Enferm Infecc Microbiol Clin.

2010;28(8):492–497

www.elsevier.es/eimc

Original

Identificación bacteriana mediante espectrometrı́a de masas matrix-assisted

laser desorption ionization time-of-flight. Comparación con la metodologı́a
habitual en los laboratorios de Microbiologı́a Clı́nica
Laura Ferreira a, Silvia Vega b, Fernando Sánchez-Juanes a, Magdalena González b, Ana Herrero b,
Ma Carmen Muñiz a, José Manuel González-Buitrago a,c y Juan Luis Muñoz b,d,
a
Unidad de Investigación, Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca, España
b
Departamento de Microbiologı́a, Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca, España
c
Departamento de Bioquı́mica y Biologı́a Molecular, Universidad de Salamanca, Salamanca, España
d
Departamento de Medicina Preventiva, Salud Pública y Microbiologı́a Médica, Universidad de Salamanca, Salamanca, España

I N F O R M A C I Ó N D E L A R T Í C U L O R E S U M E N

Historia del artı́culo: Introducción: Los métodos de identificación bacteriana usados habitualmente en Microbiologı́a Clı́nica,
Recibido el 24 de septiembre de 2009 aunque miniaturizados y automatizados, se siguen basando en principios similares a las pruebas de
Aceptado el 23 de diciembre de 2009 identificación clásicas. Sin embargo, se van produciendo avances tecnológicos que pueden modificar
On-line el 20 de abril de 2010 radicalmente estas metodologı́as. En el presente estudio se determina la utilidad de la mass spectrometry
(MS, ‘espectrometrı́a de masas’) matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight (MALDI-TOF) para
Palabras clave: la identificación bacteriana habitual en el laboratorio de Microbiologı́a Clı́nica.
Identificación bacteriana Métodos: Se analizaron 294 aislamientos bacterianos aerobios y anaerobios facultativos (65 grampositivos
Espectrometrı́a de masas y 229 gramnegativos) obtenidos a partir de diferentes muestras clı́nicas mediante metodologı́a
Matrix-assisted laser desorption ionization microbiológica habitual (Wider, Francisco Soria Melguizo, Madrid, España; Vitek-2, API Staph, API 20
time-of-flight Strep, API Coryne y API NH, BioMérieux, Marcy L’Etoile, Francia) y mediante un dispositivo de MS MALDI-
TOF Autoflex III (Bruker Daltonics GmbH, Leipzig, Alemania). Los aislamientos de Salmonella se tipificaron
con sueros especı́ficos. Los aislamientos que no ofrecieron una fiabilidad en la identificación superior al
95% en Vitek-2 o Wider se corroboraron mediante API. Los aislamientos en los que los sistemas API no
ofrecieron un perfil fiable se descartaron. La identificación mediante MS MALDI-TOF se puntúa
automáticamente por el software del sistema de 0–3 en función de su fiabilidad. Los aislamientos con
puntuaciones inferiores a 1,5 se consideraron no fiables. La correlación entre ambas identificaciones se
clasificó como correlación en la especie, el género o la ausencia de correlación.
Resultados: La correlación en la especie en los grampositivos estudiados fue del 100%. La correlación en los
gramnegativos fue del 87,7% en la especie y del 97,7% en el género. Solo hubo ausencia de correlación en un
2,2% de los aislamientos. Las identificaciones fallidas se dieron en los géneros Raoultella y Acinetobacter, en
Stenotrophomonas maltophilia y en Francisella tularensis.
Conclusión: La identificación de aislamientos bacterianos clı́nicos mediante MS MALDI-TOF muestra una
excelente correlación con la identificación mediante la metodologı́a convencional. A ello hay que añadir
que se trata de una tecnologı́a que permite la identificación de los microorganismos a partir de colonias
crecidas en placa de cultivo en apenas unos minutos con una metodologı́a extremadamente simple y sin
apenas consumibles, aunque los costes de amortización de los equipos pueden ser considerables.
& 2009 Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados.

Identifying bacteria using a matrix-assisted laser desorption ionization

time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometer. Comparison with
routine methods used in clinical microbiology laboratories

A B S T R A C T

Keywords: Introduction: The methods routinely used for bacterial identification in Clinical Microbiology Laboratory,
Bacterial identification although miniaturized and automated, are still based on the same basic principles as classical identification
Mass spectrometry methods. Nevertheless, technological advances are emerging which could modify these routine methods. We
Matrix-assisted laser desorption ionization report a comparative study between conventional identification methods and mass spectrometry MALDI-
time-of-flight TOF (MS MALDI-TOF) for bacterial identification in the Clinical Microbiology Laboratory.

 Autor para correspondencia.

Correo electrónico: jlmubel@usal.es (J.L. Muñoz).

0213-005X/$ - see front matter & 2009 Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.eimc.2009.12.009
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Methods: We analysed 294 facultative anaerobic and aerobic isolates (65 Gram positives and 229 Gram
negatives), obtained from different clinical samples, using conventional microbiological methods (Wider,
Fco. Soria Melguizo, Madrid, Spain; Vitek-2, APIStaph, API 20 Strep, API Coryne and API NH, bioMérieux,
Marcy L’Etoile, France) and an Autoflex III MS with a MALDI-TOF device (Bruker Daltonics GmbH, Leipzig,
Germany). Salmonella isolates were also typed by using specific sera. Isolates identified with a confidence
rate o95% were checked by using API systems. Isolates which were not accurately identified by API systems
were rejected. MS MALDI-TOF identification is automatically scored by the system software between 1 and 3
points. Isolates with scores o1.5 were classified as unreliable. Correlation between both identifications was
classified as correlation at the species level, at the genus level or no correlation.
Results: Correlation at the species level in Gram positives was 100%. Correlation in Gram negatives was
87.7% at the species level and 97.7% at the genus level. There was no correlation in 2.2% of Gram negatives
studied. Identification failures occurred in the genera Raoultella and Acinetobacter, in Stenotrophomonas
maltophilia and in Francisella tularensis.
Conclusion: Bacterial clinical isolates identification obtained by MS MALDI-TOF shows excellent correlation
with identification obtained by conventional microbiological methods. Moreover, MS MALDI-TOF allows the
identification of bacteria from colonies grown on agar culture plates in just a few minutes, with a very simple
methodology and hardly any consumable costs, although the financial costs of purchasing the device can be
high.
& 2009 Elsevier España, S.L. All rights reserved.

La identificación bacteriana en el laboratorio de Microbiologı́a uretrales, exudado farı́ngeo, esputo, lavados broncoalveolares,
Clı́nica se realiza de manera habitual a partir de las caracterı́sticas exudados y hemocultivos. Las muestras se sembraron en medios
morfológicas y tintoriales de los microorganismos, de su creci- de cultivo habituales (agar sangre, agar chocolate, agar MacCon-
miento en distintos medios de cultivo y atmósferas, de diversas key y agar chocolate bacitracina) y se incubaron en atmósfera
pruebas que determinan caracterı́sticas bioquı́micas de las aerobia o en el 10% de CO2 a 37 1C, según el tipo de muestra
bacterias y, en algunos casos, a partir de determinadas caracte- procesada de acuerdo con la metodologı́a microbiológica habitual.
rı́sticas de sensibilidad a los antimicrobianos. Aunque la identi- Las muestras se identificaron de acuerdo con la metodologı́a
ficación basada en las caracterı́sticas bioquı́micas y metabólicas microbiológica habitual. Los cocos gramnegativos, Moraxella y
de las bacterias ha evolucionado tecnológicamente en cuanto a la Haemophilus se identificaron mediante API NH (BioMérieux, Marci
miniaturización de las series de pruebas y a la automatización de L’Étoile, Francia). Las enterobacterias y los bacilos gramnegativos
su realización y lectura, se siguen basando en buena parte en no fermentadores (BGNNF) se identificaron inicialmente median-
los mismos principios y recursos que las pruebas en uso hace te Wider panel MIC/ID gramnegativos (Francisco Soria Melguizo,
25–30 años. Ello hace que la identificación del microorganismo se Madrid, España) o mediante tarjetas Vitek-2 GNB (BioMérieux,
retrase horas o incluso dı́as desde su crecimiento en los medios de Marci L’Étoile, Francia), y cuando esta identificación no fue fiable
cultivo, y que esta identificación sea en ocasiones dificultosa con porcentajes superiores al 95%, se ratificó mediante API 20E o
cuando se trata de microorganismos con escasa actividad API 20NE (BioMérieux, Marci L’Étoile, Francia). Los cocos y los
bioquı́mica y enzimática. Pese a que hace ya años que se han bacilos grampositivos se identificaron inicialmente mediante
ido desarrollando diferentes tecnologı́as basadas sobre todo en Wider panel MIC/ID grampositivos (Francisco Soria Melguizo,
técnicas genómicas dirigidas a salvar estas limitaciones, no son Madrid, España), y cuando este sistema no ofreció una identifi-
técnicas que hayan conseguido hasta el momento una amplia cación con un porcentaje de fiabilidad superior al 95%, se ratificó
implantación. Sin embargo, una identificación rápida y fiable de mediante API Staph, API 20 Strep o API Coryne (BioMérieux, Marci
los microorganismos aislados de muestras clı́nicas es un objetivo L’Étoile, Francia). Los aislamientos de Salmonella se serotipificaron
irrenunciable, que tendrı́a una repercusión evidente en el mediante sueros especı́ficos. La Francisella tularensis se identificó,
tratamiento del paciente infectado. asimismo, mediante aglutinación con anticuerpos especı́ficos. En
La identificación bacteriana basada en el perfil de proteı́nas aquellos casos en que ninguno de los sistemas ofreció una
obtenido mediante la mass spectrometry (MS, ‘espectrometrı́a de información fiable, el microorganismo se descartó.
masas’) denominada matrix-assisted laser desorption ionization time-
of-flight (MALDI-TOF) fue ya propuesta hace varias décadas1–4. Espectrometrı́a de masas matrix-assisted laser desorption ionization
Sin embargo, sólo recientemente ha empezado a usarse como un time-of-flight
método rápido y fiable para la identificación bacteriana5. Hasta el
momento se han efectuado estudios parciales sobre su efectividad
1. Preparación de la muestra. Se depositó una pequeña cantidad
para la identificación de determinados microorganismos en
de una colonia directamente sobre la placa ground steel del
condiciones controladas6–8, pero son muy escasos los trabajos
espectrómetro de masas, y se formó una delgada pelı́cula.
que han estudiado su efectividad en la identificación de
Sobre ella se aplicó 1 ml de la solución matriz (solución
aislamientos clı́nicos sometidos a este test directamente desde
saturada de ácido alfa-ciano-4-hidroxicinámico en acetonitrilo
los medios de cultivo habituales y sin condiciones especiales4. En el
al 50% y ácido trifluoroacético al 2,5%) y se dejó secar a
presente estudio se analiza la eficacia de la MS MALDI-TOF para la
temperatura ambiente.
identificación de aislamientos clı́nicos de bacterias grampositivas y
2. MS. Las medidas se realizaron en un espectrómetro de masas
gramnegativas de diversos orı́genes directamente a partir de su
MALDI-TOF-TOF Autoflex III (Bruker Daltonics GmbH, Leipzig,
crecimiento en medios de cultivo habituales.
Alemania). Se obtuvo el espectro entre 2–20 kD de forma
automática, y se trabajó en modo lineal positivo a una
frecuencia de 200 Hz. Los parámetros que se fijaron para el
Material y métodos espectrómetro fueron IS1 a 20 kV, IS2 a 18,6 kV, lente a 6 kV y
PIE a 40 ns. El espectro obtenido se comparó de manera
Se analizaron 294 aislamientos bacterianos aerobios y anae- automática a partir de algoritmos integrados en el software del
robios facultativos obtenidos durante 2 semanas a partir de sistema con la base de datos MALDI Biotyper. El protocolo de
muestras clı́nicas de orina, coprocultivos, exudados vaginales y trabajo del MALDI Biotyper proporciona la adquisición óptima
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de la muestra (acumulación de 500 disparos del láser en según hubiera correlación de género y especie, correlación solo
diferentes lugares de la muestra). Los espectros se calibraron de género (bien porque el sistema solo identificara a este nivel
externamente mediante la utilización de una mezcla de o porque hubiera discrepancia en la especie identificada) o no
calibrante estándar (extracto de Escherichia coli DH5-a más 2 hubiera correlación de especie ni género. En este último caso,
proteı́nas adicionales: ARNasa A y mioglobina para cubrir un la identificación se consideró fallida.
intervalo de 4–17 kD).
3. Análisis de los espectros (Bruker Daltonics GmbH, Leipzig,
alemania). Para la identificación de los microorganismos, el
espectro obtenido de los microorganismos problema se
procesó con el programa MALDI Biotyper 1.1. La lista de picos Resultados
generada se comparó con la biblioteca de referencia del MALDI
Biotyper 2.0 mediante la utilización de un algoritmo de Se incluyeron en el estudio 65 microorganismos grampositivos
comparación integrado en el software (fig. 1). Tras importar y 229 microorganismos gramnegativos. Los resultados obtenidos
el espectro al programa, todo el proceso, desde su análisis aparecen en las tablas 1 y 2. Como puede observarse en estas
hasta su identificación, se lleva a cabo de forma automática, sin tablas, la correlación en la especie de todos los grampositivos
intervención alguna por parte del usuario. estudiados fue del 100%. La correlación en gramnegativos fue
4. Valoración de resultados. Las identificaciones mediante MAL- excelente en el género (97,7%), aunque inferior en la especie
DI-TOF se clasificaron como buena (puntuación en la compa- (87,8%). Esta caı́da de la correlación en la especie está vinculada
ración entre el perfil del microorganismo problema y la base fundamentalmente a los problemas de identificación a este nivel
de datos Z2), probable (puntuación Z1,5 y o2) y no fiable de los aislamientos de Salmonella no typhi probados, que suponen
(puntuacióno1,5). Las identificaciones que entraron en esta las dos terceras partes de los aislamientos con identificación
última categorı́a se consideraron fallidas. En cuanto a la com- coincidente en el género, pero no en la especie. Sólo hubo
paración entre MALDI-TOF y los sistemas clásicos, se diferenció ausencia de correlación en un 2,2% de los aislamientos. Las
identificaciones fallidas se dieron en los géneros Raoultella y
1,0 Acinetobacter, en Stenotrophomonas maltophilia y en F. tularensis.

0,8
Aislamiento clínico
E. coli Discusión
0,6
0,4 Los resultados obtenidos muestran una excelente correlación
entre las identificaciones llevadas a cabo mediante ambos
0,2
sistemas. El 100% de los microorganismos grampositivos, entre
–0,0 los que se incluı́an aislamientos de todos los patógenos principa-
les de este grupo (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes,
–0,2
Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, etc.), coincidió
–0,4 en su identificación en la especie. Estudios previos muestran una
excelente correlación entre MALDI-TOF e identificación conven-
–0,6
cional en la especie para algunos microorganismos con cifras del
–0,8 Perfil de referencia 94,4% para S. aureus (el 100% en el género), aunque en otros casos
Base de datos Biotyper 2.0 la identificación es buena en el género ( 499% para Corynebacte-
0 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 rium y estafilococos coagulasa negativa), pero peor en la especie
m/z (el 53,3% para Corynebacterium y el 77,7% para estafilococos
coagulasa negativa)5. Un estudio reciente sobre 234 aislamientos
1,0
Aislamiento clínico clı́nicos de estafilococos coagulasa negativa pertenecientes a 20
0,8 S. aureus especies9 muestra que la correlación del MALDI-TOF con la
identificación mediante secuenciación del gen sodA fue del 93,2
0,6
frente al 75–76% de los sistemas comerciales convencionales con
0,4 que se comparó. Dentro de los gramnegativos, las identificaciones
0,2 en la especie tuvieron una correlación algo menor (87,8%), pero la
correlación en el género se sitúa en el 97,8%. Dentro de las
–0,0 discrepancias en el género se han incluido aquellos casos en los
–0,2 que MALDI-TOF indicaba en su identificación de un aislamiento de
Salmonella, una serovariedad distinta de la que se observaba
–0,4 mediante aglutinación con anticuerpos especı́ficos, o no indicaba
–0,6 serovariedad alguna. De haber considerado todos los aislamientos
de Salmonella como una sola especie (Salmonella enterica), la
–0,8 Perfil de referencia correlación en la especie hubiera sido incluso mayor (94,3%).
Base de datos Biotyper 2.0
En cuanto a las identificaciones fallidas (error en el género), ha de
0 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 tenerse en cuenta que la mayor parte de ellas se producen en
m/z géneros y especies relativamente poco frecuentes, como Raoulte-
lla, o en especies en las que la identificación por métodos clásicos
Figura 1. A) Comparación del perfil de un aislamiento clı́nico de Escherichia coli también puede ser con frecuencia dificultosa y sólo relativamente
con los recogidos en la base de datos Biotyper 2.0. B) Comparación del perfil de un fiable, como Acinetobacter lwoffi o Pseudomonas putida. De hecho,
aislamiento clı́nico de Staphylococcus aureus con los recogidos en la base de datos
Biotyper 2.0. Aparecen en azul los perfiles de referencia de la base de datos, en
estudios recientes que comparan esta metodologı́a con la
verde los picos de la cepa clı́nica coincidentes con éstos, en amarillo los de secuenciación del ácido ribonucleico ribosómico 16-S para
coincidencia moderada y en rojo los no coincidentes. identificación de BGNNF10 muestran que esta última metodologı́a
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en muchos casos tampoco es capaz de discriminar entre P. putida Alguna publicación reciente corrobora los problemas de identifi-
y Pseudomonas monteilii, como ocurre en el presente estudio. Por cación de esta especie5, pero otros estudios muestran una
otra parte, la discrepancia observada en el caso de S. maltophilia ha excelente correlación entre MALDI-TOF y ácido ribonucleico
de valorarse con precaución al tratarse de un solo aislamiento. ribosómico 16-S en un amplio grupo de BGNNF, incluida

Tabla 1
Comparación de la identificación de 65 bacterias grampositivas mediante métodos microbiológicos convencionales y mediante espectrometrı́a de masas matrix-assisted
laser desorption ionization time-of-flight

Identificación convencional Correlación en la Correlación en el Identificaciones Identificación MALDI-TOF

(n.o de cepas) especie, % género, % fallidas, % (n.o de cepas)

Staphylococcus aureus (8) 100 – – S. aureus (8)

Staphylococcus epidermidis (2) 100 – – S. epidermidis (2)
Staphylococcus hominis (1) 100 – – S. hominis (1)
Staphylococcus saprophyticus (1) 100 – – S. saprophyticus (1)
Streptococcus pyogenes (16) 100 – – S. pyogenes (16)
Streptococcus agalactiae (20) 100 – – S. agalactiae (20)
Streptococcus pneumoniae (13) 100 – – S. pneumoniae (13)
Corynebacterium urealyticum (2) 100 – – C. urealyticum (2)
Listeria monocytogenes (2) 100 – – L. monocytogenes (2)
Total Gram positivos (65) 100 – –

Tabla 2
Comparación de la identificación de 229 bacterias gramnegativas mediante métodos microbiológicos convencionales y mediante espectrometrı́a de masas matrix-assisted
laser desorption ionization time-of-flight

Identificación convencional Correlación en la Correlación en el Identificaciones Identificación MALDI-TOF

(n.o de cepas) especie, % género, % fallidas, % (n.o de cepas)

Neisseria gonorrhoeae (1) 100 – – N. gonorrhoeae (1)

Haemophilus influenzae (7) 100 – – H. influenzae (7)
Moraxella catarrhalis (2) 100 – – M. catarrhalis (2)
Escherichia coli (63) 100 – – E. coli (63)
Klebsiella pneumoniae (14) 100 – – K. pneumoniae (14)
Klebsiella oxytoca (9) 100 – – K. oxytoca (9)
Raoultella ornithinolytica (2) – – 100 Enterobacter asburiae (1)
– – 100 Enterobacter cloacae (1)
Raoultella planticola (1) – 100 – R. ornithinolytica (1)
Proteus mirabilis (26) 100 – – P. mirabilis (26)
Proteus vulgaris (3) 100 – – P. vulgaris (3)
Providencia stuartii (2) 100 – – P. stuartii (2)
Morganella morganii (4) 100 – – M. morganii (4)
Salmonella enteritidis (4) 25 100 – S. enteritidis (1)
– Salmonella sp. (2)
– Salmonella anatum (1)
Salmonella typhimurium (9) 11,1 100 – S. typhimurium (1)
– Salmonella sp. (5)
– Salmonella anatum (1)
– Salmonella dublin (2)
Salmonella grupo C (3) – 100 – Salmonella sp. (3)
E. cloacae (4) 75 100 – E. cloacae (3)
Enterobacter hormaechei (1)
E. asburiae (1) 100 – – E. asburiae (1)
Enterobacter aerogenes (1) 100 – – E. aerogenes (1)
Citrobacter freundii (1) 100 – – C. freundii (1)
Citrobacter koseri (3) 66,7 100 C. koseri (2)
E. asburiae (1)
Serratia marcescens (6) 100 – S. marcescens (6)
Pseudomonas aeruginosa (21) 100 – – P. aeruginosa (21)
Pseudomonas fluorescens (1) – 100 – Pseudomonas synxantha (1)
Pseudomonas putida (1) – 100 – Pseudomonas monteilii (1)
Stenotrophomonas maltophilia (1) – – 100 Pseudomonas beteli (1)
Aeromonas hydrophila (4) 50 100 – A. hydrophila (2)
Aeromonas caviae (1)
Aeromonas media (1)
Acinetobacter baumannii (10) 100 – – A. baumannii (10)
Acinetobacter lwoffi (2) – 50 50 Acinetobacter sp. (1)
Ochrobacter anthropi (1)
Achromobacter xylosoxidans (1) – 100 – Achromobacter ruhlandii (1)
Campylobacter jejuni (20) 100 – – C. jejuni (20)
Campylobacter coli (1) 100 – – C. coli (1)
Francisella tularensis (1) – – 100 Perfil no identificable
Total Gram negativos (229) 87,8 10 2,2

MALDI-TOF: matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight.

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S. maltophilia10. Será necesario estudiar un mayor número de identificación por microorganismo y se reducirı́a a no más de
aislamientos de esta especie para determinar la fiabilidad real 2–3 min/microorganismo.
de este sistema en la identificación de esta especie. Tiene en  Coste. El coste en fungibles es virtualmente nulo, ya que las
cambio mayor importancia, a nuestro juicio, la identificación placas metálicas de extensión y lectura son reutilizables, de
fallida de F. tularensis. El software Biotyper no fue capaz de hallar modo que el único material desechable por usar es el asa con el
ningún perfil en la base de datos semejante al de F. tularensis para que se realice la extensión y la solución matriz, de la que se usa
indicar una identificación. La revisión de la versión de la base de 1 ml por identificación. Por tanto, los únicos costes significati-
datos utilizada mostró que no aparece en la misma especie alguna vos serı́an los derivados de la amortización del espectrómetro
del género Francisella, lo que explica la imposibilidad de de masas, que no obstante pueden ser importantes. El equipo
identificación y obliga, por otra parte, a una revisión de esta base MALDI-TOF Autoflex III utilizado en este estudio tiene un coste
de datos para completarla con un microorganismo que en nuestro de alrededor de 250.000 euros, si bien no es el tipo de equipo
medio tiene suficiente importancia como para que su inclusión que se suele recomendar para identificación habitual en
sea obligada. Microbiologı́a Clı́nica para la que pueden ser suficiente equipos
Un estudio reciente llevado a cabo con un diseño similar al más sencillos, cuyo coste se sitúa, no obstante, por encima de
presente11 muestra un porcentaje de identificaciones correctas del los 100.000 euros.
95,2% sobre 1.116 aislamientos clı́nicos habituales. La correlación
de la identificación con sistemas convencionales fue del 95,5% en
enterobacterias, del 79,7% en BGNNF, del 99,5% en estafilococos, del El resultado, en conjunto, es un sistema de identificación
100% en enterococos y del 93,7% en estreptococos. extremadamente fiable, que permite, además, disponer de esta
A diferencia de trabajos más antiguos, que medı́an proteı́nas identificación de manera prácticamente inmediata una vez que se
con pesos moleculares más bajos12, los sistemas más recientes, dispone de un crecimiento suficiente en placa. Ello supone una
incluido el usado en este estudio, utilizan un intervalo de 2.000– ganancia de al menos 18–24 h en la mayor parte de las
20.000 kD. Este intervalo representa de forma predominante las identificaciones.
proteı́nas ribosómicas obtenidas de extractos bacterianos Se puede argumentar que con frecuencia la disponibilidad
completos13. Estas proteı́nas son abundantes en la célula de la identificación sin datos de sensibilidad a antimicrobianos
bacteriana y están cargadas positivamente, lo que favorece su tiene una utilidad sólo relativa, y que al tener que esperar a
medida mediante MALDI-TOF y confiere mayor consistencia a disponer de la sensibilidad a antimicrobianos por métodos
la identificación10. Finalmente, el desarrollo de un software clásicos, el tiempo requerido para disponer del estudio completo
que permite comparar los patrones de MS con una amplia base no se modifica. Esto es ası́, en efecto, pero también es cierto que
de datos de microorganismos en función de los picos obtenidos y en otras ocasiones la posibilidad de disponer de manera
la intensidad de estos (se le asigna a cada identificación un inmediata de la identificación permite inferir perfiles probables
nivel de fiabilidad entre 0–3) ha sido importante en el desarrollo de sensibilidad y ajustar tratamientos empı́ricos en consecuencia.
de su uso clı́nico. Un ejemplo de los perfiles de un aislamiento La utilidad de este sistema puede incluso incrementarse si,
clı́nico de E. coli y otro de S. aureus comparados con los perfiles de como indican algunas publicaciones, la caracterización del micro-
referencia de la base de datos aparece en la figura 1. De hecho, organismo se puede llevar más allá del nivel de especie, y es capaz
alguno de los trabajos más recientes muestra que existe una incluso de discriminar la presencia de factores de patogenicidad o
correlación entre los microorganismos para los que hay menos de de mecanismos de resistencia. A este respecto, existen publica-
10 espectros en la base de datos y la aparición de errores de ciones que indican que la MS serı́a capaz, por ejemplo, de detectar
identificación5. la presencia de betalactamasas de espectro extendido17 y de
Estudios recientes muestran a la MS como un método diferenciar entre S. aureus sensible y resistente a meticilina18 o
extraordinariamente prometedor para la identificación de hongos entre cepas productoras y no productoras de proteı́na de Panton-
patógenos. Un estudio reciente sobre 267 aislamientos de hongos, Valentine19.
250 de ellos pertenecientes al género Candida, obtuvo una Finalmente, cabrı́a la posibilidad incluso de la utilización de
identificación correcta en el 92,5% de los aislamientos14, y otros este sistema directamente sobre muestras clı́nicas, aunque es
estudios muestran, asimismo, buenos resultados en identificación probable que con importantes limitaciones. Por una parte, está la
tanto de microorganismos del género Fusarium15 como de limitación de la sensibilidad. La MS puede ser un método muy
dermatofitos16. especı́fico desde el punto de vista de la identificación, pero no es
De forma global, la identificación mediante MS tiene varias un sistema particularmente sensible. La cantidad de micro-
ventajas fundamentales: organismos presentes en buena parte de las muestras clı́nicas
probablemente sea insuficiente para proporcionar una identifica-
ción fiable. Por otra parte, muchas muestras contienen importan-
 Sencillez. El único procedimiento por realizar es una extensión tes cantidades de proteı́nas de origen humano que pueden
del microorganismo sobre una superficie metálica, similar a la interferir en los perfiles de identificación. Finalmente, incluso en
que se realizarı́a sobre un porta para cualquier tinción, salvo ausencia de proteı́nas de origen humano, la presencia de más de
que de un tamaño menor, y la adición sobre esta extensión de un tipo de microorganismos originarı́a, asimismo, perfiles no
una gota de solución matriz. identificables. Por tanto, probablemente solo algunos tipos de
 Rapidez. Todo el proceso de realización de la extensión, muestras de las que no es problemático obtener volúmenes
aplicación de solución matriz y tiempo de secado de ésta grandes, en las que puede haber poblaciones importantes de
requiere apenas unos minutos. Posteriormente, la introducción microorganismos, las infecciones son habitualmente monobacte-
de la placa en la que se realiza la extensión en el espectrómetro rianas, y en las que las proteı́nas de origen humano sean escasas,
y la lectura de éste requiere un tiempo similar. En conjunto, se como la orina, podrı́an ser susceptibles de identificación directa
considera que se requieren alrededor de 11 min para una sola mediante este sistema.
muestra desde que se deposita en la placa MALDI hasta la En definitiva, los datos obtenidos en el presente estudio
obtención del resultado. Hay que tener en cuenta, no obstante, indican que la MS MALDI-TOF puede ser un método fiable y
que es posible la identificación simultánea de hasta 96 rápido para la identificación habitual de aislamientos clı́nicos
microorganismos, en cuyo caso se optimizarı́a el tiempo de bacterianos, y puede suponer el cambio más radical desde el
 L. Ferreira et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28(8):492–497 497

punto de vista tecnológico que se produzca en esta área del 8. Lynn EC, Chung MC, Tsai WC, Han CC. Identification of Enterobacteriaceae
laboratorio de Microbiologı́a Clı́nica en décadas. La posibilidad de bacteria by direct matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectro-
metric analysis of whole cells. Rapid Commun Mass Spectrom. 1999;13:2022–7.
actuar directamente sobre muestras y de llevar la aplicación de 9. Dupont C, Sivadon-Tardy V, Bille E, Dauphin B, Beretti J, Álvarez A, et al.
esta tecnologı́a a caracterizaciones de los microorganismos más Identification of clinical coagulase negative staphylococci isolated in micro-
allá del nivel de especie, e identificar factores de resistencia o de biology laboratories by MALDI-TOF mass spectrometry and two automates.
Clin Microbiol Infect. 2009. [Epub ahead of print].
patogenicidad, abre importantes perspectivas futuras para esta 10. Mellmann A, Cloud J, Maier T, Keckevoet U, Ramminger I, Iwen P, et al.
nueva tecnologı́a. Evaluation of matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass
spectrometry in comparison to 16S rRNA gene sequencing for species
identification of nonfermenting bacteria. J Clin Microbiol. 2008;46:
1946–54.
Conflicto de intereses 11. Eigner U, Holfelder M, Oberdorfer K, Betz-Wild U, Bertsch D, Fahr AM.
Performance of a matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight
mass spectrometry system for the identification of bacterial isolates in the
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses. clinical routine laboratory. Clin Lab. 2009;55:289–96.
12. Claydon MA, Davey SN, Edwards-Jones V, Gordon DB. The rapid identification
Bibliografı́a of intact microorganisms using mass spectrometry. Nat Biotechnol.
1996;14:1584–6.
13. Suh M, Hamburg D, Gregory ST, Dahlberg AE, Limbach PA. Extending
1. Anhalt JP, Fenselau C. Identification of bacteria using mass spectrometry. Anal ribosomal protein identifications to unsequenced bacterial strains using
Chem. 1975;47:219–25. matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Proteomics.
2. Holland RD, Wilkes JG, Rafii F, Sutherland JB, Persons CC, Voorhees KJ, et al. 2005;5:4818–31.
Rapid identification of intact whole bacteria based on spectral patterns using 14. Marklein G, Josten M, Klanke U, Müller E, Horré R, Maier T, et al. Matrix-
matrix-assisted laser desorption/ionization with time-of-flight mass spectro- assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for fast
metry. Rapid Commun Mass Spectrom. 1996;10:1227–32. and reliable identification of clinical yeast isolates. J Clin Microbiol.
3. Krishnamurthy T, Ross PL. Rapid identification of bacteria by direct matrix- 2009;47:2912–7.
assisted laser desorption/ionization mass spectrometry analysis of whole cells. 15. Marinach-Patrice C, Lethuillier A, Marly A, Brossas JY, Gené J, Symoens F, et al.
Rapid Commun Mass Spectrom. 1996;10:1992–6. Use of mass spectrometry to identify clinical Fusarium isolates. Clin Microbiol
4. Fenselau C, Demirev PA. Characterization of intact microorganisms by MALDI Infect. 2009;15:634–42.
mass spectrometry. Mass Spectrom Rev. 2001;20:157–71. 16. Erhard M, Hipler UC, Burmester A, Brakhage AA, Wöstemeyer J. Identification
5. Seng P, Drancourt M, Gouriet F, La Scola B, Fournier PE, Rolain JM, et al. of dermatophyte species causing onychomycosis and tinea pedis by MALDI-
Ongoing revolution in bacteriology: Routine identification of bacteria by TOF mass spectrometry. Exp Dermatol. 2008;17:356–61.
matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. 17. Ikryannikova LN, Shitikov EA, Zhivankova DG, Illina EN, Edelstein MV,
Clin Infect Dis. 2009;49:543–51. Govorun VM. A MALDI TOF MS-based minisequencing method for rapid
6. Hettick JM, Kashon ML, Simpson JP, Siegel PD, Mazurek GH, Weissman DN. detection of TEM-type extended-spectrum beta-lactamases in clinical strains
Proteomic profiling of intact mycobacteria by matrix-assisted laser deso- of Enterobacteriaceae. J Microbiol Methods. 2008;75:385–91.
rption/ionization time-of-flight mass spectrometry. Anal Chem. 18. Du Z, Yang R, Guo Z, Song Y, Wang J. Identification of Staphylococcus aureus and
2004;76:5769–76. determination of its methicillin resistance by matrix-assisted laser desorption/
7. Mandrell RE, Harden LA, Bates A, Miller WG, Haddon WF, Fagerquist CK. ionization time-of-flight mass spectrometry. Anal Chem. 2002;74:5487–91.
Speciation of Campylobacter coli, C. jejuni, C. helveticus, C. lari, C. sputorum, and 19. Bittar F, Ouchenane Z, Smati F, Raoult D, Rolain JM. MALDI-TOF-MS for rapid
C. upsaliensis by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass detection of staphylococcal Panton-Valentine leukocidin. Int J Antimicrob
spectrometry. Appl Environ Microbiol. 2005;71:6292–307. Agents. 2009;34:467–70.