Clase 1y 2 .
Clase 1y 2 .
Clase 1y 2 .
FUNDAMENTO
Toma de Muestra:
Extirpación de pequeños fragmentos de tejido
(humano o animal). Puede obtenerse de
individuos vivos (biopsia) o muertos (necropsia)
Aclaramiento
En esta etapa intermedia se elimina el
alcohol del tejido y éste se impregna con
un solvente de la parafina. Usualmente se
realiza con el xileno (xilol). Le otorga
transparencia al tejido.
Infiltración o Inclusión en Parafina:
La parafina penetra en los tejidos y desplaza al
agente aclarante, durante 5 a 20 horas según la
naturaleza y las dimensiones de la muestra, luego
la muestra se deposita en pequeños recipientes y
se deja solidificar
Coloración:
Proporciona Contraste al tejido para ser estudiado al microscopio óptico.
El método de tinción de rutina es la Hematoxilina-Eosina (H.E.)
Preparación final del corte histológico procesado:
Aclaramiento: los reactivos utilizados (xilol) además de eliminar el alcohol, facilitan la
penetración de la resina del medio de montaje y otorga transparencia al corte de tejido
Montaje del cubreobjeto: a fin de obtener una preparación permanente, el corte se cubre
con un vidrio delgado, adherido con un medio de montaje natural (Bálsamo de Canadá) o
sintético
7. Montaje:
Los cortes ultrafinos se montan sobre un reticulado de cobre (“grilla”)
cubierto por una película plástica de sostén delgada.
8. Coloración:
Es necesario para aumentar el contraste mejora la visualización de los
detalles de la estructura celular.
Se utilizan materiales de gran densidad metales pesados Comienza añadiendo
en los pasos de la fijación, y deshidratación los colorantes (Osmio, Nitrato de
Uranilo) Inmersión secuencial en acetato de uranilo y citrato de Plomo.
•Una vez que se obtiene el corte de tejido en una lámina, el estudiante debe
imaginarse lo que verá al microscopio
Colorantes metacromático:
Colorantes básicos que reaccionan con algunas
estructuras tisulares y producen tonos de color
totalmente distintos al que se espera. Ej.: azul de
metileno o de toluidina
Colorantes indiferentes:
Azán
PAS o del ácido peryódico de Schiff
Arteria
LIPIDOS
6º.- Montar.
Azán (Azocarmin + Aniline blue)
Color Rojo
Esófago
Núcleos celulares
Color Rosa
Color Azul
Mucinógeno
Fibras de colágeno
INMUNOHISTOQUIMICOS
Consisten en la visualización de un componente
celular (organoide, macromolécula) mediante
una reacción antígeno-anticuerpo.
DIRECTO
Esta técnica se vale de un Ac primario
marcado con Fluorocromo que reacciona con
el Ag dentro de la muestra
Es un procedimiento de un solo paso y
comprende un solo Ac marcado.
INDIRECTO
Tiene mayor sensibilidad, el fluorocromo en
vez de conjugarse con un Ac primario, el
fluorocromo se conjuga con un Ac
secundario dirigido contra un Ac primario
Fluoresceína
Vimentina
Rodamina
GFAP
INMUNOENZIMATICAS
Insulina
Glucagon
MICROSCOPIA
¿Qué es un Microscopio?
•Es un Instrumento que aumenta el tamaño de una imagen y
permite ver mayores detalles.
•Cabezal
•Brazo
•Revolver
•Platina
•Base
Ópticas e iluminación
•Lámpara (Foco)
•Condensador/Diafragma
•Objetivos
•Oculares
PODER DE RESOLUCIÓN
Es la capacidad de una lente o sistema
óptico del microscopio de producir
imágenes separadas de objetos que están
muy cerca uno de otro
Equivale a la distancia mínima en la cual
se distinguen dos objetos
PODER DE PENETRACIÓN
es el que permite observar diferentes
planos en una misma posición del enfoque.
❑ Poder de definición: es la capacidad de dar
imágenes claras de contornos nítidos.
Ojo humano
MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO CLARO:
La luz atraviesa el objeto examinado y el objetivo capta la luz directa
proveniente de la fuente luminosa.
Sólo los rayos de luz refractados por las estructuras de la muestras son los
que penetran en el objetivo:
Gracias a un condensador especial que ilumina el preparado con mucha
intensidad pero en forma oblicua.
Se ve el campo oscuro y sobre el se destacan pequeñas partículas brillantes.
Proporciona mayor contraste.
•La célula:
•Concepto.
•Tipos: Eucariotas y Procariotas.
•Función.
•Forma, Tamaño y Organización.
•Compartimentación celular:
•Citoplasma y núcleo.
•Citoplasma:
•Citosol
•Inclusiones
•Organelas citoplasmáticas:
•Membranosas
BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA CLASE 2:
El Núcleo
• Es un compartimiento limitado por membrana que contiene el
genoma junto con las enzimas necesarias para la duplicación del ADN
y su transcripción en ARN.
INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS
Hígado. H-E Hígado. Carmín de Best 400X Mesenterio. Rojo Sudan 50X
•Pigmentos:
•Pueden ser exógenos o endógenos.
•Exógenos:
•Carotenos → Piel (dermis, epidermis), Adipocitos.
•Polvo de carbón → Macrófagos alveolares (Pulmón)
•Endógenos:
•Hemoglobina: Hemosiderina, Bilirrubina
•Lipofuscina.
• FUNCIONES
• Barrera permeable selectiva entre el
citoplasma y el medio extracelular
Fosfolípidos: anfipáticos
•Integrales o transmembranales:
abarcan la totalidad de la bicapa
lipidica
•Hojuela interna
•Hojuela externa
•Zona clara entre las hojuelas
RESUMEN
Cabeza polar
hidrofílicas
Colas aciloadiposas
hidrófobas
TRANSPORTE DE MEMBRANA
Las sustancias que entran o salen de la célula tienen que atravesar la membrana
plasmática.
Algunas sustancias (moléculas liposolubles o pequeñas sin carga), atraviesan la
membrana por difusión simple a favor de un gradiente de concentración
Las demás moléculas requieren la participación de proteínas de transporte para poder
atravesar la membrana
TRANSPORTE DE MEMBRANA
Proteínas transportadoras:
Las moléculas hidrosolubles pequeñas requieren
proteínas transportadoras muy selectivas que
puedan hacerlas pasar la membrana, después de
fijar una molécula la proteína transportadora
sufre una serie de cambios de conformación y
libera la molécula del otro lado de la membrana
Endocitosis: proceso de
transporte vesicular en el cual la
sustancia entra en la célula.
Endocitosis Clatrina-independiente
La Fagocitosis pero actina-dependiente
Endocitosis
Mediada Endocitosis Clatrina-dependiente
por Receptores
EXOCITOSIS
TRANSPORTE DE VESICULAR
Mecanismo constitutivo
MEMBRANOSOS NO MEMBRANOSOS
( Presenta membrana plasmática que separan (Que carecen de membrana
el medio interno del organelo del citoplasma plasmática.) Responsables de la
circundante) Responsables de nutrición, forma, movimiento, reproducción
síntesis, respiración, metabolismo. celular.)
En microscopía óptica:
Corresponde al ergastoplasma
• Producción de esteroides,
colesterol y triglicéridos
• Destoxificación de materiales o
sustancias tóxicas como el
alcohol, drogas
• Control de la contracción
muscular (células músculo
esquelético)
En microscopía óptica:
En microscopía óptica:
no se tiñe con H-E (zona paranuclear no
teñida).
Organelas citoplasmáticas
membranosas digestivas ricas en
enzimas hidrolíticas
Se encargan de la degradación
de macromoléculas derivadas de
los mecanismos endocíticos, así
como de la célula misma
(autofagia)
Endosomas:
Llevan a cabo:
La Fosforilación oxidativa (respiración celular) → Formación ATP
(Energía)
Síntesis de lípidos
Microscopía electrónica
En microscopía óptica
Características