Université Batna-1 Hadj Lakhdar

Faculté des Sciences de la Matière

Département de Chimie

3ème année Licence Chimie Organique

Cours de spectroscopie
Spectrométrie de masse (SM)

Présenté par : Pr. Haba Hamada

2019/2020 1
 Spectroscopie de masse
Sommaire 6.
5.
4. Différents
Allure de types de pics
3.
Spectres de
Appareillage masse
2.
Spectrométrie
1. de masse par
Différentes impact
méthodes de la électronique
EI-MS
Introduction spectroscopie
de masse

2
Spectroscopie de masse
Sommaire 7.4.

7.3.
Amines
7.2.
Composés
7.1. hydroxylés
Composés 7.5.
7. carbonylés
Hydrocarbures

Composés
Fragmentation
des molécules
halogénés
organiques

3
 1
Introduction
La spectrométrie de masse est une méthode analytique très
puissante permettant de déterminer la masse molaire, la structure
d'un composé ou d'expliquer des mécanismes de ruptures de
liaisons chimiques (fragmentations ou clivages). C’est une
technique très sensible car les limites de détection inférieures au
nanogramme et même au picogramme sont souvent atteintes.
La spectrométrie de masse est appliquée dans divers domaines
tels que la chimie organique, la biochimie, la médecine, la
pharmacie, la chimie de l'environnement, l'industrie alimentaire,
la géochimie, ainsi que dans l’industrie chimique et agro-
alimentaire.
La spectrométrie de masse, classiquement limitée à l'étude des
molécules organiques de masse molaire < 2000 Da, est étendue
actuellement pour analyser les macromolécules (masse molaire
>100000 Da) dont il est possible de déterminer la masse molaire à
une unité près. 4
 2 Différentes méthodes de la spectrométrie
de masse (techniques d’ionisation)
Il existe plusieurs techniques d’ionisation pour l’enregistrement des
spectres de masse:
L'impact électronique (EI-MS)
L'ionisation par impact électronique est le mode d'ionisation le plus
usuel et le plus utile pour l'étude structurale de composés organiques.
Il fera l'objet d'une description détaillée, car c'est la seule technique
qui permet une étude systématique de la structure des ions
moléculaires et des fragments ioniques formés. Dans la spectrométrie
de masse par impact électronique (EI-MS), la molécule est
bombardée par des électrons de haute énergie (70 eV) qui éjectent de
la molécule un électron faiblement lié à partir de la couche externe.
La perte de cet électron conduit à un radical-cation (c'est-à-dire un
ion possédant un électron célibataire et une charge positive), appelé
ion moléculaire et qui a la même masse que la molécule mère.
5
 Différentes méthodes de la spectrométrie
2
de masse (techniques d’ionisation)

Ionisation par impact électronique (IE) 6

 2 Différentes méthodes de la spectrométrie
de masse (techniques d’ionisation)
Ionisation douce (électronébulisation ou électrospray) (ESI) :
Dans cette technique d'ionisation, une solution de substance à
analyser est pulvérisée à travers un capillaire en acier inoxydable
dans une chambre. Un flux de gaz sec est dirigé en sens inverse
de cette pulvérisation, puis un potentiel de quelques kV est
appliqué entre le capillaire et la paroi de la chambre. Ce potentiel
a pour objectif de créer un fort champ électrique qui induit
l’apparition de charges à la surface des gouttelettes formées
sortant du capillaire en jet très fin. Ces gouttelettes, se déplacent
à travers un capillaire en verre dans la zone qui précède
l’analyseur. Elles sont orientées et focalisées par un système de
lentilles électrostatiques et dirigées dans l’analyseur du
spectromètre de masse.
7
 2 Différentes méthodes de la spectrométrie
de masse (techniques d’ionisation)

Ce procédé doux conduit le plus souvent à la formation d’ions

pseudomoléculaires ou quasimoléculaires portant une charge
positive [M+H]+, [M+Na]+, [M+K]+, [2M+H]+, [2M+Na]+,
[3M+Na]+ en mode positif…ou négative [M-H]-, [M+Cl]-,
[2M-H]- en mode négatif.

De plus, les entités ioniques produites par ce type d’ionisation

douce possèdent un rapport m/z (masse sur charge) élevé. Ceci
permet de faire l’analyse de molécules de haut poids
moléculaire comme les saponines, les polysaccharides et les
protéines.

8
2 Différentes méthodes de la spectrométrie
de masse (techniques d’ionisation)

Ionisation douce (electrospry) (ESI)

9
 2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Ionisation par bombardement d’atomes rapides (FAB) : Cette
méthode d'ionisation est utilisée pour les molécules organiques
difficiles à vaporiser. En fait, un ensemble d'atomes neutres et
lourds d'argon (Ar) ou de xénon (Xe) à haute énergie cinétique sont
ionisés par impact électronique puis dirigés pour entrer en collision
avec d'autres atomes du même gaz ionique, qu’ils catapultent vers
les molécules (M) à analyser. Ces dernières passent directement
d’une phase condensée à une phase vapeur sous forme des ions
positifs [M+1]+ (protonation) ou négatifs [M‐1]‐ par
déprotonation.

10
 2
Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Dans cette technique, l'échantillon est déposé en mélange avec une
matrice liquide (le plus souvent du glycérol, mais parfois des
mélanges tels que le Magic Bullet, qui est un mélange 4/1 de 1,4-
dithio-L-threitol et de 1,4-dithioerythritol) sur le méplat métallique
d'une canne d'introduction. Des ions lourds tels que l'argon ou le
xénon sont produits par une cathode froide placée à quelques
centimètres de l'échantillon à analyser. Les ions lourds produits lors
de la décharge sont accélérés à haute énergie par un potentiel de
quelques kV maintenu entre ces deux électrodes. A la sortie très
étroite du canon, il se produit un échange de charges donnant des
atomes lourds à partir de ces ions lourds. C'est le bombardement
par ces atomes lourds, ayant une énergie cinétique de l'ordre du
keV, qui produit des ions quasi moléculaires tels que (M+H)+,
(M+Na)+, (M+K)+ en mode positif et (M-H)- en mode négatif. 11
 Différentes méthodes de la spectroscopie
2
de masse
Grâce à cette technique, on peut analyser des molécules polaires de
haut poids moléculaire (peptides, protéines, nucléosides,
polysaccharides, antibiotiques, sels d'acides minéraux) et faire des
déterminations de structure; mais malheureusement on obtient
souvent un bruit de fond important sur le spectre de masse dû à la
matrice liquide.

12
2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse

Ionisation par bombardement d’atomes rapides (FAB)

13
 2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Ionisation chimique (CI-MS): C’est une méthode d’ionisation de
spectrométrie de masse faisant intervenir des réactions ion/charge.
En effet, dans cette technique on emploie un gaz réactif ayant une
pression de 1 mm Hg, qui est ionisé par un faisceau d'électrons tout
en produisant une série d'ions. Ces derniers réagissent à leur tour
avec les molécules de la substance à analyser. On peut utiliser divers
gaz, parmi lesquels H2, H2O, NH3, des alcools, des gaz parfaits ou
des hydrocarbures.

Dans le cas où le gaz utilisé est le méthane, l’ion [CH4]+. est formé
puis réagit avec d’autres molécules de méthane, comme suit :

14
 2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Au cours de ce processus, d’autres ions sont également produits
tels que C2H5+, C3H5+ et CH3.. En même temps, la molécule à
analyser (M) présente mais à très faible concentration réagit avec
le méthane protoné par un transfert de proton dans la phase
gazeuse.

Ce mode d’ionisation implique une forte abondance de l’ion

pseudo-moléculaire [M+H]+ et une faible probabilité de
fragmentation ce qui se traduit par une absence d’information
structurale sur la molécule (M).
15
2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse

Ionisation chimique
16
 2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Désorption ionisation laser: Pour des échantillons non volatils et
thermolabiles de masses moléculaires élevées, d'autres techniques
d'ionisation qui sont des techniques de désorption-ionisation ou de
désolvatation-ionisation ont été mises au point depuis 20 ans. On
dira d'un composé solide qu'il est « désorbé » tandis qu'un composé
en solution est «désolvaté». Il s'agit de la PD-MS (désorption
plasma), du MALDI (désorption-ionisation laser assistée par
matrice.
Cette technique utilise les produits de fission de l'isotope radioactif
252 du Californium 252Cf pour bombarder une cible sur laquelle est
déposée l'échantillon à analyser. Le californium se désintègre en
émettant des ions multichargés de très grande énergie cinétique
(environ 100 MeV). Ce principe est illustré sur la figure ci-dessous :
17
 Différentes méthodes de la spectroscopie
2 de masse

Le Maldi est une méthode d'ionisation introduite en 1988 par Karas

et Hillenkamp d'une part et par Tanaka d'autre part permettant
d'analyser des molécules de masses moléculaires très élevées,
supérieures à 300.000 Da. Elle est préconisée pour analyser les
peptides et les protéines. Actuellement, le mécanisme exact du
Maldi n'est pas encore décrit avec précision.
18
 2
Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
Un échantillon solide, dispersé dans une grande quantité de matrice
(cristalline) est irradié par des photons émis par un laser dont la
longueur d'onde est située dans la bande d'absorption de la matrice.
L'irradiation de la matrice et de l'échantillon va provoquer la
création d'une grande quantité d'énergie dans la phase condensée,
par excitation électronique des molécules de la matière. Des ions,
formés par transfert de protons ou d'électrons entre la matière
photoexcitée et l'échantillon analysé désorbent. Ce principe est
illustré par la figure ci-dessous :

19
 2 Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse
En général, la source MALDI est utilisée avec un analyseur à temps
de vol (TOF). On obtient des ions en phase gazeuse en irradiant le
composé à analyser en utilisant un laser à impulsion courte (1-
10ns). L'échantillon est incorporé uniformément dans une matrice
cristalline solide possédant une grande absorbance. Le rapport
matrice-échantillon est un paramètre important pour réussir les
analyses en MALDI, les rapports peuvent varier de 1000/1 à
5000/1.

Les matrices sont des chromophores à faible enthalpie de

sublimation, les plus utilisées sont les dérivés des acides
cinnamiques et benzoïques : l'acide sinapinique, l'acide
ferrulique, l'acide cafféique et l'acide gentisique.
20
2
Différentes méthodes de la spectroscopie
de masse

Principe d'une source MALDI. L'échantillon (en vert)

est co-cristallisé avec la matrice (en violet). 21
 3 Spectrométrie de masse par impact
électronique (EI-MS)
Principe: Cette technique repose sur l’ionisation d’un composé
organique à l’état vapeur, solide ou liquide par bombardement
électronique à 70 eV. L'ion ainsi formé, appelé ion moléculaire (m/z
= M), permet la détermination de la masse molaire du composé à
analyser (M). Il peut y avoir des clivages des liaisons chimiques
faibles au sein de l'ion moléculaire instable, conduisant ainsi à des
ions fragments, plus stables, caractéristiques du fait que cette
fragmentation ne se fait pas au hasard mais selon des mécanismes
bien élaborés en chimie organique.
Les ions fragments sont ensuite séparés en fonction de leur rapport
masse/charge par l'application d'un champ magnétique, puis
collectés par un détecteur. L'ensemble de ces ions fragments et l’ion
moléculaire représente le spectre de masse (EI-MS). Son
interpretation permet l'identification de la structure moléculaire.
22
3 Spectrométrie de masse par impact
électronique (EI-MS)

23
 Spectrométrie de masse par impact
3
électronique (EI-MS)
Introduction de l’échantillon : Pour faire pénétrer l’échantillon dans
le spectromètre, il existe deux systèmes d’injection, soit par injection
gazeuse ou par injection directe. En impact électronique, les
échantillons à analyser sont en petites quantités (µg) ou µl.
Introduction directe : Cette méthode d’injection est préconisée pour
des produits solides et liquides à faible tension de vapeur, qui sont
placées dans un récipient en quartz chimiquement inerte. Après
injection, l'échantillon est placé à l'extrémité d'une canne qui est
introduite directement dans la chambre d'ionisation.
Introduction gazeuse : Cette technique est reservée pour les
échantillons liquides ou gazeux. Un liquide peut soit être injecté avec
une micro-seringue directement par un septum dans le réservoir,
préalablement vidé, soit être congelé dans une verrerie par l’azote
liquide. L’air au-dessus de l’échantillon est éliminé par pompage et
l’échantillon est vaporisé dans le réservoir. 24
 3 Spectrométrie de masse par impact
électronique (EI-MS)
Ionisation : Les molécules d’un l'échantillon passent à l'état gazeux,
sous l'effet du vide, et sont ionisées par les électrons à haute énergie.
Il en résulte un mélange d'ions suite à la fragmentation des molécules
de départ.

La vitesse des ions générés lors de l'ionisation est calculée comme

suit:
v = (2zu/m)1/2
Dont z : la charge ionique (= n e), m : la masse ionique, v : la vitesse
de l’ion, u : le potentiel d’accélération.
25
 3 Spectrométrie de masse par impact
électronique (EI-MS)

Accélération: Dès leur formation, les ions sont dirigés et focalisés

vers la fente d’entrée du dispositif de séparation (analyseur), sous
l'effet d'un champ électrique E qui augmente leur énergie
cinétique.

Séparation: Les ions (ion moléculaire et ions fragments) qui

rentrent dans l’analyseur sont ensuite séparés par l’application
d’un champ magnétique B perpendiculaire à leur direction selon
leur rapport masse/charge (m/z). Cette séparation se fait selon des
trajectoires circulaires avec un rayon R

26
 3 Spectrométrie de masse par impact
électronique (EI-MS)

Détection: Après séparation, les ions sont collectés par un

ensemble de collecteurs d’un détecteur sensible aux charges
électriques transportées et les exprime en fonction de leur
abondance relative (intensité des signaux).

Enregistrement des spectres: Toutes les informations reçues par

le détecteur sont enregistrés et donnent un spectre de masse, qui
est représenté par l'abondance des ions en fonction de leur rapport
masse/charge.

27
 4 Appareillage
Le spectromètre EI-MS comporte quatre parties principales

Un système d'introduction de l'échantillon

Une source d'ions ou chambre d'ionisation qui permet la génération des ions.
Un analyseur qui permet la séparation des ions en fonction du rapport
masse/charge (m/z)
Un détecteur qui permet la détection des ions sortant de l'analyseur 28
 4 Appareillage
 L’un analyseur qui sépare les ions en fonction de leur masse et
de leur charge.

29
 4 Appareillage

 Le collecteur d’ions ou détecteur qui détecte les ions sortants de

l’analyseur et les exprime en fonction de leur abondance relative.

30
 5 Allure de spectres de masse
Allure d’un spectre de masse: Le spectre de masse (EI-MS) est un
diagramme donné comme suit:

Selon l'axe des abscisses : Les rapports m/z des ions détectés (en
impact électronique, z = 1 ; m/z s’exprime alors en Dalton, g/mol).
Selon l'axe des ordonnées: L'abondance relative de ces ions, dont
le pic le plus intense est fixé arbitrairement à 100 %.

Les différents types de pics observés dans un spectre de masse sont :

Le pic de base : c’est le pic le plus intense du spectre, il correspond
à l'ion le plus abondant et le plus stable.
Le pic moléculaire ou pic parent : il est attribué à l’ion de nombre
de masse égal à la masse moléculaire de la substance.
Les pics fragments : ils correspondent aux différents ions
fragments. 31
 6 Differents pics de spectres de masse
Les différents types de pics observés sur un spectre de masse sont :
Pic de base
C’est le pic le plus intense du spectre, il correspond à
l’ion le plus abondant.

Pics fragments Pic moléculaire

Ils correspondent aux ions des Il correspond à l’ion de nombre de
différents fragments issus de la masse égale à la masse moléculaire
molécule. de la substance. 32
 7 Fragmentations des molécules organiques

L’analyse d’un spectre de masse procure bien plus d’information

que la masse moléculaire ou la formule brute. En effet, elle permet
dans plusieurs cas de déterminer la structure moléculaire car les
modes de fragmentations dépendent des groupes fonctionnels
présents dans la molécule.
Trois facteurs favorisent le processus de fragmentation :
1. Les liaisons faibles subissent les clivages plus facilement.
2. Les fragments stables ont plus tendance à se former.
3. Les fragmentations avec réarrangement sont favorisées.

33
 7 Fragmentations des molécules organiques
L’origine de la fragmentation est l’excès d’énergie lors de l’impact
électronique, ce qui conduit à la rupture des liaisons chimiques de
type homolytique ou hétérolytique. Ces ruptures ou clivages sont
appelées fragmentation.
Règles de la fragmentation

Il existe deux types de fragmentation :

Fragmentation simple par rupture d’une liaison.
Réarrangement après la rupture simultanée de plusieurs liaisons.
La nature des ruptures de liaison.

Ordre de facilité d’arrachement des électrons : e –n > e –ᴨ > e – σ

34
Les fragments neutres tels que H2O, NH3, CO2, H2, CH4, C2H4, CO,
 7 Fragmentations des molécules organiques

L’ordre de facilité d’arrachement des électrons : e –n > e –ᴨ > e – σ

Les molécules neutres tels que H2O, NH3, CO2, H2, CH4, C2H4, CO,
NO, CH3OH, H2S, ... etc, n'apparaissent pas sur le spectre de masse.

Le radical neutre absent également sur le spectre de masse est

stabilisé par l’effet de la conjugaison, l’effet des atomes
électronégatif (Cl, O, S, ……), les groupements alkyles, ……etc.

Règle de l’azote: Si le nombre d’atomes d’azote dans la molécule

est impair, la masse de l’ion moléculaire est impaire.

35
 7.1 Hydrocarbures
7.1.1. Alcanes
La rupture ou clivage d'une liaison simple σ (C-C) donne
naissance à un cation et un radical neutre.

Selon la règle de Stevenson, le cation le plus stable étant celui qui

correspond au cation ayant le plus grand nombre de substituants

36
7.1 Hydrocarbures

7.1.2. Alcanes linéaires

Les signaux des alcanes linéaires les plus intenses se situent dans
la région correspondant aux fragments de 3 et 4 carbones.

37
38
7.1.3. Alcanes cycliques
Les cycloalcanes sont très stables par rapport aux alcanes
linéaires; leur pic de l’ion moléculaire est plus important.

39
40
 7.1.3. Alcènes

Dans le cas d’alcènes la fragmentation (clivage) la plus abondante

est celle en position α de la double liaison (rupture allylique), en
raison de la stabilisation par effet de mésomérie (conjugaison) du
cation obtenu.

41
 7.1.4. Alcènes

Un autre clivage est suggéré mais avec une faible abondance, du

fait de l’absence de la stabilité par résonnance du cation formé.

En cas de perte du radical H., les deux ions sont stabilisés par
résonance, mais le plus gros radical (R ou R’) sera éjecté. Par
conséquent, il aura une seconde rupture en position α de la double
liaison.

42
 7.1.3. Alcènes
Les alcènes se fragmentent de façon à générer un cation allylique
stabilisé par résonance.

43
 7.1.4. Composés aromatiques

Dans les composés aromatiques monosubstitués (Ar-R), le spectre de

masse est caractérisé par les paires d'ions à m/z = 91/65 et 77/51,
sachant que le fragment le plus abondant est celui formé par la
rupture benzylique pour donner l'ion tropylium (m/z = 91) stabilisé
par résonance

44
7.1.4. Composés aromatiques

45
 7.1.5. Composés aromatiques
Les composés aromatiques donnent des spectres de masse
facilement interprétables. Le pic moléculaire est toujours important
car l’ion moléculaire est fortement stable.

46
 7.2 Composés carbonylés
7.2.1. Cétones
Le pic de l’ion moléculaire des cétones est généralement assez
prononcé. Les pics de fragmentation majeures des cétones
aliphatiques résultent du clivage des liaisons C-C adjacentes à
l’atome d’oxygène, la charge restant sur l’ion acylium (+O=C-R)
stabiliseé par résonance. Le radical R le plus lourd se décompose
facilement et donne un pic de base.

47
 7.2.2. Aldéhydes
Le pic de l’ion moléculaire des aldéhydes est généralement
apparent. Les ruptures des liaisons C-H et C-C voisines de l’atome
d’oxygène résultent en un pic M-1 et un pic M-R (m/z = 29 CHO+).
Le pic M-1 est caractéristique même pour les aldéhydes à longues
chaines, mais le pic à M-R est présent dans les aldéhydes en C4 et
plus.

48
 Le réarrangement de McLafferty peut avoir lieu dans les cétones
ou les aldéhydes qui possèdent H en position γ. Ce réarrangement
consiste en un transfert d’hydrogène sur le site ionisé par
l’intermédiaire d’un mécanisme à six centres avec élimination
d’une molécule neutre éthylénique conduisant à la formation d’un
nouveau cation radical.

49
 7.2.3. Esters
Les clivages les plus importants dans les esters sont en position α
de la fonction carbonyle (C=O), ce qui donne lieu à deux types de
fragmentation.
-Si la rupture est à côté de l’acide séparant R’ de COOR avec
maintien de la charge sur l'un des deux fragments, le cation R’+ est
plus abondant pour les esters légers que le radical COOR• (moins
abondant).

50
-Si la coupure est à côté de l’alcool séparant R-C=O de O-R’ avec
maintien de la charge sur l'un des deux fragments, le cation
R-C=O+ est assez abondant que le radical R’-O•.

51
 7.2.4. Acides carboxyliques

Le pic de l’ion moléculaire d’un acide mono-carboxylique linéaire

est faible bien que généralement présent. Les pics (M – OH),
(M – COOH) et [COOH]+ (m/z = 45 pic de base) sont
prédominants; ils représentent le clivage des liaisons voisines de
C=O.

52
53
7.2.5. Amides

Pour les amides primaires la fragmentation majoritaire conduit à

un cation d’une masse de m/z = 44, comme suit:

Dans le cas des amides primaires à longue chaîne comme

l'hexanamide, plusieurs fragments de poids moléculaires impairs
sont détectés sur le spectre de masse à m/z = 27/29, 41/43, 55/57.
En plus, des ions pairs contenant de l'azote à m/z = 44, 72 et 86
sont observés sur le spectre de masse.
54
Les amides possédant un hydrogène en position γ peuvent faire
l’objet de réarrangement de McLafferty

55
 7.3 Composés hydroxylés
7.3.1. Alcools
Le pic de l’ion moléculaire d’un alcool primaire ou secondaire est
très faible, il est souvent indétectable pour un alcool tertiaire. En
générale, il y a clivage de lien C-C voisin de l’atome d’oxygène.

56
57
 7.3.2. Ethers
La fragmentation des éthers se fait selon deux voies principales, la
première est due à la rupture de la liaison C-C voisine de l’atome
d’oxygène avec la perte du plus gros fragment et le fragment
contenant l’atome d’oxygène forme le pic de base.

La deuxième fragmentation des éthers est due à la rupture de la

liaison C-O avec rétention de la charge sur le fragment alkyle.

58
 7.4. Amines
Les amines primaires sont caractérisées par la rupture de la
liaison σ en position α de la fonction amine correspondant au
fragment à m/z = 30

L'échelle présentée ci-après montre les différentes masses de

fragmentation des amines. Dont, les ions monoazotés ont des
masses paires (règle de l’azote).

59
7.4. Amines

Sur un spectre de masse des amines, on peut trouver une série

de pics à m/z = 30, 44, 58, 72 ,…………………….

60
7.5. Composés halogénés
La présence des isotopes d'abondance naturelle important dans
les structures de composés organiques comme les halogènes Cl et
Br (35Cl et 37Cl ou 79Br et 81Br) laisse apparaitre sur les spectres
de masse des amas isotopiques caractéristiques.

Si une molécule contient un ou plusieurs halogènes, le spectre de

masse révèle des massifs de pics caractéristiques, dont les valeurs
de m/z sont séparées de 2 unités de mase (M, M+2 et M+4) selon
le nombre des atomes y présents.

61
7.5.1. Composés chlorés

Le spectre de masse de l’atome du chlore montre la présence de

deux amas isotopiques à m/z = M et M+2 avec une intensité
relative de 3/1 respectivement.

m/z Isotope Intensité

relative
M 35Cl 3

M+2 37Cl 1

62
7.5.2. Composés bromés

Le spectre de masse de l’atome du brome montre deux amas

isotopiques à m/z = M et M+2 avec une intensité relative
identique 1/1.

Intensité
m/z Isotope
relative

M 79Br 1

M+2 81Br 1

63
FIN

64