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    UNIVERSITE DE DJIBOUTI

    FACULTES DES SCIENCES


    DEPARTEMENT DE BIOLOGIE-GEOLOGIE

    TRAVAUX PRATIQUES
    DE
    BIOLOGIE CELLULAIRE
    (L1 BIOLOGIE-GEOLOGIE)

    3
    ❖ RECOMMANDATIONS IMPORTANTES

    Les étudiants sont priés de :

    • Arriver à l’heure pour ne pas perturber le déroulement de la séance ;


    • Porter une blouse blanche propre ;
    • Préparer la séance de TP : lire attentivement le texte du fascicule correspondant à la
    manipulation du jour ;
    • Nettoyer sa paillasse à la fin de chaque séance.
    • Se munir de matériel de dessin : feuilles de dessin blanches non quadrillées format A4,
    crayon graphite HB, gomme, taille, règle, compas, boite de couleur.

    Réalisation des copies


    • Les copies doivent être réalisées entièrement au crayon ;
    • Sur chaque feuille doit figurer :
    ➢ en haut et à gauche votre nom et prénom, votre numéro de groupe, en
    haut et à droite la date.
    ➢ au milieu le thème et le titre du TP.
    • Ne jamais dessiner recto-verso, une seule face du papier doit être employée pour une bonne
    présentation ;
    • D’une façon générale, le dessin doit reproduire fidèlement l’image que donne le
    microscope (agrandir l’image en lui conservant ses proportions et sa disposition) et donner
    la valeur du grossissement ;
    • Deux dessins par feuille au maximum ;
    • Tout dessin doit être accompagné d’une légende complète, sinon le travail n’a aucune
    valeur. Les flèches doivent être, dans la mesure du possible, toutes situées du même côté
    du dessin à droite en général et dirigées vers le dessin, les écrire horizontalement. Les
    flèches doivent être tracées à la règle et parallèlement les unes aux autres.

    3
    TP 1. ETUDE MICROSCOPIQUE DE CELLULES
    VEGETALES

    OBSERVATION D’UN ÉPIDERME D’OIGNON


    (ALLIUM CEPA L.)
    1. INTRODUCTION
    L’observation d’un fragment d’épiderme « interne » du bulbe d’oignon permet de
    prendre connaissance de l’essentiel de la structure de la cellule végétale.
    Le bulbe d’oignon montre, lorsqu’il est coupé verticalement, une tige très courte
    appelée plateau qui porte un faisceau de racines adventives et des écailles emboîtées les unes
    dans les autres. Les plus externes sont desséchées, les autres sont gorgées de réserves. Dans
    l’axe, le bourgeon central est enveloppé d’écailles minces.

    Ecailles
    sèches
    Ecailles
    charnues

    Bourgeon central

    Tige très courte (plateau)

    Jeunes
    racines

    2. MATÉRIEL ET RÉACTIFS
    Microscope, lames, lamelles, 1 oignon, 1 couteau, pinces fines, 2 verres de montre
    pour chaque paillasse, solution de rouge neutre à 1g/L (Dissoudre 0,1g de rouge neutre dans
    100 ml de tampon phosphate à pH 6,5 : la pénétration du rouge neutre dans les cellules n’est
    possible qu’à ce pH), solution d’eau iodo-iodurée ou lugol (4g d’iode, 8g de KI dans 1L
    d’eau distillée), cristallisoir avec eau de Javel pour lames et lamelles usagées

    3. PRÉPARATION DES LAMES


    • On prépare simultanément 2 colorants dans 2 verres de montre :
    ➢ Rouge neutre ;
    ➢ Solution d’eau iodo-iodurée.
    • A l’aide de pinces fines, on prélève de petits lambeaux d'épiderme sur la face concave
    d'une écaille d'oignon. On les place immédiatement dans les solutions colorées (2 ou
    3 dans chaque verre de montre).
    • Sur une première lame, on dépose 1 goutte de la solution de rouge neutre et on y place
    1 ou 2 lambeaux. On recouvre d'une lamelle.
    • On fait de même avec la 2ème lame et la solution d'iode.

    3
    Pose de la lamelle

    Préparation terminée

    4. Observations (objectifs x4, x10)

    4.1 Coloration au rouge neutre (coloration vitale)

    Le rouge neutre pénètre dans la cellule sans la tuer : c'est un colorant vital.
    • Chercher à l’objectif la plus faible, une image nette de la préparation et placer une
    cellule au centre du champ du microscope.
    • Passer au fort grossissement (10X)
    • Dessiner, Mettre un titre et une légende et décrire vos observations : coloration, forme
    des cellules, présence de vacuoles, noyau et nucléoles, paroi pecto-cellulosique etc.

    4.2 Coloration à l’iode (coloration post-vitale)

    L'iode tue la cellule en provoquant la coagulation du cytoplasme et du noyau (c'est


    un fixateur) et en teintant en jaune certains éléments.
    Procéder comme dans 4.1

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