Recibido el 21-09-18

Aprobado el 26-11-18
Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 385

COMPROBACIÓN DE LOS EFECTOS DE BLOQUEADORES

SOLARES COMERCIALES USANDO ENSAYOS BASADOS EN LA
SOBREVIVENCIA DE CÉLULAS DE LEVADURA
A IRRADIACIÓN UV

Raquel Merino Urteaga*a,b, Sandy Nelly Mansilla García*a,b,

Luis Gabriel Gutiérrez Mesíasa,b, Ana Akemi Kitazono Sugaharaa,c**

RESUMEN

Se reportan ensayos basados en la supervivencia de células de la levadura Saccharomyces

cerevisiae sometidas a radiación UV, para comparar los niveles de fotoprotección que
brindan los bloqueadores solares según su valor de factor de protección solar (FPS). Diez
lociones con FPS de 15 a 100 fueron comparadas, usando irradiaciones UVB y UVC. Se
observó equivalentes capacidades fotoprotectoras en los bloqueadores con valores de FPS
igual y mayor a 50, mientras que los de FPS 15 y 30 mostraron menores niveles de protección
que eran proporcionales a esos valores. Asimismo, se compararon los precios por gramo
de las lociones analizadas, observándose una gran dispersión. Dado que no se encontraron
diferencias notables entre la fotoprotección ejercida por los bloqueadores de FPS ≥50, se
puede inferir que esa dispersión es causada por otros factores, como la reputación de la
marca, presentación del producto, estrategias de mercadeo y otros. Este trabajo demuestra la
necesidad de promover cambios en las normas locales que rigen la venta de los bloqueadores
solares, de manera tal que se use la denotación “FPS 50+” para todos aquellos con FPS ≥50 Z.

Palabras clave: Factor de protección solar, FPS, Saccharomyces cerevisiae.

ABSTRACT

An assay based on the survival rates of UV-irradiated yeast Saccharomyces cerevisiae cells
was used to compare the photoprotectant capabilities of several commercial sunscreens with
different sun protection factors (SPFs). Ten lotions with SPF values from 15 to 100 were
tested using UVB and UVC irradiations. The results showed that all lotions with SPFs ≥50
exhibited similar photoprotectant capabilities. However, the lotions with SPF 15 and SPF
30 exhibited proportionally lower photoprotection levels. Likewise, the prices per gram of
the analyzed lotions were compared, finding them widespread. Since the photoprotection
levels of the lotions with SPF values above 50 were equivalent, it could be inferred that other
factors are responsible for the variations in the prices, such as the recognition of the brand
*
Estas autoras contribuyeron equitativamente a este trabajo - a Laboratorio de Química Biológica y Bioanálisis,
Universidad Nacional Agraria La Molina - Lima, Perú - b Departamento Académico de Biología, Universidad
Nacional Agraria La Molina - Lima, Perú - c Departamento Académico de Quìmica, Universidad Nacional
Agraria La Molina - Lima, Perú **Autor de correspondencia, anakitazono@lamolina.edu.pe

Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018

 386 Raquel Merino Urteaga, Sandy Nelly Mansilla García, Luis Gabriel Gutiérrez Mesías...

name, product presentation, marketing strategies, and others. This work shows the need to
change Peruvian regulations that foresee the selling of sunscreens, to use the notation “SPF
50+” for all products with SPF >50.

Key Words: Sun protection factor, SPF, Saccharomyces cerevisiae.

INTRODUCCIÓN

La vida en la Tierra depende de la radiación electromagnética proveniente del Sol, que

incluye las del tipo visible, infrarrojo (IR) y ultravioleta (UV). Sin embargo, hace más de
30 años se identificó a la radiación UV como una fuente ambiental altamente dañina para el
ADN, que causa mutaciones con potencial efecto cancerígeno1. La radiación UV se divide
según su longitud de onda en tres segmentos denominados UVA (320-400 nm), UVB (295-
320 nm) y UVC (100-295 nm); este último es absorbido por la capa de ozono y por lo
tanto no llega a la superficie terrestre. Es por ello que las radiaciones UVA y UVB son las
principales responsables de los efectos biológicos de la radiación solar, entre los cuales se
incluyen quemaduras solares, pigmentación, envejecimiento prematuro, inmunosupresión y
carcinogénesis2.

La intensidad de radiación UV, a la cual está expuesta una persona, varía en relación a
distintos factores, como la ubicación geográfica. A una mayor altitud la atmósfera es más
delgada, por lo que menor cantidad de rayos UV son absorbidos por la capa de ozono en
la estratósfera. Según el NIH (National Institutes of Health, EE.UU.)3, la exposición a la
radiación UV incrementa en un 4 % por cada 300 metros de altura. Por esta razón, las
poblaciones asentadas en las zonas altoandinas del territorio peruano se encuentran en mayor
situación de riesgo por sobreexposición a la radiación UV. Según el INEI, el 28 % de la
superficie peruana la conforma la sierra, considerada como tal a partir de una altitud mínima
de 2000 msnm4. Así, en un reporte realizado por el Ministerio de Salud en 2013 sobre el
análisis de la situación del cáncer en el Perú, se identifica a los departamentos de las zonas
altoandinas como los de mayor incidencia de cáncer de piel. Este tipo de cáncer se encuentra
entre los cuatro más frecuentes en Arequipa, Ayacucho, Cajamarca, Cusco, Huancavelica y
Junín; y entre los ocho más frecuentes en Apurímac, Huánuco, Pasco y Puno5.

Las defensas empleadas contra la nociva radiación UV incluyen cubrir la piel con ropa,
ampararse en zonas con sombra (uso de sombreros o sombrillas), y usar bloqueadores o
protectores solares. Con respecto a estos últimos, desde su aparición en 1928, su uso se ha ido
generalizando hasta llegar a ser uno de los recursos más importantes en la prevención al cáncer
de piel. La formulación del bloqueador le otorga un determinado nivel de fotoprotección,
ya que incluye filtros orgánicos o inorgánicos, los cuales absorben o reflejan la radiación UV
incidente1. Para los bloqueadores solares, el principal y más aceptado sistema de clasificación
es el Factor de Protección Solar (FPS, o SPF en inglés), término acuñado por Greiter en 19746.
Este método de evaluación numérico relaciona, luego de 16-24 horas, a la dosis eritematosa
mínima (DEM) de piel protegida con 2 mg/cm2 de un bloqueador, y la de piel expuesta sin

Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018

Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 387

protección. El FPS se calcula como la media entre los valores obtenidos al irradiar con UVB
a 10 a 20 voluntarios con piel de fototipo I-III, según la clasificación Fitzpatrick1. Es también
importante notar que, aunque es más práctico relacionar un valor de FPS con los tiempos
de exposición requeridos para dar lugar a la formación de un eritema (con o sin bloqueador
solar), esta apreciación es errónea. Los valores de FPS están relacionados con la cantidad (o
dosis) de radiación UVB, y estas varían notablemente según las características climáticas y
la hora del día en las que se da la exposición.

Pese a que la comercialización y el empleo de bloqueadores solares ha crecido a lo largo

de los años, la mayoría de usuarios no lo emplean correctamente y muchos aún no lo
utilizan. Asimismo, la cantidad de loción aplicada comúnmente por un usuario, que se limita
aproximadamente a solo 0,5-1 mg/cm2 de protector, es menor a la cantidad aplicada en las
pruebas para el cálculo del FPS7. De esta manera, estas variaciones reducen notablemente
la efectividad del bloqueador. En nuestro país, algunos estudios realizados en este ámbito
han sido dirigidos por la Sociedad Peruana de Dermatología, por ejemplo, en campañas de
fotoeducación en playas de Lima y Callao durante el mes de enero del 20128. Se evidenció
que solo la mitad de la población encuestada utilizaba rutinariamente bloqueador solar. Por
otro lado, a pesar de que en un día de playa el 70 % aseguraba usar bloqueador como práctica
de fotoprotección, más del 80 % de estos limitaba su aplicación a una sola vez, o a una
inadecuada periodicidad (mayor que 2 horas).

Asimismo, los usuarios de bloqueadores solares tienden a pensar que mientras más alto sea el
valor de FPS, proporcionalmente mayor será la protección proveída por el producto aplicado.
Es importante notar que la “Skin Cancer Foundation” en los Estados Unidos recomienda
el uso de bloqueadores solares de amplio espectro (protección contra rayos UVA y UVB)
y con valores de FPS mayores que 309. Además, la FDA (Food and Drug Administration,
Estados Unidos)10 recomienda el uso de bloqueadores de amplio espectro con FPS de por
lo menos 15 o para el caso de personas con piel muy clara, de 30 a 50. Se ha determinado
que un bloqueador solar con FPS 15 impide la incidencia del 93 % de los rayos UVB. Este
porcentaje se incrementa hasta 97 % para un bloqueador solar de FPS 30 y hasta 98-99 % para
uno de FPS 50. Y, dadas las condiciones de aplicación y uso (contacto con agua o sudor, ropa
y otros elementos), no es posible lograr un 100 % de protección a partir de un bloqueador
solar11. En este sentido, desde el año 2007 la normativa que rige la venta de bloqueadores
solares en los EE.UU. recomienda que aquellos con valores de FPS mayor a 50 usen la
denotación “UVB FPS 50+”, para evitar influenciar en los usuarios e impedir que se trate de
justificar los altos precios de los mismos12.

Para evidenciar de manera didáctica las actividades protectoras de bloqueadores solares de

diferentes valores de FPS, es posible usar simples ensayos con la levadura Saccharomyces
cerevisiae13. En este trabajo reportamos el uso de esta técnica con ligeras modificaciones,
para la realización de un análisis comparativo de las actividades fotoprotectoras y de los
precios de diez lociones bloqueadoras en un rango de FPS de 15 a 100.

PARTE EXPERIMENTAL

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 388 Raquel Merino Urteaga, Sandy Nelly Mansilla García, Luis Gabriel Gutiérrez Mesías...

Bloqueadores solares y lociones

SeSeanalizaron
analizaronununtotal
totaldedediezdiezlociones,
lociones,laslascuales
cuales fueron
fueron adquiridas
adquiridas en en diferentes
diferentes
establecimientos
establecimientos comerciales en la ciudad de Lima (Perúù) o donadas por elLaboratorio
Se analizaron comerciales
un total de en la
diez ciudad
lociones,de Lima
las (Perú)
cuales o donadas
fueron por
adquiridas el en diferentes
Laboratorio
Skinclean
SkincleanS.R.L.
establecimientos Dos
Dosfueron
fueronlociones
S.R.L. comerciales en humectantes
la ciudad
lociones de Limacon
humectantes con adicional
(Perúù) protección
o donadas
adicional elsolar
porsolar
protección dede FPS
Laboratorio
FPS 15
15Skinclean
y 30 (MS.R.L.
y E, respectivamente),
Dos fueron y
lociones las ocho
humectantesrestantes
con fueron
adicional bloqueadores
protección solares
solar de FPScon
15
y 30 (M y E, respectivamente), y las ocho restantes fueron bloqueadores solares con valores de
valores
yFPS de yFPS
30 (M E, entre 50 y 100 (G, I, J, L, N, P, Q, yfueron
R). Los valores desolares
FPS, procedencia y
entre 50respectivamente),
y 100 (G, I, J, L, N, y las
P, ocho restantes
Q, y R). Los valores bloqueadores
de FPS, procedencia ycon valores de
presentación
presentación
FPS correspondientes
entre 50 y 100 (G, listadosestán
I, J, L, N, listados en la tabla 1, y las composiciones, en la tabla 2.
correspondientes están enP,la Q, y R).1, Los
tTabla y lasvalores de FPS, procedencia
composiciones, en la tTablay2.presentación
correspondientes están listados en la tTabla 1, y las composiciones, en la tTabla 2.
Tabla 1.Tabla
Valores de FPS,
1. Valores de procedencia y presentación
FPS, procedencia de las
y presentación de lociones investigadas
las lociones investigadas
Tabla 1. Valores
Loción de FPS, procedencia
FPS y presentación
Procedencia de las lociones investigadas
Presentación
Loción
M FPS
15 Procedencia
Supermercado Presentación
Pote de 100 g
M
E 15
30 Supermercado
Laboratorio Skinclean Pote de
Frasco de100
40 mLg
E
G 30
50 Laboratorio Skinclean
Farmacia Frasco de 40
Tubo de 90 g mL
GI 50
100 Farmacia
Farmacia Tubo de
Sachet de9010gg
IJ 100
90 Farmacia
Farmacia Sachet
Sachet de 10 gg
de 10
JL 90
50 Farmacia
Laboratorio Skinclean Sachet de 10 g
Muestra prototipo
L
N 50
100 Laboratorio Skinclean
Pedido por catálogo Muestra prototipo
Frasco de 80 g
NP 100
50 Pedido por catálogo
Farmacia Frasco
Sachetde de808 gg
P
Q 50
60 Farmacia
Farmacia Frasco de 150 gmL
Sachet de 8
Q
R 60
50 Farmacia
Pedido por catálogo Frasco
Frascodede150
80 mLmL
R 50 Pedido por catálogo Frasco de 80 mL

Tabla 2. ComposiciónTabla
de las2.lociones
Composición de las lociones investigadas
investigadas
Tabla 2. Composición de las lociones investigadasG I E R P N M J Q L
Código
Código G 100
FPS 50 I 30
E 50
R 50
P 100
N M
15 J
90 Q
60 L
50
Compuestos fotoactivos FPS 50 100 30 50 50 100 15 90 60 50
Compuestos
Homosalato fotoactivos X X X
Homosalato
Octocrileno X X X
X X X
X X X
X
Octocrileno
Butil metoxidibenzoilmetano X
X X X X
X X X X X X
X X
X
Butil metoxidibenzoilmetano
Dióxido de titanio X
X X X X X X
X X X
X X
X
Dióxido de titanio
Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato X
X X
X X X X
X X X
Dietilamino
Metoxicinamatohidroxibenzoil hexil benzoato
de etilhexilo X
X X
X X
X X X
X
Metoxicinamato
Octil salicilato de etilhexilo X X
X X X
X X
X X
X X
Octil salicilatodicaprilato
Butilenglicol X X X X X X X
Butilenglicol dicaprilato sulfónico
Ácido fenilbenzimidazol X X X X X
Ácido fenilbenzimidazol
Benzofenona 3 sulfónico X X
X X
X X X
Benzofenona 3
Etil-hexil triazona X X X X X X X X
X
Etil-hexil triazona
Metilen-bis-benzotriazolil tetrametilbutilfenol X
X X X X
X X X
Metilen-bis-benzotriazolil
Dietilhexil butamido triazonatetrametilbutilfenol X X X X
Dietilhexil butamido triazona
Bis-etilhexiloxifenol metoxifenil triazina X X X
Bis-etilhexiloxifenol
m
4-metilbencilideno metoxifenil triazina
alcanfor X X
4-metilbencilideno alcanfor X

Rev Soc Cepas

Quím Perú. 84(3) 2018 y
de levadura condiciones de cultivo
Cepas de levadura y condiciones de cultivo
Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 389

Cepas de levadura y condiciones de cultivo

Las cepas de levadura Saccharomyces cerevisiae utilizadas para todos los ensayos fueron
una cepa silvestre y la cepa mutante de deleción rad9 que es altamente sensible a la radiación
UV14. Ambas cepas tienen el background W303 con el genotipo: MATa leu2-3,112 trp1-1
can1-100 ura3-1 ade2-1 his3-11,1515. Los cultivos se realizaron en medio YPD (1 % de
extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa) en líquido, o sólido con 2 % de agar.
Las condiciones de cultivo para todos los casos fueron a temperatura ambiente, con agitación
rotatoria para cultivos líquidos.

Construcción de la cepa mutante rad9

En S. cerevisiae, el gen RAD9 cumple un rol fundamental en la respuesta al daño al ADN y
su eliminación causa un considerable aumento en la sensibilidad a la radiación UV14. Con
el propósito de maximizar la sensibilidad de los ensayos de fotoprotección se procedió a
eliminar este gen, usando un método convencional que permite el reemplazo de cualquier
fragmento de ADN por un cassette que incluye un marcador de selección. El método usado
se basa en el plásmido pUG6 desarrollado por J. Hegemann y colaboradores. Este plásmido
incluye el cassette KanMX que confiere resistencia a kanamicina y otros antibióticos16. A
su vez, el cassette KanMX está flanqueado por sendas secuencias loxP que son reconocidas
por la recombinasa Cre lo cual permite, si es requerido, la eventual remoción del cassette de
selección y dejar solo una secuencia loxP en el sitio de inserción. Para dirigir el cassette loxP-
KanMX-loxP al locus RAD9 y permitir su reemplazo, se realizó una amplificación mediante
PCR usando como plantilla el plásmido pUG6 e iniciadores con las secuencias:
(5´-TCGTGGATATTTGCAACGATGAGCAATGTGAAGTGAGCAAGATAGCAGCT
(5´-TCGTGGATATTTGCAACGATGAGCAATGTGAAGTGAGCAAGATAGCAGCT
GAAGCTTCGTACGC-3´ y 5´-TCATCTAACCTCAGAAATAGTGTTGTATATATCAT
GAAGCTTCGTACGC-3´ y 5´-TCATCTAACCTCAGAAATAGTGTTGTATATATCAT
TGTCCGTAATGCATAGGCCACTAGTGGATCTG-3´).
TGTCCGTAATGCATAGGCCACTAGTGGATCTG-3´).

Estos oligonucleótidos incluyen secuencias homólogas al cassette que permiten su amplificación

(secuencias subrayadas), y secuencias que flanquean al gen RAD9 para que el producto de PCR
resultante pueda ser correctamente reemplazado mediante recombinación homóloga. Luego
de la transformación de la cepa silvestre se seleccionaron los transformantes usando medio de
cultivo con el antibiótico G418. Los transformantes fueron analizados después para verificar,
por un lado, la aumentada sensibilidad a radiación UV y, por el otro, la eliminación del gen
RAD9 y su reemplazo por el cassette loxP-KanMX-loxP. La verificación de la eliminación
de RAD9 se realizó mediante PCR, usando el ADN genómico de los transformantes como
plantilla y cebadores específicos para RAD9 (5´-TATCGACGAAACCTCAAGGG-3´
y 5´-CATCAAACAGCCATGCATGC-3´) y para el cassette loxP-KanMX-loxP
(5´-GCGTACGAAGCTTCAGCG-3´ y 5´-CAGATCCACTAGTGGCCTATGC-3´).

Ensayos de fotoprotección in vivo

Las cepas silvestre y mutante rad9 se cultivaron por tres días en caldo YPD con agitación
y a temperatura ambiente. Se retiraron alícuotas de 500 µL de los cultivos y se sonicaron
brevemente para romper los agregados celulares. Cada suspensión sonicada fue mezclada
con agua estéril secuencialmente hasta obtener sendas diluciones de 400, 2000 y 10000 veces.
Se sembraron 3 μL de cada dilución en dos filas, en secciones de placas YPD y, luego de una

Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018

 390 Raquel Merino Urteaga, Sandy Nelly Mansilla García, Luis Gabriel Gutiérrez Mesías...

incubación de 1 hora a temperatura ambiente, se procedió a realizar el ensayo. Paralelamente,

cada placa se cubrió con una lámina de celofán dividida en cuatro secciones que contenían
las lociones
lociones aaevaluar
evaluar(figuraFig.
(figura 1).
1).Para
Paralograr
lograr una distribuciónhomogénea
una distribución homogénea de lociones
de las las lociones
se se
mezcló
mezclóy esparció
y esparciócuidadosamente 0,031 ±± 0,.001
cuidadosamente 0,.031 0,001 ggdedemuestra
muestracon con
200200
μL μL de alcohol
de alcohol 96°. 96°.
BajoBajo
esteeste
método
métodoseseobtuvieron
obtuvieroncapas
capas de loción
lociónde de22mg/cm
mg/cm 2
2 en en cada
cada cuadrante
cuadrante de ladelámina
la lámina
de celofán,
de celofán,para
paraobtener
obtener las
las condiciones recomendadas
condiciones recomendadas parapara la aplicación
la aplicación de bloqueadores
de bloqueadores en
en la pielantes
la piel antesdede la exposición
la exposición solar
solar17 . En algunos
. En17algunos de los cuadrantes,
de los cuadrantes, se colocó
se colocó papel papel de
de aluminio
aluminio
(“Al”) (“Al”) para proporcionar
para proporcionar protecciónprotección
total contratotal contra la
la radiación UV radiación UV (control
(control positivo), y en positivo),
otros
y ennootros no se ningún
se adicionó adicionótiponingún tipo (“-”)
de protector de protector (“-”) (control
(control negativo). negativo).
Finalmente, Finalmente,
al distribuir todas al
distribuir todas las
las muestras muestrassey obtuvieron
y controles controles se tresobtuvieron tres sets,
sets, que fueron queenfueron
usados usados de
los ensayos en los
ensayos de fotoprotección
fotoprotección contraUVB
contra radiación radiación
y UVCUVB . y UVC.

FiguraFigura 1. Preparación
1. Preparación de las láminas
de las láminas de con
de celofán celofán con las muestras.
las muestras. Se trazaronSe trazaron
circunferencias y
circunferencias
cuadrantes y cuadrantes
en cada lámina en cada
de celofán, lámina
se rotuló con de celofán,
el nombre dese rotuló
cada con control
muestra, el nombre de cada
positivo (“Al”)
ymuestra,
negativo control
(“-“). Sepositivo (“Al”)gydenegativo
agregó 0,.031 loción y (“-“).
200 μLSedeagregó 0,031
etanol 96° y seg homogenizó
de loción y la200 μL deen
mezcla
etanol 96° y se para
cada cuadrante homogenizó
lograr un la mezcla
espesor de en cada 2cuadrante
2 mg/cm . La tabla para lograr
muestra un espesordedelas2 muestras
la distribución mg/cm2.
Lay controles
tabla muestra la lámina
en cada distribución de las
de celofán, lasmuestras
que fuerony controles
usadas paraenloscada lámina
ensayos de celofán, las que
de fotoprotección.
fueron usadas para los ensayos de fotoprotección.
Se realizaron ensayos de fotoprotección contra radiaciones UVB y UVC. Para la irradiación
Se realizaron ensayos de fotoprotección contra radiaciones UVB y UVC. Para la irradiación
UVB (302 nm), la fuente fue un transiluminador VWR (VWR International, EE. UU.) de cuatro
UVB (302 nm), la fuente fue un transiluminador VWR (VWR International, EE. UU.) de
tubos de luz de 8 W. El transiluminador se situó 10 cm por encima de las placas cubiertas con
cuatro tubos de luz de 8 W. El transiluminador se situó 10 cm por encima de las placas
las láminas de celofán. Las placas con cepa silvestre fueron expuestas a radiación UVB a
cubiertas con las láminas de celofán. Las placas con cepa silvestre fueron expuestas a
máxima intensidad por 2 minutos y las de la cepa rad9, por 1 minuto 15 segundos.
radiación UVB a máxima intensidad por 2 minutos y las de la cepa rad9, por 1 minuto 15
segundos.
Para la irradiación UVC (254 nm), las placas cubiertas con las láminas de celofán se colocaron
en la base de una cabina de madera que incluía, a una altura de 43 cm, dos lámparas germicidas
ParaGE la irradiación UVC ultravioleta
G15T8 (radiación (254 nm), las placas
RG-3 cubiertas
de 4,9 W). Lacon las láminas
exposición parade
lascelofán se colocaron
placas con cepa
en lasilvestre
base defue
unade 50 segundos y para las placas con la cepa rad9, 25 segundos. Todas lasgermicidas
cabina de madera que incluía, a una altura de 43 cm, dos lámparas placas
GE fueron
G15T8incubadas
(radiación ultravioletaambiente
a temperatura RG-3 de por4,9
1 aW). La exposición
2 días. Los ensayos para
fueronlasrealizados
placas con
por cepa
silvestre fue de 50 segundos y para las placas con la cepa rad9,
duplicado y repetidos por lo menos una vez más, en un día diferente.25 segundos. Todas las placas
fueron incubadas a temperatura ambiente por 1 a 2 días. Los ensayos fueron realizados por
duplicado y repetidos por lo menos una vez más, en un día diferente.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018

 Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 391

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los ensayos de fotoprotección in vivo permitieron un claro análisis comparativo de la actividad

fotoprotectora a radiación UV de 10 diferentes lociones. Las figuras mostradas corresponden
a resultados obtenidos el mismo día, con un procesamiento simultáneo de las muestras y bajo
las mismas condiciones. Se observó que, independientemente de la cepa tratada (silvestre o
mutante rad9), prevalecían los patrones de sobrevivencia de cada protector solar, según el tipo
de radiación usada (UVC o UVB). En cada ensayo se incluyeron dos secciones control: una
desprotegida y totalmente expuesta (“—”), y la otra con total protección por estar cubierta
con papel aluminio (“Al”). Estos dos controles establecieron el rango de comparación de las
actividades fotoprotectoras.

oprotección in
claro análisis
la actividad
iación UV de
es. Las figuras
sponden a
el mismo día,
nto simultáneo
ajo las mismas
observó que,
de la cepa
mutante rad9), Figura Figura 2. Set2.representativo
Set representativo de ensayoa UVC
de ensayo de fotoprotección de fotoprotección
usando la cepa mutante a Con form
patrones dela cepa. rad9.
UVC
Se realizaron
Se usando
diluciones sucesivas
plaqueó porladuplicado
cepa mutante
de 400,
cada dilución
2000
rad9.
y
formando
10000 veces
Secuatro
en cultivos celulares de
realizaron diluciones
sets con dos filas idénticas.
ada protector Luego sucesivas
de 1h cada deplaca
400,fue2000
cubiertaycon
10000 veces en lámina
la correspondiente cultivos celulares
de celofán de
previamente
preparada. La placa cubierta con la lámina de celofán fue expuesta a 25 segundos de radiación
o de radiación la cepa. SeUVC plaqueó
e incubadapor duplicado
por 1-2 cada dilución
días, a temperatura ambiente. formando
oelrobustocrecimientocelularobtenidoenEncada cuatro sets con dos filas idénticas. Luego de 1h cada placa fue
eron las dos cubierta con la correspondiente lámina de celofán previamente
ncluidas: una preparada. La placa cubierta con la lámina de celofán fue
mente expuesta expuesta a 25 segundos de radiación UVC e incubada por 1-2
días, a temperatura ambiente.
a con total
r cubierta con Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018
”). Estos dos
nte de la cepa
o mutante rad9), Figura 2. Set representativo de ensayo de fotoprotección a Con formato
patrones de UVC usando la cepa mutante rad9. Se realizaron diluciones
392 Raquel Merino Urteaga, Sandy Nelly Mansilla García, Luis Gabriel Gutiérrez Mesías...
cada protector sucesivas de 400, 2000 y 10000 veces en cultivos celulares de
po de radiación la cepa. Se plaqueó por duplicado cada dilución formando
nciadeoelrobustocrecimientocelularobtenAl
idoenEutilizar
ncada cuatro sets UVC
radiación con dos filas idénticas.
se manifestó Luegoendela 1h
una dicotomía cada placadefue
sobrevivencia las células
de levadura. En base a estos resultados se pudo agrupar a los bloqueadores en dos grupos:
uyeron las aquellos dos cubierta con la correspondiente lámina de celofán previamente
que presentaron un crecimiento abundante y hasta similar al control de protección
incluidas: total, preparada.
unalos cuales La un
presentaban placa cubierta
FPS 50+ (FPS decon la lámina
50-100); y los quedepor celofán fuecapacidad
una limitada
almente expuesta expuestacausaron
de fotoprotección a 25 segundos de radiación
una significativa UVC las
muerte celular, e incubada
lociones depor FPS1-2menor a 50.
Este comportamiento es reflejado en
días, a temperatura ambiente. la figura 2 que muestra resultados representativos de un
otra con ensayo total de fotoprotección a UVC, usando la cepa mutante rad9.
tar cubierta con
Al”). Estos dos
eron así el rango de
las actividades

ación UVC se
icotomía en la
las células de
base a estos
eron agrupar a los
n dos grupos:
presentaron un
FiguraFigura 3. Set representativo
3. Set representativo de ensayo
de ensayo de fotoprotección a UVBdeusando
fotoprotección
la cepa mutantearad9.
ndante y hasta La preparación de las placas y láminas de celofán fue realizada como se indica en la figura 2.
Con formato

l de protección UVB
La placa usando
cubierta la cepa
con la lámina mutante
de celofán rad9. porLa
fue expuesta preparación
1 minuto 15 segundosde las
a radiación
presentaban un placas y láminas de celofán fue realizada como se indica en la
UVB, e incubada por 1-2 días a temperatura ambiente.
figura 2. La placa cubierta con la lámina de celofán fue expuesta
e 50-100); yEnlos los ensayos de fotoprotección a radiación UVB fue posible una diferenciación más clara
entre las por 1 minuto
lociones 15 segundos
pertenecientes a radiación
al segundo grupo (FPSUVB,
menoreaincubada
50), como seporobserva
1- en la
ada capacidad de 3. Es así que el crecimiento celular en la sección que contiene la muestra E (FPS 30)
figura 2 días a temperatura ambiente.
usaron una significativa
presentó un ligeromuerte
aumento,celular,
mientraslasque
lociones
la seccióndeconFPS menorMa(FPS
la muestra 50. 15)
Estepermaneció
con escaso crecimiento. Este cambio en la conducta presentada por la loción E al irradiar
s reflejado en la figura 2 que muestra resultados representativos de un ensayo
con UVB, en comparación al resultado del tratamiento con radiación UVC, se explica por
a UVC, usando específica rad9.
la cepa mutante
la composición que posee, la cual define el correspondiente valor de FPS. Por
ello, la presencia solo en esta loción y no en M, de algunos filtros orgánicos con capacidad
de absorción a una longitud de onda en el rango UVB, como el octocrileno, podría ser la
razón detrás de su aumento en capacidad fotoprotectora. Por otro lado, no se identificaron
cambios entre los bloqueadores con FPS mayor que 50, ya que todos permanecieron con
similar crecimiento robusto. Sin embargo, cabe destacar que para ambos tratamientos de
irradiación (UVC y UVB), la loción R (FPS 50) presentó un exiguo crecimiento, desviándose
de los patrones de fotoprotección inherentes a los bloqueadores con tal FPS.

Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018

 Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 393

fotoprotección a
ue posible una
s clara entre las
entes al segundo
r a 50), como se
a 3. Es así que el
ar en la sección
estra E (FPS 30)
gero aumento,
sección con la
15) permaneció
miento. Este
ducta presentada Figura 4. Set representativo de ensayo de fotoprotección a UVB y UVC usando la cepa
Figura 4. Set representativo de ensayo de fotoprotección a UVB y Con formato: F
silvestre sin la incorporación de etanol como diluyente. La preparación del ensayo fue
radiar con UVB, realizada
UVC usando la cepa
como se indica silvestre
en la sinplaca
figura 2. La la incorporación de etanol
cubierta con la lámina como
de celofán fue
expuesta a 2 minutos de radiación UVB o 50 segundos de radiación UVC e incubada por 1-2
al resultado del diluyente. La preparación del ensayo fue realizada como se indica
días a temperatura ambiente.
diación UVC, se en la figura 2. La placa cubierta con la lámina de celofán fue
a composición expuesta
Se procedió a 2 minutos
a analizar de radiación
este singular UVBalo realizar
comportamiento 50 segundos
pruebasdecon radiación
esta loción sin
la
ee, la cual define UVC
incorporación e incubada
de etanol por
como 1-2 días
diluyente a temperatura
(la única ambiente.
modificación al proceso), y procurando
un esparcimiento homogéneo en cada sección. La fotoprotección conferida por R (figura 4)
valor de FPS.
en estaPor ello,
prueba fue la presenciamayor
notablemente soloa laenprevia,
esta llegando
loción aysernocomparable
en M, ade la protección
ánicos con capacidad de absorción a una longitud de onda en el rango UVB, secciones
del control con aluminio y significativamente mayor a la otorgada por M, ambas
también incluidas en el nuevo ensayo. Se concluyó que en este caso particular la dilución
o, podría serrealizada
la razóncon detrás
etanoldemodifica
su aumento en capacidad
la distribución fotoprotectora.
de los activos presentes en Por la loción R, e
entificaron cambios entre
interfiere con los bloqueadores
su actividad bloqueadora. con FPS mayor que 50, ya que
on con similar crecimiento robusto. Sin embargo, cabe destacar que para
En base a los resultados reportados y bajo las condiciones seguidas en este ensayo es posible
s de irradiación
afirmar(UVC
que noyfue UVB),
posiblelaevidenciar
loción R (FPS 50)
diferencias entrepresentó un exiguo
las actividades fotoprotectoras de
ándose de los patrones de fotoprotección inherentes a los bloqueadoresfuecon
las lociones analizadas de FPS 50 a 100. Por otro lado, la distinción si clara para los
bloqueadores con FPS menores que 50.

Asimismo, al comparar los precios por gramo de las lociones analizadas (figura 5), se
observócomportamiento
izar este singular una gran dispersión entre los valores.
al realizar Un casocon
pruebas particular
esta fue el de la
loción sinloción
la E, que es
comercializada como una loción hidratante que previene el envejecimiento de la piel e incluye
tanol como además
diluyente (lafotoprotectores
activos única modificación
que conducen al aproceso), y procurando
un FPS 30, capacidad que fue unefectivamente
mogéneo en cada sección. La fotoprotección conferida por R (figura 4) en dispersión
evidenciada en los ensayos. Estas características podrían justificar su alto costo. La
de los valores obtenidos para las demás lociones sí es destacable, considerando que excepto
tablemente mayor a la previa, llegando a ser comparable a la protección del
io y significativamente mayor a la otorgada por M, ambas secciones también
vo ensayo. Se concluyó que en este caso particular la dilución realizada con Perú. 84(3) 2018
Rev Soc Quím

distribución de los activos presentes en la loción R, e interfiere con su

 394 Raquel Merino Urteaga, Sandy Nelly Mansilla García, Luis Gabriel Gutiérrez Mesías...

por las muestras E y M (FPS 30 y 15), todas presentaban valores de FPS ≥ 50 (FPS 50+), lo
además
que, activos
según fotoprotectores
los resultados que conducen
presentados, a un FPS
implicaba 30, capacidad
similares que fuefotoprotectoras.
capacidades efectivamente Las
evidenciada
muestras en los ensayos.
comerciales G, PEstas características
y R tienen valorespodrían justificar
declarados su alto
de FPS 50costo. La dispersión
y presentan precios por
de los valores
gramo obtenidos
entre 0,177 para Esto
y 0,488. las demás lociones
implica síi esestos
que para destacable,
productosconsiderando que excepto
con similares capacidades
por las muestras
declaradas E y M (FPS 30 un
de fotoprotección, y 15), todaspodría
usuario presentaban
estar valores
pagando deprecios
FPS ≥ 50 2,8(FPS 50+),
veces máslo altos.
que,también
Es según los resultadosdestacar
importante presentados, implicaba
el alto costo desimilares
la muestracapacidades
N, de una fotoprotectoras. Las
marca muy reconocida
en el país,comerciales
muestras con un valorG, Pdeclarado
y R tienendevalores
FPS 100 y distribuida
declarados de FPSmediante pedidos
50 y presentan por catálogo.
precios por
Si se entre
gramo considera
0,.,177que las muestras
y 0,.488. FPSque50+
Esto implica paraanalizadas presentan
estos productos similares
con similares capacidades
capacidades
fotoprotectoras y se relacionan
declaradas de fotoprotección, los precios
un usuario por gramo
podría estar pagando(0,177
preciospara G y 0,738
2,.8 veces paraEsN), se
más altos.
tendría
también entonces
importanteque un usuario
destacar podría
el alto costo de estar pagando
la muestra N, de4,2
unaveces
marca más
muy por el mismo
reconocida en elefecto
fotoprotector.
país, con un valor declarado de FPS 100 y distribuida mediante pedidos por catálogo. Si se

Figura
Figura 5. Análisis
5. Análisis de losdeprecios
los precios por gramo
por gramo (soles/gramo)
(soles/gramo) de las lociones
de las lociones analizadas.
analizadas. Se
Se calcularon Con formato: Fue
calcularon
los los valoreslosdividiendo
valores dividiendo respectivoslosprecios
respectivos precios
de venta de loción
de cada venta de cada
entre loción
el peso en entre
gramosel peso
del
en gramos*Las
contenido. del contenido.
lociones E y*LasM nolociones E y M no soncomo
son comercializadas comercializadas
bloqueadorescomo bloqueadores
solares sino como
solares sino
hidratante como hidratante
y aclaradora, y aclaradora,
respectivamente. respectivamente.
La loción R obtuvo laLarelación
loción soles/gramo
R obtuvo la másrelación
alta
soles/gramo
dentro de los bloqueadores más50.alta dentro de los bloqueadores de FPS 50.
de FPS
considera
A pesar de queque
las muestras
el sistemaFPS FPS
50+ analizadas
es el máspresentan
aceptado similares
para la capacidades
evaluación fotoprotectoras
de eficiencia de
y se relacionan los precios por gramo (0,177 para G y 0,738 para
bloqueadores, la interpretación de éste ha sido por años un tema controversial N), se tendría entoncesyaque que, al
un usuario
estar basado podríìa estar pagando
en respuestas 4,.2 veces de
individuales máscada
por el mismo efecto
voluntario, no fotoprotector.
genera una reproducibilidad
confiable. Algunas entidades internacionales como la FDA ya proponen que el máximo valor
A pesar de
colocado en que el sistema
la etiqueta FPS es elseamás
de lociones aceptado
“50+”, para respaldada
decisión la evaluación porde eficiencia
la falta de
de evidencia
bloqueadores, la interpretación de éeste ha sido por años un tema controversial
clínica que verifique un beneficio relevante en productos declarados con FPS mayor. Los ya que, al estar
basado en respuestas
resultados mostrados individuales
corroboran dela
cada voluntario,
fútil no genera
correlación existenteuna entre
reproducibilidad confiable. y sus
estos bloqueadores
Algunas entidades internacionales como la FDA ya proponen que
precios. Es por ello muy importante resaltar que, en lugar de considerar parámetrosel máximo valor colocadocomo
marca, alto precio, o valor de FPS, que generan una falsa sensación de seguridad,que
en la etiqueta de lociones sea “50+”, decisión respaldada por la falta de evidencia clínica es más
verifique untomar
importante beneficio relevante en productos
en consideración la cantidad declarados con FPS
del bloqueador mayor.
usada Los resultados
(obtención de capas de 2
mostrados
mg/cm 2 corroborandelaaplicación
), momento fútil correlación existenteantes
(20 minutos entre de
estos bloqueadoressolar),
la exposición y sus precios. Es en
y regularidad
por ello muy importante resaltar que, en lugar de considerar parámetros
su reaplicación (cada 2 horas o con más frecuencia en casos de excesiva sudoración o baños como marca, alto
precio,
de agua).o valor de FPS, que generan una falsa sensación de seguridad, es más importante tomar
en consideración la cantidad del bloqueador usada (obtención de capas de 2 mg/cm2), momento
Rev Soc Quím Perú. 84(3) 2018
Comprobación de los efectos de bloqueadores solares comerciales usando ensayos basados en la... 395

CONCLUSIONES

El estudio realizado refleja el margen de correlación existente entre la capacidad de

fotoprotección real de una loción bloqueadora según su valor de FPS. Se observa una
proporcionalidad hasta un valor de FPS 50. Sin embargo, se demostró que las lociones con
valores de FPS mayores que 50 exhiben similar capacidad de fotoprotección. Por esta razón,
no se justifica la extensa variación de precios entre lociones bloqueadores con valores de FPS
mayores a 50. Es, por tanto, necesario recomendar a los usuarios priorizar el uso periódico y
correcto de lociones bloqueadoras de FPS 50+, y evitar ser influenciados por los rótulos que
indican valores más altos de FPS, por sus altos precios, o por el reconocimiento de la marca.

AGRADECIMIENTOS

Nuestro profundo agradecimiento a “InnovatePerú” (Contrato N°157-PNICP-PIAP-2015)

por el financiamiento que hizo posible este trabajo. También agradecemos al Dr. Luis
Moromisato (Laboratorio Skinclean S.R.L.) por la provisión de muestras y su valioso
apoyo técnico; y a la Srta. Bélgica Pérez, Sr. José Kitazono, e integrantes del Laboratorio
de Química Biológica y Bioanálisis en la UNALM por su entusiasta ayuda a lo largo del
desarrollo de este trabajo.

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