UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

UNIVERSIDAD CATLICA DE CUYO San Luis-

Listeria

UNIVERSIDAD CATLICA DE LA PLATA

Listeria monocytogenes

Coloracin de Gram

Listeria monocytogenes

Microscopa electrnica de barrido mostrando los flagelos

Clasificacin
Listeria monocytogenes Listeria innocua Listeria ivanovii Listeria welshimeri Listeria seeligeri Listeria grayi

Listeria ivanovii subsp ivanovii Listeria ivanovii subsp londoniensis

 Debido

a su pleomorfismo Listeria puede ser confundida con

Corynebacterium, Streptococcus, Enterococcus y con Lactobacillus

Listeria
bacilos no no no

gram positivos

esporulados, capsulados,

ramificados,

 pequeos

casi cocoides, aislados o en cadenas cortas a 2 mm de longitud

cultivos

viejos o en fase rugosa formas filamentosas que pueden alcanzar hasta 20 mm.

Carcter de gran importancia diagnstica

mviles

1 a 5 flagelos pertricos

se
a

generan temperaturas de 25 C

36-37 C son aflagelados o tienen slo un flagelo, apareciendo como inmviles.

 Sombrilla

Temperatura
Temperaturas puede

ptima: 30 a 37 C

crecer en pocos das a temperaturas tan bajas como 4 C o sea refrigeracin

Colonias
pequeas,
al cabo de 1 a 2 das de incubacin a 36 C

de 1 a 2 mm de dimetro

lisas,

brillantes y en algunos cultivos muy parecidas a las de enterococos

Con

luz oblicua: tono azulado plido.

Streptococcus

Corynebacterium sp.

Enterococcus

Lactobacillus sp.

Metabolismo
Todas

las especies de Listeria poseen un metabolismo

anaerbico facultativo

(son aerobios pero desarrollan bien en microaerofilia)

Bioqumicas
Son catalasa + y oxidasa -. Utilizan glucosa y otros carbohidratos, dando productos finales cidos. Rojo de metilo y Voges-Proskauer son + Producen hidrlisis de esculina en horas. No hidrolizan gelatina, ni urea. No producen indol, ni cido sulfhdrico (H2S).

Resistencia

Son bacterias muy resistentes a factores adversos.

Toleran concentraciones de 10 % de NaCl, incluso hasta el 20 %. Resiste altos tenores de nitritos y de cidos. Tambin resiste al perxido de hidrgeno.

0 C no muere (frena su desarrollo) mxima de crecimiento

Temperatura

45-50 C.

El A

rango de pH es de 4,4 a 9,6.

pH bajos permanece viable cierto tiempo, pero sin multiplicarse.

Antgenos
Listeria

spp. poseen antgenos somticos (O) y flagelares (H), en serotipos,

clasificacin 16

identificacin importante para la determinacin del primer nivel de diagnstico y vigilancia.

serovariedades

 L. L.

incluye 13 serotipos 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e, 7

monocytogenes:

ivanovii: serotipo 5 solamente L. innocua: 3 serotipos 4ab, 6a, 6b y otro

serotipo an indefinido
L.

welshimeri: 2 serotipos 6a, 6b L. seeligeri: 4 serotipos 1/2b, 4c, 4d, 6b y

otro serotipo no definido

 La

mayora de los aislamientos humanos corresponden a los serotipos

4b, 1/2a y 1/2b

Es un patgeno invasivo que atraviesa el endotelio celular y se disemina a placenta y sistema nervioso central. La listeriolisina O (LLO) acta como un estmulo inflamatorio potente para inducir la activacin de las clulas endoteliales durante el proceso infeccioso.

Factores de virulencia
hemolisina

(listeriolisina O), dos fosfolipasas, una protena (ActA), varias internalinas.

Factor de virulencia
L.

monocytogenes produce una toxina citoltica y hemoltica, llamada listeriolisina O, protena de 52 k que se secreta a pH bajo y baja concentracin de hierro, condiciones presentes en el interior del fagolisosoma.

 Cuando

es fagocitado, comienza a fabricar la listeriolisina, que se fija al colesterol y rompe la membrana del fagolisosoma. factor favorece supervivencia intracelular

Principal

 L.

monocytogenes es una bacteria intracelular facultativa.

Epidemiologa
Quesos

Ensalada

 Cuchillos

 Embutidos

 Heladeras

 se

ha aislado de variadas especies de

mamferos, aves, peces, crustceos insectos

Hbitat
es

el suelo y la materia vegetal en descomposicin y crece como saprfito

sobrevive

En materia orgnica en descomposicin

Ambiente

es rico en celobiosa y otros disacridos derivados de plantas que inhiben en esta bacteria la produccin de sus factores de virulencia (listeriolisina y fosfolipasa C fosfatidil-inositol especfica).

 Desarrollan

los factores de patogenicidad cuando ingresan al organismo.

 incidencia Alimentos Puede

anual 0,3 al 0,8/100.000 contaminados (103UFC/ml)

alcanzar un 5 % durante algunos brotes epidmicos. sanos: hasta un 5% en

Portadores

humanos.

Clnica
En

personas adultas, la listeriosis invasiva se manifiesta como bacteriemia o como meningoencefalitis secundaria a una bacteriemia, con una mortalidad elevada, de hasta el 30%.

 Puerta

de entrada: tracto gastrointestinal

Susceptibles:

pacientes de edad avanzada o con patologa de base (Neoplasias,

hematolgicas, trasplantes de rganos, colagenosis, diabetes mellitus y SIDA).

En mujeres embarazadas
tercer

trimestre del embarazo

cuadro

pseudogripal de evolucin favorable

poco frecuente desenlace fatal en la madre amnionitis e infeccin fetal.

muy

Produce

En animales
Encefalitis

enfermedad

circular Buscan apoyo en una superficie dura

Diagnstico
* Muestreo * Enriquecimiento selectivo medio caldo Frazer

(24-48 horas a 30C)

Aislamiento selectivo Mc Bride

PALCAM colonias gris verdosas con halo negro OXFORD colonias negras con halo negro.

 En

medio OXFORD

En

medio Palcam

Purificacin * Tipificacin * Pruebas de patognesis in vivo (opcional) Test de ANTON * Cuantificacin (opcional) * Enriquecimiento en fro
(opcional)

Camp
Tcnica

para estimular la betahemlisis CAMP (Christie-Atkins-Munch-Peterson)

opcional

en el esquema diagnstico de Listeria

Diferenciacin bioqumica de especies de listeria

Especies
L.monocytogenes

Hemlisis B

manitol

Ramnosa

Xilosa

+ +

+ v -

L.Innocua L.ivanovii

L.seeligeri
L.welshimeri L.grayi

+
-

v v

+
+ -

Diferenciacin
Del

gnero Streptococcus puede diferenciarse por la tincin de Gram (bacilo gram-positivo), La movilidad (mvil), la prueba de la catalasa (positiva) y la sensibilidad a la gentamicina (sensible).

 De

Erysipelothrix rhusiopathiae puede diferenciarse por el crecimiento a 4C (crece), la prueba de la catalasa (positiva), la movilidad (mvil) y la sensibilidad a la vancomicina (sensible).

 De

las corinebacterias mviles, por la hidrlisis de la urea (negativa), la reaccin de Voges-Proskauer (positiva) y por la produccin de cido de la Dglucosa en condiciones estrictamente aerobias (positiva).

Listeria monocytogenes
Corte Longitudinal

Membrana plasmtica

Pared Celular
Corte Transversal Microscopa electrnica de transmisin 70000X

Listeria monocytogenes

Crecimiento en agar sangre

Listeria monocytogenes

-Hemlisis: Listerolisina

Listeria monocytogenes

Aislamiento en agar sangre

Listeria monocytogenes

Agar sangre

Listeria monocytogenes

Produce colonias negras en telurito

Listeria monocytogenes

Listeria crece a lo

largo de la puntura

Movilidad Agar blando glucosado

Listeria monocytogenes

Control negativo

Control positivo

Caldo Fraser

Listeria monocytogenes
Prueba de Camp

S: Staphyloccocus aureus

R: Rhodococcus equi

rea de hemlisis

Las lneas horizontales representan estras de inoculacin de 5 cepas a testear

L. monocytogenes y L. seeligeri son S+ / RL. ivanovii es S - / R + Con carcter excepcional se hallan cepas de L. monocytogenes S+ / R+.

Listeria monocytogenes
Prueba de Camp

Staphyloccocus aureus

Rhodococcus equi

rea de hemlisis

Las lneas horizontales representan estras de inoculacin de 3 cepas a testear

Medidas de control
Comienza en la granja y termina en el consumidor

Algunos consejos al consumidor:

Cocinar bien los alimentos Comprar alimentos que tengan en su envase fecha de elaboracin y vencimiento No ingerir lcteos no pasteurizados Las verduras crudas deben ser lavadas abundantemente antes de comerlas Evitar la contaminacin cruzada entre alimentos crudos y cocidos Mantener limpia la heladera

 Muchas

gracias.

Requisitos Microbiolgicos (Reglamento Tcnico Mercosur - Resolucin GMC N 69/93)

Microorganismos
Coliformes/g (30C)

Criterio de Aceptacin
n=5 c=2 m=1000 M=5000 n=5 c=2 m=100 M=500 n=5 c=2 m=100 M=1000 n=5 c=0 m=0

Categora ICMSF
5

Mtodo de Ensayo
FIL 73A: 1985

Coliformes/g (45C)

ALPHA 1992, c.24 (1)

Estafilococos coag. pos. /g Salmonella spp/25g Listeria monocytogenes/25g

FIL 145: 1990

10

FIL 93A: 1985

n=5 c=0 m=0

10

FIL 143: 1990

Referencias: ICMSF (Comisin Internacional de Especificaciones Microbiolgicas de los Alimentos) n: nmero de unidades de muestra analizada. c: nmero mximo de unidades de muestra cuyos resultados pueden estar comprendidos entre m (calidad aceptable) y M (calidad aceptable provisionalmente). m: nivel mximo del microorganismo en el alimento, para una calidad aceptable. M: nivel mximo del microorganismo en el alimento, para una calidad aceptable provisionalmente. (1) Compendium of methods for the microbiological examinations of foods. 3ra. Edicin. Editado por Carl Vanderzant y Don F. Splittstoesser. Mtodo de toma de muestra: FIL 50 C: 1999

Erysipelothrix

INTRODUCCIN se encuentra distribuido ampliamente en la naturaleza: suelo, agua, diferentes especies animales, etc. y tiene una distribucin mundial.
Especies E. rhusiopathiae y E. tonsillarum y dos especies an sin denominacin que antiguamente eran los serotipos 13 y 18.

E. rhusiopathiae causa la erisipela porcinos, pavos, patos y cabras

Tambin ha sido aislado del tegumento externo de peces y mariscos.

En el hombre: ERISIPELOIDE E. tonsillarum ha sido aislado de agua, de diferentes especies animales y de tonsilas de porcinos sanos. Desde el punto de vista econmico las explotaciones porcinas son las ms afectadas, en menor medida las de pavos y ovinos.

gnero Erysipelothrix *bacilos gram positivos *sin esporos *Inmviles *Acapsulados *anaerobios facultativos.

EPIDEMIOLOGA aislado por primera vez por Koch de un ratn de laboratorio. Pasteur lo aisl de cerdos y estableci que esta bacteria era la causal de erisipela porcina. En Argentina, Erysipelothrix rhusiopathiae fue aislado por primera vez en el ao 1946, a partir de lesiones cutneas humanas. nativo de la microbiota intestinal en porcinos y otras especies animales, es eliminado por las heces al medio ambiente

CLASIFICACIN cambios en la taxonoma de esta bacteria, basndose en tcnicas de hibridizacin DNA-DNA, se determin que el gnero Erysipelothrix comprende como mnimo dos especies: rhusiopathiae y tonsillarum, esta ltima se diferencia por la no fermentacin de la sacarosa y la ausencia de patogenicidad para el cerdo; E. tonsillarum serotipos: 3, 7, 10, 14, 20, 22 y 23. E. rhusiopathiae serotipos: 1a, 1b, 2, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 15, 16, 17, 19, 21 y N. serotipos 13 y 18 se clasificaran como dos nuevas y separadas especies.

MORFOLOGA Y CARACTERSTICAS GENERALES *Gram positiva *Se decolora rpida y fcilmente, por lo cual en muchas ocasiones se la observa de color rosado como si fuera Gram negativa.
*bacilo, delgado, recto. *0,2 a 0,4 mm de ancho y 0,8 a 2,5 mm de largo, *extremos redondeados *Se observan filamentos de hasta 60 mm o ms de longitud cuando se encuentra en forma rugosa.

Inmvil Acapsulado carece de esporo.

Anaerobio facultativo, microaerfilo.

colonias S y R de 0,1 a 1,5 mm superficie brillante, convexas y bordes netos, colonias R: ms grandes, opacas, de bordes irregulares que presentan formas filamentosas largas, provenientes de infecciones crnicas. Incubacin 48 horas, a 37 C, rango 5 a 42C. pH de 6,8-8,2, ptimo de 7,2 a 7,6. crecimiento mejora con glucosa y suero equino

catalasa y oxidasa negativo Produce cido sulfhdrico. en una forma caracterstica de cepillo limpiatubo incubado a 22 C. Produce hialuronidasa y neuraminidasa, dos enzimas involucradas en la virulencia de las cepas. Desarrolla en presencia de fenol, telurito de potasio, azida de sodio y cristal violeta: usadas para darle selectividad a los medios

Estructura Antignica Distintos componentes

dos tienen un papel preponderante en la antigenicidad. Uno produce inmunidad: glicolipopptido, termolbil y es utilizado en la elaboracin de vacunas. Otro es un hapteno termoestable que consiste en fragmentos de peptidoglicanos de la pared celular, es el empleado para clasificar la especie en serotipos.

E. rhusiopathiae tiene 29 serotipos y subtipos.

Serotipos designados con nmeros arbigos y los subtipos con letras, son los siguientes: 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 ..hasta.. 26 y N. La identificacin de las cepas en serotipos se realiza por reacciones de precipitacin en sistemas de doble difusin en gel. La mayora de los serotipos se han encontrado primariamente en cerdos y peces.
En cerdos con erisipela los serotipos 1 y 2 son los ms prevalentes.

Enzimas no se conoce la produccin de toxinas, pero la mayora de las cepas produce hialuronidasa y neuraminidasa.

PATOGNESIS El curso de la enfermedad depende de la virulencia de la cepa y de la susceptibilidad del hospedador, dada por grados variables de inmunidad.

Enfermedad aguda del cerdo Enfermedad crnica del cerdo Enfermedad en aves Erisipeloide en humanos

DIAGNSTICO DE LABORATORIO E. Rhusiopathiae en caldo o agar triptosa carne con un 10% de suero. muestras contaminadas medios selectivos

inoculacin de ratones por escarificacin de la oreja, los animales mueren generalmente a los 5-6 das postinoculacin y se puede recuperar el microorganismo en forma pura de bazo, hgado y sangre del corazn. Identificacin caractersticas tintoriales, de cultivo y pruebas bioqumicas.
PCR (Reaccin en Cadena de la Polimerasa).

Los mtodos de diagnstico serolgico no son muy efectivos para poder detectar animales infectados.

TRATAMIENTO Las drogas de eleccin son la penicilina, ampicilina y cefalotina. Luego le siguen la tetraciclina, tiamulina, clindamicina y eritromicina que tienen buenos resultados. No son recomendables el cloramfenicol, gentamicina, estreptomicina y la vancomicina.

PROFILAXIS La vacunacin contra erisipela se realiza en cerdos y aves para prevenir brotes de la enfermedad. vacunas vivas avirulentas o por vacunas muertas (bacterina) adsorbidas en gel de aluminio. Vacunas vivas serotipos 1 y 2; bacterinas utilizan cepas del serotipo 2. La vacunacin en el cerdo provoca una inmunidad de 3 a 5 meses y protege solamente contra la forma aguda de la enfermedad.

Erysipelothrix rhusiopathiae

Coloracin de Gram

Erysipelothrix rhusiopathiae

Agar Columbia

Erysipelothrix rhusiopathiae

Crecimiento en agar sangre