MINICAP PROTEIN(E) 6

Ref. 2203
Ref. 2223*

2007/09
 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

UTILISATION

Le kit MINICAP PROTEIN(E) 6 permet la séparation en milieu basique (pH 9,9) des protéines du sérum humain par électrophorèse capillaire dans le
système automatique MINICAP.
Les protéines du sérum normal humain sont séparées en six fractions majeures.
Le système MINICAP permet de réaliser toutes les séquences de l’électrophorèse jusqu’à l’obtention du profil protéique pour l’analyse qualitative ou
quantitative. Les protéines, séparées dans des capillaires en silice fondue, sont détectées directement au niveau d’une cellule sur le capillaire par
spectrophotométrie d’absorbance à 200 nm. Les profils électrophorétiques sont analysés visuellement pour détecter les anomalies. La détection
directe donne automatiquement une quantification relative précise de chaque fraction.

À usage in vitro exclusivement.

PRINCIPE DU TEST

L’électrophorèse des protéines du sérum humain est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour rechercher les modifications du
profil protéique. Parallèlement aux techniques d’électrophorèse sur différents supports, dont le gel d’agarose, la technique d’électrophorèse capillaire
s’est développée car elle offre l’avantage d’une automatisation complète de l’analyse, de séparations rapides et d’une bonne résolution. C’est une
technique de séparation électrocinétique effectuée dans un tube de diamètre interne inférieur à 100 µm rempli d’un tampon composé d’électrolytes.
Par de nombreux aspects, elle se présente comme un intermédiaire entre l’électrophorèse classique de zone sur support et la chromatographie
liquide.
Le système MINICAP utilise le principe de l’électrophorèse capillaire en solution libre, qui représente la forme la plus courante de l’électrophorèse
capillaire. Il permet la séparation de molécules chargées en fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon de pH donné, et, selon
le pH de l’électrolyte, d’un flux électro-osmotique plus ou moins important. Le système MINICAP comprend 2 capillaires en parallèle, permettant
2 analyses simultanées. Sur ce système, l’injection, dans les capillaires, de l’échantillon (dilué dans le tampon d’analyse) est effectuée par aspiration
à l’anode. La séparation est ensuite réalisée en appliquant une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes de chaque capillaire.
La détection directe des protéines est effectuée à 200 nm côté cathode. Les capillaires sont ensuite lavés par une solution de lavage, puis par le
tampon d’analyse. Avec le tampon utilisé à pH basique, l’ordre de migration des protéines sériques est le suivant : gamma globulines,
bêta-2 globulines, bêta-1 globulines, alpha-2 globulines, alpha-1 globulines et albumine. Chaque fraction contient un ou plusieurs constituants
sériques.

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS MINICAP PROTEIN(E) 6

COMPOSANTS RÉF. N° 2203 RÉF. N° 2223*

Tampon (prêt à l’emploi) 2 flacons de 250 mL 6 flacons de 250 mL
Solution de lavage (solution concentrée) 1 flacon de 25 mL 3 flacons de 25 mL
Cupules réactif 1 sachet de 125 3 sachets de 125
Filtres 3 filtres 3 filtres
Boîtes pour cupules usagées 4 boîtes 12 boîtes
Couvercles pour boîtes cupules usagées 4 couvercles 12 couvercles
* MINICAP PROTEIN(E) 6 MAXI-KIT
POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS :
Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice.
LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION.

1. TAMPON
Préparation
Le tampon est prêt à l’emploi. Il contient : tampon basique, pH 9,9 ; composants sans danger aux concentrations utilisées nécessaires pour des
performances optimales.
Utilisation
Tampon pour l’analyse des protéines sériques en électrophorèse capillaire.
Conservation, stabilité et signes de détérioration
Le tampon doit être conservé à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration
indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de tampon. Ne pas stocker le tampon à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur.
NOTE : Si le tampon d’analyse a été conservé à 2 - 8 °C, il convient de le laisser atteindre la température ambiante avant toute utilisation.
NE PAS CONGELER.
Éliminer le tampon s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne, d’un précipité ou de particules en
suspension.

2. SOLUTION DE LAVAGE
Préparation
Le flacon de solution de lavage concentrée doit être complété à 250 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée.
ATTENTION : La solution de lavage contient de la soude caustique. Solution corrosive. Provoque de graves brûlures. Conserver hors de la
portée des enfants. En cas de contact avec les yeux, laver immédiatement et abondamment avec de l’eau et consulter un spécialiste.
Enlever immédiatement tout vêtement souillé ou éclaboussé. Porter des gants appropriés et un appareil de protection des yeux / du visage.
Utilisation
Pour le lavage des capillaires après séparation électrophorétique des protéines.
Conservation, stabilité et signes de détérioration
Les solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter
l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage.
La solution diluée est stable pendant 3 mois.
Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.

-1- NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français

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3. CUPULES RÉACTIF
Utilisation
Cupules à usage unique pour la dilution et la migration des échantillons de sérum par l’automate. À placer sur le chargeur de MINICAP. Une cupule
est destinée à l’analyse de 2 échantillons.
ATTENTION : Manipuler avec précaution les cupules réactif contenant des échantillons biologiques.

4. FILTRES
Utilisation
Filtres à usage unique pour la filtration du tampon, de la solution de lavage reconstituée et de l’eau distillée ou déminéralisée (utilisée pour le rinçage
des capillaires).
IMPORTANT : Remplacer systématiquement les trois filtres à chaque renouvellement de kit.
Visser un filtre sur chaque embout de tuyau plongeant dans les flacons de tampon, de solution de lavage et d’eau distillée ou déminéralisée. Lors de
la mise en place des filtres sur l’appareil, rincer les connecteurs et les tuyaux à l’eau distillée ou déminéralisée. Les filtres usagés doivent aussi être
rincés avant leur élimination.
Le filtre destiné au tampon d’analyse doit être utilisé pour la filtration de la totalité des deux flacons de tampon prêt à l’emploi ; les deux autres filtres
sont destinés à la filtration de la solution de lavage reconstituée et de l’eau distillée ou déminéralisée (solution de rinçage).
Conservation
Avant utilisation, les filtres doivent être conservés dans leur emballage hermétiquement clos dans un endroit sec et à température ambiante ou au
réfrigérateur.

5. BOÎTES POUR CUPULES USAGÉES

Utilisation
Boîtes destinées à la récupération automatique des cupules réactif usagées sur MINICAP. À positionner sur MINICAP à l’emplacement prévu à cet
effet.
ATTENTION : Manipuler avec précaution les boîtes contenant les cupules réactif usagées contenant des échantillons biologiques.

6. COUVERCLES POUR BOÎTES POUR CUPULES USAGÉES

Utilisation
Couvercles destinés à fermer les boîtes pour cupules usagées.

RÉACTIFS NÉCESSAIRES
1. EAU DISTILLÉE OU DÉMINERALISÉE
Utilisation
Pour le rinçage des capillaires de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA.
Il est recommandé d’utiliser de l’eau distillée ou déminéralisée filtrée (sur filtre de porosité ≤ 0,45 µm).
Afin d’éviter les contaminations microbiennes, renouveler l’eau chaque jour. En cas de conservation prolongée, ajouter 35 µL/L de ProClin 300.
IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.

2. CAPICLEAN
Présentation
Le flacon de solution enzymatique concentrée CAPICLEAN (SEBIA, référence N° 2051 : 1 flacon de 12 mL) contient : enzymes protéolytiques,
surfactants et composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.
ATTENTION : La solution CAPICLEAN peut entraîner une irritation ou des brûlures cutanées, oculaires ou des muqueuses.
Utilisation
Pour le nettoyage hebdomadaire des capillaires et de l'aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA.
Voir la notice d’utilisation de CAPICLEAN, SEBIA.
IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de CAPICLEAN sur MINICAP, il est indispensable d’utiliser une étiquette code-barres destinée à identifier
le tube à hémolyse servant de support au microtube contenant la solution CAPICLEAN diluée (couper le bouchon du microtube lors de son utilisation).
Conservation, stabilité et signes de détérioration
CAPICLEAN doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon. NE PAS
CONGELER.
Il ne doit pas y avoir de précipité. Éliminer CAPICLEAN s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.
Pour une utilisation différée, placer le tube contenant la solution diluée au réfrigérateur. Il doit être utilisé dans la journée.

3. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)

Préparation
Préparer une solution d’hypochlorite de sodium (eau de Javel) à 9° chlorométrique (2 à 3 % de chlore) à partir d’une dose concentrée de 250 mL à
36° chlorométrique (9,6 % de chlore) diluée à 1 litre (volume final) dans de l’eau froide distillée ou déminéralisée.
Utilisation
Pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA (entretien hebdomadaire afin d’éliminer
toute protéine adsorbée sur l’aiguille).
Voir le manuel d’instructions de MINICAP, SEBIA.
• Déposer 500 µL de solution d’hypochlorite de sodium, préparée précédemment, dans un microtube.
• Couper le bouchon du microtube.
• Placer le microtube, positionné sur un tube à hémolyse neuf qui servira de support (identifié avec une étiquette code-barres spécifique de la solution
d’hypochlorite de sodium), en position 1 sur le carrousel de MINICAP.
• Placer une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message apparaît).
• Introduire le carrousel dans le système MINICAP.
• Fermer les portes de MINICAP, le cycle de nettoyage démarre automatiquement.

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IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de la solution d’hypochlorite de sodium sur MINICAP, il est indispensable d’utiliser une étiquette code-
barres destinée à identifier le tube à hémolyse servant de support au microtube contenant la solution (couper le bouchon du microtube lors de son
utilisation).
Conservation, stabilité et signes de détérioration
La solution d’hypochlorite de sodium à 9° chlorométrique peut être conservée 1 an à température ambiante dans un récipient en plastique fermé
hermétiquement, à l’abri des rayonnements solaires et de toute source de chaleur ou d’ignition et à l’écart des acides et de l’ammoniaque.

4. SOLUTION DE LAVAGE MINICAP

Préparation
Le flacon de solution de lavage concentrée (SEBIA, référence N° 2252 : 1 flacon de 25 mL) doit être complété à 250 mL avec de l’eau distillée ou
déminéralisée.
ATTENTION : La solution de lavage contient de la soude caustique. Solution corrosive. Provoque de graves brûlures. Conserver hors de la
portée des enfants. En cas de contact avec les yeux, laver immédiatement et abondamment avec de l’eau et consulter un spécialiste.
Enlever immédiatement tout vêtement souillé ou éclaboussé. Porter des gants appropriés et un appareil de protection des yeux / du visage.
Utilisation
Pour le lavage des capillaires de MINICAP.
Conservation, stabilité et signes de détérioration
Les solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter
l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon.
La solution diluée est stable pendant 3 mois.
Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES

1. Système d’électrophorèse capillaire MINICAP SEBIA, référence N° 1230.

2. Carrousels, fournis avec le système MINICAP.
3. Bidons plastiques fournis avec le système MINICAP : flacon pour le rinçage des capillaires (à remplir avec de l’eau déminéralisée ou distillée) et
flacon de vidange.
4. Cupules réactif MINICAP SEBIA (par 125), référence N° 2280.
5. Boîtes pour cupules réactif MINICAP usagées SEBIA (par 20), référence N° 2285.

ÉCHANTILLONS À ANALYSER

Prélèvement et conservation des échantillons

L’analyse se fait sur sérums frais. Les sérums doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques.
Les échantillons peuvent être conservés au maximum 10 jours au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).
Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons rapidement (au maximum dans les 8 heures après le prélèvement). Les sérums
congelés sont stables 1 mois.
NOTE : Ne pas conserver les sérums à température ambiante.
Les protéines des échantillons conservés entre 2 et 8 °C, se dégradent, en particulier le complément C3.
Un sérum conservé environ 10 jours entre 2 et 8 °C présente une fraction bêta-2 qui diminue progressivement et peut apparaître déformée (avec
apparition de petits pics supplémentaires du côté gamma et / ou bêta-1 suite à la dégradation du complément C3) et une fraction alpha-2 dont la forme
peut être légèrement modifiée.
Au-delà de 10 jours, la fraction bêta-1 se déforme en s’élargissant, et la fraction bêta-2 disparaît presque totalement.
Préparation des échantillons
Utiliser directement les échantillons de sérum non dilués.
Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un
cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Après remise à l’état liquide, ces sérums peuvent être analysés directement.
De même, les sérums contenant une immunoglobuline polymérisée peuvent être utilisés directement, sans traitement préalable.
Il est recommandé d’observer l’aspect du sérum avant l’analyse (cas d’hémolyse, de présence de cryoglobulines ou de turbidité).
Échantillons à éviter
• Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé. L’hémolyse peut entraîner un dédoublement de la fraction alpha-2.
• Ne pas utiliser des échantillons de sérum anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, les fractions bêta seraient fortement modifiées.
• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène migre en position bêta-2 (pic épaulé en bêta-2) ; sa présence dans certains échantillons (cas de plasma,
de sérum mal défibriné ou de sérum de patient sous traitement anticoagulant) peut fausser l’interprétation de l’analyse (confusion avec une bande
monoclonale migrant en position bêta-2 ou augmentation du pourcentage de cette fraction).

TECHNIQUE

Le système MINICAP est un instrument multiparamétrique automatique qui assure l’analyse des protéines sériques sur 2 capillaires en parallèle selon
les étapes suivantes :
• lecture des codes-barres des tubes primaires (jusqu’à 28) et du carrousel ;
• dilution des échantillons dans les cupules réactif à partir des tubes primaires ;
• lavage des capillaires ;
• injection des échantillons dilués ;
• séparation et détection directe des protéines dans les capillaires.

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Les étapes manuelles sont les suivantes :

• mise en place des tubes primaires sur le carrousel ;
• introduction dans le système MINICAP ;
• récupération des tubes après analyse ;
• récupération et fermeture des boîtes pour cupules usagées.

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE

1. Mettre MINICAP et l’ordinateur de contrôle sous tension.
2. Pour le démarrage, placer au moins une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule
réactif, un message apparaît).
3. Démarrer le logiciel, l’automate est alors automatiquement initialisé.
4. Utiliser le kit MINICAP PROTEIN(E) 6 avec le programme d’analyses "PROTEIN(E) 6". Pour sélectionner le programme d’analyses
"PROTEIN(E) 6" et mettre en place le flacon de tampon MINICAP PROTEIN(E) 6 sur l’appareil, lire attentivement le manuel d’instructions de
MINICAP.
5. Le carrousel peut contenir 28 tubes. Placer jusqu’à 28 tubes primaires sur le carrousel, en commençant par la position No. 1, et en prenant
bien soin de laisser le code-barres de chaque tube en face de sa fenêtre de lecture.
IMPORTANT : Si le premier tube à analyser n’est pas en position No. 1, l’analyse ne peut pas démarrer (en cas d’absence de tube à analyser
en position No. 1, un message apparaît).
NOTE : Lors de l’utilisation d’un sérum de contrôle, il est indispensable d’utiliser l’étiquette code-barres spécifique prévue à cet effet.
6. Placer les cupules réactif neuves sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message apparaît).
7. Placer une boîte neuve pour cupules usagées dans MINICAP à l’emplacement prévu à cet effet.
8. Introduire le carrousel dans le système MINICAP.
9. Fermer les portes de MINICAP, l’analyse démarre automatiquement.
10. Après analyse, retirer le carrousel afin d’enlever les tubes déjà analysés.
11. Retirer avec précaution la boîte contenant les cupules réactif usagées, la fermer hermétiquement à l’aide du couvercle destiné à cet effet et
la jeter.
ATTENTION : Manipuler avec précaution les boîtes contenant les cupules réactif usagées contenant des échantillons biologiques.

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES

1. Lecture des codes-barres des tubes primaires d’échantillon et du carrousel.
2. Dilution des sérums dans le tampon d’analyse, avec rinçage de l’aiguille de prélèvement entre chaque dilution.
3. Lavage des capillaires.
4. Injection des échantillons dilués dans les capillaires.
5. Migration à voltage constant en température régulée par effet Peltier, pendant environ 4 minutes.
6. Lecture à 200 nm et apparition simultanée du profil protéique sur l’écran de l’ordinateur.
NOTE : Ces étapes sont effectuées les unes après les autres pour les 2 premiers tubes analysés : les profils correspondant aux tubes analysés sont
obtenus après 10 minutes. Pour les tubes suivants, les phases 1 et 2 (lecture des codes-barres et dilution des sérums) se font en temps masqué
pendant l’analyse des 2 tubes précédents.

II. TRAITEMENT DES DONNÉES

Dès la fin de l’analyse, la quantification relative des fractions est automatiquement effectuée et les profils peuvent être analysés. À partir de la
concentration totale en protéines de l’échantillon, il est alors possible de calculer les concentrations de chaque fraction.
Les profils électrophorétiques sont analysés visuellement pour détecter les anomalies.
Les profils sont présentés par défaut en mode redessiné : ce mode rapproche la fraction alpha-1 du pic d'albumine.
En option, le mode standard permet d'afficher la courbe initiale ou courbe brute.

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSE

Une procédure d’extinction doit être lancée par l’opérateur en fin de session de travail afin de conserver les capillaires dans des conditions optimales.
IMPORTANT : Placer une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message
apparaît).

IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFS

L’automate MINICAP permet une gestion automatique des réactifs.
IMPORTANT : Il est nécessaire de suivre la procédure prévue pour le changement des flacons et de respecter le code couleur flacon – raccord rapide
lors de chaque remplacement de flacon.
L’apparition de la fenêtre de gestion des réactifs indique qu’il est nécessaire de changer un ou plusieurs réactifs :
• mise en place d’un nouveau flacon de tampon d’analyse et / ou,
• remplissage du flacon de lavage avec la solution de lavage reconstituée et / ou,
• remplissage du flacon de rinçage par de l’eau déminéralisée ou distillée filtrée et / ou,
• vidange du flacon de vidange.

IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.

VOIR LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

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RÉSULTATS

Contrôle Qualité
À chaque début de session de travail, il est recommandé d’inclure une série d’analyses avec un sérum de contrôle.

Valeurs
La détection directe sur le capillaire à 200 nm permet de définir les concentrations relatives (pourcentages) de chaque fraction.
Les valeurs normales (moyenne ± 2 écarts types) pour chaque fraction sérique ont été établies à partir d’une population de 246 adultes
normolipémiques (hommes et femmes), en bonne santé :

MINICAP PROTEIN(E) 6
Albumine 55,8 - 66,1 %
Alpha-1 globulines 2,9 - 4,9 %
Alpha-2 globulines 7,1 - 11,8 %
Bêta-1 globulines 4,7 - 7,2 %
Bêta-2 globulines 3,2 - 6,5 %
Gamma globulines 11,1 - 18,8 %

Il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales.

NOTE : Les valeurs normales ont été obtenues avec les paramètres d’intégration par défaut du logiciel (lissage 2 et dérive automatique).

Interprétation
Une déformation du profil par rapport à la normale est le signe d’une anomalie, notamment l’apparition d’un pic fin supplémentaire dans la zone des
gammaglobulines.
Le complément C4 migre entre les zones bêta-1 et bêta-2 ; la CRP migre en position bêta-2, voir PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES.
La présence d’un composant monoclonal dans le sérum peut être suspectée si le message d’alerte suivant apparaît à l’écran "Warning: Migration
centering is out of range" ou si le profil protéique est retardé ou déformé.
Il conviendra d’effectuer un traitement réducteur au bêta-mercaptoéthanol et de renouveler l’analyse pour confirmer la présence d’une paraprotéine
dans l’échantillon. Dans ce cas, préparer une solution réductrice en ajoutant 1 % de bêta-mercaptoéthanol dans le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587,
1 flacon de 5 mL). Prétraiter l’échantillon par cette solution en ajoutant 100 µL de solution réductrice à 300 µL de sérum pur. Agiter au vortex et laisser
en contact 15 minutes puis suivre la technique.
IMPORTANT : Après traitement réducteur au bêta-mercaptoéthanol, l’échantillon doit être analysé immédiatement ; il ne doit alors pas y avoir de tube
en attente d’analyse dans le système MINICAP.
Tout aspect monoclonal ou oligoclonal doit être confirmé à l’aide :
- du kit d’immunotypage SEBIA, CAPILLARYS IMMUNOTYPING ou,
- des kits d’immunofixation SEBIA, HYDRAGEL IF.
Pour des informations complémentaires sur l’interprétation des profils obtenus, voir BIBLIOGRAPHIE.

Zone alpha-2 :
• Certains échantillons peuvent présenter un dédoublement selon le phénotype d’haptoglobine, voir PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES.

Interférences et limites
Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER.
Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne
peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales.
Dans le cas d’une hypergammaglobulinémie et selon sa position dans le fond polyclonal, la présence d’une protéine monoclonale peut ne pas être
détectée. En cas de déformation, même très légère, du profil électrophorétique (détectée en lissage 0), il est alors recommandé de réaliser un
immunotypage, après traitement réducteur de l’échantillon et si un doute persiste, de confirmer le résultat obtenu par une technique d’immunofixation
sur gel d’agarose.

Assistance technique
Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux.
Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès
du Service Technique SEBIA.

PERFORMANCES

Les résultats suivants, obtenus avec le kit MINICAP PROTEIN(E) 6 sur le système MINICAP par analyse quantitative indiquent une très bonne
répétabilité et reproductibilité du kit MINICAP PROTEIN(E) 6 pour tous les aspects testés, avec un coefficient de variation moyen de l’ordre de 2,1 %
sur les pourcentages de chaque fraction.
Les pourcentages des différentes fractions protéiques ont été obtenus avec les paramètres d’intégration par défaut du logiciel (lissage 2 et dérive
automatique).

Répétabilité intra-séquence et inter-analyses

Quatre sérums différents ont été analysés en parallèle sur deux systèmes MINICAP avec le kit MINICAP PROTEIN(E) 6 et avec le même lot de
tampon d’analyse. Chaque sérum a été analysé 5 fois simultanément sur les 2 capillaires du système MINICAP. Les moyennes, écart-types (ET) et
coefficients de variation (CV) (n = 10) ont été calculés pour chaque échantillon sur chaque système MINICAP.
Le tableau suivant présente les valeurs moyennes (en %), écart-types (ET) et coefficients de variation (CV) obtenus pour chaque fraction protéique
des 4 sérums testés sur les 2 systèmes MINICAP :

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Fraction Albumine Alpha 1 Alpha 2 Bêta 1 Bêta 2 Gamma

Sérum A : système No. 1 – système No. 2
MOYENNE (%) 59,2 - 58,6 5,0 - 5,2 8,6 - 8,6 4,9 - 5,1 4,5 - 4,5 17,8 - 18,0
ET 0,53 - 0,74 0,14 - 0,16 0,28 - 0,16 0,21 - 0,15 0,11 - 0,13 0,29 - 0,30
CV (%) 0,9 - 1,3 2,8 - 3,0 3,2 - 1,9 4,3 - 3,0 2,5 - 2,9 1,6 - 1,7
Sérum B : système No. 1 – système No. 2
MOYENNE (%) 60,7 - 59,7 3,5 - 3,6 8,9 - 9,2 6,7 - 7,1 5,2 - 5,0 15,0 - 15,5
ET 0,55 - 0,45 0,09 - 0,10 0,23 - 0,15 0,18 - 0,11 0,17 - 0,15 0,20 - 0,24
CV (%) 0,9 - 0,8 2,7 - 2,7 2,5 - 1,6 2,7 - 1,5 3,3 - 3,0 1,3 - 1,6
Sérum C : système No. 1 – système No. 2
MOYENNE (%) 55,4 - 54,1 3,6 - 3,7 10,1 - 10,5 5,7 - 5,8 3,8 - 3,9 21,3 - 22,1
ET 0,73 - 0,49 0,14 - 0,14 0,27 - 0,16 0,13 - 0,05 0,11 - 0,13 0,45 - 0,25
CV (%) 1,3 - 0,9 3,8 - 3,8 2,7 - 1,5 2,3 - 0,9 2,8 - 3,3 2,1 - 1,1
Sérum F : système No. 1 – système No. 2
MOYENNE (%) 60,9 - 60,9 4,7 - 4,2 9,0 - 9,6 6,3 - 6,2 4,5 - 4,5 14,6 - 14,7
ET 0,38 - 0,46 0,10 - 0,10 0,21 - 0,18 0,18 - 0,13 0,14 - 0,12 0,20 - 0,20
CV (%) 0,6 - 0,7 2,2 - 2,5 2,3 - 1,9 2,9 - 2,1 3,0 - 2,7 1,4 - 1,4

Reproductibilité inter-analyses
Cinq sérums différents ont été analysés sur le système MINICAP avec le kit MINICAP PROTEIN(E) 6. Ces sérums ont été analysés 10 fois
successivement sur 3 systèmes MINICAP avec le même lot de tampon d’analyse. Les moyennes, écart-types (ET) et coefficients de variation (CV)
(n = 10) ont été calculés pour chaque sérum, pour chaque fraction et chaque système.
Le tableau suivant présente les limites des valeurs moyennes, ET et CV (%) obtenus pour les 5 échantillons testés et un coefficient de variation moyen
calculé à partir de tous les coefficients de variation (n = 15) :

FRACTION MOYENNE (%) ET CV (%) CV MOYEN (%)

Albumine 52,4 - 61,1 0,21 - 0,60 0,4 - 1,0 0,7 %
Alpha 1 3,4 - 4,9 0,06 - 0,28 1,8 - 6,6 3,1 %
Alpha 2 9,1 - 12,5 0,09 - 0,29 0,8 - 3,0 1,4 %
Bêta 1 5,4 - 6,7 0,05 - 0,17 1,0 - 2,7 1,9 %
Bêta 2 3,5 - 6,8 0,04 - 0,16 1,3 - 3,7 2,4 %
Gamma 14,1 - 18,5 0,06 - 0,44 0,4 - 2,4 1,4 %

Reproductibilité inter-systèmes
Cinq sérums différents ont été analysés sur le système MINICAP avec le kit MINICAP PROTEIN(E) 6. Ces sérums ont été analysés 10 fois
successivement sur 3 systèmes MINICAP avec le même lot de tampon d’analyse. Les moyennes, écart-types (ET) et coefficients de variation (CV)
(n = 30) ont été calculés pour chaque sérum, pour chaque fraction et sur l’ensemble des 3 systèmes.
Le tableau suivant présente les limites des valeurs moyennes, ET et CV (%) obtenus pour les 5 échantillons testés sur les 3 systèmes et un coefficient
de variation moyen calculé à partir de tous les coefficients de variation (n = 5) :

FRACTION MOYENNE (%) ET CV (%) CV MOYEN (%)

Albumine 52,6 - 60,5 0,39 - 1,00 0,7 - 1,7 1,2 %
Alpha 1 3,5 - 4,8 0,13 - 0,31 2,9 - 7,0 4,4 %
Alpha 2 9,5 - 12,2 0,12 - 0,36 1,0 - 3,8 2,7 %
Bêta 1 5,4 - 6,5 0,10 - 0,31 1,8 - 4,9 3,1 %
Bêta 2 3,7 - 6,8 0,13 - 0,21 1,9 - 5,6 3,7 %
Gamma 14,2 - 18,2 0,15 - 0,45 1,0 - 3,0 2,0 %

Exactitude
L’analyse de 60 échantillons différents, normaux et pathologiques, par électrophorèse capillaire sur le système MINICAP avec le kit MINICAP
PROTEIN(E) 6 et sur un autre système d’électrophorèse capillaire disponible dans le commerce, montre une bonne corrélation entre les deux
systèmes d’analyse, avec pour l'ensemble des six fractions protéiques, une sensibilité moyenne de 92.1 % et une spécificité moyenne de 94.2 % par
rapport à cette dernière technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986).
Le tableau suivant présente les résultats de régression linéaire, y = MINICAP PROTEIN(E) 6 :

Limites des % MINICAP

Fraction Coefficient de corrélation Intersection avec l’axe y Pente
PROTEIN(E) 6
Albumine 0,996 0,046 0,985 37,4 - 74,0
Alpha 1 0,987 0,032 1,012 3,1 - 13,0
Alpha 2 0,993 0,347 1,024 7,8 - 23,5
Bêta 1 0,944 0,686 0,911 3,1 - 10,2
Bêta 2 0,986 -0,232 1,035 1,9 - 14,4
Gamma 0,999 0,222 0,986 3,5 - 34,7

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

Sensibilité
Un sérum pathologique avec une protéine monoclonale à 1,03 g/L est dilué en série : migration des dilutions sur système MINICAP avec le kit
MINICAP PROTEIN(E) 6. La plus forte dilution permettant de voir la bande monoclonale est 1/4. La plus faible concentration détectée d’une bande
monoclonale est donc de 0,26 g/L pour cet échantillon.
NOTE : Selon la position de la bande monoclonale et le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines, le seuil de détection d’une paraprotéine
peut varier.

Linéarité
La technique MINICAP PROTEIN(E) 6 présente une parfaite linéarité après analyse d’un mélange à concentrations variables d’albumine (52 g/L) et
de gammaglobulines (31 g/L).

BIBLIOGRAPHIE

(1) Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel
electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205-213 (1996).
(2) Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184-1190 (1998).
(3) Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997).
(4) Jenkins MA and Guerin MD. Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis. Ann. Clin. Biochem., 32, 493-497 (1995).
(5) Jenkins MA et al. Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis : prospective analysis of 1000 specimens. J. Chromatogr.
B, 672, 241-251 (1995).
(6) Jenkins MA and Guerin MD. Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis : comparison with established techniques. J.
Chromatogr. B, 699, 257-268 (1997).
(7) Jenkins MA and Ratnaike S. Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory. J. Biochem.
Biophys. Methods, 41, 31-47 (1999).
(8) Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary
electrophoresis. Electrophoresis, 18, 1775-1780 (1997).
(9) Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995).
(10) Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715-1723
(1997).
(11) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.
(12) Wijnen PA and van Dieijen-Visser M. Capillary Electrophoresis of serum proteins : Reproducibility, comparison with agarose gel electrophoresis
and a review of the literature. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 34, 535-545 (1996).

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INTENDED USE

The MINICAP PROTEIN(E) 6 kit is designed for the separation of human serum proteins in alkaline buffer (pH 9.9) by capillary electrophoresis with
the MINICAP system.
Normal serum proteins separate into six major fractions.
The MINICAP performs all sequences automatically to obtain a protein profile for qualitative or quantitative analysis. The proteins, separated in silica
capillaries, are directly detected at an absorbance of 200 nm. The electrophoregrams can be interpreted visually to screen for any pattern
abnormalities. Direct detection provides accurate relative quantification of individual protein fractions.

For In Vitro Diagnostic Use.

PRINCIPLE OF THE TEST (1-11)

Protein electrophoresis is a well established technique routinely used in clinical laboratories for screening samples for protein abnormalities (1, 2, 3, 10).
The MINICAP has been developed to provide complete automation of this testing with fast separation and good resolution. In many respects, the
methodology can be considered as an intermediary type of technique between classical zone electrophoresis and liquid chromatography (1, 3, 8, 11).
The MINICAP System uses the principle of capillary electrophoresis in free solution. With this technique, charged molecules are separated by their
electrophoretic mobility in an alkaline buffer with a specific pH in tubes with internal diameter of 100 µm. Separation also occurs according to the
electrolyte pH and electroosmotic flow.
The MINICAP System has 2 capillaries functioning in parallel allowing 2 simultaneous analyses. A sample dilution with buffer is prepared and injected
by aspiration at the anodic end of the capillary. A high voltage protein separation is then performed and direct detection of the proteins is made at
200 nm at the cathodic end of the capillary. The capillaries are immediately washed with a Wash Solution and prepared for the next analysis with buffer.
Proteins are detected in the following order : gamma globulins, beta-2 globulins, beta-1 globulins, alpha-2 globulins, alpha-1 globulins and albumin
with each zone containing one or more proteins.

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE MINICAP PROTEIN(E) 6 KITS

ITEMS PN 2203 PN 2223*

Buffer (ready to use) 2 vials, 250 mL each 6 vials, 250 mL each
Wash solution (stock solution) 1 vial, 25 mL 3 vials, 25 mL each
Reagent cups 1 pack of 125 3 packs of 125 each
Filters 3 filters 3 filters
Bins for used cups 4 bins 12 bins
Lids for bins for used cups 4 lids 12 lids

* MINICAP PROTEIN(E) 6 MAXI-KIT

FOR OPTIMAL RESULTS :
All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions.
PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY.

1. BUFFER
Preparation
The buffer is ready to use. It contains : alkaline buffer pH 9.9 ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance.
Use
Buffer for protein analysis in capillary electrophoresis.
Storage, stability and signs of deterioration
Store the buffer at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). It is stable until the expiration date indicated on the kit package or buffer
vial labels. Avoid storage close to a window or to a heat source.
NOTE : When analysis buffer is stored between 2 to 8 °C, it is recommended to allow reagent to come to room temperature prior to use.
DO NOT FREEZE.
Discard buffer if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination.

2. WASH SOLUTION
Preparation
The vial of the stock wash solution should be diluted up to 250 mL with distilled or deionized water.
WARNING : The wash solution contains sodium hydroxide. Corrosive solution. Causes severe burns. Keep out of reach of children. In case
of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice. Take off immediately all contaminated clothing. Wear
suitable clothes and eye / face protection.
Use
For washing the capillaries after protein electrophoretic separation.
Storage, stability and signs of deterioration
Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. The stock wash solution is stable until the
expiration date indicated on the kit or wash solution vial label.
Working wash solution is stable for 3 months.
Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination.

-8- SEBIA INSTRUCTIONS - English

 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

3. REAGENT CUPS
Use
Single use cups for serum samples dilution and migration on the automated instrument. To place on the automated loading system for cups of
MINICAP. One cup is intended for the analysis of 2 serum samples.
WARNING : Reagent cups with biological samples have to be handled with care.

4. FILTERS
Use
Disposable filters for filtration of analysis buffer, working wash solution and distilled water (used for capillaries rinsing).
IMPORTANT : When kit replacement, change systematically all the three filters.
Screw one filter at the connector situated at the extremity of each tube plunging in vials of buffer, wash solution and distilled or deionized water. When
setting filters on MINICAP system, rinse the connectors and the tubes with distilled or deionized water. Used filters must be rinsed before discard.
The filter intended for analysis buffer must be used for filtration of both buffer vials ; the two other filters are intended for filtration of working wash
solution and for distilled or deionized water (for capillary rinsing).
Storage
Before use, store the filters in their sealed package in a dry place at room temperature or refrigerated.

5. BINS FOR USED CUPS

Use
Bins intended for automated collection of used reagent cups in MINICAP. To place in MINICAP at the location intended for this purpose.
WARNING : Bins containing used reagent cups with biological samples have to be handled with care.

6. LIDS FOR USED CUPS BINS

Use
Lids to close the bins containing used cups.

REAGENTS REQUIRED
1. DISTILLED OR DEIONIZED WATER
Use
For capillaries rinsing in automated system MINICAP, SEBIA, for capillary electrophoresis.
It is recommended to filter distilled or deionized water on 0.45 µm filter before use.
To prevent microbial proliferation, change the water every day. In case of longer storage, add 3.5 µL/dL of ProClin 300.
IMPORTANT : Before filling the rinse container, it is recommended to wash it with plenty of distilled or deionized water.

2. CAPICLEAN
Composition
The vial of CAPICLEAN concentrated solution (SEBIA, PN 2051, 12 mL) contains : proteolytic enzymes, surfactants and additives nonhazardous at
concentrations used, necessary for optimum performances.
WARNING : The CAPICLEAN solution may cause irritation or burns to skin, eyes and mucous membranes.
Use
For weekly capillaries and sample probe cleaning in automated system MINICAP, SEBIA, for capillary electrophoresis.
See the instruction sheets of CAPICLEAN, SEBIA.
IMPORTANT : For optimal use of the CAPICLEAN solution with the MINICAP System, it is necessary to use one bar code label intended to identify
the hemolysing tube holding the microtube which contains the diluted CAPICLEAN solution (cut the cap of the microtube before using it).
Storage, stability and signs of deterioration
Store CAPICLEAN refrigerated (2 – 8 °C). It is stable until the expiration date indicated on the vial label. DO NOT FREEZE.
CAPICLEAN must be free of precipitate. Discard CAPICLEAN if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination.
For later use, store the tube containing the diluted solution at 2 – 8 °C. It must be used within the day.

3. SODIUM HYPOCHLORITE SOLUTION (for sample probe cleaning)

Preparation
Prepare a 9° chlorinated sodium hypochlorite solution (2 % to 3 % chloride) by diluting 250 mL 36° chlorinated concentrated solution (9.6 % chloride)
to 1 liter with cold distilled or deionized water.
Use
For the sample probe cleaning in the MINICAP System (weekly maintenance in order to eliminate adsorbed proteins from the probe).
See the SEBIA MINICAP instruction manual.
• Apply in a microtube 500 µL of diluted chlorinated solution previously prepared.
• Cut the cap of the microtube.
• Place the microtube, located on a new hemolysing tube used as a support (identified with one bar code label specific to the sodium hypochlorite
solution) into position No. 1 on the rotating sampler of MINICAP.
• Position a new reagent cup on the automated loading system for cups of MINICAP (a message will be displayed if the reagent cup is missing).
• Slide the rotating sampler into the MINICAP System.
• Close the doors of the MINICAP System, the cleaning sequence starts automatically.
IMPORTANT : For optimal use of the sodium hypochlorite solution with the MINICAP System, it is necessary to use one bar code label intended to
identify the hemolysing tube holding the microtube which contains the solution (cut the cap of the microtube before using it).

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

Storage, stability and signs of deterioration

Store the working chlorinated solution at room temperature in a closed container, it is stable for 1 year. Avoid storage in sunlight, close to heat and
ignition source, and to acids and ammonia.

4. MINICAP WASH SOLUTION

Preparation
The vial of the stock MINICAP Wash Solution (SEBIA, PN 2252, 1 vial, 25 mL) should be diluted up to 250 mL with distilled or deionized water.
WARNING : The wash solution contains sodium hydroxide. Corrosive solution. Causes severe burns. Keep out of reach of children. In case
of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice. Take off immediately all contaminated clothing. Wear
suitable clothes and eye / face protection.
Use
For washing the MINICAP capillaries.
Storage, stability and signs of deterioration
Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. The stock wash solution is stable until the
expiration date indicated on the kit or wash solution vial label.
Working wash solution is stable for 3 months.
Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination.

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED

1. MINICAP system, SEBIA, PN 1230.

2. Rotating samplers supplied with MINICAP.
3. Container Kit supplied with MINICAP : Rinse (to fill with distilled or deionized water) and waste container.
4. MINICAP Reagent cups, SEBIA (125 units), PN 2280.
5. Bins for used cups, SEBIA (20 units), PN 2285.

SAMPLES FOR ANALYSIS

Sample collection and storage

Fresh serum samples are recommended for analysis. Sera must be collected following established procedures used in clinical laboratory testing.
Samples can be stored up to 10 days between 2 and 8 °C. For longer storage, samples should be frozen within 8 hours of collection. Frozen sera are
stable for one month.
NOTE : Samples should not be stored at room temperature!
Protein degradation, and in particular C3 complement degradation, is very sample dependent for sera stored between 2 to 8 °C. With degradation, the
beta-2 fraction progressively decreases and may appear distorted with small fractions appearing in the gamma zone and / or in beta-1 fraction. Alpha–2
may also appear slightly distorted.
After 10-day refrigerated storage (2 to 8 °C), the beta-1 fraction may appear increased with no beta-2 fraction present.
Sample preparation
Use undiluted serum samples.
Upon storage at 2 to 8 °C or after freezing, some sera (particularly those containing cryoglobulin or cryogel) may become viscous or develop turbidity.
At room temperature, these samples can be directly analyzed. Samples containing a polymerized immunoglobulin may be used without any treatment.
It is advised to observe the serum aspect before analysis (cases of hemolysis, cryoglobulins or turbidity).
Samples to avoid
• Do not use hemolysed serum samples. Hemolysis induces a double alpha-2 zone.
• Avoid aged, improperly stored serum samples, beta-2 fraction would be decreased.
• Avoid plasma samples. Fibrinogen migrates in beta-2 position (shoulder on beta-2) ; when it is present in some samples (plasma, serum not totally
defibrinized or patient with anticoagulant treatment), fibrinogen may interfere on the analysis and makes interpretation inacurate (suspicion of
monoclonal band or beta-2 fraction increase).

PROCEDURE

The MINICAP system is a multiparameter instrument for serum proteins analysis on 2 parallel capillaries in the following sequence :
• Bar code reading of sample tubes (for up to 28 tubes) and rotating sampler ;
• Sample dilution from primary tubes into reagent cups ;
• Capillary washing ;
• Injection of diluted samples ;
• Protein analysis and direct detection in the capillaries.

The manual steps are :

• Set up the sample tubes in rotating sampler ;
• Set up the rotating sampler in the MINICAP instrument ;
• Remove the sample tubes after analysis ;
• Remove and close the bins for used cups.

PLEASE CAREFULLY READ THE MINICAP INSTRUCTION MANUAL.

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

I. PREPARATION OF ELECTROPHORETIC ANALYSIS

1. Switch on MINICAP instrument and computer.
2. In order to start the instrument, position at least one new reagent cup on the automated loading system for cups of MINICAP (a message will
be displayed if a reagent cup is missing).
3. Set up the software, the instrument automatically starts.
4. The MINICAP PROTEIN(E) 6 kit is intended to run with "PROTEIN(E) 6" analysis program from the MINICAP instrument. To select
"PROTEIN(E) 6" analysis program and place the MINICAP PROTEIN(E) 6 buffer vial in the instrument, please read carefully the MINICAP
instruction manual.
5. The rotating sampler contains 28 positions for sample tubes. Position up to 28 sample tubes on the rotating sampler by starting into position
No. 1 ; the bar code of each tube must be visible in the openings of the rotating sampler.
IMPORTANT : If the first sample tube to analyze is not into position No. 1, the analysis can not start (a message will be displayed if a sample
tube is missing into position No. 1).
NOTE : When using a control serum, it is necessary to use the specific bar code label.
6. Position new reagent cups on the automated loading system for cups of MINICAP (a message will be displayed if the reagent cups are
missing).
7. Position a new bin for used cups in MINICAP at the location intended for this purpose.
8. Slide the rotating sampler into the MINICAP system.
9. Close the doors of the MINICAP System, the analysis starts automatically.
10. After the analysis, remove the rotating sampler with analyzed sample tubes.
11. Take off carefully the bin containing used reagent cups, close it tightly with the corresponding lid and discard it.
WARNING : Bins containing used reagent cups with biological samples have to be handled with care.

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS

1. Bar codes are read on both sample tubes and on rotating sampler.
2. Samples are diluted in buffer and the sample probe is rinsed after each sample.
3. Capillaries are washed.
4. Diluted samples are injected into capillaries.
5. Migration is carried out under constant voltage, controlled by Peltier effect for about 4 minutes.
6. Proteins are detected directly by scanning at 200 nm and an electrophoretic profile appears on the screen of the system.
NOTE : These steps are described for the two first analyzed sample tubes. The electrophoretic patterns appear after 10 minutes. For the following
sample tubes, the two first steps (bar code reading and sample dilution) are made during analysis of the 2 previous samples.

II. RESULT ANALYSIS

At the end of the analysis, relative quantification of individual zones is made automatically and profiles can be analyzed. With the total protein
concentration, the system will calculate each fraction concentration.
The electrophoregrams are interpreted visually for pattern abnormalities.
Electrophoretic profiles are visualized by default using the re-drawn mode : then, the alpha-1 fraction is closer to albumin.
Optionaly, the standard mode allows to visualize the initial pattern obtained with raw data.

PLEASE CAREFULLY READ THE MINICAP INSTRUCTION MANUAL.

III. END OF ANALYSIS SEQUENCE

At the end of each analysis sequence, the operator must start the stand by or shut down procedure of the MINICAP system in order to store capillaries
in optimal conditions.
IMPORTANT : Position at least one new reagent cup on the automated loading system for cups of MINICAP (a message will be displayed if a reagent
cup is missing).

IV. FILLING OF REAGENT CONTAINERS

The MINICAP system has a reagent automatic control.
IMPORTANT : Please refer to the instructions for replacement of reagent containers respecting color code for vials and connectors.
A message will be displayed when it is necessary to perform one of the following tasks :
• place a new buffer vial and / or ;
• fill the container with working wash solution and / or ;
• fill the container with filtered distilled or deionized water for rinsing capillaries and / or ;
• empty the waste container.

IMPORTANT : Before filling the rinse container, it is recommended to wash it with plenty of distilled or deionized water.

PLEASE CAREFULLY READ THE MINICAP INSTRUCTION MANUAL.

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

RESULTS

Quality control
It is advised to include a control serum with each sequence of analysis.

Values
Direct detection at 200 nm in capillaries yields relative concentrations (percentages) of individual protein zones.
Normal values (mean ± 2 SD) for individual major electrophoretic serum protein zones in the MINICAP system have been established from a healthy
population of 246 adults with normal triglycerides levels (men and women) :

MINICAP PROTEIN(E) 6
Albumin 55.8 - 66.1 %
Alpha-1 globulins 2.9 - 4.9 %
Alpha-2 globulins 7.1 - 11.8 %
Beta-1 globulins 4.7 - 7.2 %
Beta-2 globulins 3.2 - 6.5 %
Gamma globulins 11.1 - 18.8 %

It is recommended each laboratory establish its own normal values.

NOTE : Normal values have been established using the standard parameters of the MINICAP software (smoothing 2 and automatic drift).

Interpretation
The C4 complement migrates between beta-1 and beta-2 zones ; CRP migrates in beta-2 position, see ELECTROPHORETIC PATTERNS.
A monoclonal component may be suspected in the serum sample when the following warning signal appears on the screen "Warning : Migration
centering is out of range" or when the protein electrophoretic pattern is delayed or distorted.
To confirm the presence of a monoclonal component in the serum sample, it is necessary to treat the sample with beta-mercaptoethanol and to repeat
the analysis on the sample after reducing treatment. In this case (i) prepare 1 % beta-mercaptoethanol (BME, or 2-mercaptoethanol, 2 ME) in Fluidil
(SEBIA, PN 4587, 1 vial 5 mL), (ii) add 100 µL of this reducing solution to 300 µL neat serum, (iii) vortex and wait for 15 minutes, then follow the
standard procedure.
IMPORTANT : After reducing treatment with beta-mercaptoethanol, the sample must be analyzed without any delay ; no introduced sample tube must
be waiting for analysis in the MINICAP System.
An identification is recommended to characterize monoclonal or oligoclonal components :
- by immunotyping with SEBIA CAPILLARYS IMMUNOTYPING kit or,
- by immunofixation with SEBIA HYDRAGEL IF kits.
As an aid in interpretation of serum protein electrophoregrams, see BIBLIOGRAPHY.

Alpha-2 zone :
• In some samples and according to the haptoglobin phenotype, alpha-2 zone can be split, see ELECTROPHORETIC PATTERNS.

Interference and Limitations

See SAMPLES FOR ANALYSIS.
Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this
method.
In case of a hypergammaglobulinemia, and according to its position in the polyclonal background, a monoclonal component may not be detected.
When a distortion appears on the electrophoretic pattern, even very slight (observed with smoothing 0), it is then recommended to perform an
immunotyping analysis on the sample, after reducing treatment, and if an uncertainty persists, to confirm the result by an immunofixation technique
on agarose gel.

Troubleshooting
Call SEBIA Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instruction for the preparation and storage of materials, and for
the procedure were carefully followed.
Kit reagent Safety Data Sheets and informations on waste products elimination are available from the Technical Service of the supplier.

PERFORMANCE DATA

Results obtained using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure indicate a very good reproducibility for quantitative analysis with a mean CV % of about
2.1 % for each protein fraction.
Results presented below have been obtained using the standard parameters of the MINICAP software (smoothing 2 and automatic drift).

Reproducibility within sequence and between runs

Four (4) different serum samples were run on 2 MINICAP systems using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure and the same lot of analysis buffer.
Each sample was run 5 times on the 2 capillaries of each system. The mean, SD and CV (n = 10) were calculated for each sample, each zone and
each system.
The table shows the values for the 4 tested samples for each protein fraction calculated with the 2 MINICAP systems.

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

Fraction Albumin Alpha 1 Alpha 2 Beta 1 Beta 2 Gamma

Serum A : system No. 1 - system No. 2
MEAN (%) 59.2 - 58.6 5.0 - 5.2 8.6 - 8.6 4.9 - 5.1 4.5 - 4.5 17.8 - 18.0
SD 0.53 - 0.74 0.14 - 0.16 0.28 - 0.16 0.21 - 0.15 0.11 - 0.13 0.29 - 0.30
CV (%) 0.9 - 1.3 2.8 - 3.0 3.2 - 1.9 4.3 - 3.0 2.5 - 2.9 1.6 - 1.7
Serum B : system No. 1 - system No. 2
MEAN (%) 60.7 - 59.7 3.5 - 3.6 8.9 - 9.2 6.7 - 7.1 5.2 - 5.0 15.0 - 15.5
SD 0.55 - 0.45 0.09 - 0.10 0.23 - 0.15 0.18 - 0.11 0.17 - 0.15 0.20 - 0.24
CV (%) 0.9 - 0.8 2.7 - 2.7 2.5 - 1.6 2.7 - 1.5 3.3 - 3.0 1.3 - 1.6
Serum C : system No. 1 - system No. 2
MEAN (%) 55.4 - 54.1 3.6 - 3.7 10.1 - 10.5 5.7 - 5.8 3.8 - 3.9 21.3 - 22.1
SD 0.73 - 0.49 0.14 - 0.14 0.27 - 0.16 0.13 - 0.05 0.11 - 0.13 0.45 - 0.25
CV (%) 1.3 - 0.9 3.8 - 3.8 2.7 - 1.5 2.3 - 0.9 2.8 - 3.3 2.1 - 1.1
Serum F : system No. 1 - system No. 2
MEAN (%) 60.9 - 60.9 4.7 - 4.2 9.0 - 9.6 6.3 - 6.2 4.5 - 4.5 14.6 - 14.7
SD 0.38 - 0.46 0.10 - 0.10 0.21 - 0.18 0.18 - 0.13 0.14 - 0.12 0.20 - 0.20
CV (%) 0.6 - 0.7 2.2 - 2.5 2.3 - 1.9 2.9 - 2.1 3.0 - 2.7 1.4 - 1.4

Reproducibility between runs

Five (5) different serum samples were run 10 times using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure on 3 MINICAP systems and with the same lot of
analysis buffer. The mean, SD and CV (n = 10) were calculated for each sample, each zone and each system.
The table shows the limit values for the 5 tested samples on the 3 systems and a mean CV calculated from the CV's for each fraction (n = 15).

FRACTION MEAN (%) SD CV (%) MEAN CV (%)

Albumin 52.4 - 61.1 0.21 - 0.60 0.4 - 1.0 0.7 %
Alpha 1 3.4 - 4.9 0.06 - 0.28 1.8 - 6.6 3.1 %
Alpha 2 9.1 - 12.5 0.09 - 0.29 0.8 - 3.0 1.4 %
Beta 1 5.4 - 6.7 0.05 - 0.17 1.0 - 2.7 1.9 %
Beta 2 3.5 - 6.8 0.04 - 0.16 1.3 - 3.7 2.4 %
Gamma 14.1 - 18.5 0.06 - 0.44 0.4 - 2.4 1.4 %

Reproducibility between systems

Five (5) different serum samples were run 10 times using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure on 3 MINICAP systems and with the same lot of
analysis buffer. The mean, SD and CV (n = 30) were calculated for each sample, each zone on the 3 systems.
The table shows the limit values for the 5 tested samples on the 3 systems and a mean CV calculated from the CV's for each fraction (n = 5).

FRACTION MEAN (%) SD CV (%) MEAN CV (%)

Albumin 52.6 - 60.5 0.39 - 1.00 0.7 - 1.7 1.2 %
Alpha 1 3.5 - 4.8 0.13 - 0.31 2.9 - 7.0 4.4 %
Alpha 2 9.5 - 12.2 0.12 - 0.36 1.0 - 3.8 2.7 %
Beta 1 5.4 - 6.5 0.10 - 0.31 1.8 - 4.9 3.1 %
Beta 2 3.7 - 6.8 0.13 - 0.21 1.9 - 5.6 3.7 %
Gamma 14.2 - 18.2 0.15 - 0.45 1.0 - 3.0 2.0 %

Accuracy
Pathological and normal serum samples (n = 60) were run using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure and another commercially available capillary
electrophoresis system. The correlation parameters calculated for individual zones from the pooled data for MINICAP PROTEIN(E) 6 vs. the
comparative capillary electrophoresis system (y = MINICAP PROTEIN(E) 6) were :

Range of % values
Fraction Correlation coefficient y-intercept Slope
MINICAP PROTEIN(E) 6
Albumin 0.996 0.046 0.985 37.4 - 74.0
Alpha 1 0.987 0.032 1.012 3.1 - 13.0
Alpha 2 0.993 0.347 1.024 7.8 - 23.5
Beta 1 0.944 0.686 0.911 3.1 - 10.2
Beta 2 0.986 -0.232 1.035 1.9 - 14.4
Gamma 0.999 0.222 0.986 3.5 - 34.7

Sensitivity
Serial dilutions of one serum sample with a monoclonal protein 0.103 g/dL was electrophoresed using the MINICAP PROTEIN(E) 6 procedure. The
highest dilution with a discernible monoclonal band corresponded to 1 : 4, or a concentration of 26 mg/dL of the monoclonal protein.
NOTE : According to the position of the monoclonal component and polyclonal background in the gamma zone, the detection limit may vary.

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

Linearity
The MINICAP PROTEIN(E) 6 test was determined to be linear to at least 5.2 g/dL albumin and 3.1 g/dL gammaglobulins.

BIBLIOGRAPHY

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

Figure 1

Albumin

1
a

a-
Be 2

a-
-1
m

ph
ta

ph
am

ta
Be

Al

Al
G

Prealbumin
Gammaglobulins
C3 Complement Albumin
CRP α-lipoproteins
C4 Complement preß-lipoproteins
Transferrin ß-lipoproteins
Hemopexin
2-2 Haptoglobin phenotype Alpha-1 acid glycoprotein
Alpha-2 macroglobulin Alpha-1 antitrypsin

Figure 2

1-1 Haptoglobin phenotype

a

in
-2

-1

1
m

a-

a-

m
ta

ta
am

ph

ph

bu
Be

Be
G

Al

Al

Al

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 MINICAP PROTEIN(E) 6 - 2007/09

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

Figure 3

1-2 Haptoglobin phenotype

a

in
1
-2

-1

2
m

a-
a-

m
ta

ta
am

ph
ph

bu
Be

Be

Al
G

Al

Al

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