Morfologia y Cultivo Bacteriano

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA
TÍTULO:
MORFOLOGIA Y CULTIVO BACTERIANO
INTEGRANTES
GUZMAN VILLEGAS, MARICIELO DULCINELA
NEIRA SEMINARIO, GRASIA FERNANDA
DOCENTE:
DR, ELMER LOPEZ LOPEZ
PIURA – PERU
2023
PRACTICA N°01
MORFOLOGIA Y CULTIVO BACTERIANO
I. INTRODUCCION:
La cavidad bucal tiene diversos hábitats para los microorganismos como los
dientes, surco gingival, lengua, paladar, amígdalas, etc. que propician la
colonización de microorganismos nativos, quienes en sinergia interactúan y
ayudan al ser humano contra la invasión de microorganismos foráneo; sin
embargo, el desequilibrio en la microbiota oral nativa puede desencadenar una
serie de enfermedades como la caries dental, enfermedad periodontal, e incluso
cáncer oral y/o de orofaringe.
Con el desarrollo de técnicas microbiológicas, el ser humano ha logrado

identificar, estudiar y clasificar los diversos grupos bacterianos que afectan o
actúan en sinergia con el ser humano. Es así, como para poder entender los
mecanismos y la influencia que tienen los microorganismos en la cavidad bucal,
es importante conocer y entender los componentes estructurales y la actividad
biológica de la microbiota oral mediante técnicas de microbiología.
La clasificación correspondiente a la forma en la que obtienen energía las

bacterias es como sigue:
Quimioautótrofas: cuando obtienen la energía a partir de sustancias orgánicas.

Fotótrofas: si obtienen su energía de la luz.
Litótrofas: cuando necesitan de sustancias inorgánicas como el H2SO4, S,

NH3, NO -, Fe, entre otros.
Organotróficas: cuando sus requerimientos se basan en compuestos orgánicos

como los hidrocarburos, lípidos, proteínas, etc.
Por la utilización del carbono:

Autótrofas: Cuando sintetizan compuestos orgánicos a partir
de inorgánicos como el CO2.
Heterótrofas: Cuando su fuente de carbono es exclusivamente orgánica como
la glucosa.
Mixotróficas: Aquellas que pueden pasar estadios autótrofo y
heterótrofos.
Además de necesitar macro y micronutrientes, estos son específicos de cada

grupo bacteriano, por lo cual se deben identificar cuáles son y así poder elegir el
medio de cultivo ideal para la obtención de colonias y caracterización de las
mismas. Estos medios de cultivo tienen presentaciones en líquido conocidos
como caldos de cultivo y en sólido, que son los agares. La elección dependerá
del objetivo de la investigación a realizar.
Figura 1. Partes de una bacteria.

II. OBJETIVOS:
• Conocer los principios medios de cultivo y su preparación.
• Determinar la morfología de células bacterianas de la mucosa oral e
inocularlos en medios nutritivos de caldo y agar.
III. MATERIALES Y EQUIPOS:
3.1. Proporcionados por el laboratorio:
• Balanza digital
• Espátula de metal
• Matraces de Erlenmeyer de 200ml
• Autoclave
• Probetas graduada de 100 ml
• Micropipetas de 100 -1000 ul
• Microtubos de 1.5 ml estériles
• Parafilm
• Tubos de ensayo
• Puntas para micropipetas de 100 – 1000 ul con filtro
• Rack para microtubos.
• Microscopio
• Láminas portaobjetos
• Láminas cubreobjetos
• Set de colorantes para tinción Gram.
• Frasco lavador con agua destilada
• Aceite de inmersión
• Bandeja de coloración
• Papel aluminio
• Tablero de secado
• Cámara de flujo laminar
• Mechero de bunsen
• Microtubos de 1.5 ml estériles.
3.2. Proporcionados por el estudiante:
• Muestra de hisopado / raspado de mucosa oral
• Papel aluminio
• Cinta masketing
• Marcador indeleble fino
• Asa bacteriológica.
• Solución salina fisiológica estéril.
IV. PROCEDIMIENTOS:
4.1. Preparación de medios de cultivo:
1. Leer las instrucciones del medio de cultivo y realizar los cálculos
correspondientes de agua y medio de cultivo a utilizar.
2. Medir la cantidad correcta de agua destilada en la probeta graduada y
verter la mitad en el matraz de Erlenmeyer.
3. Pesar el medio de cultivo utilizando el papel aluminio como recipiente
previo, verter al matraz de Erlenmeyer, agregar el agua restante en la
probeta y homogenizar.
4. Tapar el matraz de Erlenmeyer con papel aluminio y cinta masketing.
5. Llevar al autoclave para su correcta esterilización. Para el caso de agares
se debe llevar a ebullición antes de esterilizarlo en el autoclave.
6. Finalizado el proceso, dejar enfriar el autoclave, retirar el medio de cultivo,
esperar a que el matraz que contiene el caldo de cultivo esté a una
temperatura aproximada de 36°C para utilizar (para el caso de agares,
cuando se encuentre a una temperatura aproximada de 50°C llevar a
cámara de flujo previamente estéril y servir en las placas de Petri unos
15ml aproximadamente, dejar secar bien para que solidifique, cubrir, sellar
y almacenar hasta su uso).
4.2. Toma de muestra:
Cómo ya se ha indicado en la práctica N°01, tomar la muestra de la cavidad
oral del paciente con las medidas de bioseguridad correspondientes. (se
tomarán dos muestras por paciente A y B).
Figura 2. Toma de muestra de mucosa oral

4.3. Morfología bacteriana:
Las bacterias se pueden observar de manera individual o en colonias a través de
un microscopio, donde por lo general, presentan formas particulares como las
que se observan en la imagen que se muestra a continuación:
Figura 3. Morfología de bacterias.

La muestra A, debe ser fijada en una lámina, tal como se aprendió en la práctica
N° 01. Se lleva al lavador para realizar tinción Gram empleado el set de
colorantes. Y una vez seca la muestra se lleva al microscopio para observar el
máximo aumento con aceite de inmersión.
Figura 4. Tinción Gram.

4.4. Siembra de la muestra:
Se realizará a partir de la muestra B del paciente en el que se observó presencia
de bacterias.
1. Colocar el hisopo con la muestra en un tubo de ensayo con solución salina
fisiológica estéril, homogenizar y dejar por un par de minutos.
2. En la cámara de flujo laminar previamente esterilizada con el material a
utilizar se deben preparar diluciones a partir de la solución salina
fisiológica con la muestra en microtubos de 1.5 ml (10-1, 10-2, 10-3, 10-
4, 10-5, 10-6).
Caldo de cultivo:
1. Rotular los microtubos de 1.5 ml con los códigos de los pacientes,
2. Alicuotar 900 ul de caldo de cultivo estéril en cada microtubo.
3. Adicionar a cada tubo 100 ul de la muestra directa y de las diluciones (10-
1, 10-3, 10-6). Adicionalmente un tubo no llevará muestra ya que será el
tubo control.
4. Tapar bien y cubrir con Parafilm para llevar a incubación a una
temperatura de 32 °C por 24 – 48 horas.
5. Cumplido el tiempo de incubación, comparar los tubos inoculados con el
control y por medio de la observación de turbidez determinar crecimiento
bacteriano.
6. Esquematice resultados.
Figura 5. Siembra en caldo de cultivo

Agar bacteriológico:
1. En el área del mechero se colocarán los materiales a usar debidamente
rotulados.
2. Los tubos con las diluciones realizadas previamente son los mismos que
utilizaremos en esta etapa de la práctica (10-1, 10-3, 10-6)
3. Con un asa bacteriológica esterilizada en mechero se homogeniza y saca
una pequeña alícuota del tubo con la dilución y aquel que contiene la
muestra directamente.
4. Colocar sobre el agar servido en placa la alícuota y esparcir por la técnica
de estrías por agotamiento.
NOTA: si no se cuenta con asa bacteriológica, trabajar en cámara de flujo
y utilizando esparcidores de vidrio.
Figura 6. Siembra con estrías por agotamiento

V. RESULTADOS: (Utilice lápices de colores)
5.1. Morfología bacteriana:
Mucosa oral
10x
Frotis de células de la mucosa

bucal
Mucosa oral
40x
El núcleo , el citoplasma y la
membrana celular
5.2. Crecimiento bacteriano en caldo de cultivo:
5.3. Crecimiento bacteriano directo y por diluciones en medio d

cultivo sólido.
VI. DISCUSION:
• La morfología bacteriana se refiere a la forma y estructura de las bacterias.
Las bacterias pueden presentar tres formas básicas: esféricas o cocos,
alargadas o bacilos y espirales o vibrios. Además, la tinción de Gram se
utiliza para clasificar las bacterias en Gram-positivas o Gram-negativas, lo
que puede ser útil para determinar el tratamiento adecuado para una
infección.
• El cultivo bacteriano es el proceso de crecimiento de bacterias en un
medio de cultivo artificial. Los medios de cultivo pueden ser sólidos,
líquidos o semisólidos y pueden contener nutrientes específicos para el
crecimiento de bacterias.
• En la discusión de los resultados de un estudio bacteriológico, se pueden
describir las formas bacterianas observadas y su tinción de Gram, así
como los medios de cultivo utilizados y las condiciones de
crecimiento.También se pueden discutir los resultados de pruebas de
sensibilidad a antibióticos y la identificación de especies bacterianas.
VII. CONCLUSIONES:
• Las técnicas microbiológicas ayudaron a que el ser humano haya logrado
identificar, estudiar y clasificar los diversos grupos bacterianos que
afectan o actúan en nuestra cavidad oral.
• Conocer la morfología de las bacterias de la cavidad oral nos ayudará a
ser más específicos a saber cómo intervenir frente a una bacteria de la
cavidad oral, además que será fundamental en el diagnóstico y
tratamiento.
VIII. ANEXOS:
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
1. Gamboa Jaimes F. Dossier microbiología oral y salud pública.2020;(39):

p. 1-7.
2. Lamont R,HG,JH. Microbiología en inmunología oral: El manualmoderno

Colombia; 2015.
3. Ciro Maguiña-Vargas1 2RGA. Los maestros y sus discípulos a lolargo de

la historia. Acta Médica Peruana. 2017 Abril; 34.
4. Vásquez Quijano AA. Memorias de Congreso. In ¿Qué sabemos de
microbiología oral?; 2022; Colombia. p. 1-46.
5. De E, Multimodal F, Flores V, Kuno C, Alvin V. Vargas-Flores, T. & Kuno-
Vargas, A. (2014). Morfología bacteriana. Revista de Actualización
Clínica, 49(2), 2594-2598 [Internet]. Uaem.mx. [citado el 21 de
septiembre de 2023].

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NEIRA SEMINARIO, GRASIA FERNANDA

DR, ELMER LOPEZ LOPEZ

MORFOLOGIA Y CULTIVO BACTERIANO

Con el desarrollo de técnicas microbiológicas, el ser humano ha logrado

La clasificación correspondiente a la forma en la que obtienen energía las

Quimioautótrofas: cuando obtienen la energía a partir de sustancias orgánicas.

Litótrofas: cuando necesitan de sustancias inorgánicas como el H2SO4, S,

Organotróficas: cuando sus requerimientos se basan en compuestos orgánicos

Por la utilización del carbono:

Además de necesitar macro y micronutrientes, estos son específicos de cada

Figura 1. Partes de una bacteria.

Figura 2. Toma de muestra de mucosa oral

Figura 3. Morfología de bacterias.

Figura 4. Tinción Gram.

Figura 5. Siembra en caldo de cultivo

Figura 6. Siembra con estrías por agotamiento

Frotis de células de la mucosa

5.3. Crecimiento bacteriano directo y por diluciones en medio d

1. Gamboa Jaimes F. Dossier microbiología oral y salud pública.2020;(39):

2. Lamont R,HG,JH. Microbiología en inmunología oral: El manualmoderno

3. Ciro Maguiña-Vargas1 2RGA. Los maestros y sus discípulos a lolargo de

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