TP2 2ci

TP de MICROBIOLOGIE DU SOL
Séance N°2:
Exploitation des microorganismes
en agriculture: Bactérisation des
semences
1
1. Bactérisation des semences
Les inoculums bactériens ont été introduits dans le sol

afin d'améliorer la croissance et la santé des plantes
tout en réduisant l'utilisation des produits chimiques.
Les groupes de bactéries appelées «Plant Growth

Promoting Rhizobacteria» (PGPR) utilisées
appartiennent notamment aux
genres Bacillus, Pseudomonas et Enterobacter.
2
Cet effet bénéfique des bactéries sur la croissance des

plantes est souvent évalué par l'augmentation du poids
des racines et des tiges.
La finalité de la bactérisation est d’augmenter le

rendement des cultures.
3
L’augmentation de rendement d’une culture

bactérisée résulte de 2 effets bénéfiques principaux :
La stimulation de croissance des plantes;
La protection des plantes contre les maladies

d’origine tellurique.
4
2. Autres effets bénéfiques
2.1. Stimulation de la germination
Une des composantes du rendement agronomique des

cultures est la densité du peuplement végétal.
Or, cette densité est liée à la faculté germinative des

semences.
Certaines souches bactériennes semblent améliorer la

germination des graines lorsque les conditions
d’environnement sont favorables ou défavorables.
5
4.2. Stimulation des interactions entre la
microflore symbiotique et la plante hôte
Certaines souches PGPR stimulent la nodulation des

légumineuses.
Il a été démontré qu’une souche de Pseudomonas

putida augmente de façon significative la nodulation
du haricot par Rhizobium.
Ces souches sont appelées «Nodulating Promoting

Rhizobacteria» (NPR).
6
4.2. Stimulation des interactions entre la
microflore symbiotique et la plante hôte
Toutes ces souches stimulent la croissance racinaire,
produisent de l’acide indole acétique et sont
pectinolytiques.
Elles provoquent une augmentation de la masse de

nodosités plutôt que de leur nombre.
De même, certaines souches de bactéries influencent

positivement la colonisation racinaire de la plante
hôte par des endomycorhizes ou par des
ectomycorhizes.
7
5. Manipulation
5.1. Préparation des graines
Les graines de blé dur sont stérilisées en surface par
trempage dans de :
 L’éthanol 70% pendant 3 min.
 L’eau de javel 5% pendant 5 min.
 Trois lavages à l'eau distillée stérile.
 Les graines sont stockées dans le réfrigérateur à
+ 4 °C jusqu’à utilisation.
8
5. Manipulation
2. Préparation de l’inoculum bactérien
La souche Bacillus subtilis a été isolée à partir de la

rhizosphère d’un amandier et identifiée. Elle est
connue sous le code V26.
La souche bactérienne a été mise en culture à 30 °C

pendant 48 h sur un milieu nutritif gélosé.
Ensuite, les bactéries ont été mises en suspension

dans 10 ml d’eau distillée stérile.
9
5. Manipulation
2. Préparation de l’inoculum bactérien
La suspension bactérienne est lavée trois fois par

centrifugation et le culot est resuspendu dans une
quantité d’eau distillée stérile.
La densité de l'inoculum est ajustée à 106 CFU/mL en

utilisant une courbe d'étalonnage établie à une
densité optique de 600 nm.
10
5. Manipulation
5.3. Bactérisation des graines
 Tremper les graines de tomate stériles dans 50 ml de

la suspension bactérienne (108 CFU/mL) pendant une
durée de 30 min, sous une faible agitation.
 Tremper les graines témoins dans de l’eau distillées

stérile pendant la même durée.
 Déposer du papier filtre stérile dans les boites de

Pétri.
11
5. Manipulation
5.3. Bactérisation des graines
 Imbiber le papier filtre stérile avec 10 ml d’eau distillée

stérile.
 Déposer les graines traitées dans les boites de Pétri

contenant du papier filtre stérile imbibé d’eau.
 Placer les boites de Pétri pour germination dans

l’obscurité, à 25°C, pendant 7 jours.
12
5. Manipulation
5. 4. Paramètres à mesurer
 Déterminer le pourcentage de germination et
l’indice de germination qui sont calculés comme suit :
Pourcentage de germination (%) = Nombre de graines

germés/Nombre de graines totales
Indice de germination (%) = [(SGe/SGc) × (Rle/RLc)] ×100

Avec : SGe : Nombre de Graines traitées germées.
SGc : Nombre de graines contrôles germées
Rle : Longueur des racines des graines traitées
RLc : Longueur des racines des graines contrôles.
 Interpréter vos résultats. 13

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TP de MICROBIOLOGIE DU SOL

Les inoculums bactériens ont été introduits dans le sol

Les groupes de bactéries appelées «Plant Growth

Cet effet bénéfique des bactéries sur la croissance des

La finalité de la bactérisation est d’augmenter le

L’augmentation de rendement d’une culture

La stimulation de croissance des plantes;

La protection des plantes contre les maladies

Une des composantes du rendement agronomique des

Or, cette densité est liée à la faculté germinative des

Certaines souches bactériennes semblent améliorer la

Certaines souches PGPR stimulent la nodulation des

Il a été démontré qu’une souche de Pseudomonas

Ces souches sont appelées «Nodulating Promoting

Elles provoquent une augmentation de la masse de

De même, certaines souches de bactéries influencent

La souche Bacillus subtilis a été isolée à partir de la

La souche bactérienne a été mise en culture à 30 °C

Ensuite, les bactéries ont été mises en suspension

La suspension bactérienne est lavée trois fois par

La densité de l'inoculum est ajustée à 106 CFU/mL en

 Tremper les graines de tomate stériles dans 50 ml de

 Tremper les graines témoins dans de l’eau distillées

 Déposer du papier filtre stérile dans les boites de

 Imbiber le papier filtre stérile avec 10 ml d’eau distillée

 Déposer les graines traitées dans les boites de Pétri

 Placer les boites de Pétri pour germination dans

Pourcentage de germination (%) = Nombre de graines

Indice de germination (%) = [(SGe/SGc) × (Rle/RLc)] ×100

 Interpréter vos résultats. 13

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