Nama : Citra Nesa Aqila

Kelas :A

NRP : 01311840000039

Tugas: Jelaskan fungsi masing-masing alat tersebut :

1. Gas chromatography (GC)
2. Tin Layer Chromatography (TLC)
3. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
4. Spectroscopy
5. Elektroforesis misal SDS PAGE
Jawab:
1. Gas chromatography (GC)
Pengembang : Archer John Porter Martin.
Fungsi
Kegunaan dari gas chromatography adalah untuk identifikasi semua jenis senyawa organik
yang mudah menguap dan juga dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif
senyawa. Analisis kuantitatif dengan gas chromatography menggunakan metode standar
internal (Rizalina et al., 2018)
Teknik gas kromatografi telah digunakan sampai batas tertentu untuk mendeteksi atau
identifikasi mikroorganisme. Metode ini umum digunakan untuk identifikasi bakteri dalam
bidang industri karena sederhana dan cukup cepat. Dalam klasifikasi bakteri melalui gas
chromatography (GC) umumnya dilakukan melalui analisis produk metabolisme mereka.
Analisis asam lemak dengan gas chromatograph (GC) menjadi salah satu metode
karakterisasi paling sederhana (Henis et al., 1966)
Prinsip Gas chromatography (GC)
Lipid bakteri ditemukan di dinding sel / fraksi membran sel tempat asam lemak terikat ke
komponen seluler lainnya. Untuk penentuan totalasam lemak, asam harus dibebaskan atau
dibelah dari komponen seluler lainnya dengan hidrolisis. Prosedur hidrolisis khusus yang
digunakan untuk melepaskan asam lemak sangat mempengaruhi hasil akhir. Setelah
hidrolisis, asam lemak diubah menjadi metil ester dan dianalisis dengan gas liquid
chromatography (GLC). GLC adalah metode kromatografi yang dipilih karena keakuratan,
kecepatan, sensitivitas, dan efisiensi pemisahan yang sangat baik yang sekarang diperoleh
dengan kolom kapiler silika leburan. Sebagai hasil dari resolusi yang sangat baik dengan
kolom kapiler, identifikasi dilakukan dengan tingkat akurasi yang tinggi dengan
membandingkan waktu retensi metil ester yang dipisahkan dengan standar yang diketahui
(Habermehl, 1985).
Cara Kerja
GLC dari CFA bakteri dilakukan sebagai berikut; Singkatnya, pelet bakteri diinkubasi selama
30 menit pada 100 ° C dalam 15% (w / v) NaOH dalam 50% air metanol kemudian
diasamkan sampai pH 2 dengan 3 mol HCl berair dalam CH, OH. Itu asam lemak termetilasi
diekstraksi dengan etil eter dan heksana. Analisis GLC dilakukan dengan kromatograf gas
HP5890A (Hewlett-Pac kard) yang dilengkapi dengan fusi au Ultra 2, 004-l l-09B kolom
kapiler silika (0,2 mm kali 25 m; ikatan silang 5% silikon fenilmetil; Hewlett-Packard) dan
detektor ionisasi nyala. Kemurnian sangat tinggi helium digunakan sebagai gas pembawa.
Suhu oven dimulai pada 170 ° C dan diprogram pada 5 C ”/ menit hingga 270 ° C di mana
suhu dijaga 5 menit. Suhu port injeksi adalah 250 ° C dan suhu detektor 300 ° C. Sampel di
injeksi menggunakan injeksi split dengan volume 1 ~ 1. waktu retensi puncak dan nilai area
puncak direkam oleh integrator HP3392A (Hewlett-Pac kard).
Intepretasi hasil:
Data waktu retensi diperoleh dari penginjeksian kalibrasi campuran diubah menjadi
Equivalent Chain Length (ECL) data untuk penamaan asam lemak bakteri. Nilai ECL untuk
setiap asam lemak dapat diturunkan sebagai fungsi elusinya waktu dalam kaitannya dengan
waktu elusi rangkaian yang diketahui asam lemak rantai lurus, kemudian hasil ini akan di
bandingkan dengan waktu retensi dengan standar asam lemak bakter (Sasser, 2006).

Gambar 1. Perbandingan kromatogram yang diperoleh dari ekstrak kultur Bacillus

licheniformis 12713. A 3- menggunakan fitted with flame ionization (FID) and electron
capture detectors (ECD) (Henis et al., 1966)
Atas dasar perbandingan nilai Rt dan θ bahan kimia yang tersedia secara komersial dengan
senyawa yang diamati dalam kultur bakteri, itu tampak bahwa puncak FID A, B, F, H, J, dan
M adalah etil alkohol, diasetil, asetoin, dan asetat, propionat, dan asam butirat, masing-
masing; puncak K dan L menunjukkan nilai Rt dan θ yang identik dengan produk yang
muncul di komersial 2, 3-butanediol dan mereka mungkin mewakili isomer dari senyawa ini.
Nilai Rt puncak ECD B, C, dan N adalah mirip dengan etil alkohol, diacetyl, dan acetoin,
masing-masing (Henis et al., 1966)
2. Tin Layer Chromatography (TLC)
Pengembang : Izmailov dan Shraiber berdasarkan uraian Mikhail Tswett tentang
kromatografi kolom sebelumnya.
Fungsi
Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah teknik cepat, sensitif, dan murah yang digunakan
untuk menentukan jumlah komponen dalam suatu campuran, memverifikasi identitas dan
kemurnian suatu senyawa, memantau kemajuan suatu reaksi, menentukan komposisi pelarut
untuk pemisahan preparatif, dan menganalisis pecahan yang diperoleh dari kromatografi
kolom Unit (Cai, 2014). Contoh penerapan TLC dalam mendukung penentuan taksonomi
bakteri adalah dengan dasar profil lemak polar isolate yang diteiti (Ka¨mpfer et al., 2015).
Prinsip Tin Layer Chromatography (TLC)
Kromatografi lapis tipis menggunakan pelat kaca tipis yang dilapisi dengan aluminium
oksida atau silika gel sebagai fasa padat. Fase gerak merupakan pelarut yang dipilih sesuai
dengan sifat-sifat komponen dalam campuran. Prinsip KLT adalah distribusi senyawa antara
fase tetap padat (lapisan tipis) yang diaplikasikan pada kaca atau pelat plastik dan fase gerak
cair (pelarut elusi) yang bergerak di atas fase padat. Sejumlah kecil senyawa atau campuran
dioleskan ke titik awal tepat di atas dasar pelat KLT. Pelat kemudian dikembangkan di ruang
pengembangan yang memiliki kumpulan pelarut dangkal tepat di bawah level di mana sampel
diterapkan. Pelarut ditarik melalui partikel pada pelat melalui aksi kapiler, dan saat pelarut
bergerak di atas campuran, setiap senyawa akan tetap dalam fasa padat atau larut dalam
pelarut dan naik ke pelat. Apakah senyawa tersebut bergerak ke atas pelat atau tetap berada di
belakang tergantung pada sifat fisik senyawa tersebut dan dengan demikian bergantung pada
struktur molekulnya, terutama gugus fungsi. Aturan kelarutan "Like Dissolves Like" diikuti.
Semakin mirip sifat fisik senyawa dengan fase gerak, maka senyawa tersebut akan semakin
lama berada dalam fase gerak. Fase gerak akan membawa senyawa yang paling larut ke atas
pelat KLT. Senyawa yang kurang larut dalam fase gerak dan memiliki afinitas yang lebih
tinggi terhadap partikel pada pelat KLT akan tetap berada di belakang (Bele and Khale,
2011).
Intepretasi hasil

Gambar 2. Profil lipid polar dari strain JM-267T. Total lipid divisualisasikan setelah KLT
dua dimensi menggunakan molibdatofosfat AC id. DPG, diphosphatidylglycerol; PG,
fosfatidilgliserol; PE, fosfatidylethanolamine; PL1–3, fosfolipid tak teridentifikasi; APL1,
aminofosfolipid tak teridentifikasi; L1, lipid polar tak teridentifikasi hanya terlihat setelah
pewarnaan lipid total (Ka¨mpfer et al., 2015).
Dalam profil lipid polar (Gbr. 2) dipho sphatidylglycerol, phosphatidylglycerol dan
phosphatidyl ethanolamine dominan. Selain itu, minor hingga jumlah sedang dari tiga
fosfolipid tak dikenal, satu aminofosfolipid tak teridentifikasi dan satu tak teridentifikasi lipid
yang hanya dapat dideteksi setelah pewarnaan lipid total ditemukan. Kehadiran tiga lipid
utama sesuai dengan data Bacillus subtilis, jenis spesies dari genus, tetapi ketiadaan
glikolipid membedakan strain JM-267T (Ka¨mpfer et al., 2015).
3. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Pengembang :
Fungsi
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) adalah bentuk khusus dari kromatografi
kolom yang umumnya digunakan dalam biokimia dan analisis untuk memisahkan,
mengidentifikasi, dan mengukur senyawa aktif (Malbiya et al., 2009). Contoh penerapan
HPLC dalam taksonomi bakteri adalah menganalisis variabilitas struktural dan
kompleksitasnya asam mikolat pada Mycobacterium ( Junior et al., 2015).
Prinsip High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
HPLC terutama menggunakan kolom yang menahan bahan pengepakan (fase diam), pompa
yang menggerakkan fase gerak melalui kolom, dan detektor yang menunjukkan waktu retensi
molekul. Waktu retensi bervariasi tergantung pada interaksi antara fase diam, molekul yang
dianalisis, dan pelarut yang digunakan. [2] Sampel yang akan dianalisis dimasukkan dalam
volume kecil ke aliran fase gerak dan dihambat oleh interaksi kimia atau fisik tertentu dengan
fase diam. Besarnya retardasi tergantung pada sifat analit dan komposisi fase diam dan fase
gerak. Waktu di mana analit tertentu terelusi (keluar dari ujung kolom) disebut waktu retensi.
Pelarut yang umum digunakan mencakup kombinasi air atau cairan organik yang dapat larut
(yang paling umum adalah metanol dan asetonitril). Pemisahan telah dilakukan untuk
memvariasikan komposisi fase gerak selama analisis; ini dikenal sebagai elusi gradien.
Gradien memisahkan campuran analit sebagai fungsi dari afinitas analit untuk fase gerak saat
ini. Pilihan pelarut, aditif, dan gradien bergantung pada sifat fase diam dan analitnya
(Malbiya et al., 2009).
Intepretasi hasil
Gambar 3. Kromatogram asam mikolat HPLC dari strain referensi Mycobacterium, dengan
puncak gugus tunggal. M. tuber-culosis H37Ra (ATCC 25177) dan H37Rv (ATCC 27294)
dan M. bovis (ATCC 19210). * puncak yang menunjukkan derajat pemisahan yang tinggi
(muncul sebagai "puncak ganda") (Junior et al., 2015).
4. Spectroscopy
Fungsi
Dalam mikrobiologi, spektroskopi Raman dianggap sebagai teknik sidik jari seluruh
organisme yang sangat penting, yang digunakan untuk mengkarakterisasi, membedakan, dan
mengidentifikasi mikroorganisme, serta menilai bagaimana mereka merespons stres abiotik
atau biotik. Meningkatkan sensitivitas Raman spektroskopi sangat bermanfaat untuk analisis
cepat bakteri (dan memang sistem biologis secara umum), di mana tujuan akhirnya adalah
untuk mencapai hal ini tanpa memerlukan kultur sel yang lama. Melewati langkah ini akan
memberikan manfaat yang signifikan di banyak bidang seperti mikrobiologi medis,
lingkungan dan industri, biologi sistem mikroba, penanggulangan perang biologis dan
pemantauan bioproses (Jarvis dan Goodacre, 2008).
spektroskopi Raman dapat digunakan untuk mempelajari keadaan metabolisme bakteri dan
respon selulernya terhadap pengobatan antibiotik, dan mengetahui adsorpsi protein (Hlaing et
al., 2013).
Prinsip Spectroscopy
untuk setiap pengukuran, satu sel bakteri dijadikan fokus menggunakan objektif mikroskop
100 × (NA = 0,85 di udara). Waktu akumulasi untuk setiap akuisisi adalah 80 detik dan tiga
akumulasi dikumpulkan untuk satu pengukuran pada setiap area sampel. Spektrum tersebut
kemudian dirata-ratakan pada enam sel yang berbeda untuk setiap metode persiapan dan fase
pertumbuhan. Perangkat lunak yang tersedia secara komersial (MATLAB) digunakan untuk
semua pemrosesan data (Hlaing et al., 2013).
Intepretasi hasil
Gambar 4. Latar belakang mengurangi spektrum Raman dari sel E. coli planktonik yang
diambil dari (i) sampel segar; (ii) sampel yang didinginkan sebelum langkah pencucian sel
dan (iii) sampel beku. Puncak dominan untuk spektrum DNA / RNA dan protein ditunjukkan
dengan bilangan gelombang (cm-1). Daerah yang diarsir menunjukkan perubahan spektrum
utama dalam sampel yang berbeda (Hlaing et al., 2013).
Spektrum ini menunjukkan karakteristik pita Raman yang ditemukan dalam literatur dan
terkait dengan komponen seluler yang melimpah seperti karbohidrat, lipid, protein, dan asam
nukleat (Hlaing et al., 2013).

Gambar 5. Plot skor untuk komponen utama pertama dan kedua dari spektrum Raman sel E.
coli planktonik dari (A) sampel segar dan (B) sampel beku. Sel berada pada fase yang
berbeda dari siklus pertumbuhan: (a) eksponensial awal; (b) eksponensial akhir; (c) stasioner
awal; (d) stasioner terlambat dan (e) penurunan (Hlaing et al., 2013).
Data ini menunjukkan variasi antara kumpulan data spektral, dari mana setiap perubahan
dalam struktur primer dan / atau komposisi makromolekul bakteri dapat dilihat. Plot nilai
rata-rata untuk komponen utama pertama menunjukkan bahwa ada beberapa tumpang tindih
antara sampel yang didinginkan dan segar, sedangkan sampel stok gliserol beku sangat
bervariasi dari kelompok sampel lainnya (Hlaing et al., 2013).
5. Elektroforesis SDS-PAGE
Fungsi
Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electroforesis (SDS-PAGE) adalah teknik
untuk memisahkan rantai polipeptida pada protein berdasarkan kemampuannya untuk
bergerak dalam arus listrik, yang merupakan fungsi dari panjang rantai polipeptida atau berat
molekulnya (Dunn, 2014). Contoh penerapan SDS-PAGE dalam katerisasi bakteri yaitu
analisis profil protein spesies yang akan diteliti (Berber, 2004).
Prinsip SDS-PAGE
Hal ini dicapai dengan menambahkan deterjen SDS dan pemanasan untuk merusak struktur
tiga dimensi pada protein dengan terpecahnya ikatan disulfide yang selanjutnya direduksi
menjadi gugus sulfidihidril. SDS akan membentuk kompleks dengan protein dan kompleks
ini bermuatan negatif karena gugus-gugus anionik dari SDS molekulnya (Dunn, 2014).
Kemudian analisis hasil akan dapat diketahui melalui kombinasi komputerisasi yang
memberikan pendekatan yang efektif untuk menyelidiki hubungan taksonomi di antara
banyak spesies bakteri (Berber, 2004).
Intepretasi hasil

Gambar 6. SDS-PAGE protein sel utuh spesies Bacillus. Garis: A. B. subtilis, B. B. subtilis
DSM 10: C. B. megaterium DSM 32; D B. megateriumATCC 1842; E. B. licheniformis, F,
B. megaterium G, B, sphaericus MRS 400; H. B. thuringiensis var. israelensis I B. cereus
ATCC 7064; M. Penanda berat molekul (x103 kDa) (Berber, 2004).
Pada gambar 6 ditunjukan bagaimana profil protein sel utuh spesies Bacilluss yang diperoleh
dengan elektroforesis gel natrium dodesil sulfatepolyakrilamida. Ada perbedaan yang cukup
besar dalam profil protein spesies Bacilluss pada wilayah 20.000-66.000 kDa. Sebagian besar
spesies Bacilluss, kecuali B. megateriumDSM 32 dan B.megateriumATCC 1842,
mengandung pita protein (ditandai dengan 1) di bagian atas setiap jalur. B. subtilis dan B
(Berber, 2004).
 Daftar Pustaka
Bele, A. A., A. Khale. Archana A. Bele* and Anubha Khale. An Overview On Thin Layer
Chromatography. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. Vol. 2
(2): 256-267
Berber, I. 2004. Characterization of Bacillus species by numerical analysis of their SDS-
PAGE protein profiles. Journal of Cell and Molecular Biology. Vol 3; 33-37
Cai, L. 2014. Current Protocols Essential Laboratory Techniques. Wiley Online Library.
Dunn, M.J. 2014. Gel Electrophoresis of Proteins. Edisi Revisi. Elsevierdeman, John M.
2008. Kimia Makanan.Edisi Kedua. Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Habermehl, K.O. 1985. Rapid Methods and Automation in Microbiology and Immunology.
Springer-Verlag Berlin Heidelberg.
Henis,Y., J. R. Gould., M. Alexander. 1966. Detection and Identification of Bacteria by Gas
Chromatography'. Applied Microbiology, Vol. 14 (4).
Hlaing, M. M., M. Dunn., S. L. MacArthur., P. R. Stoddart. 2013. Raman spectroscopy for
bacterial identification: Effects of sample preparation and storage. International Journal of
Integrative Biology. Vol. 15 (1) ;1
Jarvis, R. M., R. Goodacre. 2008. Characterisation and identification of bacteria using SERS.
Chemical Society Reviews. Vol. 37 (5); 873-1076
Junior C. A. C., C. A. L. de la Torre., E. E. de S. Figueiredo., W. L., V. M. F. Paschoalin.
2015. Application of High Performance Liquid Chromatography for Identification of
Mycobacterium spp. Licensee InTech.
Ka¨mpfer et al., H. J. Busse., J. A. Mclnroy., S. P. Glaeser. 2015. Bacillus gossypii sp. nov.,
isolated from the stem of Gossypium hirsutum. International Journal of Systematic and
Evolutionary Microbiology.Vol. 65 ; 4163–4168
Malviya. R., Bansal V., Pal O.P., Sharma P.K. 2009. High Performance Liquid
Chromatography: A Short Review. Journal of Global Pharma Technology.Vol. 2 (5): 22-
26
Rizalina,H., E. Cahyono,. S. Mursiti., B. Nurcahyo., supratno. 2018. Optimasi Penentuan
Kadar Metanol dalam Darah Menggunakan Gas Chromatography. Indonesian Journal of
Chemical Science. Vol. 7 (3)
Sasser, M. 2006. Bacterial Identification by Gas Chromatographic Analysis of Fatty Acid
Methyl Esters (GC-FAME). MIDI.