Conceptos Basicos de Bacteriología
Conceptos Basicos de Bacteriología
Conceptos Basicos de Bacteriología
Bacteriología
CONCEPTOS BASICOS DEClínica
BATERIOLOGÍA
PROF. MARIBEL FIGUEROA PENA
COLEGIO DE TECNÓLOGOS MEDICOS DE PUERTO RICO
Al completer esta conferencia, el
Tecnólogo Médico será capaz de:
1. Mencionar algunos fundamentos de toma, preservación,
almacenamiento y transporte de muestras.
2. Identificar muestras inadecuadas para procesar.
3. Enumerar características macroscópicas en una muestra.
4. Resumir cual es el propósito del análisis microscópico de una
muestra y como se realiza el mismo.
5. Mencionar los principales medios de cultivo y sus características.
6. Enumerar distintos procedimientos para la identificación
bacteriana.
7. Reconocer principios básicos de sensitividad a antibióticos.
Introducción
La Microbiología es la ciencia que estudia diferentes microorganismos a
saber: parásitos, virus, hongos y bacterias.
Esta es especialmente
abundante en nuestro
intestino grueso donde
millones de estos
habitantes se
encargan de
protegernos contra
bacterias patógenas.
Microbiota
degradar alimentos
sintetizar vitaminas
mantener la piel saludable
estimular el sistema inmunológico
La mayoría de nuestra microbiota reside en el intestine.
Colectivamente tiene un peso de aproximadamente 4.4lb.
Requerimientos ambientales
Patógenos oportunistas
Patógenos verdaderos
Lipid A
Core polysaccharide
O side chain or O antigen
Infección severa
con bacterias
gram negativas.
Exotoxinas – gram positivos y negativos
Bacillus anthracis Anthrax
Aislar …
Se necesita conocer los requerimientos de crecimiento bacteriano
para poder seleccionar el medios(s) necesarios para el cultivo
primario y optimizar la probabilidad de aislamiento efectivo.
Identificar…
La caracterización microscópica y la subsiguiente observación de
diferentes patrones bioquímicos, son la base de los sistemas de
identificación utilizados hoy día.
Recientes avance en área de la Biología Molecular tales como
Amplificación de ácidos nucleicos y MALDI-TOF --- matrix-assisted
laser desorption/ionization--- han reemplazado las bioquímicas,
pero no en todos los escenarios.
Aislar – Identificar - Analizar
Analizar…
Tanto la estructura celular, como sus patrones bioquímicos son la
base para determinar la sensitividad a agentes antimicrobianos de
una bacteria.
ANTICOAGULANTES
Se usa en muestras de sangre, medula osea y fluido synovial.
El mas usado es Sodium Polyanethol Sulfonate - SPS
Heparina – para aislar Mycobacteria en sangre.
Transporte
Paso muy importante en el procesamiento de muestra, sin
embargo, no todas las muestras pueden ser procesadas tan pronto
se reciben.
Existe un protocolo de prioridades :
Nivel 4 – Preservadas
escreta/orina con preservativos. Hisopos
Gram + Gram -
Primary stain- Stains purple Stain purple
Crystal violet
India ink
Permite apreciar la cápsula que rodea algunas levaduras
como es el Cryptococcus spp.
Observación e interpretación de cultivos
La habilidad de reconocer y describir la morfología de la colonia en
medios de cultivo , junto al gram stain, facilitan el proceso de
identificación inicial de un microorganismo.
MEDIOS SELECTIVOS
Tienen agentes que inhiben el crecimiento de ciertas especies y permite
recobrar patógenos que resisten estos agentes inhibidores.
Modified Thayer Martin – Neisseria spp.
MEDIOS DIFERENCIALES
Medios basados en la habilidad de algunas bacterias de utilizar sustratos
que usualmente producen cambios en pH y se detectan por cambios en
en el color del medio el cual posee indicador de pH.
MacConkey agar (MAC) selectivo y diferencial
MEDIOS PRIMARIOS
Crece prácticamente todo . Agar sangre(SBA) y agar chocolate(CHOC
agar)
Medios selectivos y diferenciales
Thayer-Martin
MAC agar SBA agar agar
Identificación bacteriana
PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y METABÓLICAS
Utilizado ampliamente .
Su mayor ventaja: detecta agentes infecciosos difíciles ó imposibles de cultivar .
Virus y bacterias de transmisión sexual __
Treponema pallidum , Chlamydia trachomatis
Algunas de las pruebas mas utilizadas en el laboratorio clínico:
EIA - Enzime Immunoassay – Bordetella pertussis
IFA - Indirect Florescent Antibody – Mycoplasma pneumoniae
LA - Latex agglutination - Salmonella. Streptococcus group B
Western Blot – HIV
Diagnóstico Molecular
Representa un avance significativo en el laboratorio clínico.
Han aumentado su sensitividad y especifidad.
Proveen al médico información rápida y certera para el diagnóstico y
tratamiento de agentes infecciosos que de otra manera tardaría
mucho más.
Las pruebas mas utilizadas son:
Hibridización de ácidos nucleicos
Formación de enlaces de hidrógeno entre nucleótidos de
DNA/RNA de una sola hebra que sean complementarios. Bajo
condiciones correctas, forman una molécula de ácidos nucleicos de
doble hebra, estable. Estos híbridos pueden ser de DNA:DNA, DNA:RNA,
RNA:RNA .
Diagnóstico Molecular
Amplificacción de Acidos Nucleicos
Utilizado para aumentar la cantidad de acido nucleico de
organismos a ser identificados( Target) en un periodo corto de
tiempo.
Esto aumenta la cantidad de acidos nucleicos a ser detectados
por varios métodos.
También se utiliza para aumentar la señal después de haber
hibridizado un probe al ácido nucleico de un organismo.
Los métodos de amplificación combinan tiempo de detección
rápida con especificidad y sensitividad.
En algunos casos se pueden usar estos métodos directamente en la
muestra, detectando el ácido nucleico del microorganismo
rápidamente. Ej, PCR
MALDI – TOF Mass Spectrometry
Identifica rápidamente bacterias y hongos.
Luego de aislar el organismo en medio sólido, se coloca colonia en
plato de metal.
Se le añade solución la cual extrae las proteínas del organismo.
Se coloca en el instrumento donde ocurren una serie de reacciones.
Cada proteína ( microorganismo) genera una señal diferente.
Terapia antimicrobiana
Antibióticos- Substancias químicas para tratar
enfermedades que son producidos por microorganismos.
Usualmente ,hongos y bacterias.
Inhibición de metabolitos
esenciales
Alteración de la membrana
Integridad de la pared celular
Para que se realice síntesis de la pared celular, intervienen varias enzimas, si se
interfiere con ellas ó se inactivan, se destruye ó se afecta el producto final de la
pared.
Escherichia coli
Salmonella spp.
Enterobacter cloacae
Proteus mirabilis
Klebsiella oxytoca
Klebsiella pneumoniae
B lactam antibiotics
Acción bactericida
Bacterias expuestas a B-lactam pueden producir enzima
B-lactamasa las cuales hidrolizan el anillo causando
daño al antibiótico.
Esto es un mecanismo de resistencia de las bacterias.
Para contrarrestar este efecto letal, se une un B lactam +
inhibidor de B- lactamasa, algunos de ellos son:
Acido clavulánico, Sulbactam, Tazobactam
Inhibidores de B lactamasa
Sulbactam - ampicillin/sulbactam
Tazobactam - piperacillin/tazobactam
Mecanismos de Resistencia Bacteriana
The END