Diferencia de Gram + y Gram

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO
FACULTAD DE ENFERMERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGIA
DIFERENCIAS ENTRE GRAM+ Y GRAM-

Referido a la pared celular
INTEGRANTES:
MAMANI MAQUERA RUBY LISBETH
PINEDA CAYO DENNYS
QUISPE CALDERON PILAR NOEMI
DOCENTE:
VALDEZ FRANCISCA BILMA
CICLO: I-A
2018-II
Generalidades de Bacterias
 Las bacterias o procariotas, son microorganismos unicelulares que se

reproducen por fisión binaria (división simple). Muchos tienen vida libre.
Contienen información genética, sistemas de producción de energía y
sistemas biosintéticos necesarios para el crecimiento y reproducción.
 Las bacterias pertenecen al filum de las Shizomycophyta, se les llama
también microbios o gérmenes. Son de pequeño tamaño. Casi siempre son
unicelulares.
Tipificación bacteriana
 La tipificación de las bacterias se basa en el estudio de sus características mediante técnicas que oscilan
entre las más sencillas tinciones y los más complejos estudios moleculares.
 Algunas propiedades genéticas y fisiológicas constituyen herramientas utilizadas para definir algunas
características de las cepas, como los serotipos y biotipos, determinación de especies en algunos grupos
de bacterias, producción de toxinas.
Estructura bacteriana
1.Pared celular
 Estructura rígida presente como ya se dijo en la mayoría de las bacterias, se sitúan por
fuera de la membrana citoplasmática.
 Si ésta se destruye o se impide su formación, la célula pierde su viabilidad.
El peptidoglicano, principal constituyente de la pared, es un polímero constituido

por unidades repetidas del monómero formado por: dos derivados de
carbohidratos, N-acetil Glucosamina y N-acetil Murámico (N-Ac.G, NAc.M),
unidas por enlaces beta 1-4 y asociados a cortas cadenas peptídicas a través del N-
acetil Murámico.
 El espesor de la pared, oscila entre 0,150 μm y 0,500 μm ; constituida por peptidoglicano,
que en forma de bolsa rodea toda la célula, representando del 10 al 40 % del peso de la
bacteria.
Síntesis del péptidoglicano: En el momento de la división celular se debe formar la

nueva pared celular.
Las autolisinas, enzimas producidas por la propia bacteria, forman brechas en la "vieja
pared" de la célula en división. A nivel de esas brechas o aberturas es donde se agrega
el peptidoglicano de la nueva pared en formación.
 Esta unión la realizan enzimas denominadas transpeptidasas. A este paso se lo conoce

como transpeptidación.
 La Penicilina y sus derivados, los antibióticos más usados en Medicina, actúan
precisamente inhibiendo la síntesis de la pared celular, llevando a la lisis de la
bacteria.
 Existen diferencias en el espesor de esta estructura básica, el peptidoglicano de las
bacterias Gram positivas tienen una capa gruesa de 0,02 a 0,06 μm en forma de
multicapas, mientras que las bacterias Gram negativas y las bacterias ácido alcohol
resistentes la tienen más fina, de 0,01 μm.
Pared de bacterias Gram negativas:
 Si observamos la pared al microscopio electrónico podemos observar 3 zonas:
1. La membrana citoplasmática.
2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el
peptidoglicano.
3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el
lipopolisacárido (LPS) característico de estas bacterias y proteínas (proteínas de membrana
6 externa).
Pared de las bacterias Gram positivas:
 Lo primero a señalar es la gruesa capa de peptidoglicano en forma de múltiples capas. Unidos a él
se encuentran los ácidos teicoicos (del griego techos, pared). Son polisacáridos que se unen al
ácido N-acetil murámico.
 Los ácidos teicoicos tienen por función estabilizar la pared.
 La superficie externa del peptidoglicano de las bacterias Gram positivas está usualmente cubierta
de proteínas.
 Los diferentes grupos de bacterias Gram positivas y las diferentes especies, difieren en la
composición de sus proteínas y ácidos teicoicos, siendo esto útil para la clasificación serológica y
la identificación.
 Además del peptidoglicano, la pared celular de las micobacterias contiene
una gran cantidad de glicolípido.
 Esta gran cantidad de lípidos hace que las bacterias AAR no se coloreen o
se coloreen mal con la coloración de Gram.
 Para colorearlas, se somete a las bacterias a una coloración con
Fucsina (colorante rojo) con ayuda de calentamiento y luego que son
teñidas así, resisten la decoloración con una mezcla de alcohol ácido.
 Esta gran cantidad de lípidos de la pared, 10% del total del peso de la célula
de micobacterias, protege a la bacteria de la acción deletérea de los
componentes del fagolisosoma y, probablemente, sea esta la razón por la que
las micobacterias pueden sobrevivir dentro de los macrófagos.
Pared celular bacteria grampositiva. Pared celular bacteria gram negativa.

2.Citoplasma
Se encuentran todas las enzimas necesarias para división y metabolismo bacterianos,
asimismo, cuenta con ribosomas de menor tamaño en relación a células eucariotas, pero no
presenta mitocondrias, retículo endoplásmico ni cuerpo de Golgi.
3.La membrana citoplásmica

Debajo de la pared celular se encuentra la membrana citoplasmática, la capa más interna,
compuesta por proteínas y fosfolípidos (bicapa lipídica).
4.Lipopolisacárido (LPS)
Formado por fosfolípidos y proteínas de membrana externa, se utiliza para tipificar cepas
bacterianas, una porción lipídica, el lípido A, que está anclado a los lípidos de la membrana) y
es tóxica para el humano y animales.
Características:
-Las bacterias son de vidas libres, cosmopolitas y patógenas para el hombre y animales.
-Miden entre 1 y 10 um.
-Estos causan enfermedades infecciosas en los seres vivos.
- Son beneficiosos como los que reciclan el carbono, azufre, nitrógeno y fósforo; algunos viven el
intestino del hombre (ejemplo: Escherichia coli), los cuales sintetizan vitaminas como BIOTINA; en
rumiantes elaboran celulosa, una enzima que digiere la celulosa.
Funciones:
-Nutrición: autótrofa: por fotosíntesis y quimiosíntesis y heterótrofa (bacterias).
-Reproducción: asexual y sexual, la reproduccion de las bacterias se realiza a gran velocidad;
algunas se dividen un vez cada 20 minutos.
DIFERENCIAS MOLECULARES ENTRE UNA BACTERIA GRAM POSITIVA Y OTRA GRAM NEGATIVA.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano. Poseen una pared celular más compleja:
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para -pared celular interna
replicación y supervivencia de la bacteria. -pared de peptidoglucano
- bicapa lipídica externa
No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en
condiciones adversas
Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana

No tiene espacio periplasmático citoplasmática y la interna de la membrana externa.
La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas La red de mureína presenta una sola capa
La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de
peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.
Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B,

No contiene LPS liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.
En la tinción de Gram, retienen la tinción azul Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante
Pueden ser anaerobios o aerobios
Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos Poseen proteínas con concentraciones elevadas.
complejos.
TINCION GRAM
 La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar dos clases de
bacterias estas son: bacterias Gram positivas y gramnegativos.
- Las grampositivas se tiñen de morado

- Las gramnegativos se tiñen de rojo

Alcohol acetona 7:3 (2x250 mL)
Líquido de Lugol (1x250 mL)
Safranina O solución según Gram-Hucker (1x250 mL)
Violeta Cristal Oxalato solución según Gram-Hucker (1x250 mL)
Gram Positivo: Staphyloccocus aureus Gram Negativo: Escherichia coli
FUNDAMENTO Y OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
 Es una tinción diferencial que basa su distinción en la estructura diferente de la pared

bacteriana de las bacteria Gram + (pared más gruesa, y una sola capa de peptidoglucano ) y
de las Gram- ( pared más delgada y dividida en dos partes). El procedimiento y sustancias
usadas son:
MATERIALES
· Colorante básico Cristal Violeta. Es el primer colorante que se echa sobre el

frotis previamente preparado. Es un colorante selectivo que tiñe a todos los
microorganismos. Se deja actuar durante un minuto y se lava con agua a
continuación.
· Lugol. Producto compuesto de yodo y yoduro potásico. Es un mordiente, que
intensifica al Cristal Violeta haciendo que precipite. Se deja actuar un minuto y se
lava con alcohol, el tiempo justo para que no se arrastre el colorante del todo.
· Alcohol - Acetona. El alcohol retira el colorante de las gram- debido a su diferente
estructura de la pared celular (tamaño de los poros).
· Safranina. Colorante básico diferenciador. Tiñe a las bacterias gram-. Se deja
actuar treinta segundos y se lava con agua.
TECNICAS DE TINCION
 El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan

difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la
falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más
simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos
pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células.
MUESTRA DEL MICROSCOPIO
DESCRIPCION
 Descripta en forma breve, la secuencia
de la tinción es la siguiente: el Frotis
fijado con calor se tiñe 1 min con Violeta
Cristal, se lava con agua, se cubre con
solución Yodada durante 1 min y se lava
de nuevo con agua, decolorar con mezcla
alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir
con Safranina (color de contraste) . observamos bastantes
durante 20 seg. Lavar y secar. Y el Estreptobacilos Gram +
resultado fue
EJEMPLO:
GRAMPOSITIVOS GRAMNEGATIVOS
Staphylococus aureus,
Neisseria meningitidis,
Streptococcus pyrogenes,
Neisseria gonorrhoeae,
Streptococcus aglactiae,
Escherichia coli,
Streptococcus fecalalis,
Salmonella typhi, etc
Streptococcus neumonae,
Streptococcus sanguis, etc
CONCLUSIONES
 Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades,

 Algunas son beneficiosas para la agricultura, industria, salud y la investigación
 Para observar y distinguir este tipo de células se utiliza al tinción Gram

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DIFERENCIAS ENTRE GRAM+ Y GRAM-

 Las bacterias o procariotas, son microorganismos unicelulares que se

El peptidoglicano, principal constituyente de la pared, es un polímero constituido

Síntesis del péptidoglicano: En el momento de la división celular se debe formar la

 Esta unión la realizan enzimas denominadas transpeptidasas. A este paso se lo conoce

Pared celular bacteria grampositiva. Pared celular bacteria gram negativa.

3.La membrana citoplásmica

Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana

Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B,

En la tinción de Gram, retienen la tinción azul Quedan decoloradas.

- Las grampositivas se tiñen de morado

 Es una tinción diferencial que basa su distinción en la estructura diferente de la pared

· Colorante básico Cristal Violeta. Es el primer colorante que se echa sobre el

 El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan

 Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades,

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