Zarkin Reynoso María Fernanda

23/08/2024

TAREA 1- FUNDAMENTOS

E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno)

Medio selectivo-diferencial de bacilos Gram negativos de rápido
desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
➔ Indicadores eosina y azul de metileno inhibe Gram
positivas.
➔ Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro
con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo
hacen son incoloras.
➔ Pueden crecer especies de Candida y se observa como
colonias rosadas y puntiformes
➔ En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de
especies de Salmonella y Shigella

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 °C durante 18-24 horas.

Resultados:
● Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro
azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.
● Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio,
incoloras.

SAB (dextrosa Sabouraud)

Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos y
saprófitos particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel,
pelo). También es útil para el cultivo de levaduras.
➔ El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el
pH ácido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el
crecimiento de hongos y levaduras.
➔ La peptona, la tripteína y la glucosa son los nutrientes

Incubación: En aerobiosis a 20-25 ºC. El tiempo dependerá del hongo

y levadura que se quiera recuperar. Como regla general, incubar en las
condiciones descritas durante 2 a 7 días

CET (cetrimida).
Aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y otras especies del género.
➔ La cetrimida es una sal cuaternaria de amonio también actúa como detergente catiónico y
como agente selectivo, puede inhibir a algunas especies de Pseudomonas.
➔ Peptona de gelatina aporta los nutrientes para el desarrollo microbiano
➔ El cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación de piocianina,
pioverdina, piomelanina y fluoresceína de P. aeruginosa.

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 °C durante 24-48 horas.

Resultados:
● La presencia de un color verde-azulado
corresponde a producción de piocianina,
● El color verde corresponde a la producción de
pioverdina.
● Color rosa claro, rojizo o marrón oscuro
corresponde a la producción de piorrubina.
● Examinar las placas bajo luz ultravioleta, ya que
la producción de fluoresceína se observa de
color amarillo verdoso brillante

MH (Müeller-Hinton)
Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano. Recomendado
universalmente para la realización de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
➔ Por su composición, ha sido recomendado por el para ser utilizado en forma rutinaria en la
realización del antibiograma en medio sólido, debido a sus múltiples ventajas.
➔ Puede emplearse como base para medios ricos y enriquecidos
➔ Presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad
➔ Su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo
➔ La mayoría de los patógenos microbianos crecen satisfactoriamente.

Incubación: La atmósfera, el tiempo y temperatura de incubación dependen del

grupo microbiano o microorganismo en estudio

AST (Tripteína Soya Agar)

Medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y
aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios
facultativos y estrictos
➔ Al ser suplementado con sangre permite el crecimiento de
microorganismos exigentes y visualizar hemólisis.
 ➔ La tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos libres,
bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas
➔ El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
➔ Puede ser utilizado como base a la cual se suplementa con nutrientes o con
antimicrobianos, lográndose un medio enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo

Incubación: El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependen

del microorganismo que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
● Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 33-37 º C durante 18 a 24 horas.
● Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5 % de CO2, a
33-37 ºC durante 24-48 horas.

AS (agar sangre)
El medio de cultivo agar sangre ovina proporciona el crecimiento de la gran
mayoría de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, así como de hongos
(mohos y levaduras), a partir de una base rica y complementada, ofreciendo
óptimas condiciones de desarrollo para
microorganismos no fastidiosos.
Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de
reacciones de hemólisis
➔ La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un
alto valor nutritivo
➔ El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
➔ El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril promueve el
desarrollo de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y
la adecuada observación de las reacciones de hemólisis

Incubación: El tiempo, temperatura y atmósfera de incubación, dependen del

microorganismo que se quiera recuperar.

Resultados:
● Alfa-hemólisis: coloración verdosa del medio.
● Beta-hemólisis: zona clara alrededor de la colonia.
● Gamma-hemólisis: no hay cambios.

McK (McConkey)
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas,
aguas y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae se
desarrollan en el mismo.
➔ las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano
 ➔ la lactosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ La mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
➔ Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un
viraje del color del indicador de pH (rojo neutro)

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-48 horas.

Resultados:
● Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas rojizas. Puede observarse
halo de precipitación biliar.
● Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.

CLED (cistina-lactosa-deficiente de electrolitos).

Medio indicado para el procesamiento de urocultivos. Es utilizado para el aislamiento, recuento e
identificación presuntiva de microorganismos, pues permite el desarrollo de la mayoría de los
patógenos urinarios y previene el desarrollo invasor de Proteus spp.
➔ La peptona, el extracto de carne y la tripteína aportan los
nutrientes
➔ La lactosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ la L-cistina es el agente reductor,
➔ el azul de bromotimol es el indicador de pH
➔ las cepas que la fermentan, acidifican el medio que vira del
verde al amarillo, mientras que los que no lo hacen, dan
colonias incoloras que viran el medio al color azul.
➔ La restricción de electrolitos en el medio impide el
desarrollo invasor de especies de Proteus

Incubación: En aerobiosis, a 35-37 °C, durante 18-48 horas.

Resultados:
● microorganismos fermentadores de lactosa: colonias
amarillas.
● microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, azuladas.

MAS (agar salado manitol)

Medio selectivo- diferencial para el aislamiento estafilococos y detección
de Staphylococcus aureus en muestras clínicas.
➔ El extracto de carne, la peptona de carne y la tripteína,
constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales
que promueven el desarrollo microbiano.
➔ El manitol es un hidrato de carbono fermentable.
➔ El cloruro de sodio es el agente selectivo que inhibe el desarrollo
de la flora acompañante
➔ el rojo fenol es el indicador de pH y el agar es el agente
 solidificante
➔ al fermentar el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el
indicador de pH del color rojo al amarillo.

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 °C durante 18-24 hs. Si a las 24 horas las placas presentan
resultado negativo, incubar otras 24 horas.

Resultados:
● Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de
un halo amarillo.
● Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del medio, rojas
rodeadas o no de halo rojizo-púrpura.

TCBS (tiosulfato-citrato-bilis-sacarosa).
Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio
parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, aguas y alimentos.
➔ El extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan los
nutrientes para el desarrollo microbiano
➔ La bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el desarrollo
de flora acompañante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp
➔ El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
➔ La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ el azul de bromotimol y azul de timol son los indicadores de pH que en un ambiente
alcalino le otorgan al medio de cultivo el color verde-azulado y viran al color amarillo en
medio ácido
➔ El tiosulfato de sodio es la fuente de azufre y junto con el citrato ferrico permiten la
detección de la producción de ácido sulfhídrico por formación de un compuesto color negro

Incubación: En aerobiosis, a 33-37°C durante 18-24 horas.

Resultados
● Fermentadores de sacarosa: colonias amarillas.
● No fermentadores de sacarosa: colonias del color del medio, con
centro verde.
● Productores de H2S: Colonias negras

ASS (agar salmonella-shigella).

Medio de cultivo selectivo, adecuado para el aislamiento de
microorganismos Gram negativos tolerantes a la bilis, especialmente
especies de los géneros Salmonella y Shigella, a partir de muestras de
origen clínico
➔ el mayor contenido de sales biliares y verde brillante contribuyen
a un aislamiento selectivo de Salmonellas y Shigellas
➔ El contenido de citrato férrico y tiosulfato de sodio permite
evidenciar colonias bacterias productoras de H2S
➔ La lactosa es el hidrato de carbono fermentable
Resultados:
● Los organismos fermentadores de lactosa producen ácido que, en presencia del
indicador rojo neutro, resulta en color rojo en el medio.
● Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras

ABRV (agar bilis-rojo-violeta).

Este es un medio selectivo para la investigación presuntiva y recuento de
coliformes en alimentos, productos lácteos y otros materiales de importancia
sanitaria.
➔ la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes necesarios
para el crecimiento bacteriano,
➔ las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora
Gram positiva,
➔ la lactosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ El rojo neutro es el indicador de pH.
➔ Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el
medio y producen un viraje del indicador de pH al color rojo intenso. Debido a esto, se
observan como colonias de color rojo púrpura, de 1 a 2 mm de diámetro, rodeadas,
generalmente, de una zona rojiza de bilis precipitada
➔ NO se lleva al autoclave

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-24 horas. Las placas pueden ser reincubadas
durante 24 horas adicionales.

Resultados:
● Bacterias que fermentan la lactosa: colonias rojo
púrpura, rodeadas por un halo de precipitación rojizo.
● Bacterias que no fermentan la lactosa: colonias del
color del medio, incoloras.

EHK (agar entérico-Hektoen)

Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el
aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. a partir de heces
y alimentos.
➔ la proteosa peptona y el extracto de levadura aportan
los nutrientes para el desarrollo microbiano.
➔ La lactosa, sacarosa y salicina son los hidratos de
carbono fermentables
➔ Las sales biliares inhiben el desarrollo de la flora Gram
positiva, de algunos coliformes y de la mayoría de las
cepas de Pseudomonas spp.
 ➔ El azul de bromotimol y la fucsina ácida son los indicadores de la fermentación de hidratos
de carbono,
➔ el citrato de hierro actua como indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato
debido a que se forma sulfuro de hierro, compuesto de color negro

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18 a 24 horas.

Se logra una mejor diferenciación entre especies de Salmonella y Shigella al incubar las placas
durante 48 horas.

Resultados:
Se debe determinar la fermentación de lactosa y la producción de SH2 .
● Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias amarillas o
anaranjadas.
● Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del
medio verde-azuladas.
● Microorganismos productores de SH2 : colonias con centro negro.

XLD (agar xilosa-lisina-desoxicolato).

Es un medio selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos entéricos Gram negativos, en
especial para microorganismos del género Salmonella y Shigella en muestras
clínicas y de alimentos.
➔ El extracto de levadura provee la fuente de nitrógeno, carbono,
vitaminas y cofactores de crecimiento.
➔ El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor de los
microorganismos Gram positivos
➔ La degradación de los carbohidratos xilosa, lactosa y sacarosa
genera la producción de ácidos y el indicador rojo fenol vira de rojo a
amarillo.
➔ Se incorpora la xilosa porque es prácticamente fermentada por todas
las enterobacterias, excepto por el género Shigella.
➔ La Salmonella tiene la capacidad de decarboxilar la lisina presente,
produciendo una elevación del pH o manteniéndolo neutro.
Formación de H2S por reducción del tiosulfato, lo que origina
colonias con centro negro.

Resultados: Fermentacion de la xilosa, lactosa y sacarosa genera la

producción de ácido cambiando el color del medio de rojo a amarillo. La
producción de H2S bajo condiciones alcalinas, da colonias con el centro
negro.

AVB (agar verde brillante).

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de
Salmonella spp., excepto Salmonella typhi y Salmonella paratyphi a partir de
muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria.
➔ La pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de
nitrógeno, vitaminas y minerales.
➔ La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables,
➔ el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay
producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares,
➔ el verde brillante actúa como agente selectivo que inhibe el desarrollo
de flora Gram positiva y de algunos microorganismos Gram
 negativos

Incubación:En aerobiosis, a 33-37°C hasta 48 horas.

Resultados:
● Bacterias que fermentan la lactosa y/o sacarosa: colonias amarillo-verdosas, rodeadas
por un halo de color amarillo verdoso del medio de cultivo.
● Bacterias que no fermentan la lactosa y/o sacarosa: colonias de color blanco rosadas o
transparentes rodeadas por un halo rojizo del medio de cultivo

AGCh (agar gelosa chocolate / agar chocolate).

El agar chocolate es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo, designado
principalmente al cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes como
gonococos,
meningococos, Streptococcus y Haemophilus.
➔ El medio de cultivo es ampliamente nutritivo por la presencia de peptona,
tripteína, extracto de levadura, extracto de corazón y almidón.
➔ El agregado de sangre aporta nutrientes, vitaminas y minerales adicionales.
➔ El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
➔ Este medio se prepara a partir de la base GC a la que se agrega sangre o
glóbulos rojos lisados.
➔ La adición de sangre (hemoglobina) aporta al medio un importante factor de
crecimiento, el factor X o hemina termoestable.

Incubación: El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependen del

microorganismo que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
● Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 33-37 º C durante 18 a 24 horas.
● Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5 % de CO2, a
33-37 ºC durante 18-48 horas.

Resultados:
Observar las características de las colonias.

ABE (agar bilis esculina)

Medio utilizado para el aislamiento e identificación presuntiva de
estreptococos del grupo D.
➔ Medio de cultivo nutritivo por la presencia de extracto de carne
y peptona de carne que aportan nutrientes para el desarrollo
microbiano.
➔ Los estreptococos del grupo D crecen rápidamente en el agar
bilis esculina e hidrolizan la esculina, que en presencia de iones
hierro forman un compuesto de color verde oliva hasta negro.
➔ La bilis de buey inhibe el desarrollo de la flora acompañante.

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 °C hasta 72 horas.

Resultados:
● Positivo: se observa un oscurecimiento o ennegrecimiento del medio de cultivo.
 ● Negativo: ausencia de oscurecimiento del medio de cultivo

ABP (agar Baird-Parker)

Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de
estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
➔ Medio altamente nutritivo
➔ La peptona de caseína y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono
➔ el nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B,
➔ La glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
➔ El telurito de potasio y el cloruro de litio inhiben el desarrollo de la flora acompañante
presente en la muestra.
➔ La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinásica de los microorganismos.
➔ Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color
grisáceo-negro,

Incubación: En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 24 a 48 horas.

Resultados:
● Bacterias que reducen el telurito de potasio: colonias de color
grisáceo-negro.
● Bacterias que no reducen el telurito de potasio: colonias del color
del medio, transparentes.
● Bacterias con actividad lecitinásica: halo claro en el medio de cultivo alrededor de la
colonia. Puede existir también un halo opaco alrededor de la colonia con un halo claro
externo.
● Bacterias sin actividad lecitinásica: ausencia de halo claro alrededor de la colonia.

Agar sulfito de bismuto

Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación de
Salmonella entérica serotipo Typhi y otras Salmonellas a partir
de muestras de agua, alimentos y muestras clínicas
➔ La peptona y el extracto de carne proporcionan
nitrógeno, vitaminas y minerales para el crecimiento de
los microorganismos.
➔ La dextrosa es una fuente de energía.
➔ El sulfato ferroso actúa como indicador en la producción
de sulfuro de hidrógeno, los microorganismos capaces
de producirlo se manifiesta con el centro de la colonia un
precipitado negro, que puede dar lugar a tonalidades
marrones más o menos oscuras e incluso negras.
También se puede reducir el bismuto a metal dando un brillo metálico
➔ alrededor de las colonias correspondientes.
➔ El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben conjuntamente a las bacterias Gram
positivas y coliformes
TSI (agar hierro triple azúcar)
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en
base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa y
a la producción de ácido sulfhídrico.
➔ El extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados
para el desarrollo bacteriano.
➔ La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono
fermentables.
➔ El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de
ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro
de hierro, de color negro.
➔ El rojo de fenol es el indicador de pH,

Incubación: En aerobiosis, a 33-37°C durante 18 a 24 horas.

Resultados:
Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo
produce gas.

CIT (agar citrato)

Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la
capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía
➔ el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno
➔ El citrato de sodio es la única fuente de carbono.
➔ Las sales de fosfato forman un sistema buffer,
➔ El magnesio es cofactor enzimático.
➔ el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en
medio alcalino

Incubación:En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 24-72 horas.

Algunos microorganismos pueden requerir hasta 7 días de incubación.

Resultados:
- Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta.
- Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo.
MRVP (rojo de metilo - Voges-Proskauer).
Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.
➔ Este medio contiene glucosa y peptona , es un medio de un solo
carbohidrato
➔ La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de
distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos
finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos
finales neutros (acetil metil carbinol): Esta diferencia en el metabolismo
bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo
de metilo, para revelar productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e
hidróxido de potasio para evidenciar productos neutros.

Resultados:
● Prueba del rojo de metilo: añadir unas gotas de una solución de rojo de
metilo al 0.04%, observar el color del medio.
● Prueba de Voges Proskauer: añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol
etílico absoluto y 0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar
vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.

Interpretación:
● Prueba del rojo de metilo: Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: color amarillo.
● Prueba de Voges Proskauer:Resultado positivo: desarrollo de un color rojo en pocos
minutos después de una completa agitación del tubo.
Resultado negativo: ausencia de color rojo.

Urea (caldo).
Medio de cultivo utilizado para identificar Enterobacterias con base a la hidrólisis de urea a partir
de muestras clínicas y otros materiales
➔ Permite determinar la capacidad de un microorganismo para degradar la urea
formando dos moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa.
➔ Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y
se usa sobre todo para diferenciar este género de otras Enterobacterias que dan
negativo o positivo retardado.
➔ La urea es la fuente de nitrógeno y permite la detección de la hidrólisis de la
urea,
➔ el extracto de levadura aporta vitaminas necesarias para el desarrollo de
microorganismos,
➔ el rojo de fenol es el indicador de pH

Resultados:
● Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color rosado-rojizo.
● Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece de color
 amarillo.

LIA (agar hierro lisina).

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos,
especialmente Salmonella spp., basado en la descarboxilación y
desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.
➔ La peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano.
➔ La glucosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ La lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de
las enzimas decarboxilasa y deaminasa.
➔ El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los
indicadores de la producción de ácido sulfhídrico.
➔ El púrpura de bromocresol, es el indicador de pH

● Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y provocan el viraje del

color púrpura al amarillo.
● El ambiente ácido favorece la actividad enzimática descarboxilasa y se metaboliza la lisina
a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornando al color púrpura o violeta.
● Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
descarboxilasa producen un viraje del medio de cultivo al color amarillo.
● La generación de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio
debido a la formación de sulfuro de hierro.

Resultados:
● Descarboxilación de la lisina:
Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico violeta / fondo violeta).(K/K)
Negativo: superficie alcalina /profundidad ácida (pico violeta / fondo amarillo). (K/A)
● Desaminación de la lisina:
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida. Esto sucede con cepas del género
Proteus, Providencia y algunas de Morganella spp. (R/A)
● Producción de SH 2:
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo (especialmente en el límite entre la
superficie y profundidad).
Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin cambio de color

MIO (agar movilidad-indol-ornitina).

Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia Enterobacteriaceae en base a la
movilidad, producción de indol y actividad enzimática ornitina decarboxilasa
➔ Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y
tripteína.
➔ La tripteína aporta gran cantidad de triptófano, sustrato de la enzima triptofanasa a partir
del cual se forma indol que puede ser revelado con el reactivo de Ehrlich o de Kovac´s por
la formación de un compuesto de color rojo.
➔ La glucosa es el hidrato de carbono fermentable
➔ la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina decarboxilasa,
➔ el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color
púrpura y en medio ácido es amarillo

● Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen

viraje del color púrpura al amarillo.
● Las condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina
decarboxilasa, que actúa sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente
 alcalinización del medio de cultivo y viraje al color púrpura

Resultados:
● Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
● Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie
del medio
● Prueba del indol: Agregar al medio de cultivo 3-5 gotas de Indol Reactivo
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento

FAD (fenilalanina descarboxilasa).

Medio de cultivo utilizado para diferenciar Morganella morganii biogrupo 1 y 2,
Proteus spp. y Providencia spp., de la mayoría de otros miembros de la
familia Enterobacteriaceae, en base a la presencia de la enzima fenilalanina
deaminasa
➔ El extracto de levadura aporta los nutrientes para el desarrollo
bacteriano.
➔ El aminoácido fenilalanina es sometido a la desaminación oxidativa
catalizada por la enzima fenilalanina de aminas para producir ácido
fenilpirúvico y amoníaco. La presencia del ácido fenilpirúvico se
demuestra con el agregado de cloruro férrico en medio ácido, con el
cual se forma un quelato de color verdoso entre el ácido fenil pirúvico y los iones Fe3+

Resultados:
- Agregar 4 a 5 gotas de Fenilalanina Reactivo
- Rotar el reactivo con suavidad sobre el pico de flauta.
- Observar el color dentro de los primeros 5 minutos.
Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de
condensación.
Negativo: sin cambios de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo
BHI (caldo infusión cerebro-corazón).
Medio líquido altamente nutritivo que permite el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales y nutricionalmente exigentes, aerobios y
anaerobios
➔ Su alto valor nutritivo está dado por la infusión de cerebro de ternera, la
infusión de corazón vacuno y la peptona que constituyen la fuente de
carbono, nitrógeno, aminoácidos, péptidos y vitaminas necesarias para el
desarrollo de microorganismos.
➔ la glucosa es el hidrato de carbono fermentable

Resultados:
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad.

MAL (caldo malonato).

El caldo Malonato es utilizado para la diferenciación de coliformes y otros organismos
de la familia Enterebaceae y E. coli en base a la capacidad de usar malonato.
➔ La utilización de malonato como fuente de carbono,
➔ El sulfato de amonio como fuente de nitrógeno durante el crecimiento,
produce hidróxido de sodio y, por lo tanto, un aumento de la alcalinidad, que
cambia el color del medio de verde a azul debido al indicador de pH azul de
bromotimol.
➔ El extracto de levadura es una fuente de vitaminas, particularmente del grupo
B.
➔ La dextrosa es el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y
energía.

Resultados: Cambio de color de verde a azul

SIM (movilidad-indol-sulfhídrico).
Medio semisólido destinado a verificar la movilidad,
producción de indol y de sulfuro de hidrógeno por los
microorganismos. Es útil para diferenciar miembros de la
familia Enterobacteriaceae.
➔ La tripteína y la peptona aportan nutrientes para el
desarrollo microbiano.
➔ El triptófano es un aminoácido constituyente de
muchas peptonas y particularmente de la tripteína y
puede ser metabolizado por algunas bacterias para
formar indol.
➔ El indol producido se combina con el aldehido del
reactivo de Ehrlich o de Kovac´s, para originar un compuesto de color rojo.
➔ A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que
reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de color negro

Resultados:
● Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
● Producción de SH 2 :
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra o en
todo el medio.
Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.
● Prueba del indol:
Agregar al medio de cultivo 3 a 5 gotas de Indol Reactivo
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento

Catalasa.
La catalasa es una enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y
oxígeno. La prueba se utiliza para comprobar la presencia de la enzima catalasa que se
encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen el
citocromo oxidasa. La principal excepción son los estreptococos (Streptococcus)
➔ Los organismos que poseen catalasa evidencian la reacción en 3% de peróxido de
hidrógeno por la generación rápida de burbujas de gas.

Resultados:
Catalasa positivo: hay burbujeo al combinar- se la biomasa microbiana y el peróxido de
hidrógeno.
Catalasa negativo: no hay burbujeo al combinarse el peróxido de hidrógeno y la biomasa
microbiana.

Oxidasa.
Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se
debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa.
➔ Determina la expresión de un sistema citocromo oxidasa funcional
➔ La prueba se ejecuta en discos o tiras de papel absorbente sobre las cuales se coloca una
gota de reactivo de oxidasa y posteriormente se le unta una pequeña porción de biomasa
microbiana.
➔ se utiliza una solución acuosa de 0.5 o 1% (p/v) (Reactivo de Kovac)

Resultados:
Oxidasa positivo: el papel adsorbido con reactivo de oxidasa se torna color púrpura al untarse
una pequeña porción de biomasa microbiana.
Oxidasa negativo: el papel adsorbido con reactivo de oxidasa se no torna color púrpura al untarse
una peña porción de biomasa microbiana
Coagulasa.
Determina la producción de coagulasa, un conjunto de enzimas con la capacidad de coagular el
suero. Esta prueba es básica para la diferenciación de las especies de Staphylococcus.
➔ Esta prueba se puede ejecutar con dos montajes diferentes, en tubo o en portaobjetos,
➔ Existen dos tipos de coagulasa en bacterias, una forma libre y una ligada a la envoltura
celular

● Prueba de coagulasa en portaobjetos (coagulasa ligada): se

coloca una gota de suero con EDTA en un portaobjetos y
posteriormente se combina con un pequeña porción de crecimiento
microbiano usando ya sea un asa bacteriológica o con un palillo de
madera realizando movimientos circulares por al menos 15 segundos,
los resultados son los siguientes.

Resultado:
Coagulasa positivo: el suero se coagula
Coagulasa negativo: el suero no se coagula

● Prueba de coagulasa en tubo (coagulasa libre): se emulsifica un inóculo fuerte de

crecimiento microbiano y suero con EDTA hasta obtener una suspensión lechosa, se
incuba por cuatro horas a 37°C

Resultados:
Coagulasa positivo: el suero se coagula
Coagulasa negativo: el suero no se coagula

PYR (L-pirrolidonil arilamidasa).

Detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utiliza cómo sustrato el
reactivo L-pirrolidonil-beta-naftilamida (PYR), para la identificación rápida
de enterococos.

Prueba rápida y simple utilizada fundamentalmente para la identificación

de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp. Permite la
caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de
microorganismos símil estreptococos.

Procedimiento: Realizar un alto inóculo en SSF e introducir un disco de PYR.

Resultados:
Agregar dos gotas de reactivo cinamaldehído y dejar a temperatura ambiente hasta 5 minutos.
Observar el color desarrollado:
- Positivo: presencia de actividad enzimática pirrolidonil arilamidasa: disco color
rosado a rojo.
- Negativo: ausencia de actividad enzimática pirrolidonil arilamidasa: disco y/o
solución color amarillo o incoloro.

CAMP.
Sirve principalmente para determinar la capacidad de un microorganismo para producir una
proteína conocida como factor CAMP. La proteína produce un efecto sinérgico con la β-
hemolisina de S. aureus sobre eritrocitos ovinos y bovinos que se observa como un fenómeno
lítico en la intersección de los dos microorganismos cuando se siembran en proximidad.

Procedimiento: En placa de agar sangre sembrar una estría de la cepa de S. aureus y

perpendicularmente a ésta (lo más cerca posible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa
de estreptococo en estudio.

Interpretación: El sinergismo se observa como un área de ß-Hemólisis en forma de “punta de

flecha” en la zona de desarrollo más cercana a ambas estrías.