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    Bilirubine Totale Et Directe

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    Ce document décrit une méthode pour déterminer la bilirubine totale et directe dans des échantillons de sérum ou de plasma. La bilirubine est transformée en azobilirubine par réaction avec des réactifs, et la concentration est mesurée par photométrie. Le document fournit des détails sur les principes, procédures, interprétation et contrôle qualité de la méthode.

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    bilirubine totale et directe

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    bilirubine totale et directe

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    BILIRUBIN T&D

    Bilirubine T & D
    DMSO. Colorimtrique
    CALCULS

    Dtermination quantitative de bilirubine


    IVD

    Avec calibreur:

    (A) Echantillon - (A)Blanc Echantillon

    Conserver 2-8C

    PRINCIPE DE LA METHODE
    La bilirubine est transforme en azobilirubine au moyen de lacide sulfanilique
    diazote, et se mesure par photomtrie. Des deux fractions prsentes dans le
    srum, la bilirubine-glucuronide et la bilirubine libre associe lalbumine, seule
    la premire ragit en milieu aqueux (bilirubine directe). La deuxime ne ragit
    que par solubilisation avec du dimthylsulfoxyde (DMSO)- (bilirubine indirecte).
    Dans la dtermination de la bilirubine indirecte, on dtermine galement la
    directe, le rsultat correspondant la bilirubine totale. Lintensit de la couleur
    forme est proportionnelle la concentration de bilirubine prsente dans
    1,2
    lchantillon test .

    x Calibreur Conc. = mg/dL de bilirubine


    (A) Calibreur - (A)BlancCalibreur
    Avec facteur:
    ((A) Echantillon (A) Blanc dchantillon) x Facteur* = mg/dL bilirubine dans
    lchantillon

    ConcentrationduCalibreur
    *Facteur:

    (A) Calibreur - (A) Blanc Calibreur


    Facteur thorique: Bilirubine (T) = 19,1 ; Bilirubine (D) = 14
    Facteur de conversion: mg/dL x 17,1 = mol/L.

    SIGNIFICATION CLINIQUE

    CONTROLE DE QUALITE

    La bilirubine provient de la dgradation de lhmoglobine.


    Elle est transport depuis la rate vers le foie et est excrte dans la bile.
    Lhyper bilirubinmie est le rsultat dune augmentation de la bilirubine dans le
    plasma. Les causes les plus probables de la hyper bilirubinmie sont:
    La bilirubine totale (T): Augmentation de lhmolyse, altrations gntiques,
    anmi nonatale, altrations deritropoytines, prsence de drogues.
    Bilirubine directe (D): Cholstase hpatique, altrations gntiques et
    hathiques1,5,6.
    La diagnostique clinique doit tenir compte des donnes cliniques et de
    laboratoire.

    VALEURS DE REFERENCE1

    REACTIFS
    R 1 (D)
    R 2 (T)
    R3

    Acide sulfanilique
    Acide chlorhydrique (ClH)
    Acide sulfanilique
    Acide chlorhydrique (ClH)
    Dimthysufoxide (DMSO)

    30 mmol/L
    150 mmol/L
    30 mmol/L
    50 mmol/L
    7 mol/L

    Nitrite de sodium

    Optionnel

    29 mmol/L

    BILIRRUBIN CAL

    Rf: 1002250

    PRECAUTIONS
    R1/R2/RT :Corrosif (C): R35: provoque des brlures graves.
    S26: En cas de contact avec les yeux, rincer grande eau immdiatement, et
    rendez-vous chez un mdecin

    PREPARATION
    Tous les ractifs sont prts lemploi.

    CONSERVATION ET STABILITE
    Tous les composants du kit sont stables jusqu la date de premption indique
    sur ltiquette de la capsule, et si les capsules sont maintenus hermtiquement
    ferms 2-8C, labri de la lumire et des sources de contamination. Ne pas
    utiliser les ractifs en dehors de la date indique.
    Indices de dtrioration des ractifs:
    - Prsence de particules et turbidit.
    - Dveloppement de couleurs en R 2.

    MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
    -

    Spectrophotomtre ou analyseur pour les lectures 555 nm.


    Cuvettes de 1,0 cm dclairage.
    Equipement classique de laboratoire.

    Srum ou plasma sans hmolyse (spar ds que possible des hmaties). A


    labri de la lumire.
    Stabilit de lchantillon de par la prsence dhmaties: 4 jours 2-8C ou 2
    mois 20C.

    1.

    Conditions de test:

    2.

    Longueur dondes: . . . . . . . . . . .. . . 555 nm (530-580)


    Cuvette:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm dclairage
    Temprature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25C
    Rgler le spectrophotomtre sur zro en fonction de leau distille

    3.

    Pipetter dans une cuvette:


    Blanc
    -1,5
    -100

    B. Totale
    -1,5
    50
    100

    Blanc
    1,5
    --100

    Mlanger et incuber pendant exactement 5 minutes 15-25C.


    Lire labsorption (A).

    BSIS36-F

    13/09/13

    CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
    Gamme de mesures: Depuis la limite de dtection de (T) 0,099 mg/dL (D) 0,04 mg/dL
    jusqu la limite de linarit 18 mg/dL.
    Si la concentration de lchantillon est suprieure la limite de linarit, diluer 1/2
    avec du ClNa 9 g/L et multiplier le rsultat final par 2.
    Prcision:
    Bilirubine T
    Intra-srie (n= 20)
    Inter-srie (n= 20)
    Moyenne (mg/dL)
    1,12
    5,36
    1,01
    5,28
    SD
    0,02
    0,12
    0,03
    0,12
    CV (%)
    2,33
    2,27
    2,70
    2,32
    Bilirubine D
    Intra-srie (n= 20)
    Inter-srie (n= 20)
    Moyenne (mg/dL)
    0,64
    2,28
    0,68
    2,53
    SD
    0,01
    0,02
    0,02
    0,05
    CV (%)
    1,91
    1,10
    2,51
    1,95
    Sensibilit analytique:1 mg/dL = 0,015 A (T).
    1 mg/dL = 0,073 A (D).
    Exactitude: Les ractifs SPINREACT ne montrent pas de diffrences systmatiques
    significatives lorsquon les compare dautres ractifs commerciaux.
    Les rsultats obtenus avec 50 chantillons pour la bilirubine D ont t les suivants:
    Coefficient de corrlation (r): 0.99
    Equation de la courbe de rgression: y=0.9933x + 0.0039
    Les rsultats obtenus avec 50 chantillons pour la bilirubine T ont t les suivants:
    Coefficient de corrlation (r): 0,996.
    Equation de la Coubre de rgression: y=0,0884x +0,0208
    Les caractristiques de la mthode peuvent varier suivant lanalyseur employ.

    La prsence dhmolyse fait rduire la valeur en bilirubine 1,2.


    Diffrentes drogues ont t dcrites ainsi que dautres substances pouvant interfrer
    dans la dtermination de la bilirrubine3,4.

    REMARQUES
    1.
    2.

    PROCEDURE

    4.
    5.

    Bilirubine totale
    Jusqu1,10 mg/dL
    18,81 mol/L
    Bilirubine directe
    Jusqu 0,25 mg/dL
    4,27 mol/L
    Ces valeurs sont donnes titre indicatif. Il est conseill chaque laboratoire de
    dfinir ses propres valeurs de rfrence.

    INTERFERENCES

    ECHANTILLONS

    R 1 (D) (mL)
    R 2 (T) (mL)
    R3
    ( L)
    (remarque 1)
    Echantillon
    /Calibreur
    ( L)

    Il est conseill danalyser conjointement les chantillons de srum dont les valeurs ont
    t contrles:
    SPINTROL H Normal et pathologique (Rf. 1002120 et 1002210).
    Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolres, analyser linstrument, les
    ractifs et le calibreur.
    Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrle de qualit et dterminer les
    mesures correctives mettre en place dans le cas o les vrifications ne
    correspondraient pas aux attentes.

    B. Directe
    1,5
    -50
    100

    Pour dterminer la bilirubine dans les nonatals, relever la pipette 50 L de


    lchantillon. Multiplier le rsultat obtenu par 2.
    SPINREACT dispose de consignes dtailles pour lapplication de ce
    ractif dans diffrents analyseurs.

    BIBLIOGRAPHIE
    1.
    2.
    3.
    4.
    5.
    6.

    Kaplan A et al. Bilirubine. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
    Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
    Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
    J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
    Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
    Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
    Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
    Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

    PRESENTATION
    Ref: 1001044
    Cont.

    R 1 (D):
    R 2 (T):
    R 3:

    1 x 150 mL
    1 x 150 mL
    1 x 10 mL

    SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE


    Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

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