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    La Conservation Des Prelevements

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    Ce document décrit plusieurs fixateurs tissulaires comme le formol, le bouin, l'AFA et le chlorure de zinc. Il explique leurs avantages, inconvénients, indications et modes de préparation.

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    3. LA CONSERVATION DES PRELEVEMENTS

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    LA CONSERVATION DES

    PRELEVEMENTS TISSULAIRES

    Dr Dial C.
    Dr DEGUENONVO GNC
    Labo ACP HOGGY

    1
    Le Formaldéhyde ou Formol

    2
    Le Formaldéhyde ou Formol
    1- Avantages
    Le Formol ne provoque pas de durcissement exagéré
    des tissus ;

    Il ne colore pas les tissus,

    Il permet les colorations usuelles,

    Il permet de faire l’IHC et la BioMol.


    3
    2- Inconvénients

    Il entraine la dissolution des substances


    solubles comme le glycogène

    Il ne prépare pas bien pour les prélèvements


    hématologiques.

    Risque de toxicité cutané, pulmonaire et un risque


    cancérigène
    4
    Table de macroscopie avec aspiration

    5
    3-Indications

    -l’histologie de routine
    -les grosses pièces en première intention

    4-Contre-indications (rares)

    La mise en évidence de substances solubles.


    6
    5- Préparation du Formol Neutre à
    10%
    Le « Formol pur » commercial est une solution
    aqueuse de Formaldéhyde à 40%.
    La solution à utiliser doit être diluée à 10%, pour se
    faire :
    Formol « pur» commercial…………….10ml
    Eau distillée…………………………………… 90ml
    Carbonate de calcium……………………1gr
    NB : Cette solution est neutralisée en y rajoutant 1gr
    de Carbonate de Calcium qui permet d’éviter la
    formation d’acide formique en diminuant le pH. 7
    6- Préparation du Formol Nacl

    Formol pur commercial………………..13ml

    Nacl………………………………………………0,9gr

    Eau distillée………………………………....87ml

    8
    7-Temps réel pour fixer un tissu
    Il est variable en fonction de la taille du
    prélèvement !

    De 6 heures à 24 heures : pour les petites biopsies


    De 1 à 3 jours : pour les PO

    NB : Il est souvent nécessaire de faire des tranches


    d’environ 1-2cm d’épaisseur sur les PO à l’état frais
    pour faciliter la pénétration du fixateur en
    profondeur
    9
    8- Durée de conservation après
    fixation

    Plusieurs mois voire des années.

    10
    Comment fixer?

    Ne pas mettre un prélèvement dans un récipient


    Inadapté.
    11
    Comment fixer?

    Dans un récipient ne déformant pas la pièce, mettre


    5 à 10 fois le volume de la pièce et y plonger le
    prélèvement. Pour favoriser la pénétration du
    fixateur, dès la réception de la pièce opératoire :
    - on ouvrira les organes creux
    - on fera des sections dans les organes pleins tous les
    5 à 10 mm,
    - on injectera le fixateur dans les bronches quand il
    s’agit des poumons. 12
    Le liquide de Bouin

    13
    1-Avantages

    Il conserve correctement les substances


    hydrosolubles comme le glycogène ;

    Il permet la caractérisation immunologique (IHC) de


    beaucoup d’antigènes intracellulaires.

    Il permet une bonne étude morphologique

    14
    2- Inconvénients

    Il pénètre mal les tissus qui ne sont pas atteints au-


    delà de 2 – 3 mm en profondeur ;
    Il durcit, rétracte et colore en jaune les tissus ;
    Il ne permet pas les coupes en congélation ou pour
    la M.E.
    Il altère l’ADN : empêche de faire la Biologie
    Moléculaire à cause de la présence de l’Acide
    picrique qui présente en outre un risque toxique
    15
    3- Indications
    Utilisé en histologie de routine pour fixer les petits
    prélèvements (de moins de 1cm3), comme les
    biopsies, pour une étude fine des structures
    tissulaires.

    4- Contre-indications
    Pièce volumineuse
    Recherche en Biologie Moléculaire
    16
    5- Préparation du Bouin aqueux
    A. Formule du liquide de Bouin fort

    - Formol pur commercial (40%) = 25 ml

    - Acide acétique glacial =5 ml

    - Acide picrique (à saturation dans l’eau) = 75 ml

    17
    B. Formule du liquide de Bouin faible

    - Formol pur commercial (40%) = 10 ml

    - Acide acétique glacial = 5 ml

    - Acide picrique (à saturation dans l’eau) = 50 ml

    -Eau distillée = 35ml


    18
    6- Temps réel de fixation

    Un fragment de moins de 2mm3 : 2 à 3 heures

    Un fragment supérieur à 1cm3 : jusqu’à 1 à 3 jours

    19
    7- Durée de conservation

    Quelques mois

    NB1 :- Après fixation, on déshydrate directement


    dans les alcools.

    NB2 :-L’acide picrique a un léger pouvoir décalcifiant

    20
    Autres Fixateurs dérivés du Bouin

    21
    Le liquide de Bouin alcoolique
    (Dubosq Brasil)
    Préparation
    -Alcool à 80% ………………………….150ml
    -Formol « pur » commercial ……60ml
    -Acide acétique glacial……………..15ml
    -Acide picrique…………………………1gr
    Intérêt : très pénétrant, peut compléter le Bouin
    aqueux.
    Indication : Les petites pièces(moins d’1cm) sont
    fixées en 30 minutes. 22
    Le liquide de Bouin Hollande
    Préparation
    -Formol »pur » commercial………..10ml

    -Acide picrique……………………………4gr

    -Acide acétique glacial………………..1,5gr

    -Acétate neutre de cuivre…………..2,5gr

    -Eau distillée……………………………….100ml 23
    Indications
    -Toute l’histologie de routine
    -En première intention pour les organes lymphoides
    et hématopoietiques
    -Pour les petits prélévements de moins de 1cm3
    -Fixateur rapide

    24
    Les autres fixateurs

    25
    Alcool-Formol-Acétique(A.F.A)
    Préparation
    -Formol « pur » commercial……………..20ml

    -Acide acétique glacial……………………….50ml

    -Alcool éthylique absolu…………………….750ml

    -Eau distillée………………………………………180ml
    26
    Indications : Tous tissus, petits fragments

    Conservation : Excellente

    Temps réel de fixation : 24 heures

    27
    Fixateurs à base de Chlorure de Zinc
    Formule « solution faible »
    -Formol »pur » commercial……………..130ml

    -Acide acétique glacial………………………5ml

    -Chlorure de Zinc………………………………10gr

    -Eau distillée………………………………………860ml
    Indications : Bonne étude morphologique.
    La conservation des épitopes pour l’IHC
    Temps réel de fixation : 24 heures au moins 28

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