Experiencias formativas III Blga Marisol Gamarra

PRACTICA N° 1 COLORACIÓN GRAM PARA BACTERIAS

Identifica los saberes previos del estudiante de segundo año para Identificar el nivel
conceptual previo a la unidad didáctica

MORFOLOGÍA DE LAS BACTERIAS

1. PARED CELULAR

Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas

mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que está en inmediato
contacto con el citoplasma, se encuentra la pared celular, que es una estructura
rígida que da forma a la célula. Las paredes celulares pueden destruirse o romperse
en condiciones especiales.

Constituyentes importantes de la pared celular son los aminoácidos, aminoazúcares,

azúcares y grasas. Estas sustancias (proteínas, Hidratos de carbono, grasas) están
enlazadas formando el polímero complejo que forma la pared celular.

Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram-positivas

y Gram-negativas existen importantes diferencias. Por ejemplo, las paredes de las
bacterias gram-positivas contienen menos aminoácidos que las gram-negativas; el
contenido graso es mucho más elevado en las gram-negativas que enlas gram-
positivas. Este hecho se ha propuesto como explicación del mecanismo dela reacción
al gram.

Bacteria Gram Positiva Bacteria Gram Negativa

Tiene una capa gruesa de Tiene una capa delgada de

peptidoglicano (mureina) y dos clases peptidoglicano (mureina) unida a una
de ácidos teicoicos. Ácido Lipoteicoico membrana exterior por lipoproteínas.
que está en la superficie, empotrado en La membrana exterior está hecha de
la capa de peptidoglicano y unido a la proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
membrana citoplásmica. Y ácido En el lipopolisacárido, la porción de
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teicoico de la pared que está en la lípido está embebida en el fosfolípido y

superficie y se une sólo a la capa de el antígeno O polisacárido está en la
peptidoglicano. El ácido Teicoico es el superficie. El lípido se llama Lípido A y
responsable del determinanteantigénico es tóxico, pero el lipopolisacárido
del organismo. entero se llama Endotoxina. La pared
de la célula tiene poros llamado
Porines para el transporte de
substancias de peso molecular bajo.
Entre la membrana citoplásmica y la
pared celular hay un espacio
periplásmico con enzimas hidrolíticas,
enzimas inactivadoras de antibióticos y
proteínas de transporte.

También existen diferencias en la composición de la pared entre las células de las

diversas especies.

2. Membrana Citoplásmica (citoplasmática o protoplasmática)

Inmediatamente debajo de la pared celular, existe una membrana fina, o envoltura,

que se denomina membrana citoplásmica o protoplásmica y está formada por una
bicapa de fosfolípido integral y proteínas periféricas empotradas. La membrana
citoplásmica tiene una significación funcional de suma importancia. Se trata de una
membrana semipermeable, selectiva, que controla el paso de los elementos
nutritivos dentro de la célula y la salida de los productos de desecho. Tiene enzimas
respiratorias y durante la división celular el cromosoma se une a la membrana de la
célula en el sitio llamado Mesosoma.

3. Citoplasma

El material celular contenido dentro de la membrana citoplásmica puede dividirse en

tres partes, región citoplásmica, de apariencia granular, la cual es rica en RNA, región
nuclear o cromatínica, que es rica en DNA, y la parte líquida que mantiene disueltos
los elementos nutritivos. El RNA, combinado con proteínas, forma partículas o
corpúsculos macromoleculares, de unos 200 A de diámetro, que formanuna masa
densa y compacta en todo el citoplasma. Estas partículas de RNA-proteína se
denominan ribosomas, y son el equivalente en las bacterias de los microsomas, o
partículas que se encuentran en las células animales y vegetales.

4. Estructuras Citoplasmáticas

Nucleoide (cuerpo cromatínico)

Las células bacterianas no contienen el núcleo característico de las células de las

plantas y animales superiores. Sin embargo, contienen en el citoplasma "cuerpos"
que se consideran como una estructura nuclear, el ADN de la célula bacteriana se
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encuentra confinado en este espacio, es único y circular, doble hélice sin proteínas.
Como no se trata de un núcleo discreto, se ha sugerido que se dé a estas estructuras
las denominaciones de cuerpo cromatínico, nucleoides, equivalentes nucleares, y
aun cromosomas bacterianos. Se demuestra con el método de tinción de Feulgen,
específico para el DNA, y por microscopia electrónica, porque la sustancia nuclear
es menos densa que el citoplasma cincundante.

Ribosomas

Tienen estrecha relación con la síntesis de proteínas (30S y 50S para formar un
complejo 70S).

Plásmidos

Lazos extracromosómicos de ADN, algún código para la resistencia a drogas, toxinas

y otros factores.

Endosporas

Algunas bacterias pueden transformarse en pequeños ovoides o esferas, que son

formas celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas, porque se
producen intracelularmente. Todos los organismos de losgéneros
Bacillus y Clostridium se caracterizan, en parte, por su propiedad de producir
esporas. También tienen esta propiedad otros géneros de bacterias verdaderas, pero
sólo en casos aislados. Las bacterias capaces de esporular pueden crecer y
reproducirse en forma de células vegetativas durante muchas generaciones. Sin
embargo, en cierto período del desarrollo del cultivo en medio nutritivo apropiado,se
produce, dentro del citoplasma, la síntesis de nuevo protoplasma destinado a
transformarse en espora.

Cocos

Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular. Diplococos,

aparecen por pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas.
Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño

División a lo largo del mismo

División a lo largo de 3 planos
forma plano, formando cadenas cortas División a lo largo
esférica: de 2 planos
se llama 2 cocos diferentes:
4 - 20 en cadenas: regularmente: irregularmente:
Coco juntos: Tétradas
Estreptococos Sarcinas Estafilococos
Diplococos
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Bacilos

grandes variaciones morfológicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

Forma de Empalizadas,
Dos bacilos Cadenas de
vara: se Bacilos lado con
juntos: bacilos:
llaman lado o en figuras
Diplobacilos Estreptobacilos
Bacilos en X, V o Y

Espirales (Treponemas, Borrelias ...)

Forma espiral Si la espiral es flexible y

rígida se llama: ondulada se llama:
Espirilo Espiroqueta

Las bacterias Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las

diferentes clasificaciones atienden a diversos criterios y características bacterianas:
morfología, metabolismo, presencia de pared celular, etc.
La tinción de Gram se llama así por el científico danés Hans Christian Gram (1853 –
1938), quien desarrolló la técnica en 1882 y la publicó en 1884 como una técnica
para distinguir entre dos tipos de bacterias con síntomas clínicos similares: las
bacterias Streptococcus pneumoniae (también conocida como neumococo)y
Klebsiella pneumoniae
La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una
técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una
gran utilidad en medicina.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la
pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que
no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas
por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda
membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen
incoloras.
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Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran
número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando
un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo
de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de
atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o
negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.
PASOS DE LA COLORACIÓN DE GRAM

Prepárate para el trabajo de laboratorio. Colócate guantes y amárrate el cabello si

lo tienes largo para evitar contaminar la muestra de bacteria que vayas a analizar.
Desinfecta un espacio de trabajo debajo de la campana extractora o en otra área
bien ventilada. Antes de comenzar, revisa que el mechero Bunsen y el microscopio
estén operativos.

− Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un Hisopo (bastón estéril

de algodón).
− Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
− Preparar una extensión delgada y uniforme sobre el portaobjetos y dejar secar
sin calentar. En el caso de las muestras obtenidas con gasas o algodones por
frotamiento hay que hacer girar la muestra, apretando firmemente en una
pequeña zona del portaobjetos. Si se trata de líquidos como orina o
cefalorraquídeos se coloca una gota en el centro del portaobjetos y se deja
secar sin extender. Los materiales más densos, como el pus y los esputos,
pueden extenderse uniformemente, evitando sobre todo que queden zonas
excesivamente gruesas.
− Pasar el portaobjetos por una llama de gas varias veces con el fin de matar
las bacterias y fijarlas a este.
− Cubrir el portaobjetos con solución de cristal violeta; Dejar teñir durante 30-60
segundos.
− Inclinar el portaobjetos para decantar el colorante y enjuagar con agua, Dejar
en reposo durante 30-60 segundos.
− La decoloración constituye el paso mas critico de la técnica. Inclinar el
portaobjeto para decantar la solución de lugol,
− Lavar inmediatamente el portaobjetos con agua fría corriente para eliminar el
lugol.
− Aplique la sustancia decolorante por 60 segundos
− Cubrir el portaobjetos con safranina; dejar 60 segundos y lavar con agua
corriente.
− Secar con un paño la parte inferior del portaobjetos para eliminar los restos
del colorante; dejar secar al aire.
− Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de
color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.
− En el caso de las bacterias gram positivas los complejos insolubles se quedan
atrapados entre las capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin
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disolver y dando la coloración morada característica al observarlas al

microscopio. En cambio, en las bacterias gram negativas
estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al
microscopio se verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si se
ha añadido la fucsina al final de la técnica de tinción de Gram.

− Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el

Staphylococcus, el Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de
bacterias gram negativas son la Escherichia coli y la Pseudomona
aeuruginosa.

Coloración de Gram

• Los cocos Gram positivos generalmente son ya sea estafilococos (que

significacocos en grupos) o estreptococos (que significa cocos en
cadenas).
• Las Gram positivas incluyen los bacilos y las
bacterias Clostridium, Corynebacterium y Listeria.la especie
Actinomyces amenudo tienen ramas o filamentos. Identifica bacterias
Gram negativas. Las bacterias Gram negativas (teñidas derosado) a
menudo se clasifican en tres grupos. Los cocos son las bacterias esféricas,
las bacterias largas y delgadas, y las varas cocoides están en un punto
intermedio.
• Los cocos Gram negativos son más comúnmente la especie Neisseria.
• Las Gram negativas incluyen las bacterias E.
coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella,
Shigella, Pseudomonas y muchas otras. La bacteria Vibrio cholerae puede
aparecer como varas normales o varas curvas
• Las Gram negativas "cocoides" (o "cocobacilos")
incluyenla Bordetella, Brucella, Haemophilus y
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Pasteurella

REACCION Y COLORACION DE LAS BACTERIAS

Paso del proceso
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS

Solución de Cristal
Violeta al 1%. Células color violeta Células color violeta
Se deja actuar 1 minuto

Formación del complejo Formación del complejo

Solución Yodo- Iodurada. Yodo – Cristal Violeta Yodo – Cristal Violeta
Se deja actuar 1 a 2 en el interior de las células en el interior de las células
minutos Las células permanecen Las células permanecen
violetas violetas
Solución de alcohol Acetona El complejo Yodo – Cristal El complejo Yodo – Cristal
Se deja actuar 20 Violeta no sale de las Violeta se separa de las
Segundos Células, las que conservan Células, las que pierden el
el color violeta. Color y no pueden observarse
Solución de Safranina. Las células conservan el Las células decoloradas se
Se deja actuar 1 a 2 Color Violeta. Tiñen de rojo.
Minutos.

Lavar, secar y observar al microscopío.

1. IDENTIFICA LAS PARTES DE LA CÉLULA PROCA RIOTA

CAPSIDA

PARED CELULAR
MENBRANA PLASMATICA

MATERIAL GENETICO O ADN

PIL
I MATERIAL GENETICO O ADN

CITOPLASMA
RIBOSOMAS

MESOSOMA

FLAGELO
PLASMIDO
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3. INDICA LAS CLASES DE BACTERIAS POR SU FORMA

A). ESTAFILOCOCOS. B) ESTREPTOCOCOS. C)BACILOS D) VIBRIOS E) ESPIROQUETAS

4. MENCIONA LAS CLASES DE LAS BACTERIAS DE ACUERDO A SU FLAGELO.

A…...MONOTRICO

B.…LOFOTRICO

C.......ANFITRICO

D........PERITRICO.

5. REALIZA UN CUADRO DE LAS PRINCIPALES BACTERIAS QUE PRODUCEN

ENFERMEDADES

Nombre común Nombre científico Enfermedad

1 Bacilo de koch Micobacterium….. tuberculosis
2 Escherichia coli Escherichia coli Infecciones del tracto urinario,
3 Salmonella Salmonella spp. infecciones
Salmonelosis intestinales
4 Neisseria meningitidis Neisseria meningitidis Meningitis bacteriana
5 Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae Neumonía, meningitis, sinusitis
6 Haemophilus influenzae tipo Meningitis, infecciones graves
Haemophilus influenzae tipo b
b en niños
7 Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium diphtheriae Difteria
8 Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis
9 Vibrio cholerae Vibrio cholerae Cólera
10 Treponema pallidum Treponema pallidum Sífilis
11 Streptococcus pyogenes Streptococcus pyogenes Amigdalitis estreptocócica
12 Infecciones de la piel,
Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus intoxicación alimentaria,
septicemia
13 Clostridium tetani Clostridium tetani Tétanos
14 Borrelia burgdorferi Borrelia burgdorferi Enfermedad de Lyme
15 Helicobacter pylori Helicobacter pylori Úlceras, gastritis
16 Chlamydia trachomatis Chlamydia trachomatis Clamidia (infección de
17 Bordetella pertussis Bordetella pertussis transmisión
Tos ferina sexual)
18 Yersinia pestis Yersinia pestis Peste
19 Legionella pneumophila Legionella pneumophila Enfermedad del legionario
20
Gastroenteritis por
Campylobacter jejuni Campylobacter jejuni
Campylobacter
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6. EXPLICA LAS DIFERENTES FORMAS DE REPRODUCCIÓN DE LAS BACTERIAS

FISION BINARIA O BIPARTICION Es un método de reproducción sin intervención

sexual que es frecuente en bacterias. Este
mecanismo implica la división de una célula madre en
dos células hijas que son genéticamente idénticas
entre sí.

CONJUGACION Es un mecanismo mediante el cual las bacterias

transfieren material genético entre sí. A diferencia de
la división binaria, que es un método de reproducción
asexual, la conjugación es un proceso de
transferencia de material genético entre bacterias que
ocurre de manera sexual.
TRANSDUCCION Es un método adicional de transferencia de material
genético entre bacterias. A diferencia de la
conjugación bacteriana, que implica la transferencia
directa de material genético a través de un puente de
conjugación, la transducción bacteriana utiliza virus
bacteriófagos para transferir el ADN entre bacterias.
TRANSFORMACION Es un proceso en el cual las bacterias tienen la
capacidad de tomar material genético externo de su
entorno y lo integran en su propio genoma. Este
proceso les permite adquirir nuevas características y
funciones a través de la transferencia de genes.
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8. MENCIONA LA IMPORTANCIA BIOLOGICA DE LAS BACTERIAS

 Ciclo de nutrientes: Las bacterias son responsables de la

descomposición de materia orgánica y la liberación de nutrientes en el
suelo, lo que permite su reciclaje y disponibilidad para otros organismos.

 Fijación de nitrógeno: Algunas bacterias tienen la capacidad de

convertir el nitrógeno atmosférico en formas utilizables por las plantas,
como los compuestos de amonio y nitrato. Esto es esencial para el
crecimiento de las plantas y la producción de alimentos.

 Simbiosis: Las bacterias establecen relaciones simbióticas con otros

organismos, como las bacterias intestinales que ayudan en la digestión
de los alimentos en los seres humanos y animales.

 Producción de alimentos: Las bacterias son utilizadas en la producción

de alimentos como el yogur, el queso, el chucrut y el kimchi, mediante
procesos de fermentación.

 Biorremediación: Algunas bacterias tienen la capacidad de degradar

contaminantes y sustancias tóxicas en el medio ambiente,
contribuyendo a la limpieza de suelos y aguas contaminadas.

 Síntesis de vitaminas: Algunas bacterias son capaces de sintetizar

vitaminas esenciales, como la vitamina K y algunas vitaminas del
complejo B, que son necesarias para el funcionamiento adecuado de
nuestro organismo.

 Investigación científica: Las bacterias son ampliamente utilizadas como

organismos modelo en la investigación científica debido a su simplicidad
y facilidad de manipulación.
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9. TINCION DE GRAM REALIZA Y EXPLICA, EL INFORME DE TUS PROCEDIMIENTOS Y

OBSERVACIONES CON FOTOS

MATERIALES
− Lapiceros
− Colores
− Material Bibliográfico
− Google meet
− Plataforma Moodle
− Guía de practicas

PROCEDIMIENTOS
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RESULTADOS

STREPTOCOCCUS SALIVARIUS ESPORAS E HIFAS TABICADAS

DIPLOCOCOS CLAMIDIOFOROS Y CLAMIDIOESPORAS

ZOOESPORANGIO-ESPORANGIOFORO CONIDIOFORO PENICILLUM

-APLANASPORAS
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CONCLUSIÓN FECHA
QUE APRENDÍ
Las bacterias son una parte esencial del medio ambiente, ya que 22-03-2024
desempeñan un papel importante en la descomposición de
organismos muertos. Tanto las bacterias como los hongos pueden
ser observados y diferenciados mediante técnicas de tinción, lo que
permite identificar a qué especie pertenecen.
FIRMA
QUE ME FALTO APRENDER

APELLIDOS Y NOMBRES: ENCINAS FRANCO, JOSIE RAY