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    Extraction Et Mise en Évidence de La Quantité de Glycogène Présent Dans Le Foie

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    Extraction et mise en évidence

    de la quantité de glycogène présent dans le


    foie
    TP mis au point et présenté par Nadine MORANGE et Dominique GANTHEIL : Lycée L.
    Limosin

    BUT :
    On se propose de déterminer par la méthode colorimétrique de Beer-Lambert, la quantité de
    glycogène préalablement extraite d' un échantillon de foie le plus frais possible, plus l'abattage
    de l'animal sera récent, plus le résultat de la manipulation sera probant .

    MATÉRIEL NÉCESSAIRE :
    Matière première Appareillage Verrerie Réactifs Matériel Exao
    Foie de veau ou de Balance Buchner + Eau iodée Color 4 (Jeulin)
    porc frais filtres
    Broyeur Alcool à 95 Cuves
    électrique Fiole à vide colorimétriques
    HCl
    Trompe à vide Bêcher concentrée Logiciel Enzymo

    Passoire Éprouvette Glycogène

    Pipette

    MANIPULATION :
    La manipulation se déroule en deux temps, il faut en premier lieu extraire le glycogène du foie
    puis dans un deuxième temps réaliser le dosage de l'échantillon obtenu par rapport à une
    gamme étalon en utilisant la méthode de Beer-Lambert .

    Extraction du glycogène :

     Peser et couper en petits morceaux 10 g de foie frais


     Faire bouillir le foie dans 100 ml d'eau distillée pendant 2 minutes
     Égoutter à l'aide d'une passoire puis le broyer avec un mixeur
     Ajouter 50 ml d'eau distillée et faire bouillir 5 minutes
     Filtrer sous vide sur Buchner
     Précipiter le filtrat récupéré avec 5 gouttes d'HCl concentré, (si un précipité important
    se forme, filtrer à nouveau afin d'éliminer l'excès protéique).
     Traiter le filtrat récupéré par 4 fois son volume d'alcool à 95 puis filtrer sous vide
     Récupérer le filtre, le laisser égoutter puis reprendre celui-ci avec 5 ml d'eau distillée
     Tester la présence de glycogène en prenant 3 gouttes du liquide obtenu et rajouter une
    goutte d'eau iodée*, (on doit obtenir une couleur brun-acajou).

    *Eau iodée : dissoudre 1 g d'iode dans 2 g d'iodure de potassium puis compléter à 100
    ml avec de l'eau distillée

    Dosage de l'échantillon suivant la méthode de Beer-Lambert :

     La loi de Beer-Lambert obéit à la relation suivante DO = E . l . C

    DO ou densité optique correspond à une absorbance

    E (Epsilon) correspond au coefficient d'extinction molaire, (il est constant pour un produit
    donné)

    l est l'épaisseur du milieu traversé, (ici, il s'agit d'une cuve carré de 1 cm de coté)

    C correspond à la concentration du produit à étudier

    E et l sont tout les deux constants, on peut donc dire que l'absorbance sera
    proportionnelle à la concentration

     Préparation de la gamme étalon

    On prépare 100 ml d'une solution mère de glycogène à 10 g/L à partir de glycogène du


    commerce (Reférence au catalogue Jeulin : 117036, pureté 85%, conserver au réfrigérateur à
    4¡). Il faut tenir compte de la pureté du produit pour réaliser les solutions.

    On réalise les dilutions suivantes :

    Dilutions 1/2 1/4 1/8 1/32


    Concentration de glycogène en
    4.250 2.125 1.063 0.266
    mg/ml

    Les cuves se préparent de la manière suivante :

    1 ml de solution de glycogène + 3 ml d'eau distillée + 1 goutte d'eau iodée

    Le blanc permettant de régler le 100% de transmission se fait avec la solution diluée au


    1/32
    Les mesures se font avec une longueur d'onde de 470 nm (filtre bleu)

    Avant de réaliser le dosage, vérifier que la coloration de l'échantillon de foie se situe bien
    dans la gamme

    RÉSULTATS :
    Concentration de glycogène en
    4.250 2.125 1.063 0.266
    mg/ml
    Absorbances 0.45 0.20 0.10 0.05

    La courbe peut être réalisée sur du papier millimétré ou avec le logiciel Excel à partir des
    mesures expérimentales.

    On place ensuite l'échantillon de foie dans le colorimètre, on mesure l'absorbance, on la


    reporte sur la courbe étalon et on déduit ainsi la concentration en glycogène de nos 10 g de
    foie du départ.

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