-disolución, que será proporcional a la actividad
de un ion con carga z, Az. El potencial de membrana se producir por el
equilibrio del intercambio iónico.

Serán necesarios dos electrodos, uno sumergido en la disolución de referencia de la especie A y otro
sumergido en la disolución problema.
Potencial membrana-disolución: Constante
Potencial membrana-problema: Sensible a la concentración de Az
Electrodos de referencia a cada lado
El signo de la expresión dependerá de la carga del ión, siendo negativa
cuando se esté utilizando fluoruro, por ejemplo. Por tanto, la “z”
corresponde a la carga del ión.
SELECTIVIDAD DE ISE
Son tan selectivos como es la selectividad del intercambio iónico. Se caracteriza por sus:
- Membranas → Diseñadas para dar respuestas elevadas a un determinado ion (primaria), y una
respuesta reducida para el resto de iones (secundaria)
- Coeficiente de selectividad → Estima la gravedad o magnitud de las respuestas secundarias de

una membra [Ka,b <10-10 Valor bueno para unos pocos interferentes]
EL ELECTRODO DE PH Y OTROS ISES DE MEMBRANA DE VIDRIO
ELECTRODO DE MEMBRANA DE VIDRIO PARA PH
Este electrodo está formado por una membrana, que es una pared de vidrio silicato
amorfo de sodio y calcio.
También está formado por dos electrodos de referencia: Un electrodo de

referencia externo de Ag/AgCl, y un electrodo de referencia interno de Ag/AgCl
con una disolución de HCl, es decir, de referencia interna de protones. → Los dos
electrodos están bañados por una disolución de la cual no se sabe la concentración.
Para medir el pH de las disoluciones, la membrana entra en contacto con las dos
disoluciones, la concentración de HCl será conocida, mientras que la otra es la que
queremos determinar. Se crea un potencial eléctrico que será proporcional a la
cantidad de iones que estén en la disolución.
SELECTIVIDAD DE LOS ELECTRODOS DE VIDRIO PARA PH

• El vidrio tiene una composición optimizada para reconocer preferentemente al protón y excluir
posibles competidores, especialmente al sodio.
• Corning 015, formado por silicato de sodio y calcio: 0’5 < pH < 9.
• Si el pH es menor que 0’5 (pH < 0’5), el pH será más alto que el real, por tanto, se produce un
error ácido debido a la saturación de la membrana con protones.

• Si el pH es mayor que 9 (pH > 9), el pH será más bajo que el real, por tanto, se produce un
error sistemático por exceso de sodio.
ELECTRODO DE VIDRIO COMBINADO PARA PH

Son mas prácticos, pero más frágiles. La composición del vidrio cambia en los electrodos selectivos para
todos los cationes alcalinos s (Li+, Na+, K+, Rb+, Cs+) y pseudo-alcalinos (mimetizan el comportamiento
alcalino NH4+, Tl+ y Ag+)
Están formados por un electrodo interno y otro externo de referencia de Ag/AgCl, un puente salino,
cristales de KCl en el interior del tubo, y, en el interior del electrodo hay una disolución de HCl, que sirve
de referencia interna de pH.
ELECTRODO DE FLUORURO
Está formado por un cristal de LaF3 con impurezas de EuF2. Es utilizado para la determinación de fluoruro
y cationes que forman sales muy poco solubles con el fluoruro, como el Al 3+.
No tiene interferencias y tiene el siguiente rango de pH: 4 < pH < 8.
Podemos decir que los electrodos de membrana tienen en común:

 Se basan en una diferencia de potencial entre las dos caras de la membrana que separa dos disoluciones de
concentración diferente de la especie a determinar.
 La diferencia de potencial tiene como principal componente el cambio de energía libre asociada a la transferencia de
masa a través de la membrana.
 Todos ellos cumplen la ley de Nernst.
Variables que más afectan a la medida:
- Temperatura
- Potencial del electrodo de referencia
- Fuerza iónica
- pH de la muestra
- Interferencias (coeficiente de selectividad)
TECNICAS POTENCIOMETRICAS CUANTITATIVAS
CALIBRADO EXTERNO
K’’ → Función no lineal de la fuerza iónica de la
disolución
Preparación de un calibrado externo:

Disoluciones y muestras de idéntica fuerza iónica
(imitación de matriz)

CALIBRADO INTERNO O ADICIÓN PATRON
Cuando la matriz varia de una muestra a otra y no es posible el calibrado externo
Medida de la muestra → adición de volúmenes conocidos de patrón a la muestra. Tienen que ser
volúmenes pequeños para no diluir la muestra. → Medida del potencial
VENTAJAS: Rápida, poco espacio y energía, instrumentación económica, personal poco cualificado.
VALORACIONES DE POTENCIAL
Las valoraciones potenciométricas sirven para determinar el punto final en valoraciones analíticas. Se
basan en la monitorización de una propiedad de la disolución durante el proceso de valoración. El punto
final potenciométrico es ampliamente aplicable y proporciona datos más exactos que los indicadores.
Es aplicable en disoluciones coloreadas o turbias, y requiere más tiempo.

La determinación del punto final puede hacerse por tres métodos: método de la tangente (calcular el
punto donde se igualan los moles de analito), método de la primera derivada (el punto de equivalencia
queda en un máximo) y método de la segunda derivada (el punto de equivalencia es 0).
VOLTAPEROMETRÍA
Medida de la corriente que pasa por una celda cuando se aplica un barrido de potencial.
Es el conjunto de técnicas que se van a basar en la relación que hay entre la cantidad
de potencial que aplico y la corriente que se genera. La intensidad de corriente que
se generará en el medio dependerá del analito que tenga. Esto quiere decir que el
método es selectivo.
ELECTRODOS INDICADORES
SOLIDOS
Están formados por un disco rotatorio, ya que normalmente se hacen girar sobre si mismos,
para que la disolución esté agitada. Además, están recubiertos por un soporte.
El principal inconveniente de estos es el envenenamiento: Deposito de especies insolubles formadas por

electrolisis, o recogidas de la disolución. También puede ocurrir la oxidación del mismo material del
electrodo.
La solución para el envenenamiento es: pulir mecánicamente la superficie con un abrasivo (Al2O3). Y
aplicar un potencial que elimine las sustancias no deseadas.
LÍQUIDOS
Los electrodos indicadores líquidos son habitualmente de mercurio (Hg), ya que su principal ventaja es
que no se envenenan. Encontramos:
9
• Gotas de mercurio → flujo de gotas que cae a velocidad constante: gravedad, presión desde un
depósito, pulsador. La gota cae, por ello, se está renovando continuamente.
• Gota colgada de mercurio → gota colgada que cae cuando ha terminado el experimento.
Rotatorios. La gota será renovada tras cada experimento.
• Electro generación de mercurio → disolución de mercurio añadida a la disolución de trabajo.
Reducción a potencial bajo y generación de una película de mercurio sobre un electrodo rotatorio
de platino o carbono.
VENTAJAS DE TRABAJO
Los valores de potencial aplicables durante la medida son limitados, que serán distintos dependiendo del
electrodo seleccionado.
Platino y carbono → permiten llegan hasta un valor máximo de 1,3 voltios. Los valores no pueden ser
mayores que 1,3 dado que el agua se oxidaría.
Oro → permite llegan hasta un valor máximo de 1,2 voltios.
Mercurio → permite llegar hasta un valor máximo 0’8 voltios. Por encima de 0’8 el mercurio se oxidaría
a Hg+2. Permite llegar hasta valor inferior de -1’6 voltios en medio ácido, o -2’9 voltios en medio alcalino.
Platino y otro → permiten llegar hasta un valor inferior de -0’1 voltios.

Carbono nitrificado → permite llegar hasta un valor mínimo de -0’6 voltios.
ORIGEN Y CONTROL DE LA CORRIENTE EN VOLTAMPEROMETRIA
CORRIENTE FARADICA Y CAPACITATIVA

Corriente farádica: se forma cuando tenemos un analito que se oxida o reduce, sobre
la superficie del electrodo, dando lugar a una corriente de electrones. Además de la
correspondiente reacción contraria en el contraelectrodo.
- Si en el electrodo ocurre la reducción → La corriente se llama corriente

católica (positiva)
- Si en el electrodo ocurre la oxidación → La corriente se llama corriente aniónica
(negativa)
Corriente capacitativa: se produce por la acumulación o liberación de cargas en la disolución

más próxima a la superficie de los electrodos. Causas: Cambio de potencial de un electrodo
o su área / Cambio de la composición de la disolución / Fenómenos no instantáneos (inercia)
TRANSPORTE DE LA CORRIENTE EN VOLTAMPEROMETRIA

- En el proceso redox no tiene lugar en el seno de la disolución, sino en la disolución próxima a la
superficie del electrodo.
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- La disolución esta estructurada en 2 capas: Primaria → Formada principalmente por iones que
anulan la carga del electrodo, es decir, si el electrodo es positivo, la capa estará formada por
negativos.
La segunda es la de difusión → Formada por iones que anulan la carga del electrodo, pero hay
una mayor cantidad de cationes.
- Mantenimiento de la corriente gracias a la transferencia de masas des de la disolución hasta el
electrodo a través de la capa de difusión.
- El tamaño de la capa debe estar controlado, ya que si durante la difusión se hace cada vez mayor,
la distancia que tienen que recorrer los iones es también cada vez mayor → Hecho que haría
que la transferencia de masas fuera cada vez más lenta, y la corriente cada vez menor →
SOLUCIÓN: Agitar la disolución
- Además, también tenemos que controlas la corriente, añadiendo un electrolito inerte de
concentración elevada que reparará los desequilibrios iónicos. Cuando esta controlada, pasa a
llamarse polarización del electrodo por difusión.
Corriente controlada por difusión: valor máximo cuando la C de la especie consumida se reduce
a 0.
J: Flujo de masas, que es proporcional al gradiente de C y inverso a la grosor de la capa de difusión.

VOLTAMPEROGRAMA → Diapositiva 49
POLAROGRAFÍA
• En este, el electrodo de trabajo es un electrodo de gotas de mercurio (área no constante, irá

aumentando y disminuyendo con cada gota)
• La capa de difusión es área y grosor va creciendo durante la vida de la gota
• La disolución no se agita, por lo que se creará un barrido de potencial.
VOLTAMPEROMETRÍA CON UN CIRCUITO DE MUESTREO DE CORRIENTE

Toma de medidas en momento seleccionado del barrido del potencial
VOLTAMPEROMETRÍA DE IMPULSO
Las voltamperometrías de impulso son muy utilizadas. No se aumenta el potencial siguiendo una rampa
simple, sino que, aumenta a golpes. Pueden ser:
NO DIFERENCIAL
- Los impulsos están sincronizados por un circuito de corriente

- Cada subida brusca del potencial viene seguida de un periodo en el que el potencial es cnt.
- Cuando se aplica el impulso, la corriente de capacitancia aumenta; después tiene a bajar.
- Mejora la relación señal ruido, se obtienen límites de detección mejores,
DIFERENCIAL
- Aumenta el potencial, y durante un tiempo breve se mantiene cnt, hasta que decae un poco.
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- Cuando aumenta el potencial, aumenta la corriente capacitiva; y cuando se presenta cnt empieza
a bajar.
- Las corrientes capacitivas primera y tercera se igualan y se anulan.
- Se obtiene una mejor relación señal-ruido por lo que podríamos llegar a límites de detección mas
bajos, mayor capacidad para diferenciar los analitos, es decir, mayor selectividad.
VOLTAMPEROMETRIA DE REDISOLUCIÓN
Estas pueden ser: anódicas, catódicas y de adsorción. Están divididas en las siguientes etapas:
1. Electrolisis total → se produce una deposición del material sobre el electrodo, a potencial cnt
con agitación.
2. Redisolución → el potencial no será cnt, por lo que se aplica un barrido de potencial donde la
especie electroactiva se oxidará o reducirá, produciendo corriente.
VENTAJAS: La mínima cantidad de analito necesaria para detectar el analito es muy baja: Polarografía, 10-
6 M // Voltamperometría de impulsos normal, 10–7 M // Voltamperometría diferencial de impulsos, 10–
8 M // Técnicas de redisolución,10-10 M
INCONVENIENTES: Interferencias y efecto matriz
ANÓDICA → Saplica un potencial bajo y constante. Si el potencial es bajo, significa que el analito se va

a reducir, y, se recogerá sobre el electrodo. En el caso de que se utilice un electrodo de gota de mercurio,
el analito quedará en la gota de manera preconcentrada.
- Primera etapa → potencial constante, para favorecer la reducción del analito. Posteriormente,
finaliza la agitación.
- Segunda fase → se aplica el barrido de potencial. El analito que se había recogido se oxida y
volverá a la disolución.
Es necesario controlar los factores que afectan a la corriente, para mantener constante el porcentaje de
analito recogido. Factores como, el tiempo de electrolisis, el tamaño de la gota, etc.
Analitos: metales capaces de formar amalgamas con el mercurio, como, por ejemplo: Bi, Cd, Cu, Ga, In,
Pb, Tl, Sn y Zn. Se puede llegar a valores de trazas, subtrazas y ultratrazas.
CATÓDICA → Los analitos que se utilizan son compuestos insolubles con

Hg (l): Como haluros, SCN-, y moléculas orgánicas con S reducido
ADSORCIÓN → En la primera etapa no se produce ninguna O/R del analito, sino que el analitos se
absorberá, se quedará depositado en la superficie del electrodo. Durante la segunda etapa, tendrá lugar
una rampa de potencial que podrá ser positiva o negativa según si se oxida o reduce.
Analitos: trazas de sustancias con potente actividad biológica, hormonas esteroides, estupefaciente y
principios activos de muchos medicamentos.
12

APLICACIONES EN ANALISIS DE INTERÉS FARMACEUTICO
Las técnicas analíticas son útiles para matrices complejas.
Potenciometría: Na+, K+, Ca2+, H+ (pH), Cl– y CO2 (disuelto), además de una serie de sustratos de
enzimas (urea, oxalato, etc.) Medio ambiente: aplicaciones importantes en medidas de pH, de fluoruro,
NH3, NO3– y otros.
Voltamperometría: determinaciones de trazas de numerosas especies químicas: cationes metálicos,

aniones inorgánicos, y sustancias orgánicas con grupos electroactivos: carbonilos (aldehídos, cetonas,
quinonas), ácidos carboxílicos, peróxidos, derivados halogenados, dobles enlaces conjugados, grupos nitro,
grupos amino, etc

SENSORES ELECTROQUIMICOS
AMPEROMETRIA
Es una técnica relacionada con la amperometría. La principal diferencia es que no se produce un barrido
de potencial, por lo que, éste será constante. Se mide la corriente en función del tiempo. Se utiliza
exclusivamente en tecnología de sensores.
SENSOR DE OXIGENO DISUELTO SENSOR DE GLUCOSA
- Tiene en un extremo una membrana permeable a los Está formado por tres membranas:
gases, en este caso al oxígeno.
- La primera, que deja pasar la glucosa.
- El electrodo de trabajo es un electrodo de platino. El
- La segunda, formada por un enzima inmovilizado.
contraelectrodo es un anillo de plata..
- La tercera, por la que pasará el peróxido de hidrógeno
- Los dos están separados de la membrana por una
formado.
disolución de KCl.
- Solo el oxígeno es el que se reduce sobre platino a un
Dentro de la membrana la glucosa se oxida a gluconolactona,
potencial constante. La corriente entre los electrodos
mientras que el oxígeno se reduce a peróxido de hidrógeno, que
es proporcional a la concentración de oxígeno.
pasará por la tercera membrana. Llegará al anillo de plata, que se
- La cantidad plata que se oxida es muy poca, por lo que,
reducirá, mientras que el oxígeno se oxidará, produciendo de
no se ve afectado.
nuevo oxígeno. La corriente será proporcional a la concentración
de glucosa.
Controlar el oxígeno en el agua es importante porque hay
especies que viven en agua, y según la cantidad de haya presente.
Tanques de depuración en agua, indicativo de las bacterias que
puedan vivir ahí.
13
TEMA 8: ESPECTROMETRÍA ANALÍTICA
FUNDAMENTOS Y CLASIFICACIÓN
Las técnicas ópticas que se utilizan implican la medida de alguna interacción entre la radiación
electromagnética y la materia. Son técnicas de uso generalizado, muy rápidas y utilizadas por su gran gama
de instrumentación disponible. Tienen también grandes posibilidades de automatización y una resolución
de problemas sin recurrir a otros métodos.
La radiación electromagnética es una forma de energía, que se transmite por el espacio, a velocidades
muy altas, y que puede escribirse como una onda. Se presenta como oscilaciones sinusoidales de 2 campos:
Uno eléctrico y otro magnético, que son perpendiculares entre sí.
La dirección en la que oscila el campo es perpendicular a la dirección en la que se propaga.

PROPIEDADES ONDULATORIAS
 Amplitud (A) → Distancia al máximo de la onda.
 Frecuencia (u) → Numero de oscilaciones por segundo. Es cnt en
cualquier medio de propagación.
 Velocidad de propagación (Vi) → Velocidad a la que se mueve la
onda. Depende del medio de propagación.
 Longitud de onda (λ) → Distancia entre dos máximos o dos mínimos
consecutivos. Las unidades varían dependiendo las técnicas empleadas
y el medio de propagación.
El modelo ondulatorio no explica los procesos asociados con la absorción y emisión de energía radiante.
 Partícula → Está formada por paquetes discretos de energía o partículas,

denominados fotones o cuantos.
 Espectro electromagnetico → Abarca un amplio intervalo de energia (u) y longitudes de onda. A
menor longitud de onda, mas energetico.
El espectro visible es una zona pequeña, el único intervalo que nuestro ojo puede captar.
CLASIFICACIÓN DE LAS TECNICAS OPTICAS
NO ESPECTROSCOPICAS: La radiación electromagnética y la ESPECTROSCOPICAS: Tienen un intercambio de energía, así que

materia interaccionan, pero no intercambian energía, no habrá tiene lugar transiciones a estados de energía superior (excitación).
transición entre los niveles de energía. Una vez aplicado el estímulo se puede medir la radiación
electromagnética.
- Dispersión (turbidimetría, nefelometría)
- Difracción (Rayos X, de electrones) - Espectroscopia de emisión: estímulo térmico o eléctrico
- Refracción (Refractómetro, interferometría) - Espectroscopia por quimioluminiscencia: reacción química
- Rotación óptica (Polarimetría, dicroísmo circular) - Espectroscopia de absorción: cantidad de luz absorbida
- Espectroscopia por fotoluminiscencia:
El estímulo puede tener lugar a niveles atómicos o a niveles moleculares, según donde se produzca:
- Niveles moleculares: UV-V, IR, fluorescencia, etc

- Niveles atómicos: absorción atómica, RX, emisión atómica, etc
LEY DE BEER
Cuando un haz de RE monocromático incide sobre

una muestra disuelta, que contiene una especie
cromófora, es decir, capaz de absorber la RE de dicha
longitud de onda. Al salir la RE estará atenuada.
La fracción de radiación incidente que transmite la disolución recibe el nombre de Transmitancia, se

expresa como porcentaje.
La Absorbancia indica la cantidad de luz que ha absorbido la muestra, está relacionada con la
Transmitancia.
Los equipos miden la potencia del haz que ha pasado a través de las celdas, que contienen el blanco y el
analito, respectivamente. Se compara, por tanto, el haz que atraviesa un blanco y el haz que atraviesa a la
muestra. Se relaciona con la concentración de una especie.

La relación entre absorbancia de luz monocromática y
concentración de una especie absorbente, se denomina Ley de Beer.
APLICACIONES
- Establecer las condiciones de trabajo: pH adecuado, disolvente, intervalo de concentraciones,
longitud de onda óptima.
- Si se conoce la absortividad molar (a) y el paro óptico (b), se obtiene la concentración.
- La absortividad molar depende del disolvente, composición y temperatura.
- Curva de calibrado que relaciones la absortividad y la concentración.
LIMITACIONES
- Sólo se cumple para radiaciones monocromáticas que atraviesan disoluciones diluidas (<0.01). a
mayor concentración se observa desviaciones de la linealidad. Si cada vez la concentración es
mayor, las moléculas estarán más juntas entre sí, y se producirán interacciones que modificarán
la absortividad y concentración.
- Variación de las propiedades en disoluciones concentradas y en diferentes disolventes.
- Las fuentes de radiación son policromática, por ello, será necesario utilizar monocromadores, que
seleccionarán una banda de longitudes de onda lo más estrecha posible. Por esto, la radiación no
será totalmente monocromática.

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV -VISIBLE
Las moléculas experimentan 3 tipos de cambios

energéticos:
1. Transferencia de un electrón de un nivel

de bajo a uno mayor de energía (transición
energía)
2. Transiciones vibracionales: inducidas por la radiación.
3. Transiciones rotacionales: inducidas por la radiación.
Hay muchas energías para cada estado, pero están relacionadas a energía de enlaces intramoleculares. Los
estados cuánticos.
- E electrónica → estados energéticos de sus distintos electrones enlazantes.

- E vibracional → asociada al elevado número de vibraciones interatómicas.
- E rotacional → movimientos rotacionales dentro de una molécula.
ESPECTROFOTOMETROS
Se encargan de la medida de la absorbancia. Están formados por los siguientes elementos:

FUENTE LUMINOSA
 Lámparas de Wolframio: [2900 K. 320-2200 nm] Trabajan en el visible y en una zona de
ultravioleta.
 Lámpara de Wolframio-halógeno: Yodo en cubierta de cuarzo que permite que la temperatura
con la que se puede trabajar sea mayor temperatura. 3500 K.
 - Lámparas de arco de deuterio: dos electrodos inmersos en deuterio. Se produce una descarga
y el deuterio produce radiación electromagnética. 200-400 nm.
SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA

Para seleccionar las longitudes de onda se emplean los monocromadores, que tienen la función de aislar bandas
estrechas y longitudes de onda. Están formados por una rendija de entrada y otra de salida, por espejos y una red
de dispersión, para dispersar la RE en diferentes fracciones. Pueden ser de 2 formas:
PRISMA: REDES DE REFLEXION

- Basados en la refracción de la luz
- Placa con surcos lineales paralelos y con igual
- Separan en bandas de luz estrechas que contienen
separación
pocas longitudes de onda
- Separan en rayos de luz con ángulos distintos en
- Cuarzo (UV) o vidrio silicatado (Vis) función de la longitud de onda
PORTAMUESTRAS
Deben de ser transparentes a la región de interés y químicamente inertes. Normalmente suelen ser de
cuarzo o de vidrio silicatado, es decir, resistentes. La calidad de los datos depende mucho de cómo se
utilizan y de su mantenimiento, por ello, deben de estar siempre lo más limpias posibles.

DETECTORES
Son dispositivos muy sensibles que emiten electrones por una superficie que inciden sobre una segunda
que se encuentra a un potencial positivo respecto del emisor.
 Aceleración de los electrones

 Extracción de más electrones que son acelerados hacia una nueva superficie.
 Repetición del proceso_ más de 106 electrones por cada fotón que incide en la primera
superficie.
 Transformación de intensidades de luz en señales eléctricas medibles.
FILAS DE FOTODIODOS
Son dispositivos semiconductores que responden a la luz formando pares hueco-electrón. Están formados
por un conjunto detectores, ordenados de manera lineal en un circuito. Sobre cada uno de dichos circuitos
puede incidir una longitud de onda. De manera que en la muestra se absorben varias longitudes de onda.
Posteriormente, pasa por el seleccionador, que selecciona cada longitud de onda, y posteriormente se
reconocen por los diferentes detectores. Se puede medir la absorbancia de todas las longitudes de ondas
que absorbe la muestra. Tienen respuestas rápidas.
CONFIGURACIONES FRECUENTES

Los espectrofotómetros UV-visibles tienen dos configuraciones:
1. Haz simple
2. Haz doble: formado por un sistema de
espejos, produce que la RE pase a la vez
por una muestra y un patrón. Esto se
realiza para comparar las dos
absorbancias, y de esta forma, se permite
eliminar radiación parásita, que no se
puede eliminar en el caso de el haz simple.
Compensa variaciones de intensidad de la
fuente y longitudes de onda.
APLICACIÓN DE LOS METODOS UV-V
Determinación de iones metálicos de transición: cuyas disoluciones tienen color, es decir, absorben en el
visible. El color que muestran no es el color de la longitud de onda a la que absorben.
Compuestos orgánicos: para aquellas especies que tienen un alto grado de conjugación. Útil tanto para:
determinar la concentración de las especies como ara determinar grupos funcionales en moléculas
orgánicas, análisis de muestras bioquímicas, seguimiento de cinética de procesos químicos y bioquímicos.

FOTOLUMINISCENCIA MOLECULAR
Una especie absorbe radicación EM y pasa a un
estado excitado. Una molécula está en estado
excitado muy poco tiempo, por lo que, vuelve en
nano segundos al estado relajado o fundamental. Este
proceso se denomina estado de relajación.
La energía puede eliminarla en forma de calor o en

forma de RE. Si se produce una emisión de radiación,
y previamente la molécula se ha excitado por
radiación, se denomina fotoluminiscencia.
La relajación vibracional del estado vibracional más energético, hasta el estado vibracional más bajo. No
es un proceso radiante. Esta relajación se produce porque las moléculas excitadas están colisionando con

moléculas del disolvente. En esas colisiones, el exceso de energía vibracional, se transmite a las moléculas
del disolvente, sin emitir fotones. Se convierte una parte de la energía absorbida en calor, y se transmite
por el entorno.
Conversión interna: La molécula vuelve al estado fundamental a través de colisiones con el disolvente.
Fluorescencia: Puede volver al estado fundamental desde el estado vibracional, emitiendo un fotón. Este
proceso se denominaría fluorescencia. La emisión fluorescente tiene menor energía que la excitación, este
desplazamiento de longitudes de onda se denomina desplazamiento de Stokes.
El camino de vuelta más probable es aquel que minimice el tiempo de vida media del estado excitado.
Debido a las diferencias de energía entre el estado excitado y fundamental son muy parecidas, en los
espectros de absorción y emisión sean muy parecidos. Es decir, uno será la imagen especular del otro. .
La fosforescencia y la fosforescencia se diferencian en el tiempo de vida. La

fluorescencia tiene un tiempo de vida corto, entre 10-8 y 10-4. La
fosforescencia tiene un tiempo de vida más largo, menor intensidad y, por
tanto, menos aplicaciones en análisis químico.
VARIABLES QUE AFECTAN A LA FLUORESCENCIA

- Moléculas con estructura capaz de absorben radiación UV-V.
- Los procesos de relajación no radiantes, los vibracionales, son más probables, minimizan el tiempo
de vida de la molécula en los estados excitados.
- Compuestos con anillos aromáticos (relajación radiante)
- Compuestos de carbonilo alifáticos y alicíclico.
- Estructuras de doble enlace conjugado.
- Favorecida en moléculas con rigidez molecular.
- A mayor temperatura, fluorescencia menos eficaz. Si la temperatura es elevada, se favorecen las
colisiones entre moléculas, por ello, favorece los procesos de relajación no radiante.
- Disolventes poco viscosos, las moléculas se moverán con más facilidad.
INTRUMENTACIÓN
 Fuente de radiación de arco de mercurio o xenón, que son más intensas que las de UV-V.
 Filtros o monocromadores.
 Dos filtros (fluorímetro)
 Dos monocromadores (espectrofluorímetro)
 La celda para la muestra está formada por las 4 caras pulidas
 El detector debe de estar a 90º para disminuir el ruido.
RELACIÓN ENTRE FLUORESCENCIA Y CONCENTRACIÓN
La energía de una molécula se relaciona con la intensidad incidente y la
intensidad que se emite. La relación se cumple a bajas concentraciones (<
0.05). siempre es necesario comprobar experimentalmente la relación
lineal.
APLICACIÓNES DE LA FLUORESCENCIA MOLECULAR
SENSIBILIDAD
La sensibilidad en métodos fluorimetricos es superior que en los basados en la radiación de UV-V. El

detector de los métodos de radiación compara dos radiaciones con concentraciones muy similares. En el
caso de los métodos fluorimetricos, el detector compara una relación con muchas mas diferencia, por
ello tiene mayor sensibilidad.
SELECTIVIDAD
La selectividad es superior en métodos fluorimetricos. No hay muchas especies fluorescentes en comparación
con las especies capaces de absorber, por ello, incrementa la selectividad. Se trabaja con dos longitudes de onda, una
de excitación y otra de emersión. Se puede seleccionar una u otra para eliminar el efecto de las interferencias.
En el caso de que haya especies no fluorescentes, la técnica se puede emplear siempre que dichas muestras sean
marcadas de manera covalente con marcadores fluorescentes.
ESPECIES INORGANICAS
 Métodos directos: Muchas especies inorgánicas en estado sólido muestran fluorescencia, esto no es
práctico analíticamente. En disolución sí, pero está limitada a la determinación de compuestos de uracilo y
elementos de tierras raras.
 Formación de quelatos fluorescentes: Combinación de un ion metálico con un ligando orgánico
[Ag+, Al3+, Cu2+, Li+]
 Métodos indirectos: Proceso de desactivación de la fluorescencia (inhibe la visión fluorescente de
otra disolución)
ESPECIES ORGANICAS Y BIOQUIMICAS

Hidrocarburos, colorantes, ácidos, aldehídos, alcoholes, compuestos nitrogenados, hidratos de carbono, pesticidas.
Las vitaminas fueron el primer grupo para los que se describieron estos métodos fluorimetricos.

QUÍMICA CLINICA
Alta sensibilidad, simplicidad y bajo coste, como, por ejemplo, la determinación de fenilamina en suero,
corticosteroides (glándulas suprarrenales), catecolaminas (sistema vascular), porfirinas, trastornos hepáticos, etc.
ANALISIS BIOQUIMICOS
Secuencia de nucleótidos en el ADN con marcas fluorescentes.
FARMACOS Y DROGAS
Métodos para diferenciar entre principios activos y metabolitos, como por ejemplo la aspirina, codeína,
morfina, quinina, etc.
ESPECTROSCOPIA ATOMICA
Solo los átomos neutros se ven envueltos en

el proceso de absorción. Es importante que no
estén ionizados.
Atomización: Se puede conseguir utilizando

una llama, mediante un horno eléctrico o

mediante plasma (diapositiva. 47)
EN LLAMA
Se utiliza mucho porque el instrumental no es complejo de utilizar. Puede ser más complicado el software
que el instrumental en sí. Son más baratos y además son muy versátiles: podemos analizar un gran número
de sustancias. Se gasta un mayor volumen de muestra.
Primero hay una etapa de aspiración y de nebulización, es decir, formación de un aerosol en la llama. Se
produce la evaporización del disolvente, disociación y atomización de compuestos inorgánicos. A
continuación, se realiza una irradiación y la muestra absorbe.
La energía proporcionada es directamente proporcional a la temperatura de la llama.
ELECTROTERMICA
En horno, se utiliza un atomizador electrotérmico. Se torna pequeños volúmenes de muestra de orden
de microlitro. Más sensible que la de llama (de uno a dos órdenes de magnitud).
Escoger uno u otro depende del coste y de la finalidad.

ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA EN LLAMA (FAAS)
TRANSFORMACIÓN EN VAPOR ATOMICO

La muestra inicialmente tiene que estar en disolución, y pasará a la cámara. Es un tubo pequeño de plástico,
normalmente, el movimiento se produce por aspiración (también puede utilizarse bombas peristálticas o
jeringas).
Si se hace por aspiración, es que las características físicas de patrones y muestras han de ser idénticas. Los
patrones han de estar disueltos en el mismo disolvente que se ha utilizado en la muestra. Si hay partícula
de polvo o no se ha preparado correctamente dificulta la medición. TEMA 2 Análisis Químico
La siguiente etapa es la de nebulización, consiste en convertir la dilución en

un aerosol. Para formar el aerosol se utiliza un tubo capilar que aspira la
muestra, de manera que, en este mismo tubo llega la aspiración a mucha
velocidad. Cuando llega a la parte final sale dispersado en forma de muchas
gotitas y se forma el aerosol.
Utilizar un nebulizador no es demasiado eficaz, solo se nebuliza entre un

5-10% de la muestra introducida. Siendo este motivo por el que la

electrotérmica se ha desarrollado siendo una alternativa a esta técnica.
Cuando se ha formado hay que transportarlo hasta la llama. Tienen que llegar gotas que tienen un
determinado tamaño, que se consigue con bolas de impacto, tabiques deflectores, etc. De esta forma se
selecciona el tamaño de las gotas.
TIPOS DE LLAMAS
Normalmente se usa un gas oxidante y un combustible. Hay tres tipos de llama:
 Aire-acetileno: de uso general. Suelen funcionar bien para casi cualquier elemento.
 Óxido nitroso-acetileno: trabaja a temperaturas más altas. Y tiene mejores límites de detección
(Si, Al, Sc). Está sujeta a menos interferencias
 Aire-hidrógeno: atomiza fácilmente Se y As.
FACTORES CRITICOS
Si tiene temperatura demasiado elevada corremos el
riesgo de que toda la muestra no sea atomizada.
Favorece también la ionización de átomos, que son
absorbidos. Además, la relación entre oxidante y
combustible puede inducir cambios de temperatura.
INSTRUMENTACIÓN
Se utiliza una fuente de radiación (cátodo hueco). No son lámparas de la espectroscopía de UV. Está la
llama/quemador, viene a sustituir a la celda que se usaba en la absorción molecular.

➔ Tenemos la entrada de aire y combustible. Monocromador. Detector y luego el sistema de
registro de datos.
La lámpara es la parte más crítica del instrumento porque los átomos presentan líneas de absorción muy
estrecha, absorben a longitudes de onda muy concretas. Se aplica el principio de que cualquier especie
química es capaz de, en condiciones adecuadas, absorber su propia radiación.
FUNCIONAMIENTO: de la siguiente forma: es un tubo de vidrio, y en la parte interna tiene un gas que
se encuentra a baja presión. Tiene un ánodo (wolframio) y un cátodo (del metal que vamos a analizar).
Se aplica una diferencia de potencial entre los

dos electrodos, y el gas que está dentro se
ioniza. Ese gas (cationes gaseosos) se aceleran

hacia el cátodo, y como consecuencia del
choque se extraen iones metálicos de la
especie que queremos determinar. Cuando
vuelven al estad fundamental, emite una
longitud de onda que absorbe el propio
elemento que se va a analizar.
Tenemos una lámpara para cada elemento,

perdemos disolución. Se han comercializado
lámparas para medir varios elementos, porque esa lámpara es una aleación de metales, y, por tanto,
podemos medir varios simultáneamente.
La OTRA POSIBILIDAD es usar lámparas de descarga sin electrodos. Tubos de cuarzo herméticamente
cerrado que contiene unos pocos mg del elemento de interés. Baja presión. Se aplica un campo intenso
de radiofrecuencias o microondas, ese gas noble se ioniza. Los iones producidos son acelerados hasta que
adquieren la suficiente Energía cinética para excitar a los átomos del metal.
El espectro a los monocromadores, así como en UV en ocasiones se necesita monocromadores de alta

resolución, en este caso son bastante sencillos. Porque las líneas de absorción suelen estar bastante
separadas. Las rendijas tienen que ser muy estrechas.
Finalmente, respecto a los detectores, se utiliza un tubo fotomultiplicador. No es interesante el espectro.

Por ello, la técnica es de tipo cuantitativo. En el caso de la molecular o fluorescencia los espectros pueden
tener utilidad para la identidad.
INTERFERENCIAS
ESPECTRALES: aquella en la que la señal del analito solapa con otros elementos o señales debidas al
entorno. La llama por sí misma también produce radiación. Señales de llama o al horno se pueden corregir
de un corrector de deuterio (para llama). La forma más sencilla es escoger otra longitud de onda, hay
elementos que absorben a varias longitudes de onda.
Hay espectrómetros de alta resolución que no se pueden aplicar las dos soluciones dadas son capaces de
resolver rayas que se encuentran muy cercanas.
QUÍMICAS: provocada por cada componente de la muestra que pueda disminuir el grado de atomización
del analito. Solución: adición de un agente liberador para que no compleje y no se formen sales insolubles.
IONIZACIÓN: es la más habitual y la más importante. Si los átomos se ionizan y disminuye la cantidad de
átomos neutros repercute en la determinación. Afecta mucho a metales alcalinos y alcalinotérreos a
temperaturas incluso bajas de la llama. Con otros elementos no. La solución es añadir un supresor de
regulación.
A veces para compensar el efecto de interferencias se suelen utilizar calibración por patrón interno.
APLICACIONES
• La absorción atómica es muy buena para análisis de trazas, detecta concentraciones muy bajas y
se cumple la ley de Beer. Pese a todo, puede ser interesante que la relación señal-concentración
es lineal. La ley de Beer no siempre cumple esto.
• Los patrones han de tener la misma matriz de la muestra, si no es posible, el calibrado de adición
estándar. Si es necesario añadir alguna especie para eliminar interferencias tienen que tenerla los
patrones y la muestra.

• Matrices en las que se pueden encontrar variedades, desde agua, suelos, bioquímica, toxicología,
etc. Prácticamente cualquier matriz.
• Metales: antimonio, cadmio, calcio, cesio, cromo, cobalto, oro, plomo, níquel, entre otros.
INCONVENIENTES
- Las muestras tienen que estar en disolución. Muestra en estado sólido no se vaporaría con la
misma efectividad. Muestra que no se haya encontrado ningún disolvente en el que sea soluble.
- Necesitamos un volumen de muestra importante. Enseguida, el instrumental comienza a absorber.
- La llama tiene un gas oxidante y el combustible. Si no se ha quemado bien el gas con la combustible
queda un poco de gas que puede tener un efecto de dilución en la muestra.
- Se ha de comprobar que el flujo de gas y combustible sea el adecuado.
- Para ciertos elementos refractarios necesitan de temperaturas tan altas que las que se alcanzan
con estos equipos son temperaturas insuficientes (B, W, Ta, Zr).
- En caso de análisis multielemental es tediosa (pesada)
VENTAJAS
- Tiempos de análisis con cortos.
- Interferencias químicas no son significativas.
- Análisis rápido de uno o pocos elementos de muchas muestras.
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CARACTERÍSTICAS ANALÍTICAS
 Linealidad de la ley de Beer.
 Buena precisión
 Límites de detección najo, que sirven para análisis de trazas de concentraciones
muy pequeñas.
ESPECTROMETRÍA DE ATOMIZACIÓN ELECTROTÉRMICA (ETAAS)
Existen algunos métodos sin llama, para generar la población necesaria de átomos libres. Como puede
ser: Aquí, el atomizador, es un tubo de grafito abierto por los dos extremos, y ajustado a contactos
eléctricos.
La temperatura del horno se podrá aumentar y variar según la aplicación de diferentes potenciales. Para
prevenir la oxidación de los elementos, se hace pasar una corriente de gas, de N o Ar.
Se realizan una serie de pasos para su

procedimiento:
- Secado: eliminación del disolvente.

Proceso lento.
- Mineralización: eliminar especies no deseadas (materia orgánica) Proceso lento.
- Atomización: Volatilización del residuo sólido y formación del vapor atómico. Necesaria rapidez
para poder alcanzar la temperatura de atomización.
VENTAJAS
- Sensibilidad elevada
- Volúmenes de muestra pequeños (0.5-10 L)
- Tratamiento de la muestra “in situ”
INCONVENIENTES
- Menos reproducibilidad (5-10%)
- Interferencias
- Mayor tiempo de análisis
- Intervalo analítico inferior a dos órdenes de magnitud
- Mayor precio
SENSORES OPTICOS
Un sensor es un dispositivo capaz de responder de forma continua y reversible a la variación de un

parámetro fisicoquímico o a la variación de la concentración de una determinada especie química.
Ejemplos: termómetro Hg, papel indicador pH, etc.
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Es importante ya que da el resultado con gran rapidez. No necesitan muestreo, ni añadir reactivos (que
todas esas operaciones introducen errores, por tanto, no induce errores).
Se trabaja mucho en la actualidad, ya que ahorra en tiempo análisis y personal.
Los más conocidos son:
- Sensor de oxígeno: puede ser capaz de regular la señal de luminiscencia de diversos colorantes
Quenching (Amortiguación): Cuando el oxígeno se encuentra presente en una disolución
proporciona un camino no radiante a la desactivación que disminuye la emisión de la molécula
excitada, por tanto, depende de la concentración el amortiguador. Por lo que seremos capaces
de determinar la concentración de oxígeno y su variación en distintos procesos.
- Sensor de CO2: la presencia de él puede inducir cambios de pH, basados en un cambio óptico.
Fundamentalmente es una membrana de teflón disuelta en tampón carbonato. Si tenemos CO2
disuelto cambia el pH del tampón y el indicador de pH hace evidente el cambio.
Los avances más significativos, son su acoplamiento a técnicas convencionales con fibras ópticas.
12

TEMA 9: INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS
CROMATOGRAFICO
CONCEPTO Y CLASIFICACIÓN DE LAS TECNICAS
CONCEPTO
El análisis cromatográfico tiene un amplio abanico de técnicas que tienen como objetivo separar los
componentes de una muestra compleja a lo largo del tiempo, a través de la interacción entre 2 fases:
- Fase estacionaria (inmóvil)

- Fase móvil (en continuo movimiento a través de la fase estacionaria)
Los componentes interaccionan de forma diferente entre las fases. De este modo, se distribuyen de una

manera u otra, y con el tiempo los componentes son separados.
Las técnicas afines, son aquellas en las que tiene lugar un proceso electroforético, o aquellas en las también
tiene lugar un proceso cromatográfico. Hay 2 técnicas muy importantes:
- Electroforesis capilar → Formada por una sola fase líquida. La separación de produce por
electroforesis.
- Electro cromatografía → Formada por dos fases. La separación se produce por una combinación
de electroforesis y cromatografía.
CLASIFICACIÓN
SEGÚN EL ESTADO FÍSICO DE LA FASE MOVIL
 Fase gaseosa: cromatografía de gases o cromatografía gaseosa (CG).

 Fase líquida: cromatografía de líquidos o cromatografía líquida (CL).
 Fluido supercrítico: cromatografía supercrítica (CS).
Un fluido supercrítico es un compuesto químico que se encuentra en unas condiciones de presión y

temperatura superiores a las de su punto crítico. Cuando el compuesto se encuentra en dichas
condiciones, se considera un híbrido que se difunde como un gas, pero disuelve como un sólido. Si se
trabaja con una fase móvil con un fluido supercrítico la toxicidad es mucho más baja, porque no utiliza
disolventes tóxicos.
SEGÚN LA NATURALEZA DE LA FASE ESTACIONARIA Y SU RETENCIÓN

 Cromatografía de gas-líquido: Mas utilizada que la cromatografía de gas-solido, por ello, si no se
especifica, siempre será gas-líquido
[ Exclusión molecular → Separa los componentes en función de su tamañi ]
CROMATOGRAFÍA DE GASES
- Fase móvil: mero vehículo de transporte de los

analitos (estado gaseoso)
- Separación: producto de su equilibrio entre su

estado gaseoso y su disolución en la fase
estacionaria (líquido).
- Muy utilizada en la separación de todo tipo de
solutos volátiles a alta temperatura (hasta 350-
450ºC). Ej: hidrocarburos, pesticidas, azúcares y
alcoholes.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
- Fase móvil: intervención activa en la separación. Mayor número de factores a modificar, como el pH, el
solvente, la concentración, el tampón, introducir un aditivo a la fase móvil, etc.
- Separación: compuestos de muy diversas polaridades y en un intervalo de masas moleculares muy amplio
sin limitación de volatilidad.

TIPOS DE DESARROLLO
ELUCIÓN ZONAL / ELUCIÓN POR BANDAS

 Es la más utilizada
 Se introduce toda la muestra, de una vez, ocupando una franja estrecha.
 Elución con flujo continuo de fase móvil, también durante la inyección.
 La fase estacionaria retiene a los analitos, para ello, esta fase deberá tener afinidad por
dichos analitos para que queden retenidos.
 La fase móvil fluye a través de la fase estacionaria y hace avanzar en la dirección del
flujo.
 Los componentes más retenidos viajarán a menos velocidad y eluyen más tarde.
Aquellos que tienen más afinidad por la fase estacionaria, el equilibrio le cuesta más
tener afinidad por la fase móvil.
 Salida del sistema → un compuesto saldrá primero que el otro. Para detectar cual es,
se añade un detector en la salida, se emplea un cromatograma. Tiene la función de
identificación y cuantificación.
 Obtención de picos aislados (idealmente)
Las separaciones son rápidas y reproducibles. Permite la diferenciación de solutos con propiedades
similares.

ELUCIÓN FRONTAL
 Se emplea la propia muestra como fase móvil, y solamente bombeará la muestra
una vez, cuando llegue al final habrá finalizado. De manera que algunos
componentes quedarán retenidos de forma selectiva, respecto a otros.
 Un componente avanzará más rápido que otro dependiendo de la afinidad de
éste por la columna. En ocasiones se produce la elución de los componentes
cuando el sistema está saturado con alguno de ellos.
 Se obtienen frentes con los solutos que han alcanzado la saturación.
Permite preconcentrar trazas y purificar grandes volúmenes de disolvente. Para análisis
y cuantificación es más utilizada la elución zonal.
PARAMETROS FUNDAMENTALES
GEOMETRICOS
Dependen únicamente del diseño físico del sistema separador, es decir, el

cromatógrafo, siendo independientes de las condiciones de trabajo y de la naturaleza

del soluto:
- Volumen ocupado por el soporte sólido. Cuando la fase es líquida se necesita un soporte sólido.
(Vss)
- Volumen ocupado por la fase estacionaria. Esta fase puede estar enlazada a un soporte sólido.
(Vs)
- Volumen ocupado por la fase móvil (Vm)
- Volumen total (Vt)
- Longitud de la columna (L)
En el caso en que la fase sea sólida, ella misma

será el soporte. En el caso de que se trabaje
con columnas capilares, el volumen del
soporte sólido será cero, y el volumen que
ocupa la fase estacionaria sería la superficie interna del capilar por el espesor de la fase enlazada.
El volumen ocupado por la fase móvil se denomina volumen muerto, que es el volumen que ocupa dentro
de la columna más todo el volumen de la fase móvil que ocupe otras zonas del cromatógrafo, es decir,
todos los espacios accesibles a los solutos:
- Volumen interno del inyector.

Vm = volumen de fase móvil
- Volúmenes internos de tubos y conexiones.
que se necesita para eluír un
- Espacios entre las partículas del relleno y los poros de las partículas.
soluto no retenido por la fase
- Volumen interno de la celda de detección.
estacionaria.
- Accesibilidad de los solutos a los poros de las partículas.

MODOS DE DETERMINARLO:
• Inyectar un compuesto que no presente retención en el sistema, es decir, que no interaccionará
con la fase estacionaria. Este tipo de compuestos se denominan marcadores de volumen muerto.
• Determinar la primera perturbación de la línea base que se produce al inyectar una disolución
con una composición distinta a la mezcla de disolventes de la fase móvil. Es decir, se producirá la
señal debido a la diferencia de composición.
MARCADORES DE VOLUMEN MUERTO → KBr, Uracilo, Urea
OPERATIVOS
Dependen de las condiciones de trabajo, siendo independientes de la naturaleza de los solutos:

- Tiempo muerto o tiempo que utiliza un soluto no retenido para atravesar el sistema.
- Velocidad promedio de la fase móvil → distancia que recorre la fase móvil en la unidad de
tiempo.
- Caudal volumétrico (F) → cociente entre cualquier volumen de fase móvil y el

tiempo utilizado por dicho volumen en atravesar el sistema.
(Si la columna es capilar, en ese caso, el producto de pi por r cuadrado)
CARACTERÍSTICAS DE LOS SOLUTOS
Dependen de la naturaleza de los solutos y de parámetros operativos y geométricos:
- Razón de distribución (Kd)

- Volumen de retención (Vr)
- Tiempo de retención (tR)
- Factor de retención o retención relativa
(k): Relación entre la masa de solutos en la
fase estacionaria y la masa de soluto en la
fase móvil.
Otras características de K son:
- Retraso cromatográfico en unidades de tiempo muerto → Parámetro normalizado.

- La diferencia (Tr-To) es el tiempo de retención corregido
- Parámetro característico del soluto, útil para realizar comparaciones entre sistemas,
- Independiente de la longitud de la columna y del caudal
TEORIAS DE LA CROMATOGRAFIA
En una separación cromatográfica intervienen simultáneamente procesos de equilibrio y procesos de

difusión La separación puede explicarse desde el punto de vista del equilibrio químico. Como la fase móvil
fluye por dentro de la fase estacionaria, los
solutos se mueven, por ello, interviene un
aspecto dinámico que interviene en la
separación cromatográfica.
Las 2 teorías, explican 3 fenómenos
básicos:
ENSANCHAMIENTO
Dentro del sistema cromatográfico se produce un ensanchamiento de bandas. Inicialmente se inyecta una
muestra, que puede contener uno o varios solutos. Conforme pasa el tiempo, el soluto quedará retenido
en la fase estacionaria, de manera que, al pasar el tiempo, pasará más fase móvil y se irá diluyendo. Al final,
se observa una banda que tiene una determinada anchura, en lugar de una banda con un pico estrecho.
Este fenómeno se explicó muy bien con la teoría del

equilibrio químico. Con una serie de embudos y

fases miscibles, se producía una transferencia de una
de las fases a la otra. se observaba que tenían
concentración de soluto estaba repartida en
muchos tubos.
ESTRECHAMIENTO RELATIVO
Se produce un estrechamiento del espacio que ocupa la fase móvil. El volumen de fase móvil que se gasta
aumenta más rápido que el volumen ocupado por el soluto. Al inyectarlo ocupa un determinado volumen,
al cabo del tiempo, como está siendo retenido por la fase
estacionaria, la fase móvil llega al final del sistema
separador. De manera que, si se compara el espacio que
estaba ocupando el soluto al inicio, finalmente, este espacio
será menor.
Se produce un estrechamiento de la banda del soluto,

como consecuencia de que aumente la banda de la fase
móvil.
MIGRACIÓN DIFERENCIAL
Se produce una migración de las zonas ocupadas por los solutos. Los solutos migran de diferentes
velocidades.
Actúa a favor de la separación, pero el estrechamiento de bandas y el estrechamiento relativo, van en

contra de la separación. La combinación de los tres da lugar a la separación.

TEORIA DEL EQUILIBRIO (EFICACIA CROMATOGRAFICA)
- Está basada en la teoría de platos.

- División de la columna en un numero imaginario de secciones o platos
- Permanencia del soluto durante un tipo finito en cada plato (equilibrio) y transporte de un plato
al siguiente
- El número total de platos será la eficacia
- Idéntica constante de distribución del soluto en todos los platos e independiente de su
concentración
Interesa que los picos sean cuanto mas estrechos mejor.
MEDIDA EXPERIMENTAL DE LA EFICACIA

 Altura equivalente a un plato teórico (H) → Más eficaz cuanto menor es H
 Eficacia total del sistema → Mediante el numero total de platos teóricos con los que
esta funcionando.
 Sistema más eficaz a mayor N
¿Como aumenta N?

- Cuando mayor es N, el pico es más estrecho.
- Diferente en una misma columna, dependiente de la naturaleza del soluto y de cómo interacciona con la
fase estacionaria y la fase móvil. Si está muy retenido, el pico será mucho más ancho y la eficacia será
menor.
- Aumentar la longitud de la columna, aunque aumentaría el tiempo.
- Disminuir el tamaño de las partículas.
- Disminuir la viscosidad.
- Aumentar la temperatura.
- Disminuir los efectos extracolumnares (bomba, inyector, etc).
TEORIA DINAMICA (ECUACIÓN DE VAN DEEMTER)
El ensanchamiento de picos se debe a 3 procesos de difusión, representando cada uno un termino distinto
de la ecuación de velocidad →
• Termino constante, A: Difusión de remolino

• Termino inverso (B/u): Difusión molecular longitudinal
• Termino proporcional (Cu): Retraso en transferencia de masa
Termino constante:
- La fase móvil avanza más rápido por los canales anchos

- El flujo es más rápido por el centro que por los lados
- Hay moléculas que siguen caminos más rectos y otras más
largos

Termino inverso:
- Flujo de soluto de las zonas de mayor concentración hacia las zonas de menor concentración en
la dirección del eje de la columna
- Ensanchamiento proporcional al tiempo de permanencia en el sistema
Termino proporcional (retraso en transferencias de masa)
- De la fase móvil a la estacionaria y de la fase estacionaria a la móvil

- Disminución de C: reducción del espesor de la fase estacionaria, de los espacios libres accesibles
a la fase móvil, profundidad de los poros y viscosidad de las fases.
RESOLUCION

 Medida del grado de separación entre dos solutos.
 Depende de la separación entre los picos y de su ensanchamiento.
Factor de selectividad: Sólo tiene en cuenta la retención. En el numerado se pone el que tiene más
retención
- alfa = 1: no es posible separar el par de picos,

- alfa > 1: los dos solutos se separan fácilmente con el sistema cromatográfico utilizado
La selectividad se define siempre respecto a un par de solutos, y es distinta para cualquier otro par de
solutos.
ECUACIÓN DE SNYDER
- Se debe medir la anchura de los picos.
- Ampliamente utilizada por su sencillez.
- No es una medida normalizada ni asociada a un par de picos.
COMBINACIÓN ECUACIÓN DE SNYDER, K Y N

- R combinación de tres factores: eficacia global (N), selectividad (alfa > 1) y
retención.
- Variación de R al modificar estos factores.
TEMA 10: CROMATOGRAFIA DE GASES
COLUMNAS Y FASES ESTACIONARIAS
FASE MOVIL: Gas que no interacciona con los solutos, solamente los arrastra.
FASE ESTACIONARIA: Superficie activa de un solido, un liquido depositado sobre las partículas de un
soporte sólido (columnas de rellenos) o en las paredes del tubo (columnas capilares), ya sea por mojado
o por unión química (fase enlazada). Responsable de la separación que tiene lugar dentro del sistema.
Este tipo de cromatografía se aplica a compuestos que son volátiles,
Según como sea la fase estacionaria encontramos:
• Solido activo: (Cromatografía gas-sólido o de adsorción) → separación de compuestos que son gases

a temperatura ambiente, como CO, CO2 , N2 , NH3
• Líquido (Cromatografía gas-líquido o de reparto) → separación de todo tipo de compuestos
suficientemente volátiles a la temperatura de trabajo.
Aunque la técnica se puede extender a compuestos no volátiles, siempre y cuando por formación
de derivados volátiles mediante derivatización: como es el caso de los azúcares que se silian (los
grupos –OH se transforman en grupos sililo, −O−Si(CH3 )3) , y los ácidos grasos se transforman
en sus correspondientes ésteres metílicos.
Por su amplia aplicación, se entiende que cuando se habla de cromatografía de gases, se entiende que se
trata de la cromatografía de gas líquido, o de reparto.
Normalmente suele utilizarse fases estacionarias enlazadas, para separar los solutos apolares de los polares:
• F. Apolares: Retienen a los solutos mediante fuerzas hidrofóbicas. Las más habituales están
compuestas por poli-dimetil-siloxano (PDMS) [–O–Si(CH3 )–]n, que son polímeros de alto peso
molecular para el análisis de compuestos apolares.
• F. Polarizables:. Las más habituales son PDMS con una cierta proporción de grupos fenilo (5%)
poli-difenilsiloxano. Para compuestos polarizables (dobles enlaces, anillo aromático, etc)
• F. Polares: PDMS con una proporción elevada de grupos propil-fenil y propil-ciano. Para
compuestos polares (alcoholes, cetonas, ésteres, etc)
• F. Muy polares: PDM con proporciones elevadas de propil-ciano y fases de polietilenglicol (PEG,
H−[−O–CH2 –CH2 –]n –OH), para analizar compuestos muy polares y con protones ácidos
como los alcoholes.
La separación se realiza de acuerdo con la afinidad de los solutos hacia la fase estacionaria.
CARACTERÍSTICAS DE LAS COLUMNAS
Están formadas por un tubo que puede ser de diversoso materiales, dentro del cual se encuentra algún
tipo de fase estacionaria, descritas anteriormente. Las características son en cada tipo de columna:
COLUMNA DE RELLENO
- Rellenas de un material poroso como sílice, a las que se enlazan polímeros de alto peso molecular.
1
- Tubos de acero inoxidable, vidrio o teflón, de 1 a 10 m de longitud en un rollo para poder
introducirlas en el horno
- Diámetro interno: de 2 mm a 4 mm
COLUMNAS CAPILARES ABIERTAS

- La fase estacionaria es la pared interna de un tubo capilar sin relleno, o su recubrimiento.
- Son tubos de sílice con recubrimiento de poliimida para evitar su ruptura.
- Permeabilidad hacia los gases mayor que las de relleno, por eso tienen longitud grande sin
presiones elevadas
- Una longitud desde 15 m hasta 90– 120m
- Diámetro interno: de 50 a 530 µm
COLUMNAS CAPILARES MIXTAS

Las paredes están recubiertas por una capa de soporte absorbente con un canal central abierto.
COMPONENTES DE UNA CROMATOGRAFIA DE GASES

- Suministro de gas comprimido
- Reguladores de presión
- Caudalímetro o rotámetro (mediador del caudal), a la
salida de la columna
- Módulo de inyección
- Horno de columnas
- Detector, o detectores
- Sistema informático de adquisición, tratamiento y
presentación de datos
- Tubos y piezas de conexión
No existe ningún tipo de interacción química entre el gas utilizado como fase móvil y los analitos
GAS PORTADOR
- Es un simple portador, y su naturaleza no influye sobre la selectividad
- La difusibilidad de los solutos es mayor si el gas es menos viscoso, y se incrementa la velocidad a
caudales altos
- El mejor es el H2 (menos viscoso) seguido de He y N2
- Se evita el O2 o aire para evitar los riesgos de oxidación de analitos o de la fase estacionaria
- También hay que tener en cuenta: Peligrosidad, detector y precio [El He es mas caro que el H2,
y un recurso no renovable; el H2 es muy explosivo y reactivo con O y oxidantes]
MODULO DE INYECCION
- Tiene la misión de vaporizar la muestra y incorporarla a la corriente del gas portador que va a la
columna

- Vaporización → Es una etapa crítica, tiene que ser lo más rápida posible, para mantener la eficacia
y no se discrimine ningún componte de la muestra.
- Esta formado por un bloque metálico con regulación de Tº independiente de la Tº del horno
- Las muestras se inyectan mediante inyección automática i manual, pinchando a través de un sello
(septum) de caucho de silicona con una jeringa Hamilton. Para inyectar volúmenes muy pequeños.
VAPORIZACIÓN
En el inyector, la muestra se vaporiza en una cánula (liner) para ser arrastrada por el gas portador hacia
la columna y ocupe una franja estrecha. Fabricadas en cuarzo, vidrio o sílice Sus funciones son:
- Proporcionar un espacio y tiempo suficiente para que la muestra

se vaporice por completo, y los componentes volátiles
producidos se mezclen bien antes de que entre en la columna
- Proteger la columna de los restos no volátiles de las muestras que
se van acumulando en la cámara de volatilización, que debe
limpiarse o reemplazarse periódicamente
Hay diferentes modos de vaporización seguida de inyección:

 Inyección con derivación (o división) de la muestra (split injection): La muestra se volatiliza en la
cánula, pero sólo una fracción del vapor producido entra en la columna. El resto se desecha a
través de la salida o purga de derivación. Eficacias elevadas. Pérdida representatividad. LODs altos,
debido a que las cantidades son muy pequeñas.
 Inyección sin derivación (splitless injection): La muestra se volatiliza también en la cánula, y casi
todo el vapor producido entra en la columna. Cuando se trabaja sin división, la eficacia es más
baja. Se mantiene la representatividad. LODs bajos.
 Inyección directa en columna: Volatilización directa de la muestra en la cabeza de la columna. Uso

de una aguja más larga para que su extremo penetre hasta el comienzo de la columna. Todo el
vapor producido entra en la columna. Alta representatividad, pero la ausencia de discriminación
de masas incrementa los LODs. Esta es:
- Menos reproducible que en cánula

- Riesgo de estropear la columna (componentes no volátiles), ya que pueden quedar
depositados en la columna.
- No permite realizar división de la muestra (uso de columnas capilares). Estas columnas
requieren dividir siempre la muestra para que no se produzca sobrecarga.
- Reservada para casos especiales: análisis de solutos térmicamente inestables, que pueden
sufrir degradación en contacto con los materiales de la cánula
En los últimos años, es también muy popular en cromatografía de gases, la técnica de espacio de cabeza.
En esta técnica:

1. Muestra en un vial que se calienta para
formar el producto volátil que ocupa
la atmosfera por encima de la
muestra, conocido como espacio de
cabeza.
2. Producto volátil transferido al
cromatógrafo de modo manual o
automático
3. Análisis de compuestos volátiles en
muestras sólidas o líquidas. Se libera el
compuesto volátil por desorción
térmica.
4. Aplicación en: Alcoholes en sangre, disolventes residuales en productos farmacéuticos, aromas en
bebidas y alimentos y fragancias en perfumes y cosméticos

5. No adecuado para compuestos volátiles de alto punto de ebullición
DETECTORES
Los detectores en cromatografía de gases se pueden clasificar
en:
SIN BARRIDO
DETECTOR DE IONIZACIÓN DE LLAMA (FID)

- Es uno de los más utilizado
- Como gas portador se suele utilizar N2
- A la salida de la columna el gas se mezcla con pequeños caudales
de H2 y aire con el fin de mantener la llama.
- Esta llama quema dentro de un anillo conectado a un potencial
de tierra.
- La punta de quemador esta conectada a un elevado potencial
- En ausencia de portadores de cargar en el gas, la corriente eléctrica entre el anillo y el quemador
es cero. Pero cuando el analito es orgánico, se origina una corriente eléctrica.
- Sensibilidad: proporcional al número de átomos de carbono oxidables. Disminuye al aumentar la
sustitución con halógenos, aminas y oxhidrilos. Contribución nula de carbonilos.
- LODs: Muy bajos, en compuestos con C oxidables.
- RDL: Muy amplio (7 órdenes de magnitud)
- Otros: Adecuados para columnas capilares. Estable, sencillo y robusto. Pero tienen la desventaja
de ser destructivo, por lo que no pueden ser acoplados a otros detectores.
Encontramos detectores derivados de FID que hacen a los detectores más sensible y específicos, como
es el detector de nitrógeno-fosforo, NDP →
▪ Inserción en el seno de la llama de una esfera de silicato o rubidio, que mediante una
resistencia eléctrica se mantiene a altas Tº catalizando la descomposición de N y P,
produciendo una gran cantidad de iones y un aumento de la corriente eléctrica entre el
anillo y el quemador.
▪ Aumenta la sensibilidad debido al N y P. Es decir, tiene límites de detección muy bajos
para estos compuestos.
DETECTOR FOTOMETRICO EN LLAMA

- Este es selectivo para compuestos de P y S.
- No mide corriente, sino radiación emitida por llama.
- Genera un aislamiento de radiación emitida por compuestos de P y S
- Sensibilidad: 100000 veces más sensible que el FID a compuestos de
PyS
- Importante en estudios de plaguicidas y otros contaminantes.
DETECTOR DE CAPTURA ELECTRONICA

Los electrones rápidos se generan por un isótopo radiactivo: 63Ni.
- Electrones rápidos: se pierden chocando con las paredes.

- Electrones lentos: corriente entre la carcasa (cátodo), y el ánodo colector.

elento + soluto soluto-
- Cuando eluye un soluto electrófilo, éste capta los electrones y

la corriente disminuye (proporcional a la concentración)
- Cuando no hay solutos hay corriente, mientras que cuando
haya, la corriente disminuirá.
- Solutos fuertemente electrofílicos (derivados halogenados) →
LODs muy bajos.
- Detección y determinación de pesticidas y otros compuestos
que contienen bromo, cloro o flúor en sus moléculas.
- Compuestos halogenados: 1000 veces más sensible que el FID.
- LODs del orden de unos pocos femtogramos (1fg=10-15g) por
segundo.
- Importante en análisis ambiental.
CON BARRIDO
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
Espectrometría de masas → Las moléculas de los analitos en fase gas se hacen colisionar con electrones,
átomos de helio, etc., para ionizarlas y romperlas en unos pocos fragmentos.
Espectro de masas → Cantidad o abundancia de la molécula ionizada y de los fragmentos iónicos

recogidos a valores crecientes de la relación masa/carga (m/z)

Para moléculas pequeñas la ionización da sobre todo iones con una única carca [z = +1, o z = –1]
Para moléculas grandes, como pueden ser proteínas, suelen dar iones con varias cargas.
Si la energía comunicada es baja:
- Se pueden obtener moléculas ionizadas sin fraccionar y con un electrón menos → M+· ("ión
molecular")
- Con un protón de menos (M – 1)
- “Aductos”: molécula con un protón de más (M + 1) +, o un ión sodio de más (M + 23)+, o un
ión amonio de más (M + 18)+
Si la energía comunicada es la suficiente:
- Ruptura de la molécula en fragmentos y reducción de la abundancia (o intensidad) del ión

molecular, pudiendo llegar a cero
- La abundancia de los principales fragmentos iónicos o “transiciones” crece.
- Picos de los fragmentos → Dan información sobre la estructura moléculas, es decir, de la
presencia de un grupo metilo u otras cadenas alquílicas, grupos funcionales, anillos aromáticos


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TEMA 1: INTRODUCCIÓN A LA QUÍMICA ANALÍTICA

El Objetivo principal es la resolución de problemas planteados como consecuencia de la actividad

Reservados todos los derechos.

• Principio o proceso: Constituye el fundamento de la técnica. Puede ser puramente físico,

• Procedimiento: Descripción detallada de un método analítico.

• Determinación: Análisis de la muestra para establecer la concentración del analito.

Reservados todos los derechos.

• Medida: Determinación experimental de las propiedades químicas o físicas de un analito.

• Análisis cualitativo: Identificación de elementos, iones o compuestos presenten en una muestra.

• Análisis cuantitativo: Determinación de la cantidad presente de uno o más de ellos.

• Análisis estructural: Distribución de los componentes de la muestra,

El proceso analítico es el conjunto de etapas sucesivas, realizadas en un

Me han encerrado aquí ¿alguien puede leer esto?

• Búsqueda bibliográfica de la información.

SELECCIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO

• Exigencias en la calidad de resultados (exactitud, precisión, etc)

• Concentración del analito en la muestra (escala de trabajo)

• Presencia y concentración de interferencias.

TOMA Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Reservados todos los derechos.

TRATAMIENTO Y EVALUACIÓN DE RESULTADOS

• Evaluación de los resultados.

Me han encerrado aquí ¿alguien puede leer esto?

Reservados todos los derechos.

Un importante aspecto del desarrollo, producción, distribución y uso de medicamentos es su análisis. En

Durante el desarrollo de un nuevo producto farmacéutico es necesario realizar estudios químicos de la

• Los diferentes tipos y niveles de impurezas.

• La velocidad de degradación del producto.

• Los métodos de análisis que permitan su monitorización.

• La determinación de sus productos de descomposición, su toxicidad y sus productos

Me han encerrado aquí ¿alguien puede leer esto?

TEMA 2: TOMA, CONSERVACIÓN, TRANSPORTE Y

Reservados todos los derechos.

REPRESENTATIVIDAD DE LA TOMA DE MUESTRA: Para que

• Estado físico de la población.

• Heterogeneidad del lugar de la toma de muestra

• Número y tamaño adecuado de porciones tomadas

• Conocimiento de los factores de distorsión (tiempo,

¿COMO EVITAR ALTERACIONES EN LA MUESTRA?:

• Absorción de humedad Adición de estabilizadores químicos

• Perdida de partículas Congelación para evitar degradación

• Absorción componentes Adsorción sobre fase sólida

ASPECTOS ESTADISCTICOS DE LA TOMA DE MUESTRA:

▪ Sm: Varianza del método analítico, que se calcula a partir

¿CÓMO REDUCIR LOS ERRORES DEL MUESTRE O?:

▪ Selección del número de muestras de laboratorio, que se

Se puede calcular la incertidumbre relativa, y a partir de ella obtenerse el número de muestras a

Reservados todos los derechos.

• Trituración y homogeneización: Los materiales duros se triturarán en molinos de bolas, y los

• Técnicas de separación extractivas

• Otras técnicas de aislamiento y reconcentración

Me han encerrado aquí ¿alguien puede leer esto?

CENTRIFUGACIÓN: Selección de las condiciones (tiempo y revoluciones)

• La disolución se acelera aumentando

• La disolución puede basarse en:

° VENTAJAS: Bajo coste

° DESVENTAJA: Pérdida de compuesto volátil

Digestión en horno de microondas

- Se utiliza una bomba (recipiente cerrado herméticamente)