Ejercicios Cinética e Inhibición Enzimática

EJERCICIOS CINÉTICA E
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
EJERCICIOS
1. La β-glucosidasa es una enzima que cataliza la reacción de hidrolisis de celobiosa a
glucosa. Con el objetivo de determinar la actividad enzimática y la velocidad inicial
de reacción, se realiza un experimento en las condiciones siguientes: 5 ml de
solución de celobiosa (100 mmol/mL) y 44 mL de solución tampón se introducen
en un reactor agitado. La reacción se inicio mediante la adición de 1 mL de
solución de una preparación enzimática de β-glucosidasa que contenía 0,1 mg de
proteína/mL. Se tomaron muestras de 0,1 mL a diferentes tiempos de reacción,
determinándose la concentración de glucosa:
Tabla 1: Variación de la concentración de glucosa respecto al tiempo.

Determinar la actividad de β-glucosidasa en unidades de actividad/mL de solución
enzimática y en unidades/mg de proteína. (Una unidad de actividad se define como la
actividad que produce 1 mmol de glucosa/min).

2. Un extracto enzimático crudo contiene 20 mg de proteína/ml. Un volumen 10 µl
de ese extracto en un volumen de reacción de 0,5 ml catalizaron la producción de
3 µmoles de producto en un minuto en condiciones óptimas de trabajo. Calcular:
a) La velocidad de reacción en µmoles/min/ml.
b) La concentración del enzima en U/ml de extracto.
c) La actividad específica del extracto.
d) La actividad total del extracto si tenemos 100 ml del mismo.
3. El lino es una fibra que contiene 95% de celulosa de alto peso molecular con un
grado de polimerización de 3500. Cual sería la carga enzimática que se debe
adicionar para hidrolizar completamente 5000 kg de lino en tres horas, como
máximo, con una enzima celulolítica que tiene una actividad de 200 U/mL (U esta
definido como µmol de glucosa liberada/min). Peso molecular glucosa: 180 g/mol;
Peso molecular celulosa: n*PM glucosa – (n-1)*PM agua, donde n es el grado de
polimerización.
4. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reacción de una enzima E fue de 20

µg/min para una concentración de sustrato de 3 mM. Si la concentración de
sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los 40 µg/min. Al
añadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reacción fue de 20 µg/min para
una concentración de sustrato de 8 mM. Calcules KM, Vmáx y KI para esta enzima,
sabiendo que la concentración de inhibidor añadido es de 6 mM.
5. Se han obtenido los siguientes datos experimentales durante el estudio de la
actividad catalítica de una peptidasa intestinal capaz de hidrolizar el dipéptido
glicilglicina para producir dos moles de glicina por mol de dipéptido.
So (mM) 1,5 2,0 3,0 4,0 8,0 16
Vo (mM/min) 0,21 0,24 0,28 0,33 0,40 0,45
Determinar los valores de KM y VMax para esta reacción enzimática.
6. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de qué

manera está actuando el inhibidor. Determinar la Km para la enzima y la Ki
para el complejo enzima-inhibidor ¿Cuál es la velocidad máxima?
[S] mM μg producto/h (sin μg producto/h (6 mM

inhibidor) inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313
7. Los siguientes datos se obtuvieron del análisis cinético de una enzima aislada de
las hojas de la planta de mora azul. La enzima cataliza la hidrolisis de esteres como
el benzoato de metilo. Se probó la acetofenona como inhibidor de la estearasa ¿Es
ésta un inhibidor competitivo, no competitivo o incompetitivo? Determinar los
parámetros cinéticos para la reacción inhibida y sin inhibición. Los datos se
obtuvieron midiendo la desaparición de sustrato.
V0 (nmol/min) V0 (nmol/min)
Benzoato de metilo
V0 (nmol/min) [Acetofenona]= [Acetofenona]=
(µmol/L)
0.00037 M 0.00158 M
3,7 10 5 -
13 30 20 -
39 63 45 20
79 87 70 40
230 116 102 80
400 122 122 110
8. Se realizaron estudios de inhibición para dos enzimas diferentes presentes en el
suero bovino. Se varió la concentración de sustrato a en ausencia y en presencia
de tres concentraciones diferentes de inhibidores de cada enzima. En cada caso
encontrar:

a) El tipo de inhibición.
b) El valor de Km y Vmax.
c) El valor de Ki para el inhibidor.
[Bromolevamisol] 0 8 16 40
(mM)
[Sustrato] ¯[FP] Velocidades iniciales (mmol min-1 mgProt.-1)
(mM)
0.1 0.231 0.210 0.191 0.158
0.3 0.431 0.369 0.309 0.239
0.7 0.607 0.488 0.425 0.277
1.3 0.751 0.599 0.467 0.304
1.8 0.811 0.657 0.530 0.319
2.6 0.912 0.657 0.546 0.328
4.1 0.957 0.688 0.561 0.351
5.8 0.981 0.741 0.558 0.344

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EJERCICIOS CINÉTICA E

Tabla 1: Variación de la concentración de glucosa respecto al tiempo.

4. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reacción de una enzima E fue de 20

Determinar los valores de KM y VMax para esta reacción enzimática.

6. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de qué

[S] mM μg producto/h (sin μg producto/h (6 mM

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