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    PCR

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    Yuriko Espino Mora
    El documento describe la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y su uso para detectar la presencia de esporas bacterianas en muestras de miel. Explica los requerimientos y fases de la PCR, y cómo se puede utilizar esta técnica como un método de diagnóstico rápido y confiable para identificar patógenos sin necesidad de cultivo bacteriano.

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    El documento describe la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y su uso para detectar la presencia de esporas bacterianas en muestras de miel. Explica los requerimientos y fases de la PCR, y cómo se puede utilizar esta técnica como un método de diagnóstico rápido y confiable para identificar patógenos sin necesidad de cultivo bacteriano.

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    PCR punto final

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    El documento describe la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y su uso para detectar la presencia de esporas bacterianas en muestras de miel. Explica los requerimientos y fases de la PCR, y cómo se puede utilizar esta técnica como un método de diagnóstico rápido y confiable para identificar patógenos sin necesidad de cultivo bacteriano.

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    Instituto Politécnico Nacional

    Escuela Nacional de ciencias Biológicas

    UDA: Métodos moleculares

    Polymerase Chain Reaction (PCR)

    Amarantha Serrato

    01 de Marzo de 2019, CMDX


    ¿Qué es la PCR?
    • La reacción en cadena de la
    polimerasa (PCR) es una técnica de
    laboratorio común utilizada para
    hacer muchas copias (¡millones o
    miles de millones!) de una región
    particular de ADN.

    Fig. Kary Mullis, inventor de la


    PCR
    Requerimientos Deben tener 15-10
    nt de longitud con
    55% de G-C
    Reactivos Concentración final
    0.1 mg/ml (máximo
    500 ng; de bacteria
    DNA templado de 1 a 10 ng y si es
    plásmido de 0.1 a 1
    ng)
    dNTP´s 0.2-1.0 mM
    DNA polimerasa 0.5-2.5 mM
    Mg ++ 1.5 mM Taq polimersa o Vent,
    ambas obtenidas de
    Buffer 1X bacterias termófilas
    Oligo forward 0.01 mM
    Oligo reward 0.01 mM
    Fases de la PCR
    Desnaturalización (96°C): Aumenta la
    temperatura para desnaturalizar cadenas de DNA.
    Lo que genera las cadenas molde de cadena sencilla
    para el siguiente paso.

    Templado (55 - 65°C): la reacción se enfría


    para que los primer puedan unirse a sus
    secuencias complementarias.

    Extensión (72°C): la temperatura de la


    reacción se eleva para que la Taqpolimerasa
    extienda los cebadores y sintetice así nuevas
    cadenas de ADN.
    Análisis del resultado
    Gel del agarosa al 1.2-2.0 %

    Azul Bromofenol

    Bomuro de Etidio

    UV
    Aplicaciones
    Identificación de
    drogas o fármacos

    Mutaciones
    dirigidas

    Identificación
    de especies
    Identificación de
    patógenos
    Introducción
    Las esporas de las
    bacterias pueden
    encontrarse ranto en la
    colmena como en la miel.
    Se analiza la técnica de
    PCR como un posible
    diágnostico de la
    presencia de la espora
    bacteriana en la miel

    Figura. Colmena infectada con Paenibacillus larvae


    Material y métodos

    Cultivo bacteriano
    Presencia de PCR -
    Restos lasvarios-1ml de agua esporas Secuenciación
    destilada-80°C/15 min
    Resultados
    Discusión
    Las esporas fueron detectadas
    por medio de PCR, pero
    únicamente reduciendo el Se evita la inhibición de la
    número de ciclos al fue sometida reacción cuando los
    la secuenciacón extractos de ADN de esos
    materiales se diluyeron
    Para mejor eficiencia en la antes de la PCR.
    detección de las especies
    implicada se plantea desarrollar
    un mejor diseño de los
    cebradores
    Conclusión

    Se concluye que las esporas de larvas son una técnica alternativa para
    un diagnóstico rápido y confiable de AFB en muestras de miel y larvas,
    sin necesidad de cultivo bacteriano en un medio de crecimiento.
    Referencias
    • Anderson, M. (1990) Perfecting the polymerase chain reaction. Laboratory
    Equipment Digets. 1:30-31
    • Cao, Y., Kollow K. y Liu. G.Y. (2000) In-situ inmuno-PCR to detect antigens. The
    Lancet. 356:1002-3
    • Chesters, J.K. (1996) Polymerase chain reaction. Proc Nutr Soc. 55 (1B):599-
    604. Review.
    • Piccini, C., D'alessandro, B., Antunez, K., & Zunino, P. (2002). Detection of
    Paenibacillus larvae subspecies larvae spores in naturally infected bee larvae
    and artificially contaminated honey by PCR. World Journal of Microbiology and
    Biotechnology, 18(8), 761-765.

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