BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Pustaka Tanaman Jatropha curcas

2.1.1 Taksonomi Tanaman Jatropha curcas

Klasifikasi dari tanaman Jatropha curcas adalah sebagai berikut (Nurcholis

dan Sumarsih, 2007):
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Euphorbiales
Famili : Euphorbiaceae
Genus : Jatroph
Spesies : Jatropha curcas L.

Gambar 2. 1 Jatropha curcas L. (Prihandana dan Hendroko, 2006)

6
 7

2.1.2 Nama Daerah

Tanaman jarak pagar memiliki beberapa nama daerah antara lain nawaih
nawas (NAD), jirak (Sumatera Barat), jarak kosta, jarak kusta, jarak budeg, dan
kalake pagar (Sunda), Jarak gundul, jarak cina, jarak iri, dan jarak pager (Jawa),
kalekhe paghar (Madura), jarak pager (Bali), lulu nau, lulu ai, fula, paku luba,
paku lunat, dan jarak pageh (Nusa Tenggara), paku kase (Timor), kuman nema
(Alor), lulunan (Roti), jarak kosta, jarak wolanda, tondoutomene, dan bindalo
(Sulawesi), bintalo (Gorontalo), balacai (Manado), peleng kaliki (Bugis), tangang
tangang kali atau tangang kanjoli (Makasar), muun mav, ai huwa kamala, ai
kamala, ai hua kamaalo, jai huakamalo, balacai, dan kadoto (Maluku), malate dan
makamale (Seram), balacai (Halmahera), serta balacai hisa (Ternate atau Tidore)
(Prihandana dan Hendroko, 2006).

2.1.3 Morfologi Tanaman Jatropha curcas

Tanaman jarak memiliki banyak jenis, seperti jarak bali (Jatropha

podagrica), jarak kepyar (Ricinus communis), jarak gurita (Jatropha multifida),
jarak merah (Jatropha gossyphifolia), jarak batavia (Jatropha integerrima), dan
jarak pagar (Jatropha curcas). Akan tetapi, diantara semua jenis tanaman jarak,
jarak pagar (Jatropha curcas) merupakan salah satu tanaman yang diketahui
memiliki aktivitas antibakteri. Tanaman Jatropha curcas merupakan tanaman asli
Amerika Tengah yang saat ini telah menyebar ke seluruh dunia terutama daerah
tropis (Widyawati, 2010). Nurcholis dan Sumarsih (2007), menyatakan bahwa
tanaman jarak memiliki percabangan yang tidak teratur dengan ranting bulat dan
tebal, kulit batang berwarna keabu-abuan atau kemerah-merahan. Apabila batang
ditoreh maka batang mengeluarkan getah, berwarna putih atau kekuning-kuningan.
Selain itu, pertumbuhan batang tanaman jarak pagar tidak berlangsung secara terus
menerus, tetapi memiliki masa dormansi yang dipengaruhi oleh curah hujan, suhu,
dan cahaya. Batang bersifat sukulen (berair), sehingga tanaman jarak pagar toleran
terhadap kekeringan.
Tanaman jarak pagar termasuk perdu dengan tinggi 1-7 m. Daun jarak
merupakan daun tunggal dengan pertumbuhan daun yang berseling, berbentuk
jantung atau bulat telur. Pangkal daun berlekuk, ujungnya meruncing, dan
 8

bergerigi. Tulang daun menjari dan panjang tangkai daun sekitar 4-15 cm. Bunga
tanaman jarak merupakan bunga yang majemuk. Bunganya berwarna kuning
kehijauan (Nurcholis dan Sumarsih, 2007).
Prihandana dan Hendroko (2006), menyatakan bahwa buah jarak pagar
berbentuk oval dan berdiameter 2-4 cm. Berwarna hijau ketika masih muda dan
kuning jika sudah matang. Buah jarak pagar matang tidak serentak. Perbanyakan
tanaman jarak pagar dapat dilakukan secara generatif menggunakan benih maupun
secara vegetatif dengan stek batang. Benih mempunyai 5 akar tunggang, dari
masing-masing akar tunggang akan muncul akar lateral. Tanaman jarak pagar yang
diperbanyak menggunakan stek batang hanya mempunyai akar lateral (Nurcholis
dan Sumarsih, 2007).

2.1.4 Kandungan Senyawa pada Tanaman Jatropha curcas

Aktivitas antimikroba dihubungkan dengan kehadiran fitokimia. Berikut

adalah hasil skrining fitokimia Jatropha curcas ekstrak etanol daun dan kulit batang
Jatropha curcas.
Tabel II. 1 Metabolit sekunder pada ekstrak etanol daun dan kulit batang Jatropha
curcas 20 mg/ml (Ekundayo et al., 2011)
Metabolit Jumlah fitokimia yang ada (mean ± SD)
sekunder Daun Kulit batang
Tanin 23,1 ± 0,1 25,4 ± 0,1
Phlobatanin 4,3 ± 0,1 5,1 ± 0,1
Saponin 16,1 ± 0,1 14,3 ± 0,1
Flavonoid 8,2 ± 0,1 11,0 ± 0,1
Steroid 22,1 ± 0,1 20,2 ± 0,1
Terpenoid - 0,2 ± 0,3
Glikosida 3,9 ± 0,1 4,3 ± 0,1
Alkaloid 10,0 ± 1,2 12,0 ± 0,2
Antrakuinon 0,1 ± 0,0 1,1 ± 0,3
Fenol total 0,2 ± 0,1 0,6 ± 0,2
- = tidak ada
Ekstrak etanol kulit batang mempunyai persentasi yang tinggi pada tanin,
steroid, saponin, alkaloid, flavonoid, dan phlobatanin, sedangkan ekstrak etanol
daun mempunyai persentasi yang tinggi pada tanin, steroid, saponin, alkaloid, dan
flavonoid. Terpenoid ada pada ekstrak kulit batang, sedangkan pada ekstrak daun
tidak ada.
 9

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Andriani (2015), hasil skrining

fitokimia dengan metode KLT menunjukkan ekstrak etanol kulit batang memiliki
senyawa alkaloid dengan spot noda berwarna jingga (Rf 0,94), terpenoid dengan
spot noda berwarna ungu (Rf 0,16), flavonoid dengan spot noda berwarna kuning
kehijauan (Rf 0,72), polifenol dengan spot noda berwarna hitam (Rf 0,85), dan
antrakuinon dengan spot noda berwarna merah ungu (Rf 0,57).

2.1.5 Manfaat Tanaman Jatropha curcas

Semua bagian telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk

menyembuhkan berbagai penyakit seperti infeksi kulit, diare, demam dan penyakit
lain yang disebabkan oleh mikroorganisme dan dokter hewan sejak lama (Dalziel,
1955; Duke, 1988). Jatropha curcas juga digunakan sebagai obat yang berpotensi
sebagai sumber obat herbal gigi dan sembelit (Awe et al., 2010).

2.1.6 Tinjauan Aktivitas Antibakteri Tanaman Jatropha curcas

Pada penelitian yang dilakukan oleh Ekundayo et al., (2011) dengan

menggunakan metode difusi sumuran, ekstrak etanol kulit batang Jatropha curcas
mampu memberikan aktivitas antibakteri dengan konsentrasi 20 mg/ml
menunjukkan diameter zona hambat pada bakteri Staphylococcus aureus sebesar
30,60 mm dan Escherichia coli sebesar 36,30 mm.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Nyembo et al., (2012) dengan
metode difusi cakram, pada pada ekstrak metanol daun Jatropha curcas dengan
konsentrasi 500 μg/disk menunjukkan adanya zona hambat pada Staphylococcus
aureus sebesar 15 mm dan Escherichia coli sebesar 14 mm, sedangkan pada ekstrak
metanol kulit akar Jatropha curcas menunjukkan zona hambat Staphylococcus
aureus sebesar 20 mm dan Escherichia coli sebesar 16 mm.

2.2 Tinjauan Pustaka Moringa oleifera

2.2.1 Taksonomi Tanaman Moringa oleifera

Klasifikasi dari tanaman Moringa oleifera adalah sebagai berikut (BPOM RI,
2008):
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
 10

Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Capparales
Suku : Moringaceae
Marga : Moringa
Spesies : Moringa oleifera Lam.

Gambar 2. 2 Moringa oleifera L. (BPOM RI, 2008)

2.2.2 Nama daerah

Menurut BPOM RI (2008), di Indonesia, Moringa oleifera mempunyai nama

yang berbeda di berbagai tempat, seperti Murong (Aceh), Kelor (Melayu), Munggai
(Minangkabau), Kilor (Lampung), Kelor (Sunda), Kelor (Jawa Tengah),
Marongghi (Madura), Kelor (Bali), Parongge (Bima), Kawona (Sumba), Kirol
(Buru), Kelo (Ternate), Kelo (Tidore).

2.2.3 Morfologi Tanaman Moringa oleifera

Tanaman Moringa memiliki banyak jenis, seperti Moringa oleifera, Moringa

arborea, Moringa hildebrandtii, Moringa peregrina. Akan tetapi, Moringa oleifera
diketahui memiliki aktivitas antibakteri. Moringa oleifera termasuk salah satu jenis
tanaman obat asli dari India dan telah ditanam di berbagai negara termasuk Asia.
Menurut Kristina dan Syahid dalam Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman
Industri (2014), kelor memiliki batang berkayu, tegak, berwarna putih kotor, kulit
tipis, permukaan kasar. Tinggi tanaman dapat mencapai 10 m, arah cabang tegak
 11

atau miring, cenderung tumbuh lurus dan memanjang. Daun majemuk, bertangkai
panjang, tersusun berseling, daun saat muda berwarna hijau muda. Buah berbentuk
panjang persegi tiga, panjang 20-60 cm, buah muda berwarna hijau, setelah tua
menjadi coklat, bentuk biji bulat, berwarna coklat kehitaman. Akar tunggang,
berwarna putih membesar seperti lobak.

2.2.4 Kandungan Senyawa pada Tanaman Moringa oleifera

Banyak manfaat dari Moringa oleifera berhubungan dengan kandungan

bahan aktif yang terdapat dalam tanaman. Berikut adalah data skrining fitokimia
pada penelitian yang dilakukan oleh Patel et al., (2014).
Tabel II. 2 Analisa kualitatif skrining fitokimia ekstrak etanol dan air daun
Moringa oleifera (Patel et al., 2014)

Metabolit sekunder Etanol Air

Alkaloid + +
Flavonoid + +
Saponin + +
Steroid + +
Tanin + -
Glikosida - -
Gula tereduksi - -
Minyak atsiri - +
- = tidak ada
Pada tabel diatas menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Moringa oleifera
memiliki metabolit sekunder alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, dan tanin,
sedangkan ekstrak air daun Moringa oleifera memiliki metabolit sekunder alkaloid,
flavonoid, saponin, steroid, dan minyak atsiri.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Endarwati (2016), hasil skrining
fitokimia dengan metode bioautografi menunjukkan fraksi etil asetat daun Moringa
oleifera memiliki senyawa terpenoid dengan spot noda berwarna merah ungu (Rf
0,86), antrakuinon dengan spot noda berwarna hijau ungu (Rf 0,49), flavonoid
dengan spot noda berwarna kuning intensif (Rf 0,79), polifenol dengan spot noda
berwarna kuning kecoklatan (Rf 0,94).

2.2.5 Manfaat Tanaman Moringa oleifera

Selama berabad-abad dan dalam banyak budaya di seluruh dunia, penggunaan

obat dari Moringa oleifera telah digunakan untuk mengobati masalah kesehatan,
 12

seperti pengobatan infeksi bakteri, jamur, penyakit menular seksual, malnutrisi, dan
diare (Fahey, 2005). Daun Moringa oleifera juga dapat dimanfaatkan sebagai
makanan pokok (Hidayati, 2009). Hasil penelitian Kristina dan Syahid dalam Warta
Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri (2014), menyatakan bahwa daun
Moringa oleifera dapat meningkatkan produksi ASI bagi wanita yang sedang
menyusui dan mengatasi anemia pada anak-anak dan ibu hamil dengan cara
mengkonsumsi daun baik dikukus atau direbus, dapat juga menggunakan tepung
kelor untuk dibuat minuman. Selain itu, bermanfaat juga sebagai antiinflamasi,
antihipertensi, antitumor, antioksidan, antipiretik, antiulkus, antiepilepsi, diuretik,
menurunkan kolesterol, antidiabetes dan aktivitas hepatoprotektif (Sharma et al.,
2012).

2.2.6 Tinjauan Aktivitas Antibakteri Tanaman Moringa oleifera

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Bukar et al., (2010), ekstrak

etanol daun Moringa oleifera mempunyai aktivitas antibakteri spektrum luas. Hasil
menunjukkan, bahwa aktivitasnya dapat melawan empat bakteri isolat, yaitu
Enterobacter spp. (0,7 mm), Staphylococcus aureus (0,8 mm), P. aeruginosa (0,7
mm), dan Escherichia coli (0,7 mm) yang sensitif pada konsentrasi 200 mg/ml.
Pada penelitian yang dilakukan Endarwati (2016) dengan metode
bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan konsentrasi 50 mg/ml
dapat memberikan diagonal zona hambat pada Staphylococcus aureus dengan nilai
Rf 0,79 (flavonoid) sebesar 10,17 mm, Rf 0,86 (terpenoid) sebesar 12,26 mm, Rf
0,94 (polifenol) sebesar 13,73 mm, dan Rf 0,94 (antrakuinon) sebesar 13,73 mm.
Pada penelitian yang dilakukan Primasari (2016) dengan metode bioautografi,
fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan konsentrasi 50 mg/ml dapat
memberikan diagonal zona hambat pada Escherichia coli pada nilai Rf 0,79
(flavonoid) sebesar 6,7 mm, Rf 0,86 (terpenoid) sebesar 11,8 mm, Rf 0,94
(polifenol) sebesar 14,5 mm, dan Rf 0,94 (antrakuinon) sebesar 14,5 mm.
 13

2.3 Tinjauan Pustaka Staphylococcus aureus

2.3.1 Klasifikasi Bakteri Staphylococcus aureus

Klasifikasi bakteri Staphylococcus aureus (Todar, 2012) adalah sebagai

berikut :
Kingdom : Bacteria
Kelas : Bacilli
Ordo : Bacillales
Famili : Staphylococcaceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus

Gambar 2. 3 Staphylococcus aureus (Todar, 2012)

2.3.2 Morfologi Bakteri Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus adalah bakteri Gram positif berbentuk bulat dengan

diameter 1 μm yang dapat diamati di laboratorium sebagai sel tunggal, berpasangan
atau tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur seperti buah anggur
(Tim Mikrobiologi FK UB, 2003). Bersifat koagulase dan katalase positif,
nonmotil, dan sebagai bakteri anaerob fakultatif (WHO, 2000). Tumbuh berkoloni
kuning pada media yang kaya nutrisi (Winn et al., 2006).

2.3.3 Patogenesis Bakteri Staphylococcus aureus

Departemen Kesehatan Minnesota (2010), menyatakan bahwa

Staphylococcus aureus telah lama dikenal sebagai salah satu bakteri paling penting
yang menyebabkan penyakit pada manusia. Hal ini adalah penyebab utama infeksi
kulit dan jaringan lunak seperti abses (bisul). Meskipun sebagian besar infeksi tidak
serius, Staphylococcus aureus dapat menyebabkan infeksi serius seperti infeksi
aliran darah, pneumonia, atau infeksi tulang dan sendi. Menurut Kementerian
 14

Kesehatan RI (2010), Staphylococcus aureus menjadi salah satu penyebab utama

pneumonia pada anak balita.
Berdasarkan Antimicrobial Resistance: Global Report on Surveillence dari
WHO (2014), menyatakan bahwa kasus resistensi Staphylococcus aureus terutama
terhadap metisilin atau dikenal dengan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus
(MRSA) di negara Asia Tenggara cukup tinggi, yaitu sekitar 80,6%. MRSA
melibatkan penerimaan gen mecA yang merupakan penentu penicillin binding
protein (PBP2a) yang dapat mengurangi afinitas untuk β-laktam (Hartman dan
Tomasz, 1981; Song et al ., 1987). Gen mecA disisipkan ke dalam elemen
Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) (Ito et al., 1999). SCCmec
adalah suatu elemen DNA berukuran besar antara 20-100 kb. Penicillin binding
protein (PBP2a) menyebabkan resistensi terhadap semua antibiotik β-laktam
sebagai blok protein yang mengikat di tempat aktif untuk β-laktam (Fuda et al.,
2005a; Fuda et al., 2005b).
Staphylococcus aureus memiliki kemampuan untuk beradaptasi dengan
lingkungan yang berbeda dan dapat berkoloni di kulit manusia, kuku, lubang hidung
dan selaput lendir. Dengan cara demikian, Staphylococcus aureus menyebar
melalui kontak fisik dan udara. Kolonisasi Staphylococcus aureus merupakan
faktor risiko penting untuk infeksi Staphylococcus aureus berikutnya (Wertheim et
al., 2004).

2.3.4 Terapi

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif yang dapat

menyebabkan berbagai macam penyakit, mulai dari infeksi yang ringan sampai
infeksi yang mengancam jiwa dan fatal. Sejak penggunaan pertama penisilin,
Staphylococcus aureus telah menunjukkan kemampuan luar biasa untuk
beradaptasi. Selain itu, saat ini banyak masyarakat terkait infeksi Staphylococcus
resisten terhadap metisilin (MRSA).
Menurut Kester et al., (2007) terapi pilihan utama untuk Staphylococcus
aureus adalah kategori penisilinase-resisten penisilin (metisilin, oksasilin) dan
sebagai obat pilihan alternatifnya adalah kategori aminopenisilin yang dapat
ditambahkan β-laktamase inhibitor (ampisilin dan sulbaktam, amoksisilin dan
klavulanat) bila mikroorganismenya masih sensitif terhadap metisilin, tetapi bila
 15

resisten metisilin dapat digunakan vankomisin. Karena ampisilin dapat dihidrolisa

oleh β-laktamase, sebaiknya dapat ditambahkan β-lactamase inhibitor agar dapat
efektif terhadap bakteri Staphylococcus aureus (Arimuko, 2010).
Beberapa strain sekarang resisten terhadap sebagian besar antibiotik biasa,
sehingga dikhawatirkan tidak akan ada antibiotik baru di masa yang akan datang.
Oleh karena itu, pendekatan baru sedang dilakukan untuk menemukan generasi
antimikroba berikutnya. Target seperti enzim yang terlibat (misalnya dalam
pembelahan sel) diidentifikasi berdasarkan pengetahuan fisiologi bakteri dan
metabolisme. Kemudian, metode skrining dikembangkan untuk mengidentifikasi
molekul target tertentu, sehingga dengan pengetahuan rinci molekul target inhibitor
spesifik dapat dirancang (National Institute of Health, 2006).

2.4 Tinjauan Pustaka Escherichia coli

2.4.1 Klasifikasi Bakteri Escherichia coli

Klasifikasi Escherichia coli (Todar, 2012) adalah sebagai berikut:

Kingdom : Bacteria
Filum : Proteobacteria
Kelas : Gamma Proteobacteria
Ordo : Enterobacteriales
Famili : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Spesies : Escherichia coli

Gambar 2. 4 Escherichia coli (CDC, 2016)

 16

2.4.2 Morfologi Bakteri Escherichia coli

Bakteri ini berbentuk batang, berukuran 0,4-0,7 x 1,0-3,0 μm, termasuk Gram
negatif, dapat hidup sendiri maupun berkelompok, tidak membentuk spora, serta
fakultatif anaerob (Tenailon et al., 2010). Struktur sel E. coli dikelilingi oleh
membran sel, terdiri dari sitoplasma yang mengandung nukleoprotein. Membran
sel E. coli ditutupi oleh dinding sel berlapis kapsul. Flagela dan pili E. coli menjulur
dari permukaan sel (Tizard, 2004).

2.4.3 Patogenesis Bakteri Escherichia coli

Escherichia coli adalah bakteri yang sering ditemukan dalam usus manusia
dan hewan. Kebanyakan Escherichia coli tidak berbahaya dan merupakan bagian
penting saluran usus manusia. Namun, beberapa Escherichia coli adalah patogen,
karena dapat menyebabkan penyakit diare. Escherichia coli yang dapat
menyebabkan diare ditularkan melalui air, makanan yang terkontaminasi atau
melalui kontak dengan hewan atau orang (Center for Disease Control and
Prevention, 2015).
Traveler’s diarrhea adalah salah satu masalah kesehatan yang sering
mempengaruhi di negara berkembang dan daerah tropis yang disebabkan oleh
Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). ETEC merupakan penyebab diare akut
pada anak-anak dan orang dewasa, umumnya karena tidak cukupnya ketersediaan
air bersih dan kesehatan yang buruk (Qadri et al., 2005).
Kejadian Luar Biasa (KLB) diare juga sering terjadi dengan angka kematian
yang masih tinggi. Di Indonesia, pada tahun 2015 terjadi 18 kali KLB diare yang
tersebar di 11 provinsi, 18 kabupaten/kota dengan jumlah penderita 1213 orang dan
kematian 30 orang (CFR 2,47%). Angka kematian (CFR) saat KLB diare
diharapkan <1%. Dilihat rekapitulasi KLB diare dari tahun 2008-2015 terlihat
bahwa CFR saat KLB masih cukup tinggi (>1%), kecuali pada tahun 2011 (CFR
0,40%) (Kemenkes RI, 2016).

2.4.4 Terapi

Escherichia coli adalah Gram negatif, berbentuk batang, sebagian besar

berada di saluran usus manusia. Beberapa strain Escherichia coli menghasilkan
racun yang bekerja pada lapisan usus dan menyebabkan penyakit. Diare adalah
 17

penyakit yang paling umum disebabkan oleh bakteri Escherichia coli (Bauche dan
DuPont, 2011). Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) diidentifikasi sekitar 80%
dari kasus di seluruh dunia berkontribusi paling banyak pada kasus traveler’s
diarrhea (Goldsmid dan Leggat, 2007).
Terdapat tiga antibiotik yang telah menunjukkan efektivitas dalam
mengurangi durasi dan keparahan traveler’s diarrhea, yaitu fluorokuinolon
(siprofloksasin atau levofloksasin), rifaksimin, dan azitromisin. Fluorokuinolon
menjadi drug of choice untuk profilaksis dan pengobatan bakteri patogen penyebab
diare, tetapi meningkatnya resistensi menghalangi penggunaannya di masa depan
(Connor, 2012). Tingkat resistensi berkembang dari tahun 1998-2003 mencapai
hingga 58%. Azitromisin adalah antibiotik golongan makrolida yang
direkomendasikan untuk pengobatan mandiri (Saussure, 2009; DuPont, 2007).
Azitromisin memiliki tingkatan yang lebih tinggi pada aktivitasnya melawan ETEC
(DuPont, 2007). Rifaksimin berasal dari rifampisin telah disetujui untuk
pengobatan diare yang berusia lebih dari 12 tahun. Selain itu, antimotilitas seperti
loperamide (Imodium) dapat digunakan untuk mengurangi jumlah tinja sekitar
lebih dari 60%. Cairan oral seperti oralit juga sangat penting, karena dapat
mencegah dehidrasi. Jika tidak bisa minum cairan melalui oral untuk mencegah
dehidrasi, maka harus menerima cairan melalui intravena (Connor, 2012).

2.5 Tinjauan Kloramfenikol

Kloramfenikol ditemukan pada tahun 1947, diisolasi dari organisme
Streptomyces venezuelae yang ditemukan di Caracas, Venezuela. Kloramfenikol
mempunyai struktur yang sederhana. Kloramfenikol berwarna putih keabuan atau
putih kekuningan, kristalnya seperti jarum (Sweetman, 2009) dan mempunyai rumus
molekul C11H12Cl2N2O5 (NCBI, 2016).

Gambar 2. 5 Struktur Kimia Kloramfenikol (Forrest dan Oldach, 2004)

 18

Kloramfenikol adalah antibakteri spektrum luas pertama yang ditemukan dan

membuktikan mampu dalam mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri Gram
positif dan Gram negatif (Sweetman, 2009). Berdasarkan penelitian yang dilakukan
oleh Niswah (2014) pada ekstrak metanol buah parijoto dengan menggunakan
metode difusi cakram, kloramfenikol 30 μg dapat menghambat bakteri
Staphylococcus aureus dengan diameter zona hambat sebesar 27,33 mm dan
Escherichia coli dengan diameter zona hambat sebesar 27,67 mm, sedangkan pada
ekstrak etil asetat buah parijoto, kloramfenikol 30 μg dapat menghambat bakteri
Staphylococcus aureus dengan diameter zona hambat sebesar 27,67 mm dan
Escherichia coli dengan diameter zona hambat sebesar 29,33 mm.
Tabel II. 3 Standar Interpretatif Diameter Zona Hambatan dan Nilai Batas
(Breakpoints) Kadar Hambatan Minimal (KHM) untuk
Enterobacteriaceae dan Staphylococcus spp. (Patel et al., 2015)

Antibiotik Kadar Diameter KHM (μg/ml)

Cakram R I S R I S
Chloramphenicol 30 μg ≤12 13-17 ≥18 ≥32 16 ≤8
Keterangan : R = Resisten
I = Intermediet
S = Sensititif
Ukuran sensitif, intermediet, dan resisten disesuaikan dengan standar yang
telah ditetapkan. Kriteria tersebut didefinisikan sebagai berikut (Lesmana, 2006):
a. Sensitif
Menunjukkan bahwa infeksi yang disebabkan oleh mikroorganisme yang
diuji mungkin cukup untuk diobati dengan antibiotik dalam konsentrasi biasa yang
dianjurkan.
b. Intermediet
Mikroorganisme masih dapat dihambat oleh antibiotik dengan konsentrasi
tertentu, jika konsentrasi yang diberikan lebih tinggi dari biasanya.
c. Resisten
Mikroorganisme yang menunjukkan resistensi tidak terhambat oleh
konsentrasi antibiotik yang biasa dianjurkan.
 19

Kloramfenikol larut dalam lemak dan merupakan bakteriostatik, tetapi bisa

menjadi bakterisida dalam konsentrasi tinggi atau ketika digunakan terhadap
organisme yang sangat rentan. Kloramfenikol berdifusi melalui dinding sel bakteri
dengan reversibel mengikat protein 50s subunit ribosom bakteri, dimana transfer
asam amino untuk mengembangkan rantai peptida dicegah, sehingga menghambat
pembentukan ikatan peptida dan sintesis protein bakteri (menghalangi poliferasi sel
bakteri selanjutnya) (Anonim, 2016).

2.6 Aktivitas Antibakteri dari Metabolit Sekunder

2.6.1 Alkaloid

Alkaloid ditemukan pada bakteri, jamur, tumbuhan dan hewan, meskipun

distribusinya dalam setiap kingdom sangat terbatas. Alkaloid ditandai dengan
keragaman struktur yang besar dengan kehadiran atom nitrogen menjadi dasar satu-
satunya ciri yang menyatukan (Evans, 2009). Kebanyakan alkaloid memiliki hanya
satu atom nitrogen, tetapi beberapa memiliki hingga lima. Nitrogen dapat terjadi
dalam bentuk amina primer, amina sekunder atau amina tersier (Robbers et al.,
1996). Selain karbon, hidrogen dan nitrogen, pada sebagian besar alkaloid
mengandung oksigen.
Alkaloid diklasifikasikan menurut struktur kimia dan biokimia berasal dari
alam (Evans, 2009). Pada struktur kimia, ada dua pembagian alkaloid yaitu alkaloid
heterosiklik yang mengandung nitrogen dan alkaloid non heterosiklik yang juga
dikenal sebagai proto alkaloid yang mengandung nitrogen di rantai samping (Evans,
2009). Klasifikasi berdasarkan asal alam juga memungkinkan, karena alkaloid
tertentu biasanya terbatas pada sumber tertentu (Evans, 2009). Alkaloid tetap
menjadi perhatian dari banyak penelitian, pengembangan mereka sebagai obat
antibakteri yang diteruskan dalam akademisi, industri dan para pengusaha (Hraiech
et al., 2012).
Mekanismenya yaitu menghambat sintesis DNA dan RNA bakteri (Cushnie
et al., 2014). Alkaloid dalam tanaman Jatropha curcas efektif untuk bakteri Gram
positif dan Gram negatif. Pada penelitian yang dilakukan oleh Ekundayo et al.,
(2011), didapatkan bahwa kulit batang mengandung 12,0% alkaloid yang memiliki
daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 30,6 mm dan
 20

Escherichia coli sebesar 36,3 mm. Kehadiran alkaloid dalam ekstrak daun kelor
telah dilaporkan oleh Kubmarawa et al., (2007) dimana kehadiran alkaloid tersebut
berbeda dalam tingkatan pada pelarut dalam ekstraksi. Pada penelitian yang
dilakukan oleh Ojiako (2014) didapatkan, bahwa dalam daun kelor mengandung
0,42% alkaloid yang memiliki daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus
sebesar 10 mm dan Escherichia coli sebesar 8 mm.
2.6.2 Flavonoid

Flavonoid merupakan senyawa metabolik sekunder yang menunjukkan

berbagai aktivitas biologis seperti antimikroba, antiinflamasi, analgesik, antialergi,
sitostatik dan antioksidan (Hodek et al., 2002). Menurut Sabir (2005), disebutkan
bahwa flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel
bakteri, mikrosom, dan lisosom sebagai hasil interaksi antara flavonoid dengan
DNA bakteri.
Pada penelitian yang dilakukan oleh Ekundayo et al., (2011) didapatkan hasil,
bahwa kulit batang Jatropha curcas mengandung 11,0% flavonoid yang memiliki
daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 30,6 mm dan
Escherichia coli sebesar 36,3 mm, sedangkan pada penelitian yang dilakukan oleh
Endarwati (2016) dengan metode bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa
oleifera dengan konsentrasi 50 mg/ml dapat memberikan diagonal zona hambat
pada Staphylococcus aureus pada nilai Rf 0,79 yang mengandung flavonoid sebesar
10,17 mm, sedangkan pada penelitian yang dilakukan Primasari (2016) dengan
metode bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan konsentrasi
50 mg/ml dapat memberikan diagonal zona hambat pada Escherichia coli pada nilai
Rf 0,79 yang mengandung flavonoid sebesar 6,7 mm.

2.6.3 Polifenol

Senyawa fenolik adalah sebuah kelompok metabolit sekunder yang

didistribusikan luas dalam tanaman dan memiliki aktivitas antibakteri (Maddox et
al., 2010). Senyawa polifenol mengandung lebih dari 1 cincin benzen dengan
struktur yang lebih kompleks. Biasanya digunakan untuk fungsi pertahanan dari
berbagai spesies tanaman (Boudet, 2006).
 21

Polifenol bekerja dengan cara mendenaturasikan protein dan merusak

membran sel (Pelczar dan Chan, 1988). Polifenol memiliki spektrum luas dengan
sifat kelarutan pada suatu pelarut yang berbeda-beda. Hal ini disebabkan oleh gugus
hidroksil pada senyawa tersebut yang dimiliki berbeda jumlah dan posisinya.
Dengan demikian, ekstraksi menggunakan berbagai pelarut akan menghasilkan
komponen polifenol yang berbeda pula. Sifat antibakteri yang dimiliki oleh setiap
senyawa yang diperoleh dari ekstraksi tersebut juga berbeda (Pambayun et al.,
2007).
Pada penelitian yang dilakukan oleh Ekundayo et al., (2011) didapatkan,
bahwa kulit batang Jatropha curcas mengandung 0.6% total fenol yang memiliki
daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 30,6 mm dan
Escherichia coli sebesar 36,3 mm. Pada penelitian yang dilakukan Endarwati
(2016) dengan metode bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan
konsentrasi 50 mg/ml dapat memberikan diagonal zona hambat pada
Staphylococcus aureus pada nilai Rf 0,94 yang mengandung polifenol sebesar
13,73 mm. Pada penelitian yang dilakukan Primasari (2016) dengan metode
bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan konsentrasi 50 mg/ml
dapat memberikan diagonal zona hambat pada Escherichia coli pada nilai Rf 0,94
yang mengandung polifenol sebesar 14,5 mm.

2.6.4 Antrakuinon

Antrakuinon merupakan senyawa turunan kuinon. Menurut Cowan (1999),

kuinon memiliki sifat antimikroba yang sangat luas karena disamping merupakan
sumber radikal bebas, juga dapat membentuk kompleks dengan asam amino
nukleofilik dalam protein sehingga dapat menyebabkan protein kehilangan
fungsinya. Antrakuinon memiliki mekanisme kerja dengan cara menghambat
sintesis protein bakteri (Pandey dan Mishra, 2009).
Saeed et al., (2004) menyatakan, bahwa antrakuinon berfungsi sebagai
antibakteri. Antrakuinon tersebut dapat menghambat berbagai bakteri seperti
Pseudomonas aeruginosa, Proteus morgaii, Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis, Escherichia coli, Salmonella, dan Shigela serta dapat digunakan sebagai
obat pada infeksi kulit, flu, batuk, dan demam yang disebabkan oleh bakteri
(Winarti, 2005).
 22

Pada penelitian yang dilakukan oleh Ekundayo et al., (2011) didapatkan,

bahwa kulit batang Jatropha curcas mengandung 1,1% antrakuinon yang memiliki
daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 30,6 mm dan
Escherichia coli 36,3 mm. Pada penelitian yang dilakukan Endarwati (2016)
dengan metode bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan
konsentrasi 50 mg/ml dapat memberikan diagonal zona hambat pada
Staphylococcus aureus pada nilai Rf 0,94 yang mengandung antrakuinon sebesar
13,73 mm, sedangkan pada penelitian yang dilakukan Primasari (2016) dengan
metode bioautografi, fraksi etil asetat daun Moringa oleifera dengan konsentrasi
50 mg/ml dapat memberikan diagonal zona hambat pada Escherichia coli pada nilai
Rf 0,94 yang mengandung antrakuinon sebesar 14,5 mm.

2.7 Tinjauan Tentang Metode Pengujian Antibakteri

Pada awal antibiotik digunakan, hanya ada sedikit spesies bakteri yang
resisten. Beberapa bakteri bersifat resisten secara intrinsik terhadap antibiotik
tertentu, maksudnya adalah sudah sejak awal kuman menunjukkan sifat ketahanan
terhadap antibiotik.
Uji kepekaan antimikroba menjadi penting, jika ada indikasi bahwa
mikroorganisme penyebab infeksi merupakan bagian dari kelompok kuman yang
resisten terhadap antibiotik yang umum digunakan dalam pengobatan. Alasan
dilakukan uji kepekaan antimikroba adalah untuk mendapatkan agen antimikroba
yang tepat untuk pengobatan penyakit infeksi tertentu (Soleha, 2015). Ada beberapa
metode uji kepekaan, tetapi metode yang paling sering digunakan adalah metode
difusi karena mempunyai keuntungan ekonomis dan sederhana (mudah dibuat)
(Farida, 2011).
Metode difusi dapat dilakukan dengan 3 cara, yaitu metode cakram kertas,
metode parit, dan metode lubang/sumuran.
1. Metode Cakram Kertas (Cara Kirby Bauer)
Pada metode cakram kertas digunakan suatu kertas cakram yang berfungsi
sebagai tempat menampung zat antimikroba. Kertas cakram tersebut kemudian
diletakkan pada lempeng agar yang telah diinokulasi mikroba uji, kemudian
diinkubasi pada waktu tertentu, sesuai dengan kondisi optimum dari mikroba uji
 23

yaitu pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Pada metode difusi, penentuan aktivitas
didasarkan pada kemampuan difusi dari zat antimikroba dalam lempeng agar yang
telah diinokulasi dengan mikroba uji (Kusmayati dan Agustini, 2007).
Uji aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan metode difusi dan metode
pengenceran. Uji difusi cakram dilakukan dengan mengukur diameter zona bening
yang merupakan petunjuk adanya respon penghambatan pertumbuhan bakteri oleh
suatu senyawa antibakteri dalam ekstrak. Syarat jumlah bakteri untuk uji
kepekaan/sensitivitas yaitu 105-108 CFU/ml (Hermawan et al., 2007).
Menurut Ahn et al., (1994) respon penghambatan aktivitas antibakteri
dikelompokkan menjadi empat kategori sebagai berikut :
Tabel II. 4 Respon Penghambatan Aktivitas Antibakteri (Ahn et al., 1994)

Diameter zona hambat Respon hambat

> 20 mm Kuat
16 mm - 20 mm Sedang
10 mm - 15 mm Lemah
< 10 mm Tidak ada

Metode cakram kertas memiliki kelebihan, yaitu mudah dilakukan, tidak

memerlukan peralatan khusus dan relatif murah, sedangkan kelemahannya
adalah ukuran zona bening yang terbentuk tergantung oleh kondisi inkubasi,
inokulum, predifusi dan preinkubasi serta ketebalan medium (Bonang, 1992;
Pelczar, 1988). Apabila keempat faktor tersebut tidak sesuai, maka hasil dari
metode cakram kertas sulit untuk diintepretasikan (Bonang, 1992).
2. Metode Parit
Suatu lempeng agar yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji dibuat
sebidang parit. Parit tersebut berisi zat antimikroba, kemudian diinkubasi pada
waktu dan suhu optimum yang sesuai untuk mikroba uji. Hasil pengamatan
 24

yang akan diperoleh berupa ada tidaknya zona hambat yang akan terbentuk di
sekitar parit, interpretasi sama dengan cara Kirby Bauer (Bonang, 1992).

3. Cara Lubang/Sumuran
Pada lempeng agar yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji dibuat
suatu lubang yang selanjutnya diisi dengan zat antimikroba uji. Kemudian
setiap lubang itu diisi dengan zat uji. Setelah diinkubasi pada suhu 37°C selama
18-24 jam dilakukan pengamatan dengan melihat ada atau tidaknya zona hambatan
di sekeliling lubang (Bonang, 1992).
2.7.1 Metode Difusi Cakram

Obat dijenuhkan ke dalam kertas cakram. Kertas cakram yang mengandung

obat tertentu ditanam pada media perbenihan agar padat yang telah dicampur
dengan mikroba uji, kemudian diinkubasikan 37°C selama 18-24 jam. Selanjutnya
diamati adanya zona jernih disekitar kertas cakram yang menunjukkan tidak adanya
pertumbuhan mikroba (Tim Mikrobiologi FK UB, 2003).
Untuk mengevaluasi hasil uji kepekaan tersebut, dapat dilakukan dua cara
sebagai berikut (Tim Mikrobiologi FK UB, 2003) :
a. Cara Kirby Bauer, yaitu dengan cara membandingkan diameter zona hambat
disekitar cakram dengan tabel standar yang dibuat oleh NCCLS (National
Committee for Clinical Laboratory Standard). Dengan tabel NCCLS ini
dapat diketahui kriteria sensitif, intermediet, dan resisten.
b. Cara Joan-Stokes, yaitu dengan cara membandingkan radius zona hambatan
yang terjadi antara bakteri kontrol yang sudah diketahui kepekaannya
terhadap obat tersebut dengan isolat bakteri yang diuji. Pada cara Joan-
Stokes, prosedur uji kepekaan untuk bakteri kontrol dan bakteri uji dilakukan
bersama-sama dalam satu piring agar.
Prosedur Difusi Cakram (Lesmana, 2006) :
1. Pembuatan biakan kuman (berumur 24 jam) yang telah murni dan telah
diketahui identitasnya dalam 0.5 ml kaldu Brain Heart Infussion (BHI).
Inkubasi pada suhu 35°C sampai mencapai kekeruhan yang sesuai dengan
standar McFarland 0,5 (biasanya setelah 2-6 jam). Penyesuaian kekeruhan
 25

dilakukan dengan menambahkan larutan NaCl pada biakan kaldu sekitar 1

sampai 2 x 108 CFU/ml. Terdapat cara lain yaitu dengan membuat suspensi
kuman dari biakan pada lempeng agar non selektif (blood agar) yang berumur
18-24 jam dalam larutan garam faal dan menyesuaikan kekeruhannya dengan
standar McFarland 0,5.
2. Secara optimal, 15 menit setelah dilakukan penyesuaian kekeruhan, suspensi
kuman diambil dengan menggunakan kapas lidi steril. Kapas lidi diputar
beberapa kali kemudian di tekan ke dinding bagian dalam tabung untuk
menghilangkan kelebihan inokulum dari biakan kaldu.
3. Kapas lidi ditanam ke lempeng agar Mueller-Hinton dengan cara
mengusapkannya pada seluruh permukaan lempeng agar. Prosedur tersebut
diualang selama 2x dengan setiap kali memutar posisi lempeng agar 60° agar
seluruh permukaan terinokulasi rata. Sebagai tahap akhir, seluruh tepi agar
juga diusap. Lempeng agar yang telah diinokulasi dibiarkan selama 5-10
menit, untuk mengeringkan kelebihan cairan inokulum pada permukaan agar.
4. Sejumlah cakram antibiotika disiapkan dan diletakkan satu per satu di atas
agar biakan secara manual atau dapat juga dengan menggunakan aparatus
pembagi (disk dispenser). Setelah itu, cakram antibiotika diletakkan perlahan
dengan pinset untuk memastikan seluruh permukaan bersentuhan sempurna
dengan permukaan agar yang mengandung biakan kuman.
5. Lempeng agar dibalik dan dalam waktu tidak lebih dari 30 menit
diinkubasikan secara aerob pada suhu 37°C selama 18-24 jam.
6. Hasil pengujian dibaca dengan mengukur zona hambatan yang diperlihatkan
oleh biakan tersebut.

2.7.2 Metode Dilusi

Metode dilusi digunakan untuk menentukan konsentrasi hambat minimal

(KHM) yang merupakan konsentrasi terkecil dari zat antimikroba uji yang masih
memberikan efek penghambatan terhadap pertumbuhan mikroba uji. Pada
prinsipnya dilakukan dengan menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi
dengan media cair dan diinokulasikan dengan mikroba uji. Kemudian diinkubasi
pada suhu 37°selama 18-24 jam dan diamati terjadinya kekeruhan pada tabung.
Hasil pengamatan diperoleh konsentrasi terendah zat antimikroba pada tabung yang
 26

ditunjukkan dengan hasil biakkan yang tampak jernih. Kemudian, biakkan dari
semua tabung yang jernih diinokulasikan pada media agar padat, diinkubasikan dan
keesokan harinya diamati ada atau tidaknya bakteri yang tumbuh (Tim
Mikrobiologi FK UB, 2003).

2.7.3 Metode Gradien Antimikroba (E-test)

Metode gradien antimikroba menggabungkan prinsip metode dilusi dengan

metode difusi untuk menentukan nilai kadar hambat minimal (KHM). Nilai kadar
hambat minimal (KHM) ditentukan di persimpangan strip dan lingkaran hambatan
pertumbuhan (Balouiri et al., 2015). Di dalam prosedur ini, strip diresapi dengan
peningkatan gradien konsentrasi agen antimikroba dari ujung satu ke ujung lainnya,
diendapkan pada permukaan agar yang sebelumnya diinokulasi dengan
mikroorganisme diuji.

2.7.4 Metode Biautografi

Bioautografi adalah suatu metode pendeteksian untuk menemukan suatu

senyawa antimikroba yang belum teridentifikasi dengan cara melokalisir aktivitas
antimikroba tersebut pada suatu kromatogram. Metode tersebut didasarkan pada
aktivitas biologi analit, baik sebagai antibakteri, antifungi, antitumor, maupun
antiprotozoa (Choma, 2010). Bioautografi sering digunakan untuk mendeteksi
antibiotik yang dapat dianalisis dengan KLT.
Ciri khas dari prosedur bioautografi adalah didasarkan atas teknik difusi agar,
dimana senyawa antimikrobanya dipindahkan dari lapisan KLT ke medium agar
yang telah diinokulasikan dengan merata bakteri uji. Dari hasil inkubasi pada suhu
dan waktu tertentu akan terlihat zona hambatan di sekeliling noda dari KLT yang
telah ditempelkan pada media agar. Zona hambatan ditampakkan oleh aktivitas
senyawa aktif yang terdapat di dalam bahan uji terhadap pertumbuhan
mikroorganisme uji (Betina, 1972).
Bioautografi dibedakan atas tiga bagian, yakni :
1. Bioautografi kontak
Bioautografi kontak merupakan senyawa antimikroba dipindahkan dari
lempeng KLT ke medium agar yang telah diinokulasikan bakteri uji yang peka
secara merata dan melakukan kontak langsung (Dewanjee et al., 2014).
 27

Metode ini didasarkan atas difusi dari senyawa yang telah dipisahkan dengan
Kromatografi Lapis Tipis. Lempeng kromatografi tersebut ditempatkan di atas
permukaan media agar yang telah di inokulasikan dengan mikroorganisme yang
sensitif terhadap senyawa antimikroba yang dianalisis. Setelah 15-30 menit,
lempeng kromatografi tersebut dipindahkan dari permukaan medium. Senyawa
antimikroba yang telah berdifusi dari lempeng kromatogram ke dalam media agar
akan menghambat pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi pada waktu dan suhu
yang tepat sampai noda menghambat pertumbuhan mikroorganisme uji tampak
pada permukaan membentuk zona yang jernih (Dewanjee et al., 2014).
2. Bioautografi Langsung (Deteksi KLT)
Bioautografi langsung merupakan dimana mikroorganismenya tumbuh
secara langsung diatas lempeng KLT. Prinsip kerja dari metode ini adalah suspensi
mikroorganisme uji dalam medium cair disemprotkan pada permukaan KLT yang
telah dihilangkan sisa-sisa eluen yang menempel pada lempeng kromatogram.
Setelah itu dilakukan inkubasi pada suhu dan waktu tertentu (Dewanjee et al.,
2014).
Senyawa dalam lempeng kromatogram dideteksi dengan sinar UV pada
panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Setelah diketahui letak dan jumlah
senyawa aktif yang terpisah atau terisolasi dengan timbulnya noda pada lempeng
KLT, selanjutnya di semprotkan suspensi bakteri uji sebanyak 5-6 ml di atas
permukaan lempeng KLT secara merata. Lempeng KLT diinkubasi 24 jam,
kemudian disemprot dengan 5 ml larutan Triphenyl Tetrazolium Chloride sejumlah
20 mg/ml serta Methyl Thiazole Tetrazolium (2,5 mg/ml) dan selanjutnya
diinkubasi kembali selama 4 jam pada suhu 37°C (Dewanjee et al., 2014).
3. Bioautografi Perendaman (Agar Overlay Bioautografi)
Bioautografi perendaman merupakan bioautografi yang dimana medium agar
telah diinokulasikan dengan suspensi bakteri dituang di atas lempeng KLT. Pada
prakteknya, metode ini dilakukan dengan lempeng kromatografi yang telah dieluasi
di letakkan dalam cawan petri, sehingga permukaan tertutup oleh medium agar
yang berfungsi sebagai base layer. Setelah base layernya memadat, dituangkan
medium yang telah disuspensikan mikroba uji yang berfungsi sebagai seed layer.
Kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu yang sesuai (Dewanjee et al., 2014).
 28

2.8 Standar McFarland

Standar McFarland digunakan untuk standarisasi perkiraan jumlah bakteri
yang terdapat dalam larutan suspensi dengan membandingkan kejenuhan dari tes
suspensi dengan standar McFarland. Standar McFarland adalah sebuah larutan
kimia dari BaCl2 dan H2SO4, reaksi antara kedua reaksi kimia tersebut
menghasilkan lapisan endapan berupa BaSO4.
Sebelum digunakan, standar McFarland harus di kocok untuk memastikan
BaSO4 telah berdistribusi secara sempurna dalam larutan tersebut dan dipindahkan
secara kuanti ke dalam tabung reaksi yang digunakan untuk preparasi suspensi
inokulum. Sekali dipindahkan secara kuanti, tabung reaksi harus di tutup dengan
rapat untuk mencegah penguapan yang terjadi. Standar McFarland yang sering
digunakan dalam Laboratorium Klinik Mikrobiologi adalah standar McFarland 0.5
yang setara dengan jumlah perkiraan suspensi bakteri yaitu 1,5 x 108 CFU/ml,
dimana standar tersebut merupakan dasar untuk percobaan kerentanan antimikroba
dan percobaan hasil biakan media. Kejenuhan dari sebuah standar McFarland dapat
dibandingkan secara visual dengan sebuah suspensi bakteri yang diketahui
konsentrasinya seperti tabel dibawah ini :
Tabel II. 5 Standar McFarland (Anonim, 2014)

Standart 1% BaCl2 1% H2SO4 Perkiraan suspensi

Mc Farland (ml) (ml) bakteri/ml
0,5 0,05 9,95 1,5 X 108
1,0 0,10 9,90 3,0 X 108
2,0 0,20 9,80 6,0 X 108
3,0 0,3 9,7 9,0 X 108
4,0 0,4 9,6 1,2 X 109
5,0 0,5 9,5 1,5 X 109
6,0 0,6 9,4 1,8 X 109
7,0 0,7 9,3 2,1 X 109
8,0 0,8 9,2 2,4 X 109
9,0 0,9 9,1 2,7 X 109
10,0 1,0 9,0 3,0 X 109
 29

Prosedur (Anonim, 2014):

1. Campurkan standar McFarland pada vortex untuk pengujian. Pastikan bahwa
standar McFarland dipindahkan secara kuanti ke dalam tabung reaksi yang
memiliki ukuran dan diameter yang sama seperti tabung reaksi yang
digunakan untuk persiapan tes suspensi.
2. Siapkan sebuah tes suspensi dengan perlakuan segar, biakan bersih dari tes
organisme dan inokulasi ke dalam broth yang sesuai.
3. Kemudian bandingkan secara visual kejenuhan dari tes suspensi dengan
standar McFarland dengan membandingkan garis kejernihan pada kartu
Wickerham.
4. Apabila hasil tes suspensi tidak terlalu jenuh, maka inokulasi dengan
penambahan organisme atau inkubasi tabung reaksi sampai kejenuhannya
sesuai dengan standar McFarland. Apabila dilusi diperlukan, gunakan pipet
steril dan tambahkan broth atau saline yang cukup untuk mendapatkan
kejenuhan yang sesuai dengan standar McFarland.

2.9 Kombinasi Ekstrak Tanaman

Demam tifoid adalah infeksi bakteri global yang disebabkan oleh bakteri
Salmonella typhi. Ditularkan melalui air, susu, makanan, buah, dan sayuran yang
terkontaminasi dengan bakteri juga ditularkan melalui pengolah makanan
(Doughari et al., 2007). WHO memperkirakan sekitar 12,6 juta infeksi demam
tifoid dengan hampir 600.000 kematian setiap tahunnya (WHO, 2003).
Adanya multidrug resistant terhadap infeksi patogen manusia (termasuk
demam tifoid), sehingga diperlukan sumber lain agen antibakteri baru, seperti obat
tradisional yang umumnya terdiri dari beberapa jenis tanaman obat yang memiliki
efek jika dikombinasi, yaitu efek yang saling mendukung satu sama lain untuk
mencapai efektivitas pengobatan (Katno, 2008). Oleh karena itu, dilakukan suatu
penelitian mengenai pengaruh antibakteri dengan menggunakan kombinasi ekstrak
tanaman. Salah satunya adalah menggunakan kombinasi ekstrak etanol daun
Balanites aegyptiaca dan Moringa oleifera pada Salmonella typhi.
Pada penelitian yang dilakukan oleh Doughari et al., (2007), dilakukan
dengan metode difusi cakram. Ekstrak etanol daun Balanites aegyptiaca
 30

menunjukkan diameter zona hambat sebesar 16 mm, sedangkan ekstrak etanol daun
Moringa oleifera menunjukkan diameter zona hambat sebesar 8 mm pada
konsentrasi 100 mg/ml masing-masing. Ketika kedua tanaman dikombinasi
masing-masing dalam 100 mg/ml, aktivitas antibakteri meningkat dengan
menunjukkan diameter zona hambat sebesar 18 mm. Penelitian ini menggunakan
antibiotik siprofloksasin, kotrimoksazol, dan kloramfenikol sebagai kontrol positif
dengan konsentrasi 10 mg/ml dengan diameter zona hambat siprofloksasin sebesar
10 mm, kotrimoksazol sebesar 8 mm, dan kloramfenikol sebesar 5 mm. Hasil Kadar
Hambat Minimal (KHM) pada Balanites aegyptiaca adalah 6,5 mg/ml, sedangkan
pada Moringa oleifera adalah 8 mg/ml.
Diketahui hasil skrining fitokimia dari Moringa oleifera, mengandung
senyawa alkaloid, saponin, tanin, dan fenol, sedangkan Balanites aegyptiaca
mengandung senyawa saponin, tanin, fenol, antrakuinon. Kehadiran kandungan
senyawa tersebut telah dilaporkan penggunaannya dalam tanaman sebagai aktivitas
antimikroba (Pretorius dan Watt, 2001).
Selain penelitian diatas, penelitian mengenai aktivitas antibakteri dengan
kombinasi ekstrak tanaman lainnya juga dilakukan oleh oleh Onyeagba et al.,
(2004), yaitu tentang efek antibakteri dari ekstrak bawang putih (Allium sativum
Linn), jahe (Zingiber officinale Roscoe), dan jus jeruk limau (Citrus aurantifolia
Linn). Pada konsentrasi 20 g/100 ml masing-masing ekstrak etanol tunggal bawang
putih dan jahe, tidak memberikan efek antibakteri dengan tidak terbentuknya
diameter zona hambat, sedangkan jus jeruk limau memberikan diameter zona
hambat pada Staphylococcus aureus sebesar 17 mm dan Escherichia coli sebesar
11 mm. Ketika dilakukan dikombinasi, ekstrak etanol bawang putih dan jus jeruk
limau memberikan diameter zona hambat pada Staphylococcus aureus sebesar 19
mm, sedangkan pada Escherichia coli memberikan diameter zona hambat sebesar
15 mm pada kombinasi ekstrak etanol jahe dan jus jeruk limau. Pada penelitian ini
menggunakan antibiotik trimethoprim sulfametoksazol (primpex) sebagai kontrol
positif. Kontrol positif memberikan diameter zona hambat pada Staphylococcus
aureus sebesar 35 mm, sedangkan pada Escherichia coli sebesar 9 mm.
Adanya penelitian tentang kombinasi ekstrak tanaman yang memiliki
aktivitas antibakteri, membuat produsen memiliki inisiatif untuk menciptakan
 31

produk herbal yang terbuat dari kombinasi tanaman. Contoh produk herbal tersebut,
seperti cairan kumur dan telan Enkasari dari PT. Kimia Farma yang komposisinya
terdiri atas sari daun saga (Abrus precatorius Folia), daun sirih (Piper betle Folia),
akar kayu manis (Liquiritae Radix), dan mentholum yang memiliki khasiat untuk
membantu menyegarkan mulut, mengurangi bau mulut, dan membantu mengurangi
sariawan.
Daun saga (Abrus precatorius) menjadi salah satu komposisi dalam produk
cairan kumur dan telan Enkasari. Diketahui, bahwa daun saga merupakan tanaman
yang banyak digunakan secara tradisional sebagai obat. Berdasarkan penelitian Britto
et al., (2012), ekstrak metanol daun saga memiliki kandungan metabolit sekunder
steroid, triterpenoid, gula, alkaloid, fenol, flavonoid, dan tanin. Menurut Lewis dan
Ausubel (2006), tanaman yang kaya metabolit sekunder seperti tanin, alkaloid, dan
flavanoid yang ditemukan dengan cara in vitro memiliki aktivitas antibakteri. Hal
tersebut terbukti dengan penelitian Britto et al., (2012), dengan menggunakan metode
difusi cakram pada konsentrasi 10 g/100 ml daun saga memberikan diameter zona
hambat sebesar 20,30 mm pada bakteri Aeromonas hydrophila dimana bakteri ini
merupakan bakteri penyebab diare pada anak-anak. Tidak hanya itu, pada penelitian
Kalra dan Abhilasha (2013), ekstrak etanol batang dan kulit kayu Abrus precatorius
efektif untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 20
μg/ml, Pseudomonas aeruginosa 54 μg/ml, dan Candida albicans 75 μg/ml. Selain
saga, daun sirih (Piper betle) juga menjadi salah satu komposisi dari produk ini.
Daun sirih secara umum telah dikenal masyarakat sebagai bahan obat tradisional
dan dikenal juga mempunyai aktivitas antibakteri. Kemampuan tersebut, karena
adanya kandungan 0,7-2,6% minyak atsiri yang sebagian besar terdiri dari
fenilpropana, kavikol, kavibekol, estragol, eugenol, metil eugenol, karvakol, sineol,
p-simol, terpinen, seskuiterpen, dan sekitar 0,8-1,8% berupa enzim diastase, tanin,
gula, dan amilum terpinen (Prayogo dan Sutaryadi, 1992).
Karvakol bersifat sebagai desinfektan dan antijamur, euganol dan metil
eugenol dapat digunakan untuk mengurangi sakit gigi (Syukur dan Hernani, 1999).
Menurut Mursito (2002), saponin dan tannin bersifat sebagai antiseptik pada
permukaan luka, bekerja sebagai bakteriostatik yang biasanya digunakan untuk
infeksi pada kulit, dan luka. Flavanoid berfungsi sebagai bakteriostatik dan anti
 32

inflamasi. Kartasapoetra (1992), menyatakan daun sirih antara lain mengandung

kavikol dan kavibetol yang merupakan turunan dari fenol yang mempunyai daya
antibakteri lima kali lipat dari fenol biasa terhadap Staphylococcus aureus.
Berdasarkan penelitian Agarwal et al., (2012) dengan metode difusi pada
konsentrasi 500 mg/ml, ekstrak etil asetat daun sirih dapat memberikan diameter
zona hambat pada Staphylococcus aureus sebesar 20 mm, Pseudomonas
aeruginosa sebesar 33 mm, dan Escherichia coli sebesar 38 mm. Selanjutnya, akar
kayu manis (Liquiritae Radix) yang memiliki banyak manfaat. Kandungan senyawa
kimia dari kayu manis antara lain minyak atsiri, safrole, sinamaldehida, tanin,
dammar, kalsium oksalat, flavonoid, triterpenoid, dam saponin (Utami dan
Puspaningtyas, 2013). Manfaat dari kayu manis adalah sebagai obat asam urat,
tekanan darah tinggi, maag, kurang nafsu makan, sakit kepala, diare, perut
kembung, susah buang air besar, dan sariawan (Utami dan Puspaningtyas, 2013).
Berdasarkan penelitian Fukai et al., (2002), terdapat senyawa glabridin dan
glabrene pada akar kayu manis dapat menunjukkan aktivitas antibakteri pada
Methicillin Sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) dan Methicillin Resistant
Staphylococcus aureus (MRSA) masing-masing pada konsentrasi 12,5 μg/ml.
Berdasarkan penelitian-penelitian tersebut, maka dapat menjadi bukti dan
alasan untuk menciptakan suatu produk herbal yang memiliki manfaat sebagai
antibakteri, sehingga diharapkan dengan adanya penelitian tentang tanaman obat
dapat menjadi dasar pembuatan produk herbal yang memiliki manfaat sesuai
dengan tujuannya dan aman digunakan oleh masyarakat.