DETERMINACIÓN ESPECTOFOTOMÉTRICA

DEL pKa DEL REPOLLO MORADO

Br. José Meneses V-26.430.820

Br. Paola Palmera 24.970.205

Universidad de Carabobo
Facultad Experimental de Ciencias y Tecnología
Departamento de Química
Unidad de Química Analítica
Laboratorio de Análisis Instrumental

Prof. José González

RESUMEN

El objetivo de la presente práctica fue determinar la constante de ionización (pKa) del

Indicador presente en el Repollo Morado empleando la técnica de Espectrofotometría de
Absorción Molecular UV-Visible. Para ello se prepararon soluciones de diferentes pH
extraídas a partir de trozos de Repollo Morado en agua hirviendo, midiéndose luego la
absorbancia de cada una longitud de onda de (380,0±2,5) nm y (510,0±2,5). El valor de pka
se obtuvo por el método gráfico, donde se obtuvo una ecuación de una recta al graficar el
[In- ]
log ([HIn]) vs pH, de la cual se obtuvo el valor del pKa (7,24±2,54) a (380,0±2,5) nm y
(6,90±0,53) a (510,0±2,5) nm al hacer el despeje de la ecuación de la recta obtenida por
regresión lineal. Se empleo de igual modo el método algebraico a partir por el despeje de la
ecuación de Henderson-Hasselbalch, del cual se obtuvo un valor de pKa de (7,46±0,24) a
(380,0±2,5) nm y (7,24±0,24) a (510,0±2,5) nm, hallándose que no hay diferencias
significativas entre ambos valores. Este valor de igual manera se comparó con el reportado
bibliográficamente pKa = (6,99±0,16) y de igual manera no presento diferencias
significativas.

Palabras clave: pKa, Método; Gráfico, Algebraico.

ABSTRAC
The objective of the present practice was to determine the ionization constant (pKa) of the
indicator present in the red cabbage using the UV-Visible Molecular Absorption
Spectrophotometry technique. For this purpose, solutions of different pH extracted from
pieces of Purple Cabbage in boiling water were prepared, then measuring the absorbance of
each wavelength of (380.0 2.5) nm and (510.0 2.5). The pka value was obtained by the
[In- ]
graphical method, where an equation of a line was obtained by graphing the log ([HIn]) vs
pH, from which the value of pKa (7,24±2,54) a (380,0±2,5) nm and (6,90±0,53) a
(510,0±2,5) nm was obtained nm when clearing the equation of the line obtained by linear
regression. The algebraic method was used in the same way, starting with the clearing of the
Henderson-Hasselbalch equation, from which a pKa value of (7.46±0.24) a (380.0±2.5) nm

1
and (7,24±0,24) a (510,0±2.5) nm was obtained. This value was similarly compared with the
reported literature pKa = (6.99 0.16) and likewise I did not present significant differences.
Key words: pKa, Method, Graphical, Algebraic.

I. INTRODUCCIÓN radicales oxidrilos unidos a los anillos,

uno de ellos, enlazado a una cadena de
Las variables de un sistema pueden ser
azúcar, y el compuesto se encuentra como
medidas por propiedades físicas o
ion oxonio, se habla de uno de los
químicas, o sencillamente, de manera
pigmentos de la familia de las antocianinas
cualitativa, estudiando alguna
llamadas cianidinas. [1]. Estas son las
consecuencia en el sistema o en el entorno
responsables de darles la típica coloración
que correlaciona dichas variables. Una de
morado-rojiza a las lombardas o col
ellas, de especial importancia en sistemas
morada, mejor conocidas con el nombre de
biológicos, y en los estudios de química
repollo morado.
analítica, es el pH, el cual puede ser
medido con un electrodo de vidrio, o La práctica realizada se tuvo como
visualmente, gracias al uso de un indicador objetivo la determinación del pKa del
ácido base que vire de color en el rango de indicador extraído del repollo morado,
pH de interés. Aunque el primer método es empleando la técnica de
más exacto, el segundo abarca un sinfín de Espectrofotometría de Absorción
moléculas presentes en la naturaleza como Molecular.
compuestos orgánicos, todos ellos con
anillos conjugados donde los electrones de
valencia absorben energía en el espectro II. METODOLOGÍA
visible, exhibiendo coloraciones distintas
en sus estados de disociación. Muchos de Reactivos
los indicadores ácidos y bases son
- Hidróxido de Sodio (NaOH)
pigmentos vegetales, que se encuentran en Marca: Riedel-de Haën. Peso Molecular:
frutas, licores, flores, cultivos o plantas; o g
40 . Pureza: 99%
animales, presentes en los extravagantes mol
colores de algunas especies. Este hecho ha
promovido la investigación de diversos y - Ácido Clorhídrico (HCl).
g
exóticos pigmentos, con la finalidad de Densidad (ρ): 1.19 . Peso Molecular:
mL
darles un uso ya sea como indicadores de g m
36,45 . % : 99 %.
acidez, o para otros propósitos mol m
farmacéuticos y medicinales. [1]
- Buffer NaH2PO4/Na2HPO4 0,1 M,
Entre los principales pigmentos pH = 6,27±0,02.
encontrados como indicadores naturales,
en los alimentos, se tienen a las - Agua Destilada
antocianinas, que conforman una familia
de compuestos según los radicales unidos
a la cadena lateral. Cuando se tienen

2
Equipo Tabla.1. Preparación de Soluciones
de Indicador de Repollo Morado a
- Espectrofotómetro Spectronic 20+ distintos pH
de Haz Sencillo.
Marca: Milton Roy. HCl NaOH pH
Buffer
Rango Espectral: 340 a 950 nm. Paso de Solución 6M 6 M (±0,02)
(mL)
Banda Espectral: 20 nm. (gotas) (gotas)
Precisión de Longitud de Ondas: ±2,5nm. 1 0 6 0 3,28
Precisión Fotométrica: ±2% T. [2] 2 0 0 0 4,49
3 10 0 0 7,26
- Potenciómetro Modelo PHS-3C. 4 10 0 8 8,17
Intervalo de pH: (0,00-14,00) pH. 5 10 0 21 8,95
Precisión de la Medición de pH: ±0,02. 6 10 0 55 11,43
7 0 0 75 13,10
Preparación de Soluciones

• 100 mL de solución de Indicador

de repollo morado.

Se pesaron (60.0543±0.0001) g de
repollo morado troceado en un beaker y se
colocó a ebullición en agua destilada hasta
la decoloración del repollo. La solución
resultante se filtró y se aforó en un balón
de (100,00±0,08) mL, sin añadir agua Figura.1. Soluciones de Indicador de
destilada. Repollo morado a distintos pH.
Rojo: pH= 3.28; Rosado: pH= 4,49;
• Soluciones de Indicador a distintos Morado: pH= 7,26; Azul: pH= 8,17; Azul
pH verdoso: pH= 8,95; Amarillo Verdoso:
Se tomaron 7 balones de (50,00±.0,05) pH= 11,43; Amarillo: pH= 13,10.
mL, rotulados del 1 al 7. A cada uno se les
adiciono (10,00±0,02) mL de solución de • Barrido Espectral y Selección de
indicador. En la tabla 1. Se muestra las Longitud de Onda de Trabajo
cantidades de indicador y de buffer
NaH2PO4/Na2HPO4 0,1 M, HCl y NaOH Se realizo un Barrido Espectral a
empleados para preparar las soluciones en las soluciones de pH = (3,28±0,02)
distintos pH, donde este último parámetro (Especie Ácida) y de pH =
fue medido con el potenciómetro PHS-3C. (13,10±0,02) (Especie Básica) desde
Se preparo un blanco diluyendo (340,0±2,5) nm hasta (630,0±2,5) nm,
(10,00±0,02) mL en un balón alternando el blanco entre cada cambio
(50,00±.0,05) mL. La figura .1. evidencia de longitud de onda para calibrar y
las soluciones de indicador preparadas y ajustar el % de transmitancia, donde se
sus distintas coloraciones. determinó que el máximo de absorción
de la especie ácida fue a (380,0±2,5)
nm y el de la especie básica
(510,0±2,5) nm, siendo estas las
longitudes de onda de trabajo.

3
 • Medición de las soluciones de La ecuación (3), es conocida como
indicador a distintos pH en las metodo gráfico [4].
Longitudes de Onda de Trabajo.
Esto es una ordenada al origen de
Se midió el % Transmitancia de las una ecuación para una línea recta:
soluciones desde pH = (3,28±0,02)
y = mx + b
hasta (11,43±0,02) a las longitudes de
onda determinadas las cuales fueron [In- ]
donde y es el log ([HIn]), m = 1 y b = -pKa.
(380,0±2,5) nm y (510,0±2,5) nm, con
las cuales se determinó las Por lo tanto, si el término log se gráfica vs
absorbancias correspondientes y con el pH, la pendiente es 1, la ordenada en el
estas se calculó los valores de pKa por origen es -pKa y la línea debe atravesar el
el método gráfico y el método eje del pH donde pH = pKa. (Figura.2.) en
algebraico. el último punto [In- ] = [HIn] y, por lo
tanto, el logaritmo de la razón de estos
III. DISCUSIÓN Y RESULTADOS términos es cero y pH = pKa. [4]
Un conocido experimento en
análisis y física cursos de laboratorio
de química es la determinación
espectrofotométrica del pKa del pKa
de un indicador ácido-base. Este
experimento produce resultados
precisos resultados utilizando equipos
que se encuentran en la mayoría de los
laboratorios de química general
(medidores de pH y
espectrofotómetros de longitud de
onda única, como como el Spectronic
20). [3] Figura.2. Gráfica para determinar el pKa.
La disociación de un indicador [4]
monoprótico se ve por la siguiente [In- ]
reacción de equilibrio: La razón se determina por
[HIn]
media de espectrofotometría,
HIn ⇌ H+ +In- (1)
determinando el espectro de absorción del
La expresión de equilibrio para indicador en su especia ácido en el cual
esta disociación se puede escribir este se encuentra en su especie HIn y el
como: espectro de absorción de la especie básica
[In- ]
donde predomina la especie In-. Luego se
pH = pKa − log ([HIn]) (2) [4] determinan las absorbancias de las
especies con pH intermedio a las
Está ecuación se puede rearreglar longitudes de onda determinadas de las
como: especies ácida y básica. Por lo tanto, la
[In- ] razón se puede expresar como:
log ([HIn]) = pH − pKa (3) [4]
[In- ] 𝐴−𝐴𝑎
[HIn]
= (4) [4]
𝐴𝑏 −𝐴

4
 Donde:
El barrido espectral realizado a las
Aa = Absorbancia de HIn soluciones (1) y (2) del indicador de
Ab = Absorbancia In repollo morado desde (340,0±2,5) nm
hasta (630,0±2,5) nm, índico que los
A = Absorbancia de la mezcla. [4] máximos de absorbancia para la especie
La ecuación (2) también se puede ácida y básica son (380,0±2,5) nm y
reescribir como: (510,0±2,5) nm como muestra la Figura. 3.

[In- ] Con estos datos, se realizó la

pKa = log ([HIn]) +pH (5) [2] medición del resto de las soluciones a
distintos pH los cuales se reportan en la
La ecuación (5) es conocida como tabla .2.
el método gráfico. En el método
algebraico, los valores de los conjuntos de Con los datos obtenidos se puede
pH y absorbancias se sustituyen en la lograr obtener el valor de pKa por el
ecuación (5) y se calcula el pKa para cada método gráfico y por el método
conjunto. El pKa reportado es una media algebraico.
de los pKa calculados. [3]
Barrido Espectral Repollo Morado
Tabla .2. Absorbancias de las soluciones 0,45
0,40
Absorbancia

de indicador a diferentes pH y su 0,35 Barrido

relación logarítmica 0,30 Especie
0,25 Ácida
Longitud 0,20
[𝐴 − 𝐴𝑎 ] 0,15
de Onda pH Absorbancia Barrido
log ( ) 0,10
(λ ± 2,5) (±0.02) [𝐴𝑏 − 𝐴] 0,05 Especie
nm 0,00 Básica
3,28 0,14±0,01 — 330,00 530,00
4,49 0,17±0,01 -0,89±0,13 Longitud de Onda (λ) nm
7,26 0,28±0,02 0,07±0,13
380,0 8,17 0,34±0,02 0,52±0,22 Figura.3. Barrido Espectral de las
8,95 0,39±0,02 0,39±0,02 especies ácida y básica del indicador de
11,43 0,60±0,03 — repollo morado.
13,10 0,40±0,02 —
3,28 0,38±0,02 — Al observar los valores obtenidos
4,49 0,07±0,01 1,19±0,22 se puede tomar en cuenta los valores que
corresponden a las soluciones de pH =
7,26 0,16±0,01 0,30±0,06
(7,26±0,02) a la del pH = (8,95±0,02). El
510,0 8,17 0,08±0,01 1,00±0,15
rango de viraje del indicador de pH es de
8,95 0,06±0,01 1,51±0,44
6,8 a 7,2 [5]. Ya que se necesitan mínimo
11,43 0,04±0,01 — dos puntos para poder construir una recta
13,10 0,05±0,01 — se tomaron los valores antes mencionados
para realizar él método gráfico ya que la en
la especie presente a pH = (4.49±0,02) es
la especie ácida.

5
 electrones basales del sistema π de los
La figura. 4. Muestra las anillos. En contraste, cuando se acerca al
coloraciones de las moléculas que pH 9, la tercera forma de la ciadinina
conforman el indicador de repollo morado, aumenta la absorción en el violeta, y la
denominadas antocianinas. concentración de la segunda especie va
disminuyendo, originando una serie de
mezcla de colores que luego, a pH 12, se
torna completamente amarillo al estar
presente sólo la especie más básica.[2]
Al analizar la estructura de la
especie más básica, se observa una
densidad de carga que se puede
deslocalizar fácilmente a lo largo de los
tres anillos, haciéndolo una base más
estable, y por ende, sus estados de mayor
energía requerirán de longitudes de
ondas pequeñas, en la zona del violeta,
explicando así su absorción y el color
amarillo que se observa al adicionar
NaOH concentrado a una fiola
conteniendo la solución del repollo.[2]
Debido a esto, el tinte de col
morado tiene la capacidad de actuar
como un indicador de pH natural.
Al graficar los valores de
[In- ]
log ([HIn]) vs los valores de pH
Figura.4. Estructuras de las antocianinas
del repollo morado y coloración de a seleccionados de la tabla.2. se realizó una
distintitos pH. [6] regresión lineal a ambas longitudes de
onda obteniendo así la pendiente y el
Los colores obtenidos pueden intercepto
explicarse en base a las estructuras de la
ciadinina a lo largo del rango del pH. de las rectas para determinar el pKa por el
método gráfico, reportadas en la tabla 3.
A pH ácido, y aunque no aparezca
en ninguna de las figuras el balón a pH Tabla.3. Pendiente e intercepto de
3.28, la forma ionizada positiva del rectas de regresión lineal a diferentes
pigmento es la más estable, absorbiendo longitudes de onda
en el verde y reflejando la luz rosada-roja,
Longitud de
A medida que se desplaza en el rango en
onda Pendiente Intercepto
que se trabajó la práctica, la absorbancia
(λ ± 2,5) nm
en el verde va disminuyendo y aumenta la
absorción del rojo en la 2da especie, no 380,0 0,799±0,181 5,667±1,480
ionizada, que pudiera explicarse al no 510,0 0,724±0,036 4,996±0,295
tener la molécula ninguna carga
deslocalizada sino únicamente los

6
 Los valores obtenidos de pKa obtenidos por este metodo son mejores que
obtenidos por él método gráfico y el el gráfico.
método algebraico se evidencian en la
tabla.4. El valor del pKa reportado
bibliográficamente es de (6,99±0,16) [5].
Tabla.4. Valores de pKa obtenidos por Con esto se puede comparar si el valor
el Metodo gráfico y método algebraico. obtenido de pKa difiere significativamente
del valor reportado bibliográficamente
Longitud haciendo una prueba de significación con
pKa pKa
de onda un valor conocido realizando una prueba
Método Método
(λ ± 2,5) “t” al 95% de confianza. Los resultados se
Gráfico Algebraico
nm evidencian en la tabla 6.
380,0 7,46±0,24 7,27±2,54
510,0 7,24±0,24 6,90±0,53 Tabla. 6. Comparación del valor de pKa
experimental con el pKa reportado
bibliográficamente.
Se realizo una comparación de los
valores pKa de ambos métodos a sus pka Desviación
texp tcrit*
correspondientes longitudes de onda para Experimental Estandar
saber si difieren significativamente con 7,24 0,24 1,804 12,71
una prueba “t” al 95% de confianza. Los *Valor tomado de la Referencia [7]
resultados del estadístico se evidencian en Al ser la texp menor que la tcrit, se
la tabla. 5. comprueba que no hay diferencia
Tabla.5. Prueba de Significación de dos significativa entre ambos valores, a pesar
métodos experimentales de los valores de que el método de determinación del
de pKa a distintas longitudes de onda pKa referenciado bibliográficamente varia
Longitud metodológicamente a pesar de emplear la
pKa pKa
de onda
Método Método s texp tcrit*
misma técnica instrumental, ya que
(λ ± 2,5) emplearon una longitud de onda de
Gráfico Algebraico
nm medición distinta, un intervalo pH en las
soluciones de trabajo y equipos distintos.
380,0 7,46±0,24 7,27±2,54 1,804 0,129
12,70
[5]
IV. CONCLUSIÓN
510,0 7,24±0,24 6,90±0,53 0,411 1,012
*Valor tomado de la Referencia [7]
- El valor de pKa determinado por
Al analizar los resultados se espectrofotometría de Absorción
observa que no hay diferencias molecular UV-Visible por el
significativas entre los valores de pKa método gráfico es (7,27±2,54) a
determinados por el método gráfico y (380,0±2,5) nm y (7,27±2,54) a
algebraico, ya que los valores de texp son (510,0±2,5) nm.
muchos menores que los de la tcrit [7];
rechazando la hipótesis nula de que si - El Valor de pKa determinado por
la técnica de espectrofotometría de
A pesar de ello los valores Absorción UV-Visible por el
obtenidos por el método algebraico posee metodo algebraico es (7,24±0,24) a
desviaciones mas pequeñas que el por el (380,0±2,5) nm y (6,90±0,53) a
método gráfico, por lo tanto, los valores (510,0±2,5) nm.

7
 Edición. Editorial Prentice-Hall
- La solución de repollo morado Hispanoamericana. C.A. Páginas: 788-790
puede ser usado como excelente
[5] Chigurupati, N.; Saiki, L.; Gayser, C.;
indicador debido a su intervalo de
Dash, A. K. Evaluation of red cabbage dye
pH y sus cambios de colores.
as a potential natural color for
pharmaceutical use. International Journal
- La constante de ionización (pKa) of Pharmaceutics 2002, 241(2), 293– 299.
del indicador del repollo morado
determinada fue de 7,24 ± 0,24; [6] Compoundchem (2017) Making a Red
valor que no presenta diferencias Cabbage pH Indicator: The Method and
significativas con el reportado en the Chemistry. [En Línea] Consultado:
la bibliografía. Debido a que se han [22, Abril, 2023] Disponible en:
https://www.google.com/amp/s/www.co
aislado 7 diferentes antocianinas
mpoundchem.com/2017/05/18/red-
del indicador de repollo morado, el
cabbage/amp/.
pKa reportado representa un pKa
macroscópico para un grupo [7] Miller N. J Miller J. C (2002)
estrechamente relacionado Estadística y Quimiometría para química
presente en este color natural. analítica. 4° Edición. Editorial Prentice-
Hall. Páginas: 45-45; 263.
- La técnica de espectrofotometría
de absorción molecular UV-
Visible es excelente para la
determinación del pKa de un
indicador.

V. REFERENCIAS
BIBLIOGRAFICAS

[1] Garzón, A., (2008). Las antocianinas

como colorantes naturales y compuestos
bioactivos: revisión. Acta biol. Colomb.
13 (3), pp.27-36
[2] Skoog D, West D 1 2005)
Fundamentos de Química Analítica (8°
Edición). México. Editorial Thompson
Páginas: 671.
[3] Patterson, G. S. A Simplified Method
for Finding the pKa of an Acid–Base
Indicator by Spectrophotometry. Journal
of Chemical Education 1999, 76, 395–398.
[4] Day Jr. R.A, Underwood A.L (1969)
Química Analítica Cuantitativa. 5°