UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE GENÉTICA Y BIOTECNOLOGÍA

BIOLOGÍA MOLECULAR
INFORME: Análisis bioinformático de secuencias proteicas
MESA: 3
GRUPO DE PRÁCTICA: 2
DOCENTE:
● Julio Solis Sarmiento

INTEGRANTES:
- Justino Chavez, Alem Grimaldi (22100048)
- Polanco Diaz, Carlos Polanco (22100040)
- Ramos Huerta, Cristhofer Brayan (21100110)
- Ushñahua Santos, Dariel Abner (22100044)
- Valverde Vilcherrez, Ana Karla (22100138)

LIMA - PERÚ
2024
INTRODUCCIÓN
El análisis bioinformático de secuencias proteicas es una disciplina que integra biología,
informática y matemáticas para estudiar las proteínas a nivel molecular. Las proteínas son
fundamentales para los procesos biológicos, y su análisis permite identificar, comparar y
predecir su estructura y función a partir de sus secuencias de aminoácidos. Los principales
objetivos incluyen la identificación de proteínas desconocidas, la predicción de estructuras
tridimensionales, el análisis evolutivo y la determinación de funcionalidades y dominios
proteicos (Can, T; 2014).

Las herramientas y métodos utilizados en este campo son variados e incluyen alineación de
secuencias mediante herramientas como BLAST y Clustal Omega, bases de datos como
UniProt, NCBI y PDB, además de programas de predicción de estructuras como Phyre2 y
AlphaFold. Por otro lado, el modelado molecular y la dinámica molecular son técnicas
cruciales para simular el comportamiento de las proteínas en diversas condiciones, ayudando
a entender su estabilidad y funcionalidad (Altschul, S; et al. 1990).

Las aplicaciones del análisis bioinformático de secuencias proteicas son amplias, abarcando
la medicina, la biotecnología y la investigación básica. En medicina, este análisis facilita el
diseño de nuevos fármacos y terapias proteicas; en biotecnología, permite la ingeniería de
enzimas y proteínas específicas; y en la investigación básica, proporciona una comprensión
profunda de los mecanismos biológicos a nivel celular y molecular. En conjunto, esta
disciplina es esencial para el avance de la biología moderna y sus aplicaciones tecnológicas
(Can, T; 2014).

me caen mal, onvrez, no resuelven, esperan que todo se los den fácil, la csmr, odio, odio, odio, odio
tengo hambre, por eso tengo odio, se me pasará cuando cene, pero mientras tanto, odio, odio, odio,
sepan resolver, la csmr

a, cómo que no hay comida :le da un ataque:

no hay cena caumsa. equisde , tas loquita ya u.u

PRÁCTICA PARA CASA - ACTIVIDAD 2

1. Realizar otras búsquedas de proteínas (cistein proteasas, RNA polimerasas, rubisco, etc)
según interés de los estudiantes y determinar si la proteína está en AlphaFold
https://alphafold.ebi.ac.uk/
 ● Cistein proteasa - Papaína:

Estructura 3d de la proteína:
 ● Cistein proteasa - Caspasa

Estructura 3d de la proteína:

● RNA Polimerasa - RNA polymerase holoenzyme

Estructura 3d de la proteína:
2. Realizar una búsqueda de diferentes péptidos de familias con las siguientes expresiones(por
separado: defensinas en Arabidopsis thaliana, defensinas de insectos, defensinas de humanos,
defensinas de ratón, defensinas de Lepidium meyenii.

a) Defensinas en Arabidopsis thaliana

b) Defensinas de humanos
c) Defensinas de ratón

d) Defensinas de Lepidium meyenii

3. Realizar una búsqueda con siguiente símbolo: pdf2.1 Identificar cuáles son los otros
nombres o símbolos con que se conoce a esta proteína pdf2.1 en Arabidopsis thaliana.
 Codigo PDF2.1

Sinonimos:

● DEF1: Defense protein 1

● PR-12: Pathogenesis-related protein 12
● At4g34740: Alternative protein identifier
● PDF1.2: A less common name for the protein

4. Realizar búsqueda de: afp4 raphanus. Percatarse del número de entrada (entry) en Uniprot
correspondiente a esta proteína. Identificar como se identifica a este péptido en la sgte
publicación: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC160805

Número de entrada en Uniprot: O24331

Identificación en la publicación:

En la publicación https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC160805, este péptido se identifica

como Rs-AFP, que significa proteína antifúngica de rábano pequeña y rica en cisteína.
PRÁCTICA PARA CASA - ACTIVIDAD 4
1. Realizar la búsqueda de proteínas contra la base de datos nr utilizando como Query a la sgte
secuencia:

>secuencia X0

MSWFFTLLFLISSLSLTTPSEASHEKKPPSAVVVGTVYCDTCFQAEFSHASHFISGASVGVECK
DGSSKPSFQTEVKTDSHGVFRVHLPFSVSKRVKKIEGCSVKLISSSEPYCAVSSTATSSSLHLKS
SEQGTYIFSAGFFTFKPLKQPSLCNQKPSIPNSKEFSSQKSSFPGIPVTSPFPGKTTKAGQLTDKK
VGLPGLPGTGLPGLPGLPGIPQLTPFTGKNTKGGQLTDKKLLGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPG
LPGLPGLPGLPGLPGLGKAGQLNDKKVARPDTSFTTPQIPKTSLPPNPSPPTSRIPGIPRASSKQT
TSP

2. Resultados típicos, sin filtros de baja complejidad:

- Análisis para la secuencia “hypothetical protein L3X38_019983” perteneciente a Prunus

dulcis “ Almendra ”. Sin aplicar un filtro de baja complejidad, esta secuencia de 331 aa posee
un porcentaje de identidad de 97.89%.

a. Código FASTA

>KAI5340709.1 hypothetical protein L3X38_019983 [Prunus dulcis]

MSWFFTLLFLISSLSLTTPSEASHEKKPPSAVVVGTVYCDTCFQAEFSHASHFISGASVGVECKDGSSKP
SFQTEVKTDSQGVFRVHLPFSVSKRVKKIEGCSVKLISSSEPYCAVSSTATSSSLHLKSSEQGTYIFSAG
FFTFKPLKQPSLCNQKPSIQNSKEFSSQKSSFPGIPATSPFPGKTTKAGQLTDKKVGLPGLPGLPGTGLP
GLPGLPGIPQLTPFTGKNTKGGQLTDKKLLGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLGK
AGQLNDKKVARPDTSFTTPQIPKTSLPPNPSPPTSRIPGIPQASSKQTTSP
 3. Resultados con filtros de baja complejidad:

- Análisis para la secuencia “hypothetical protein L3X38_019983” perteneciente a Prunus

dulcis “ Almendra ”. Al aplicar un filtro de baja complejidad, esta secuencia de 331 aa posee
un porcentaje de identidad de 96.37%.

a. Código FASTA

>KAI5340709.1 hypothetical protein L3X38_019983 [Prunus dulcis]

MSWFFTLLFLISSLSLTTPSEASHEKKPPSAVVVGTVYCDTCFQAEFSHASHFISGASVGVECKDGSSKP
SFQTEVKTDSQGVFRVHLPFSVSKRVKKIEGCSVKLISSSEPYCAVSSTATSSSLHLKSSEQGTYIFSAG
FFTFKPLKQPSLCNQKPSIQNSKEFSSQKSSFPGIPATSPFPGKTTKAGQLTDKKVGLPGLPGLPGTGLP
GLPGLPGIPQLTPFTGKNTKGGQLTDKKLLGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLPGLGK
AGQLNDKKVARPDTSFTTPQIPKTSLPPNPSPPTSRIPGIPQASSKQTTSP

TAREA 1
Revise el concepto de homología y paralogia. ¿Qué aplicaciones tienen dichos conceptos en análisis
biológico y bioinformático? Además, explore los tipos de mutaciones en ácidos nucleicos y cómo
pueden utilizarse estos conceptos en los objetivos de comparación o alineamiento de secuencias.

● Homología: La homología se refiere a las características biológicas, incluyendo los genes y

sus productos, que provienen de una característica presente en un ancestro común. Las
características homólogas, como los genes, se llaman homólogos. Los genes homólogos
pueden divergir evolutivamente de dos maneras: mediante la separación de dos poblaciones
con el gen ancestral en dos especies diferentes, o mediante la duplicación del gen ancestral
dentro de una misma línea evolutiva. Los genes que se separan por especiación se conocen
 como ortólogos. Los genes que se separan por eventos de duplicación de genes se llaman
parálogos (Koonin, E; 2005).
● Paralogia: La paralogía es una relación definida sobre un par de genes homólogos que han
surgido a través de una duplicación de genes (Koonin, E; 2005).

Los conceptos de paralogía y homología son fundamentales en el análisis biológico y bioinformático,

especialmente en el estudio de la evolución de genes y proteínas. Estos conceptos se aplican en varios
contextos clave dentro de estas disciplinas. Por ejemplo en el análisis filogenético, la homología
ayuda a identificar genes y proteínas que comparten un ancestro común, lo cual es crucial para
construir árboles filogenéticos que representan las relaciones evolutivas entre especies o genes. Por
otro lado, la paralogía permite identificar eventos de duplicación génica en la historia evolutiva de una
especie, lo que es útil para entender la diversificación de funciones dentro de una misma especie. En
la anotación de genomas, la homología se utiliza para transferir información funcional de genes
conocidos a genes desconocidos en genomas recién secuenciados, dado que los genes homólogos
suelen compartir funciones similares. La identificación de genes paralogos, por su parte, ayuda a
predecir posibles funciones divergentes que pueden haber surgido tras una duplicación génica. Los
estudios de expresión génica también se benefician de estos conceptos. La homología permite
comparar patrones de expresión génica entre especies, proporcionando información sobre la
conservación funcional de genes. La paralogía permite estudiar la divergencia en la regulación y la
función de genes duplicados dentro de la misma especie, revelando cómo han evolucionado nuevas
funciones. En el análisis de proteínas, la homología es utilizada en la modelación de estructuras de
proteínas, donde las estructuras de proteínas homólogas conocidas se usan como plantillas para
modelar proteínas desconocidas. La paralogía ayuda a entender la diversificación funcional de
proteínas dentro de una familia de proteínas y cómo las duplicaciones génicas han contribuido a la
evolución de nuevas funciones proteicas. En el desarrollo de medicamentos, la homología permite la
identificación de blancos terapéuticos conservados entre especies, facilitando la identificación de
dianas farmacológicas. La paralogía, por otro lado, ayuda a evitar efectos secundarios no deseados al
identificar y discriminar entre miembros de familias de proteínas que pueden tener funciones
diferentes o redundantes. La biología comparativa también se beneficia de estos conceptos. La
homología permite el estudio de la evolución de rutas metabólicas y redes regulatorias conservadas
entre especies. La paralogía permite el análisis de la especialización y la adaptación de genes
duplicados en respuesta a diferentes presiones selectivas ambientales. Finalmente, en la identificación
de elementos conservados, la homología permite identificar secuencias conservadas a nivel de
nucleótidos o aminoácidos que pueden ser funcionalmente importantes, como sitios de unión a
proteínas o ARN. La paralogía, por su parte, permite identificar variaciones específicas en secuencias
duplicadas que pueden tener relevancia funcional o regulatoria (Koonin, E; 2005).

Con respecto a las mutaciones en ácidos nucleicos estos son cambios en la secuencia de ADN o ARN
que pueden afectar la estructura y función de genes y proteínas. Comprender los tipos de mutaciones,
como puntuales, inserciones y deleciones (indels), duplicaciones, inversiones, translocaciones y
frameshift, es crucial en biología molecular y bioinformática. Las mutaciones puntuales incluyen
transiciones (cambio de una purina por otra purina o de una pirimidina por otra pirimidina) y
transversiones (cambio de una purina por una pirimidina o viceversa). Las inserciones y deleciones
añaden o eliminan nucleótidos, las duplicaciones copian segmentos de ADN, las inversiones revierten
segmentos, y las translocaciones mueven segmentos de una ubicación a otra. Las mutaciones
frameshift alteran el marco de lectura de un gen. En la comparación de secuencias, estos conceptos
son clave para detectar homología y construir árboles filogenéticos. Las mutaciones puntuales y los
indels ayudan a identificar genes homólogos y a inferir relaciones evolutivas. Los algoritmos de
alineamiento, como Needleman-Wunsch y Smith-Waterman, utilizan matrices de sustitución y
penalizaciones por gaps para realizar alineamientos precisos. La detección de variación genética se
beneficia del análisis de mutaciones, como los SNPs y los indels, que se usan en estudios de variación
genética y asociación de rasgos. El análisis funcional de mutaciones permite predecir los efectos de
frameshift, duplicaciones y translocaciones en proteínas. Herramientas bioinformáticas modelan estas
mutaciones para estudiar sus consecuencias y el análisis de conservación funcional ayuda a identificar
dominios críticos en proteínas (Alberts, B; et al. 2014).

TAREA 2
a. Identificar una proteína de interés en eucariotas (enzima, transportador, etc). Utilice sus
conocimientos de Bioquímica para elegir dicha proteína. Reporte el identificador (número de
accession o de entrada en UNIPROT o NCBI). Buscar secuencias homólogas por BLAST en
especies diferentes. Resuma todo lo que se puede aprender de BLAST y Alineamiento por
pares. Elija 2 secuencias homólogas, una distante y otra cercana para comparar con la
secuencia elegida. Interprete y dé ejemplos de cambios conservados, no conservados y huecos
en la comparación de dichas secuencias.

Coagulation Factor XIII B chain

Número de Accession: P05160

Secuencia FASTA:

MRLKNLTFIIILIISGELYAEEKPCGFPHVENGRIAQYYYTFKSFYFPMSIDKKLSFFCLAGYTTESGRQ
EEQTTCTTEGWSPEPRCFKKCTKPDLSNGYISDVKLLYKIQENMRYGCASGYKTTGGKDEEVVQCLSDGW
SSQPTCRKEHETCLAPELYNGNYSTTQKTFKVKDKVQYECATGYYTAGGKKTEEVECLTYGWSLTPKCTK
LKCSSLRLIENGYFHPVKQTYEEGDVVQFFCHENYYLSGSDLIQCYNFGWYPESPVCEGRRNRCPPPPLP
INSKIQTHSTTYRHGEIVHIECELNFEIHGSAEIRCEDGKWTEPPKCIEGQEKVACEEPPFIENGAANLH
SKIYYNGDKVTYACKSGYLLHGSNEITCNRGKWTLPPECVENNENCKHPPVVMNGAVADGILASYATGSS
VEYRCNEYYLLRGSKISRCEQGKWSSPPVCLEPCTVNVDYMNRNNIEMKWKYEGKVLHGDLIDFVCKQGY
DLSPLTPLSELSVQCNRGEVKYPLCTRKESKGMCTSPPLIKHGVIISSTVDTYENGSSVEYRCFDHHFLE
GSREAYCLDGMWTTPPLCLEPCTLSFTEMEKNNLLLKWDFDNRPHILHGEYIEFICRGDTYPAELYITGS
ILRMQCDRGQLKYPRCIPRQSTLSYQEPLRT

Secuencias Homólogas por BLAST:

Accession: AAI48334.1
Secuencia FASTA:

>AAI48334.1 Coagulation factor XIII, B polypeptide, partial [synthetic

construct]

MRLKNLTFIIILIISGELYAEEKPCGFPHVENGRIAQYYYTFKSFYFPMSIDKKLSFFCLAGYTTESGRQ
EEQTTCTTEGWSPEPRCFKKCTKPDLSNGYISDVKLLYKIQENMRYGCASGYKTTGGKDEEVVQCLSDGW
SSQPTCRKEHETCLAPELYNGNYSTTQKTFKVKDKVQYECATGYYTAGGKKTEEVECLTYGWSLTPKCTK
LKCSSLRLIENGYFHPVKQTYEEGDVVQFFCHENYYLSGSDLIQCYNFGWYPESPVCEGRRNRCPPPPLP
INSKIQTHSTTYRHGEIVHIECELNFEIHGSAEIRCEDGKWTEPPKCIEGQEKVACEEPPFIENGAANLH
SKIYYNGDKVTYACKSGYLLHGSNEITCNRGKWTLPPECVENNENCKHPPVVMNGAVADGILASYATGSS
VEYRCNEYYLLRGSKISRCEQGKWSSPPVCLEPCTVNVDYMNRNNIEMKWKYEGKVLHGDLIDFVCKQGY
DLSPLTPLSELSVQCNRGEVKYPLCTRKESKGMCTSPPLIKHGVIISSTVDTYENGSSVEYRCFDHHFLE
GSREAYCLDGMWTTPPLCLEPCTLSFTEMEKNNLLLKWDFDNRPHILHGEYIEFICRGDTYPAELYITGS
ILRMQCDRGQLKYPRCIPRQSTLSYQEPLRT

Accession: XP_032955220.1

Secuencia FASTA:
>XP_032955220.1 coagulation factor XIII B chain [Rhinolophus
ferrumequinum]

MRSKVLAFIIILIISGELYAEEKPCGLPTVENGRLAPYYYTFESFYFPMSIDQKLSFSCLAGYATETGKK
EDKTTCTTEGWNPRPRCFKKCTKPDLMNGFISDAKLLYKFQENMRYSCASGYKTTGGQDEEVVQCLADGW
SSQPACRKEHETCLAPELHHGNYSTTQRTFRVKGKVRYECAPGYYTAGGKKTEEVECHTYGWSVTPKCTK
LKCSSLRLIENGYFHPIKQTYEEGDVVQFFCHENYYLSGADLIQCYNFGWYPESPVCEGRRNRCPPPPLP
LNSKLQTYSTTYRHGETVRIECELNFEIQGSEEIRCDNGKWTDPPKCTEEKEKTACEEPPHIEHSAANLY
AKVYYNGDKVAFACQSGYHLRGSKEITCLRGKWTVPPECVENNENCKPPPDVTNGAVVGGLLASYTTGSS
VEYRCNEYYILKGAKRSRCQQGQWSSPPVCLEPCTVNMDYMNRNNIEMKWKLEGKVLHGDLIDFACKQGF
DLAPSTPVSALSVQCDRGEVKYPVCLRKESKGMCASPPLIKNGVITSSVRGSYENGSSVEYRCFDHHFLQ
GPRVSHCSQGVWTTPPLCLEPCTLSSVEMENNNLLLKWDFDNRPYIFHGEYIEFLCRRDTYVAQLSTIGS
ELRVRCDRGQLKYPRCIQRQRMLFYQEPVRT

Comparación entre: Homo sapiens vs Rhinolophus ferrumequinum

Resultados: emboss_needle-I20240614-192938-0805-23132248-p1m

# Length: 661

# Identity: 537/661 (81.2%)

# Similarity: 595/661 (90.0%)

# Gaps: 0/661 ( 0.0%)

# Score: 3070.0
Cambios Conservativos: Son aquellos en los que un aminoácido es reemplazado por otro con
propiedades químicas similares. En tu resultado, estos se representan con dos puntos ( : ). Estos
cambios suelen tener un impacto mínimo en la estructura y función de la proteína.

Donde encontramos la mayor cantidad de cambios conservativos son en las siguientes líneas de
comparación (segunda, séptima y novena):

Cambios no conservativos: Son aquellos en los que un aminoácido es reemplazado por otro con
propiedades químicas diferentes. En tu resultado, estos se representan con un punto ( . ). Estos
cambios pueden tener un impacto significativo en la estructura y función de la proteína.

Donde encontramos la mayor cantidad de cambios no conservativos son en las siguientes líneas de
comparación (séptima, duodécima y décimo tercera):
 Huecos: Son espacios en la alineación que indican la inserción o eliminación de uno o más
aminoácidos. Los huecos pueden tener un impacto significativo en la estructura y función de la
proteína, especialmente si ocurren en una región funcionalmente importante de la proteína. Estos
huecos son representados por un espacio en blanco, sin embargo, observamos que en los
resultados obtenidos, no existen huecos.

En conclusión, podemos observar que entre ambas secuencias existe gran similitud, debido a que no se
encuentran los llamados “huecos” en su comparación de secuencias, pero sí existen muchos cambios tanto
conservativos como no conservativos, lo que indican similitudes fuertes y débiles respectivamente, esto
podría verse reflejado en los resultados obtenidos luego del BLASTP al buscar similitudes en organismos
diferentes dando un 81% de similitud.

TAREA 3
Análisis de la proteína elegida en la tarea anterior.

a. Análisis de dominios y residuos conservados utilizando CDD y resumir tres puntos

importantes de la información existente en UniProt de dicha proteína. No debe copiar
pantallazos de todo lo reportado por CDD o UniProt. Buscar literatura que de soporte
(experimental o bioinformático) a las características observadas de su proteína

Al momento de analizar el dominio al que pertenecía y los residuos conservados de la

proteína, utilizando CDD como se indica en el ejercicio, se tuvo problemas para la
identificación de estos puntos puesto que el programa daba como resultado una superfamilia ,
específicamente la superfamilia C1.
 Link de la página:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi?hslf=1&uid=410341&#seqhrch

Puntos importantes:

Coagulador de la sangre: El factor XIII es un factor importante en la coagulación de la fibrina

de la sangre, ya que activa los enlaces cruzados de la fibrina. La cadena B específicamente,
permite la estabilización de la cadena A. Ambos factores actúan cuando hay presencia de
calcio (Muszbek ,2004).

Coágulos de Fibrina: Aportan y estabilizan el factor A para poder formar los coágulos de
fibrina y permitir la cicatrización de las heridas del cuerpo (Thomas, 2016)

Problemas en coagulación: Su ausencia ocasiona problemas en la coagulación de la persona,

como la disminución de la actividad del factor como tal , y como resultado , problemas en la
coagulación de la sangre, asi como trastornos hemorrágicos , que se manifiestan como un
mayor tiempo de sangrado y mayor tiempo hasta que ocurra la cicatrización (Thomas, 2016).

b. Análisis de las propiedades de la proteína como la composición, carga de su proteína y asociar

con su posible estructura, función o en la purificación y caracterización de dicha proteína.

Composición de la proteína:
Carga de la proteína: -10

Punto isoeléctrico teórico de: 6.01

Estructura tridimensional:

Su función , tomando en cuenta sus características ácidas, y apoyándonos en los conceptos

que da Uniprot, es la coagulación de la sangre ante una hemorragia. El pH estándar de la
sangre es de 7.35 aproximadamente, lo que nos indica que esta proteína suele estar en un
estado ácido, puesto que su punto isoeléctrico es menor al pH de su medio.

En lo que respecta a su purificación y caracterización, considero que, tomando en cuenta

también lo que hemos aprendido en clase estas últimas semanas, podría realizarse métodos
 por cromatografía de intercambio iónico , ya que se conocen las características de carga y
composición de la proteína. Se debe tomar en cuenta la cascada de coagulación para su
correcta purificación , ya que si no se toma en cuenta las medidas necesarias, y se administran
los anticoagulantes, esta ruta metabólica dificultará su purificación.

Referencias Bibliográficas
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2014). Molecular Biology of
the Cell (6th ed.). Garland Science.

Altschul, S. F., Gish, W., Miller, W., Myers, E. W., & Lipman, D. J. (1990). Basic local alignment
search tool. Journal of Molecular Biology, 215(3), 403-410.
https://doi.org/10.1016/S0022-2836(05)80360-2

Can, T. (2014). Introduction to Bioinformatics. In: Yousef, M., Allmer, J. (eds) miRNomics:
MicroRNA Biology and Computational Analysis. Methods in Molecular Biology, vol 1107.
Humana Press, Totowa, NJ. https://doi.org/10.1007/978-1-62703-748-8_4

Koonin, E. V. (2005). Orthologs, paralogs, and evolutionary genomics. Annual Review of Genetics,
39, 309-338. https://doi.org/10.1146/annurev.genet.39.073003.114725

Muszbek, L., Yee, V. C., & Hevessy, Z. (1999). Blood coagulation factor XIII: structure and function.
Thrombosis research, 94(5), 271-305.

Thomas, A., Biswas, A., Dodt, J., Philippou, H., Hethershaw, E., Ensikat, H. J., Ivaskevicius, V., &
Oldenburg, J. (2016). Coagulation Factor XIIIA subunit missense mutations affect structure
and function at the various steps of Factor XIII action. Human Mutation, 37(10), 1030–1041.
https://doi.org/10.1002/humu.23041