Practica4Micrótomo 221014 072401

Jiménez Juárez Salvador
Lechuga Ramírez Monserrath

Comprender los principios y fundamentos básicos para el corte y
tinción de muestras histológicas mediante el uso de microtomía y
colorantes, para reconocer los pasos finales del procesamiento de
muestras y la observación de las misams por microscopía óptica.
Que el alumno comprenda los principios y fundamentos

básicos de los diferentes tipos de tinciones así como su
utilidad en el estudio de muestras histológicas, realizando
la tinción de una laminilla para que se familiarice con las
técnicas de tinción.
Que el alumnos comprenda el fundamento del

micrótomo y conozca su uso.
Que el alumno adquiera la capacidad de diferenciar los

diferentes tipos de tinción al analizar uuna laminilla
histológica.
Valorar la importancia de llevar a cabo en orden y correctamente

cada uno de los pasos a seguir hasta la obtención de un corte
histológico mediante uso del micrótomo.
El micrótomo (mikro: pequeño", y temnein:
parte/rebanada (Gómez, 2006; Dey, 2018)) es un
instrumento de corte que permite obtener secciones
muy finas de un material. Después de la inclusión y la
obtención del bloque de parafina, el siguiente paso en
la técnica histológica ordinaria es la microtomía
(Fortoul, 2017; Dey, 2018). Para lograr examinaciones
microscópicas exitosas es imperativo tener delgados
cortes del tejido.
Fig 1. Micrótomo de rotación.
Los microtomos y su inclusión como un
instrumento fundamental empezaron con el inicio de
los microscopios de luz. Para poder analizar objetos,
estos debían ser lo suficientemente finos para que la luz
los traspasara. Los primeros micrótomos eran en su
inicio simples cuchillas (normalmente cuchillas de
afeitar) con los que se hacían cortes de forma manual.
Como las exigencias a los preparados iban en
aumento, fue necesario que los micrótomos se
desarrollaran. Los primeros micrótomos, tal como hoy
en día los conocemos, se desarrollaron en 1770. Con
estos se podía fijar la prueba y ajustar el grosor del
Fig 2. Corte histológico en
corte mediante unos tornillos. micrótomo.
Hay diversos tipos de micrótomos (de mano,

balanceo, rotación, deslizamiento, criostato, ultra
micrótomo, etc.), siendo el más empleado el de
rotación por las ventajas que aporta: gran precisión y la
posibilidad de producir secciones en serie muy finas.
Hoy en día, los micrótomos mecánicos se

componen de un bloque, un sujeta-muestras y un
equipo técnico para el control del avance. La calidad
de los preparados depende del tipo de avance, la
geometría de la cuchilla y el ángulo entre la cuchilla y la
dirección de corte. Adicionalmente se puede influir en
el resultado en la preparación de la muestra (por
ejemplo, mediante congelación). Además de los
micrótomos mecánicos, actualmente se usan cada vez
más los micrótomos láser, con los que es posible preparar muestras sin
contacto.
Las cuchillas que utilizan los micrótomos pueden ser de tres tipos de
materiales, los cuales dependen de la necesidad que el laboratorio necesite
cubrir y de la finura del corte que requieran las secciones.
• Cuchillas de Acero: son especiales para cortar secciones de tejidos

blandos de animales y/o vegetales.
• Cuchilla de Vidrio: son ideales para extraer secciones muy delgadas para
microscopía de luz y electrónica.
• Cuchillas de diamante: Se utilizan en las industrias, pues éstas se utilizan

para cortes finos de materiales duros como huesos, dientes y materia
vegetal como, maderas duras, pues además son ideales para microscopía
de luz como y electrónica.
Mayoritariamente los tejidos, sobre todo los de los animales, son incoloros
y por ello necesitamos teñirlos para observar sus características morfológicas con
el microscopio óptico. Ello se consigue con el uso de los colorantes, sustancias
coloreadas que son capaces de unirse de manera más o menos específica a
estructuras del tejido aportándoles color mediante reacciones acido-base. Estas
tinciones se realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las más
utilizadas las secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas
en el criostato.
Antes de proceder a la tinción, si partimos de cortes de parafina, tenemos
que llevar a cabo procesos previos sobre las secciones como es el desparafinado
y la hidratación, puesto que estos colorantes son hidrosolubles. Una de las
tinciones usadas por excelencia usada en histología es la hematoxilina-eosina
sobre cortes de parafina; como vemos se usa un colorante básico (hematoxilina)
y otro ácido (eosina) para teñir de diferente color a las estructuras ácidas y básicas
de la célula. Otras tinciones empleadas para distinguir tejidos es la tinción de
Giemsa, tinción de Coomaasie, Tinción de Romannowsky-Giemsa, tinción
tricrómica de Masson, solo por mencionar algunas; por lo tanto al existir una gran
variedad de tinciones, estas fueron diseñadas para la tinción de determinados
componentes de los tejidos y así apreciar sus estructuras a través del microscopio
óptico.
El espermatozoide de los mamíferos está
compuesto en dos regiones principales: Histología de Espermatozoides
a) Cabeza: contiene el acrosoma, el

núcleo y residuos de algunas estructuras
citoplasmáticas. El acrosoma está rodeado
por una membrana y contiene enzimas
hidrolíticas.
Objetivo: 40x
Aumento total: 400
Tinción: Coomasie Azul
Microscopio: óptico compuesto
b) Flagelo: contiene un axonema central
rodeado por fibras externas densas. La
parte anterior del flagelo contiene las
mitocondrias enrolladas alrededor de las
fibras densas externas. Estas estructuras en
conjunto forman el citoesqueleto del
flagelo.
Observaciones:
En la muestra histológica observada a través del microscopío, los espermas de
observaron con una ligera tonalidad azulada por el borde, posiblemente requería
mayor tiempo bañado en la tinción de Coomasie o pudiera ser que la tinción tenga
varios años en uso y haya perdido ligeramente sus propiedades pintoras. Sin
embargo pudo apreciarse el citoesqueleto de los espermas se apreció la cabeza y el
flagelo, no obstante los componentes de estas dos partes como el núcleo y el
acrosoma no fueron apreciables.
La sangre es un tejido conectivo líquido, Histología De La Sangre
que circula por capilares, venas y arterias de
todos los vertebrados.
Sustancia líquida:
Plasma: líquido transparente con cierta

tonalidad amarilla, se encuentra formada por
agua en un 90%, y el otro 10% corresponde a
sales, minerales, azúcares y una gran cantidad
de proteínas; tiene como funciones (ejemplos
breves): las inmunoglobulinas ayudan a
la defensa de infecciones, factores de Objetivo: 40x
coagulación, etc. Aumento total: 400
Tinción: Giemsa
Sustancias sólidas: Microscopio: óptico compuesto
Glóbulos rojos: suministran oxígeno

desde los pulmones a todo el cuerpo.
Glóbulos blancos: son parte del sistema

inmunitario.
Plaquetas: ayudan a la coagulación de la

sangre.
Fig. 10. Representación de las

células sanguíneas
Observaciones:
Histológicamente nos fue posible encontrar ciertas células importantes dentro de la

muestra, estas se encontraban unidas, la tinción de Giemsa tiñó dichas células con
tonalidades azuladas; identificamos especialmente la presencia de plaquetas (A) que
encontramos dispuestas en formas muy pequeñas y ovaladas de color azulado.
Por otra parte, observamos a los linfocitos (B) que se encuentran de color más
intenso y oscuro, finalmente los eritrocitos (C) que pueden verse en forma de pequeños
círculos que tienen cierta transparencia central debido a si estructura bicóncava.
Retomando la práctica anterior en donde se realizó una inclusión en
parafina del órgano (pulmón y corazón de rata) dejando que este solidifique una
semana, al pasar este tiempo se desmoldar el bloque el cual fue comparado con
un bloque proporcionado por el profesor, esta comparación nos ayudó a
identificar artefactos, uno de los observados es que debido a la regular inclusión
en parafina no quedó de manera uniforme propiamente, ya que el órgano no se
cubrió del todo y se veía al descubierto en su mayor parte, por lo que aunque al
momento de realizar el tallado previo (forma de trapecio) para poder ajustarlo
al microtomo de rotación, se desprendió un gran trozo de parafina.
Posteriormente se procedió a la tinción de muestras histológicas las cuales
fueron: frotis sanguíneo, espermas de cobayo y tejido muscular.
A la hora de observar a través del microscopio las muestras se observó

que en las laminillas al utilizar diferentes tipos de tinción, cada una tiene un
propósito diferente, hay tinciones que muestran una estructura completa, así
como hay otras que solo tiñen ciertas partes de la muestra y otras que solo
mejoran la exposición de estas mismas, todo va a depender de que es lo que se
quiera analizar al igual que el tipo de muestra.
Para poder visualizar y diferenciar las células contenidas en el frotis se

empleó la tinción de Giemsa ya que los eritrocitos son teñidos por los aniones
eosina, los leucocitos se observan con un núcleo púrpura y el citoplasma de color
azul-lila.
En seguida los espermas de cobayo se tiñeron con la tinción de Coomasie

ya que esta tinción tiene afinidad por las proteínas. Las proteínas del acrosoma
se tiñen de azul.
Finalmente, la tinción de Hematoxilina-Eosina fue empleada para la

visualización e identificación de núcleos y citoplasma celular. Esta tinción se basa
en una reacción ácido-base, en la cual la hematoxilina es un colorante básico con
afinidad por componentes ácidos, como son los ácidos nucleicos aportando una
coloración morada, y la eosina es un colorante ácido que tiñe el citoplasma que
posee propiedades básicas, otorgándole una coloración rosada.
Se logró adquirir un acercamiento al conocimiento de la correcta
aplicación del procesamiento histológico para el tratado de una muestra los
cuales fueron de correctamente aprehendidos tras una presentación
demostrativa de los profesores y demás alumnos y el funcionamiento general de
un micrótomo para realizar correctamente el corte del bloque de parafina con
una muestra de tejido, sin embargo se pudo ver los resultados de una muestra
otorgada por los asesores con los procesamientos adecuados para tenerla como
referencia y llevar a cabo el corte con el microtomo lo que nos ayudó a
comprender la importancia de llevar a cabo y de manera adecuada cada uno de
los pasos,desde la toma de muestra hasta la tinción,con base en esto logramos la
observación y el análisis minucioso del tejido.
Así mismo se aprendieron las bases generales de cada una de las
diferentes tinciones con diferentes muestras para observarlas al microscopio y
aprender sobre las diferentes células/tejidos y como se puede identificar qué
estructuras son capaces de teñir cada colorante según su capacidad química y
cómo este interactúa con la muestra.
• Delgado, L. (2017) principios básicos prácticos de anatomía e histología. ciudad de

México, México
•
• SciElo. (2004) Salud pública y regulación sanitaria. Unidad de criopreservación de
muestras biológicas
•
• Megías M, Molist P, Pombal MA. Atlas de histología vegetal y animal.
http://mmegias.webs.uvigo.es/inicio.html.
•
• Slideshare. (2022) pasos de la técnica histológica básica.
•
• Fortoul, T. (2017). Histología y Biología Celular 3 ed (pp 11-17). China: McGraw-Hill.
Education.
•
• Fiette, L., Slaoui, M., Bauchet, AL. (2017). Procedures of Necropsy and Tissue
Sampling. En Gautier, JC. (Ed.), Drug Safety Evaluation. Methods and Protocols, (2°
ed., Vol. 1641, pp. 71-100). Humana Press

Practica4Micrótomo 221014 072401

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Practica4Micrótomo 221014 072401

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Practica4Micrótomo 221014 072401

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Jiménez Juárez Salvador

Lechuga Ramírez Monserrath

Que el alumno comprenda los principios y fundamentos

Que el alumnos comprenda el fundamento del

Que el alumno adquiera la capacidad de diferenciar los

Valorar la importancia de llevar a cabo en orden y correctamente

Hay diversos tipos de micrótomos (de mano,

Hoy en día, los micrótomos mecánicos se

• Cuchillas de Acero: son especiales para cortar secciones de tejidos

• Cuchillas de diamante: Se utilizan en las industrias, pues éstas se utilizan

a) Cabeza: contiene el acrosoma, el

Plasma: líquido transparente con cierta

Glóbulos rojos: suministran oxígeno

Glóbulos blancos: son parte del sistema

Plaquetas: ayudan a la coagulación de la

Fig. 10. Representación de las

Histológicamente nos fue posible encontrar ciertas células importantes dentro de la

A la hora de observar a través del microscopio las muestras se observó

Para poder visualizar y diferenciar las células contenidas en el frotis se

En seguida los espermas de cobayo se tiñeron con la tinción de Coomasie

Finalmente, la tinción de Hematoxilina-Eosina fue empleada para la

• Delgado, L. (2017) principios básicos prácticos de anatomía e histología. ciudad de

También podría gustarte