DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

T.D. M18 – LEF SVI,

(Techniques chimiques pour la biologie / PARTIE I)

Pr. El Rhaffari L.

Année universitaire 2020/2021

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TD de M18-LEF SVI/FS-MEKNES/Pr. L. EL RHAFFARI
EXERCICE 1. Identification d’une espèce chimique dans un comprimé et une pommade
On dispose d’un comprimé d’Actron (médicament antalgique), d’un tube de Percutaféine
(pommade pour un traitement local à visée amincissante) et de caféine.
Afin de vérifier la présence de caféine dans ces deux médicaments, on réalise une
chromatographie sur couche mince.
Les dépôts réalisés sont :
C : une solution de caféine dans de l’acétate d’éthyle ;
A : le comprimé d’Actron mis en solution dans de l’acétate d’éthyle ;
P : une solution de pommade dans l’acétate d’éthyle.
Après élution et séchage, la plaque est révélée à la lampe UV.
1. Réaliser un schéma légendé de l’expérience.
2. Réaliser un schéma légendé du chromatogramme obtenu.
3. Définir le rapport frontal de la caféine puis le calculer.
4. Le comprimé et la pommade contiennent-ils de la caféine ? Justifier. Où peut-on trouver
cette information ?
5. Le comprimé et la pommade sont-ils des espèces chimiques pures ou des mélanges ?
Justifier.

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EXERCICE 2. Extraction et dosage d’une substance
L'acide benzoïque est utilisé comme conservateur alimentaire dans de nombreuses boissons
en particulier les boissons « light », (II apparaît sous le code 210 sur l'étiquette de ces
boissons). Au laboratoire, il se présente à l'état pur sous la forme de cristaux blancs.
I. On veut extraire l'acide benzoïque d'une boisson au coca à l'aide d'un solvant.
On dispose de trois solvants : dichlorométhane, éthanol et éther éthylique. Dans un livre de
chimie on a trouvé les données suivantes:
Solvants eau dichlorométhane éthanol Ether éthylique
Solubilité de l'acide
Assez
benzoïque dans ces moyenne bonne bonne
faible
solvants
densité 1 1,2 0,8 0,6
Miscibilité dans l'eau - Non miscible miscible Non miscible
Facilement Facilement
Dangerosité - irritant
inflammable inflammable
1) Quel solvant faut-il choisir? Donner les 2 raisons principales en expliquant. Par la suite le
solvant choisi sera désigné par le symbole S.
On procède à l'extraction en versant 100ml de boisson et 20 ml de S dans une ampoule à
décanter. Après agitation vigoureuse et dégazage on laisse décanter.
2) Que signifie la phrase « on laisse décanter» ?

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3) Faire un schéma (avec une légende très précise et justifiée) de l'ampoule et de son contenu
après décantation. Indiquer clairement dans quelle phase se trouve l'acide benzoïque.
On récupère cette phase dans un flacon que l'on met de côté pour une analyse ultérieure:
c'est l'extrait E1.
II. On sait synthétiser l'acide benzoïque au laboratoire.
Pour cela on chauffe à reflux un mélange d'alcool benzylique, de permanganate de potassium
et d'un peu de soude pendant une demi-heure.
4) Faire un schéma simplifié du dispositif expérimental.
Expliquer en détails son principe de fonctionnement.
Le liquide obtenu est ensuite refroidi et après un traitement approprié, On obtient alors des
cristaux blancs.
Afin de les analyser, on en dissout quelques-uns dans un peu de solvant S. Cette solution est
appelée E2.
III. On procède à l'analyse des produits obtenus par extraction (E1) et par synthèse (E2).
On prépare:
 . Une solution de référence (appelée E3 ) d'acide benzoïque pur dans un peu de solvant S
 . Une solution de référence (appelée E4 ) d'alcool benzylique dans le solvant S. On fait la
chromatographie sur couche mince de E1, E2, E3 et E4. L'éluant est un mélange de
cyclohexane et d'acétone.
5) Faire le schéma légendé de l’expérience. On obtient le chromatogramme suivant:

0
0 0
0 0 0

El E2 E3 E4
6) D'après ce chromatogramme, la boisson contient-elle de l'acide benzoïque ?
Interpréter la présence de plusieurs taches pour E1.
7) Les cristaux blancs obtenus par synthèse sont-ils bien des cristaux d'acide benzoïque?
8) Interpréter la présence de plusieurs taches pour E2
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EXERCICE 3 : Formulation et préparation de produits
Au laboratoire, on peut préparer du savon en traitant une huile alimentaire par de la soude.
Le protocole proposé est le suivant:
« Dans un ballon, introduire avec précaution 40 ml de soude concentrée, 22 ml de d'huile de
tournesol, quelques grains de pierre ponce, ainsi que de l'éthanol afin de favoriser le mélange
des réactifs. Chauffer à reflux pendant 20 minutes. Lorsque la synthèse est terminée extraire
le savon du mélange. Pour cela, après l'avoir laissé refroidir, le verser dans une solution d'eau
salée. Le savon devient alors solide et surnage sur la solution ».
1) Faire un schéma annoté du montage utilisé pour la synthèse.
2) Peut-on formuler une hypothèse concernant la nécessité de chauffer?

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3) Pourquoi ajoute-t-on de la pierre ponce?
4) Sachant qu'il se forme du glycérol au cours de la réaction, écrire symboliquement la
réaction chimique.
5) Faire un bilan des conditions expérimentales.
6) Comment peut-on séparer simplement le savon de la solution?

EXERCICE 4. Etude d’une vitamine

L'acide L-ascorbique (C6H8O6) est le nom donné à la vitamine C. Chez l’homme, la déficience
en vitamine C provoque une maladie, le scorbut. Le besoin journalier de cette vitamine est
d’environ 100 mg. La vitamine C est un antioxydant. La production mondiale annuelle de
vitamine C de synthèse est évaluée à environ 80000 tonnes avec une augmentation annuelle
constante de 3-4%.
On se propose d’extraire la vitamine C de la tomate fraiche et de la doser : 5 mg de matière
fraîche congelés dans l’azote liquide sont broyés et homogénéisés au Polytron à grande vitesse
pendant 30s dans un tube de 15 ml, contenant 2,5 ml de milieu d’extraction (acide
métaphosphorique 3% (p/v) et EDTA 2,5 mM). Après centrifugation à 14000 g pendant 10 mn
à 4°C, le surnageant est filtré, le filtrat est récupéré et peut être stocké pendant 30 min au
maximum dans la glace à l’abri de la lumière avant analyse.
Partie 1.
• Pourquoi la vitamine C est synthétisée au lieu de l’extraire ?
• Quelles sont les précautions prises dans cette extraction pour préserver l’acide
ascorbique ?
• Quel est l’utilité de l’azote liquide dans cette extraction ?
• Quel est le principe du broyeur Polytron, quelles sont les précautions à prendre ?
La méthode de dosage employée est un titrage. L'acide ascorbique est mis en présence d'un
excès de solution de diiode (I2). Une réaction d’oxydoréduction a lieu entre le diiode et l’acide
ascorbique selon la réaction :
C6H8O6 + I2 ⇔ C6H6O6 + 2 I- + 2 H+
Puis l’excès de diiode est ensuite titré par une solution de thiosulfate de sodium (Na2S2O3).
• Indiquer la forme oxydée et la forme réduite parmi les deux formules brutes (C6H8O6
& C6H6O6) de la Vitamine C :
• Pourquoi faut-il boire, ou doser, rapidement le jus d'un fruit pressé contenant la
vitamine C ?
Partie 2 :
Un volume connu de jus de fruits (10 ml) est prélevé à la pipette et est mis en présence d’une
quantité connue, et en excès de diiode (120ml à 0,002M). L’excès de diiode restant est alors
titré par une solution de thiosulfate de sodium de concentration connue (0,002M), en
présence d’empois d’amidon (indicateur coloré, pour titrer la solution de diiode). Masse
molaire de l'acide ascorbique : 176 g/mol, Masse molaire de thiosulfate de sodium (Na2S2O3,
5H2O)=248,2 g/mol
• Écrire les demi-équations électroniques relatives aux couples d'oxydoréduction mis en
jeu montrant que le diiode est un réactif oxydant alors que l'ion thiosulfate est un réactif
réducteur.
• Établir l’équation de la réaction de titrage de l’excès de diiode par les ions thiosulfate
sachant que les couples mis en jeu étant (I2 / I- ) et ( S4O6 2- / S2O3 2-).

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• Déterminer la quantité de diiode en excès, qui a été dosée par le thiosulfate.
• En déduire la relation entre l’excès de diiode et la quantité d’ion thiosulfate versée à
l’équivalence.
• Calculer la quantité d’acide ascorbique contenue dans les 10 ml de la prise d’essai.
• En déduire la masse de vitamine C contenue dans 1L de jus.
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EXERCICE 5 : Purification des protéines

L'une des étapes de purification des protéines est la précipitation fractionnée par addition
d'un sel dans la solution protéique.
1. Quels sont les facteurs qui influencent la solubilité des protéines ?
On ajoute très progressivement une masse donnée de sel (le plus souvent le sulfate
d'ammonium : (NH4)2SO4)), jusqu’à atteindre un certain pourcentage de saturation.
2. Donner le principe de cette technique :
L’addition du sel se traduit par une augmentation du volume de la solution. La grandeur qui
tient compte de cette augmentation est le volume spécifique.
3. Calculer la concentration molaire d’une solution saturée de (NH4)2SO4 à 0°C.
4. Calculez, à 0°C, la quantité de (NH4)2SO4 solide à ajouter à 500 ml d’une solution à 40%
de saturation pour l’amener à 60 % de saturation.

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 Corrections

EXERCICE 1. Identification d’une espèce chimique dans un comprimé et une pommade

1. Voir TP.
2. Schéma du chromatogramme :
3. La caféine est une espèce chimique pure. Le rapport frontal de la
caféine s’obtient à partir de la seule tache correspondant au
h
dépôt : R f  C ;
H
hC est la distance entre la ligne de dépôt et le centre de la tache ; on
mesure hC = 0,6 cm
H est la distance entre la ligne de dépôt et le front du solvant ; on

mesure H = 4,0 cm
0,6
A.N. : R f   0,15
4,0
4. Pour les dépôts A et P, on observe une tache ayant le même rapport frontal que la
caféine. Le comprimé d’Actron et la pommade contiennent tous les deux de la
caféïne. On peut trouver cette information sur la notice du médicament.

5. Pour le dépôt A, le chromatogramme révèle la présence de plusieurs taches. Le
comprimé d’Actron contient au moins une autre espèce. C’est donc un mélange.
Pour la pommade, seule la tache correspondant à la caféine est révélée. Mais
certaines espèces chimiques peuvent ne pas être solubles dans le solvant de dépôt.
C’est peut-être un corps pur ou un mélange ?

EXERCICE 2. Extraction et dosage d’une substance

I.1 éthanol ou éther éthylique dans lesquels l'acide benzoïque est soluble.

De plus ces solvants ne sont pas irritants.

I.2 "on laisse décanter" : on laisse le solvant et la boisson, liquides non miscibles, se séparer .

I.3.

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Le solvant le plus dense (la boisson) occupe la partie inférieure ; le solvant le moins dense,
contenant l'acide benzoïque, occupe la partie supérieure.

(1) : élévateur à croisillons; (2) chauffe ballon ; (3) ballon ; (4) réfrigérant

II. le chauffage à reflux permet, en travaillant à chaud d'accélérer la réaction chimique tout en
évitant les pertes de réactifs et de produits.

III.

La boisson (1) contient de l'acide benzoïque et au moins deux autres substances (présence de
3 taches).

Quant à (2) il contient de l'acide benzoïque et de l'alcool benzilique (toutes les traces de ce
réactif n'ont pas été éliminées)

EXERCICE 3 : Formulation et préparation de produits

1) cf TP ; 2) accélérer la réaction ; 3) régulariser l’ébullition ; 4) soude + huile  savon + glycérol
5)
✔ espèces chimiques : 40 mL de soude concentrée, 22 mL de d’huile de tournesol, pierre
ponce, éthanol
✔ verrerie : montage chauffage à reflux, éprouvettes graduées, béchers.
✔ Manipulation : Chauffer à reflux pendant 20 minutes, verser dans une solution d’eau salée
après refroidissement.
✔ 6) décantation – filtration

EXERCICE 4. Etude d’une vitamine

L'acide L-ascorbique (C6H8O6 , M=176 g.mol-1) est le nom donné à la vitamine C. Chez
l’homme la déficience en vitamine C provoque une maladie, le scorbut. Le besoin journalier
de cette vitamine est d’environ 100 mg. La vitamine C est un antioxydant. La production
mondiale annuelle de vitamine C de synthèse est évaluée à environ 80000 tonnes avec une
augmentation annuelle constante de 3-4%.
On se propose d’extraire la vitamine C de la tomate fraiche et de la doser :
5 mg de matière fraîche congelés dans l’azote liquide sont broyés et homogénéisés au
Polytron à grande vitesse pendant 30 s dans un tube de 15 ml, contenant 2,5 ml de milieu

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d’extraction (acide métaphosphorique 3% (p/v) et EDTA 2,5 mM). Après centrifugation à
14000 g pendant 10 mn à 4°C, le surnageant est filtré, le filtrat est récupéré et peut être stocké
pendant 30 min au maximum dans la glace à l’abri de la lumière avant analyse.
 Pourquoi la vitamine C est synthétisée au lieu de l’extraire ?
La quantité demandée est très importante, la synthèse est facile
 Quelles sont les précautions prises dans cette extraction pour préserver l’acide
ascorbique ?
Manipulation rapide et On travaille à froid (azote liquide, centrifugation à 4°C, glace pour
le stockage
 Quel est l’utilité de l’azote liquide dans cette extraction ?
Eviter le surchauffage du Polytron et faciliter le broyage
 Quel est le principe du broyeur Polytron, quelles sont les précautions à prendre ?
Surpression et souspression appliquées aux échantillons
La méthode de dosage employée est un titrage. L'acide ascorbique est mis en présence
d'un excès de solution de diiode (I2). Une réaction d’oxydoréduction a lieu entre le diiode et
l’acide ascorbique. Puis l’excès de diiode est ensuite titré par une solution de thiosulfate de
sodium (Na2S2O3) selon la réaction suivante :
C6H8O6 + I2 ⇔ C6H6O6 + 2 I- + 2 H+
 Indiquer la forme oxydée et la forme réduite parmi les deux formules brutes (C6H8O6 &
C6H6O6) de la Vitamine C :
La Forme réduite : C6H8O6 et la forme oxydée : C6H6O6 ………
 Pourquoi faut-il boire, ou doser, rapidement le jus d'un fruit pressé ?
La vitamine C est une molécule réduite qui capte rapidement l’O2 dissout dans l’eau

Un volume connu de jus de fruits (10 ml) est prélevé à la pipette et est mis en présence
d’une quantité connue, et en excès de diiode (120ml à 0,002M). L’excès de diiode restant est
alors titré par une solution de thiosulfate de sodium de concentration connue (0,002M), en
présence d’empois d’amidon (indicateur coloré, pour titrer la solution de diiode).
Masse molaire de l'acide ascorbique : 176 g/mol
Masse molaire de thiosulfate de sodium (Na2S2O3,5H2O)=248,2 g/mol
 Écrire les demi-équations électroniques relatives aux couples d'oxydoréduction mis en
jeu montrant que le diiode est un réactif oxydant alors que l'ion thiosulfate est un réactif
réducteur.
I2 + 2e ⇔ 2 I & S2O3- - ⇔ S4O6- - + 2e-
- -

 Établir l’équation de la réaction de titrage de l’excès de diiode par les ions thiosulfate
sachant que les couples mis en jeu étant (I2 / I- ) et ( S4O6 2- / S2O3 2-).
2 S2O3- - + I2 ⇔ S4O6- - + 2 I-
• Déterminer la quantité de diiode en excès, qui a été dosée par le thiosulfate.
n (I2)total = n (I2) ayant réagi avec l’acide ascorbique + n (I2) ayant réagi avec l’iode
thiosulfate

………
• En déduire la relation entre l’excès de diiode et la quantité d’ion thiosulfate versée à
l’équivalence.
n (I2)total = n (C6H8O6) + n (Na2S2O3)/2

• Calculer la quantité d’acide ascorbique contenue dans les 10 ml de la prise d’essai.

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 n (C6H8O6) = n (I2)total - n (Na2S2O3)/2

n (C6H8O6) = C(I2)*V(I2) - C(Na2S2O3)* V(Na2S2O3)/2

Donc, la concentration de l’acide ascorbique dans le jus est
de : C(C6H8O6) = n C6H8O6/ V jus prélevé pour le dosage (en L)

• En déduire la masse de vitamine C contenue dans 1L de jus.

La masse d’acide ascorbique par litre de jus est de
: m(C6H8O6)/L = C(C6H8O6)*MR (C6H8O6)

Masse molaire de l'acide ascorbique : 176 g/mol ; M(Na2S2O3,5H2O)=248,2 g/mol

…………………………………………………………………………………………………

EXERCICE 5 :
L'une des étapes de purification des protéines est la précipitation fractionnée par addition
d'un sel dans la solution protéique.
1. Quels sont les facteurs qui influencent la solubilité des protéines ? Question du cours
On ajoute très progressivement une masse donnée de sel (le plus souvent le sulfate
d'ammonium : (NH4)2SO4)), jusqu’à atteindre un certain pourcentage de saturation.
2. Donner le principe de cette technique : Question du cours
L’addition du sel se traduit par une augmentation du volume de la solution. La grandeur qui
tient compte de cette augmentation est le volume spécifique.
3. Calculer la concentration molaire d’une solution saturée de (NH4)2SO4 à 0°C.
La dissolution d'un soluté correspond à la formation de liaisons hydrogène entre les
groupements polaires ou chargés du soluté et les molécules d'eau.
En solution, l'anion SO42- et le cation NH4+ sont donc entourés d'une enveloppe d'hydratation
et occupent un volume plus important que sous la forme de sel (cristal). Cette augmentation
de volume est traduite par le volume spécifique.

Une solution de sulfate d'ammonium saturée, ou à 100% de saturation, est obtenue en

dissolvant 706 g de (NH4)2SO4 dans 1000 g d'H2O, soit 1000 mL, soit :
volume de la solution saturée = 1000 mL + (706 g x 0,565mL.g.1) = 1000 mL + 399 mL =
1399 mL
[(NH4)2SO4] = (706 g / 1399 mL) = 0,505 g.mL.1 = 505 g.L.1
[(NH4)2SO4] = (505 g.L.1 / 132 g.mol.1) = 3,82 mol.L.1 = 3,82 M
4. Calculez, à 0°C, la quantité de (NH4)2SO4 solide à ajouter à 500 ml d’une solution à
40% de saturation pour l’amener à 60 % de saturation.
On cherche la masse m(NH4)2SO4 à ajouter telle que :
[500 ml à 40% saturation + m(NH4)2SO4] = [(500 ml + x ml) à 60% de saturation] (1)

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Une solution de sulfate d'ammonium à 100% de saturation = 0,505 g./ml, donc :
[(NH4)2SO4]40% = 0,4 x 0,505 g./ml = 0,4 x 0,505 g.mL.1
[(NH4)2SO4]60% = 0,6 x 0,505 g.mL.1 = 0,6 x 0,505 g/.ml

Le volume additionnel x peut s'exprimer en fonction de m(NH4)2SO4 et du volume spécifique

: x ml = m(NH4)2SO4 x 0,565ml.g.1
On peut écrire la relation (1) de la manière suivante :
(500 ml x 0,4 x 0,505 g.ml.1) + m(NH4)2SO4 = [500 ml + (m(NH4)2SO4 x 0,565ml.g.1)] x 0,6 x 0,505
g.ml.1
===> m(NH4)2SO4 = 60,9 g

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