Quantificação de Flavonoides e Polifenois
Quantificação de Flavonoides e Polifenois
Quantificação de Flavonoides e Polifenois
PESQUISA/RESEARCH
RESUMO
As plantas medicinais são utilizadas para o tratamento de diversos distúrbios de saúde por grande parte da população. A Trixis
antimenorrhoea (Schrank) Kuntze é empregada na medicina tradicional para tratamento de hemorragias uterinas e inflamação
nos olhos. O objetivo deste trabalho foi à identificação qualitativa de classes dos metabólitos secundários presentes em
amostras de folhas de Trixis antimenorrhoea (Schrank) Kuntze e a quantificação de polifenois totais e de flavonoides. As
características fitoquímicas da espécie estudada foram determinadas através dos ensaios para verificar presença de taninos,
alcaloides, antraquinonas, flavonoides, cumarinas e saponinas. A cromatografia em camada delgada foi utilizada para
determinar o perfil do extrato bruto da planta utilizando padrões de compostos fenólicos específicos. Para o doseamento de
polifenois totais e de flavonoides foram empregados métodos espectrofotométricos. A Trixis antimenorrhoea (Schrank)
Kuntze apresentou como metabólitos secundários compostos fenólicos, particularmente flavonoides e taninos. A espécie
vegetal apresentou 5,4% de polifenólicos totais e teor de flavonoides de 1,15,% comparado a quercetina e 2,03% comparado a
rutina. As análises fitoquímicas realizadas indicaram que a espécie vegetal estudada possui compostos que podem ser
potencialmente ativos.
Palavras-chave: Flavonoides, Compostos fenólicos, Plantas Medicinais
ABSTRACT
The medicinal plants are used for the treatment of various health disorders for most of the population. The Trixis
antimenorrhoea (Schrank) Kuntze is used in traditional medicine to treat uterine bleending and inflamation eye. The objective
of this study was the qualitative identification of classes of secondary metabolites in samples of leaves Trixis antimenorrhoea
(Schrank) Kuntze and quantification of total polyphenols and flavonoids. The phytochemical characteristics of the studied
species have been determined through essays to identify the presence of tannins, alkaloids, anthraquinones, flavonoids,
coumarins and saponins. The thin layer chromatography was to determine the profile of brute extract of the plant by using
specific standard of phenolic compounds. For dosing of total polyphenols and flavonoids were employed spectrophotometric
methods. The Trixis antimenorrhoea (Schrank) Kuntze presents flavonoids as secondary metabolites, particularly flavonoids
and tannins. The plant species had 5.4% of total polyphenol and flavonoid content of 1.15% compared to quercetin and 2.03%
compared to rutin. The phytochemicals analysis carried out showed that the studied plant species have compounds that can be
potentially active.
Keywords: Flavonoids, Phenolic compounds, Medicinal plants
INTRODUÇÃO
Segundo a OMS cerca de 80% da população de países medicinais (Rosa et al., 2011). No Brasil, esta situação é
em desenvolvimento faz uso de práticas tradicionais na semelhante, sendo que o uso de plantas medicinais, muitas
atenção primária à saúde e destes, 85% empregam plantas vezes, é o único recurso terapêutico de inúmeras comuni-
* Contato: Marta Maria Duarte Carvalho Vila, Rodovia Raposo Tavares, km 92,5, Sorocaba, SP, Brasil, CEP 18023-000, 55 15 2101-7104, e-mail:
marta.vila@prof.uniso.br
130
Granato et al.
Rev. Bras. Farm. 94 (2): 130-135, 2013
132
Granato et al.
Rev. Bras. Farm. 94 (2): 130-135, 2013
Em seguida foram adicionados 150 g de sulfato de lítio e hidroalcóolico teve a capacidade de proteger a mucosa
50 mL de água de bromo. A solução foi fervida para gástrica de ratos submetidos a tratamentos agudos com
eliminação do excesso de água de bromo. Completou-se o indometacina e etanol, respectivamente. Esse resultado foi
volume da solução para 1000 mL com água destilada. atribuído à presença de flavonoides e taninos, já que são
Após o preparo, manteve-se a solução sob refrigeração em grupos com uma variedade de efeitos biológicos, incluindo
frasco âmbar. atividade antiúlcera e prevenção de lesão gástrica, segundo
Solução de carbonato de sódio 29 mg mL-1: pesou-se 290 os autores (Pereira et al., 2005).
g de carbonato de sódio, dissolveu-se em água destilada e O perfil cromatográfico da Trixis antimenorrhoea
completou-se o volume para 1000 mL. Após o preparo a (Schrank) Kuntze obtido na cromatografia em camada
solução foi filtrada com papel de filtro qualitativo. delgada indicou a presença do ácido clorogênico. A
Soluções padrão de ácido tânico presença de ácido clorogênico pode favorecer uma ação
Solução mãe 250 µg mL-1: 0,025 g de ácido tânico foram antioxidante da espécie vegetal. O caráter antioxidante dos
transferidos para balão volumétrico de 100 mL, compostos fenólicos permite-lhes neutralizar as espécies
completando-se o volume com água destilada. reativas ao oxigênio. Esta propriedade confere aos
Soluções de ácido tânico: da solução mãe de ácido compostos fenólicos vasta atividade biológica, destacando-
tânico, foram transferidos 1 mL, 4 mL, 6 mL e 8 mL para se a diminuição do risco de doença cardiovascular (através
balões de 10 mL, completando-se o volume com água da diminuição da oxidação de LDL, queda da pressão
destilada, obtendo-se as concentrações de 25, 100, 150 e arterial e diminuição do nível de colesterol plasmático), a
200 µg mL-1, respectivamente. redução do risco de desenvolvimento da doença de
Alzheimer, a prevenção de alguns tipos de câncer e o
RESULTADOS E DISCUSSÃO retardamento do envelhecimento celular (Carvalho, 2007).
O uso de diferentes formas extrativas deu-se em função Os teores de flavonoides da Trixis antimenorrhoea
das exigências analíticas. Extratos etanólicos (70% v/v) a (Schrank) Kuntze estão indicados na tabela 2, sendo
1% e 5% (m/v) foram empregados pelo desconhecimento obtidos através da comparação com os padrões de rutina e
das potencialidades dos extratos advindos da espécie quercetina e observados em três comprimentos de onda
vegetal estudada. O ultrassom foi utilizado no preparo dos (405, 407 e 420 nm). As absorbâncias das soluções foram
extratos como o objetivo de aumentar a extração dos registradas a 405, 407 e 420 nm, uma vez que se
componentes (Victorio et al., 2009). desconhece a real composição flavonoidica das folhas de
A caracterização dos principais grupos químicos de Trixis antimenorrhoea. A verificação preliminar indicou
sustâncias vegetais foi feita através de reações de maior absorbância do extrato bruto etanólico, entre 400 e
precipitação e coloração características. Os resultados da 410 nm (e não tipicamente entre 415 e 430 nm para
prospecção fitoquímica da Trixis antimenorrhoea derivados flavonoidicos da classe dos flavonois, como
(Schrank) Kuntze para cada classe dos principais rutina e quercetina).
metabólitos secundários são apresentados na tabela 1. Sobrinho et al. (2008) analisando flavonoides em
Estes resultados indicaram a presença de taninos e extrato de Bauhinia cheilantha pelo método de
flavonoides. complexação com cloreto de alumínio e empregando
rutina como padrão, obtiveram o comprimento de onda de
Tabela 1. Prospecção fitoquímica das folhas de Trixis maior absorção 420 nm. Já o trabalho de Marques et al.
antimenorrhoea (Schrank) Kuntze. (2012) observaram, na análise de flavonoides de diferentes
Metabólitos secundários Reação de Caracterização Resultados
extratos de Bauhinia forficata, comprimentos de máxima
Alcaloides Reação de Bouchardat (-) absorção de 408 e 421 nm em comparação com os
Reação de Dragendorff (-) padrões quercetina e rutina, respectivamente.
Taninos (reação com barbatimão 20%) (-) Comprimentos de onda próximos a 425 nm
Antraquinonas Reação de Borntrager (-) correspondem à banda de absorção do complexo
Cumarinas Reação com hidróxido de potássio 5% em (-) quercetina-alumínio. A quercetina é um flavonol comum
metanol entre os flavonoides encontrados nas plantas. Entretanto,
Flavonoides Reação de Shinoda (+)
complexos derivados de flavonas absorvem em
Reação com hidróxido alcalino (+)
comprimentos de onda inferiores, o que pode causar uma
Reação com cloreto férrico a 2% (+)
subestimativa nas determinações de misturas ricas em
flavonas (Marcucci et al., 2012). Assim, é interessante
Reação com cloreto de alumínio (+)
empregar outro padrão de flavonoide, como a rutina, com
Saponinas Índice de espuma (-)
absorções máximas em diferente comprimento de onda,
Taninos Reação com cloreto férrico a 2% (+)
para melhor estimativa do teor total dos flavonoides. Pelos
Reação com acetato de chumbo a 10% (+)
resultados obtidos o comprimento de maior absorção em
Reação com acetato de cobre a 5% (+)
relação aos padrões utilizados foi de 405 nm, o que pode
Reação com acetato de chumbo e ácido (+)
indicar que o extrato detém um teor mais elevado de
acético glacial
flavonoides derivados de flavonas.
Reação com gelatina (+) Os flavonóides constituem uma classe de polifenois que
estão presentes em relativa abundância entre os
Em um estudo realizado com a Trixis antimenorrhoea metabólitos secundários de vegetais. Esses compostos
(Schrank) Kuntze com o objetivo de avaliar o efeito possuem também importância farmacológica, resultante de
antiúlcerogênico, foi demonstrado que o extrato algumas propriedades atribuídas a alguns representantes
133
Granato et al.
Rev. Bras. Farm. 94 (2): 130-135, 2013
dessa classe como ação anticarcinogênica, anti- tratamentos oftálmicos, como conjuntivites e oftalmias é
inflamatória, antialérgica, antiulcerogênica, antivirais, indicada, para aplicação local em compressas, o decocto
entre outras (Simões et al., 2000). das folhas e hastes (Lorenzi & Matos, 2008).
O efeito anti-hemorrágico, obtido pela ingestão de chás,
Tabela 2. Teor de flavonoides da Trixis antimenorrhoea provavelmente, pode ser decorrente da presença de
(Schrank) Kuntze comparados com padrão de quercetina e flavonoides, em função de sua atividade anti-inflamátoria
rutina, após reação com cloreto de alumínio em metanol (Simões et al., 2000). Outra possibilidade para explicação
em diferentes comprimentos de onda de sua atividade anti-hemorrágica recai na capacidade de
Comprimento Média das Flavonoides totais Flavonoides totais inibição da atividade da enzima xantina-oxidase por ação
de onda (nm) leituras das comparados com comparados com
dos flavonoides com diminuição da pressão sanguínea
mediada pela vasodilatação direta (Fiuza et al., 2008). Já
amostras quercetina (%) rutina (%) o efeito antimicrobianos dos taninos e flavonoides
405 0, 3325 1,98 2,83
(Mendes et al. 2011) permitem justificar o emprego
popular da Trixis antimenorrhoea (Schrank) Kuntze como
407 0, 3241 1,85 2,72 antisséptico local ocular.
420 0, 2604 1,15 2,03
CONCLUSÃO
Pelos dados obtidos pode-se concluir que a Trixis
A concentração de polifenólicos totais foi calculada antimenorrhoea (Schrank) Kuntze, tem em sua
empregando-se padrão de ácido tânico. A curva de composição fitoquímica, flavonoides e taninos como
calibração obtida apresentou equação da reta A= 0,090C + metabólitos secundários. Dentre os flavonoides houve a
0,005, com coeficiente de determinação (R) igual a 0,998, indicação da presença do flavonoide ácido clorogênico.
onde A é igual a absorbância e C a concentração de ácido Deve-se considerar, no entanto, que as reações empregadas
tânico. A espécie vegetal estudada apresentou 5,4% de na abordagem fitoquímica constituem um indicativo de
polifenólicos totais. presença dos componentes pesquisados, uma vez que,
Flavonoides, taninos e outras substâncias fenólicas são algumas das reações não apresentam especificidade
constituintes de plantas com potencial atividade suficiente, podendo resultar, em resultado falso-negativo.
antioxidante, principalmente, por atuarem como A espécie vegetal estudada apresentou 5,4% de
sequestradores de radicais de oxigênio. Pesquisas com polifenólicos totais e teor de flavonoides quantificado de
espécies vegetais ricas nestas substâncias demonstraram, 1,15,% comparados a quercetina e de 2,03% comparados
ainda serem fontes potenciais de novos agentes a rutina em 420 nm.
antimicrobianos. Considera-se também que a atividade As análises fitoquímicas realizadas indicaram que a
antimicrobiana apresentada por drogas vegetais pode ser espécie vegetal estudada possui compostos que podem ser
em função da presença de flavonoides, taninos, alcaloides, potencialmente ativos em modelos biológicos e
saponinas e terpenos (Souza et al., 2007). farmacológicos. São necessários ensaios para o
Segundo Mendes et al. (2011) a presença de taninos e fracionamento dos extratos brutos obtidos das folhas a fim
flavonoides pode conferir atividade antimicrobiana a um de identificar os princípios ativos e realizar ensaios
extrato. Deste modo, a presença desses compostos no biológicos para comprovar possível atividade biológica.
extrato da Trixis antimenorrhoea (Schrank) Kuntze leva à
expectativa de que esta espécie vegetal possa ter ação AGRADECIMENTOS
antimicrobiana. Ambos os extratos hidroalcóolicos Agradecemos a bióloga Sumiko Honda pela
analisados (1 e 5%) indicaram a presença de taninos e identificação da espécie estudada.
flavonoides. Este fato pode ser um indicativo que a espécie
vegetal em questão, poderia vir a ter efeito antimicrobiano
REFERÊNCIAS
mesmo empregando-se concentrações mais baixas dos
extratos, que eu seria interessante para seu emprego Almeida RB & Scheffer TP. Estudo sobre a utilização de
medicinal. recursos vegetais com potencial terapêutico. Rev. Saúde
Os taninos apresentam diversos efeitos, devido, Publ. Santa Cat. 5 (1): 50-71, 2012.
principalmente, as suas propriedades adstringentes. Os
Brasil. Ministério da Saúde. Secretaria de Atenção à
taninos empregados por via oral exercem efeito
Saúde. Cadernos de Atenção Básica, Práticas Integrativas
antidiarréico e antisséptico; em uso externo
e Complementares, Plantas Medicinais e Fitoterapia na
impermeabilizam as camadas mais expostas da pele e
Atenção Básica, 2012.
mucosas, protegendo assim as camadas subjacentes. Pela
capacidade de precipitar proteínas, os taninos propiciam Carvalho EB. Estudos da interacção entre proteínas e
um efeito antimicrobiano e antifúngico (Monteiro et al., taninos: influência da presença de polissacarídeos, 2007,
2005). Porto, 193 p. Tese de doutorado, Departamento de
A espécie vegetal Trixis antimenorrhoea (Schrank) Química, Faculdade de Ciências da Universidade do Porto.
Kuntze vem sendo utilizada na medicina popular para
Costa AF. Farmacognosia. 4ª ed. Lisboa: Fundação
diversos fins, mas destaca-se no tratamento de hemorragias
Caloust Gulbenkian, 1994.
uterinas e inflamação nos olhos. No caso dos distúrbios
uterinos é empregada, por via oral, na forma de chá, feito Farmacopeia Portuguesa IX, Vol. 1, Lisboa: Infarmed -
por decocção de suas raízes ou folhas frescas. Para Ministério da Saúde, 2008.
134
Granato et al.
Rev. Bras. Farm. 94 (2): 130-135, 2013
Fiuza TS, Rezende MH, Sabóia-Morais, SMT, Bara MTF, Rosa C, Camara SG, Beria, JU. Representações e intenção
Tresvenzol LMF, Paula J R. caracterização de uso da fitoterapia na atenção básica de saúde. Ciên
farmacognóstica das folhas de Eugenia uniflora L. Saúde Coletiva 16 (1): 311-318, 2011.
(Myrtaceae). Rev. Eletron. Farm. 5 (2): 1 - 11, 2008
Rocha WS, Lopes RM, Silva DB, Vieira, RF, Silva JP,
Fumagali, E.; Gonçalves, R.A.C.; Machado, M.F.P.S.; Agostini-Costa TS. Compostos fenólicos totais e taninos
Vidoti, G.J.; Oliveira, A.J.B. Produção de metabólitos condensados em frutas nativas do cerrado. Rev. Bras.
secundários em cultura de células e tecidos de plantas: o Frutic. 33 (4): 1215-1221, 2011
exemplo dos gêneros Tabernaemontana e
Rossato AE, Pierini MM, Amaral PA, Santos, RR,
Aspidosperma. Rev. Bras. Farmacogn. 8(4): 627-641,
ZanetteVC. Fitoterapia racional: aspectos taxonômicos,
2008.
agroecológicos, etnobotânicos e terapêuticos.
Gonçalves NMT, Gerenutti M, Chaves DAS, Vila MMDC Florianópolis: DIOESC, 2012
A tradição popular como ferramenta para a implantação da
Silva NCC, Fernandes Júnior A. Biological properties of
fitoterapia no município de Volta Redonda – RJ. Rev Bras.
medicinal plants: a review of their antimicrobial activity. J.
Farm. 92 (4):346-351, 2011.
Venom. Anim. Toxins incl. Trop. Dis. 16(3): 402-413,
Leite A C, Placeres Neto A, Ambrozin ARP, Fernandes 2010
JB, VieiraPC, Silva MFGF, Albuquerque S. Trypanocidal
Silva AJ, Costa RS, Mariano, AS, Silva KLS, Jordão, CO.
activity of flavonoids and limonoids isolated from
Análise farmacognóstica de amostras de espinheira santa -
Myrsinaceae and Meliaceae active plant
Maytenus ilicifolia (Schrad.) Planch. (Celastraceae)
extracts. Rev.Bras. Farmacogn. 20 (1): 01-06, 2010.
comercializadas em farmácias e banca popular de
Lorenzi H & Matos FJA. Plantas medicinais no Brasil: Votuporanga – São Paulo. Rev. Bras. Farm. 93(4): 457-
nativas e exóticas. 2ª ed. Nova Odessa: Instituto Plantarum 462, 2012
de Estudos da Flora Ltda, 2008.
Simões CMO, Schenkel EP, Gosmann G, Mello J C P,
Marcucci MC, Woisky RG, Salatino A. Uso de cloreto de Mentzi L A, Petrovick PR Farmacognosia: da planta ao
alumínio na quantificação de flavonoídes em amostras de medicamento. 2ª ed. Porto Alegre: Editora da UFSC, 2000.
própolis. Disponível em
Sobrinho TJSP, Silva CHTP, Nascimento JE, Monteiro
http://www.bichoonline.com.br/artigos/apa0014.htm.
JM, Albuquerque UP, Amorim ElC. Validação de
Acesso em 09/03/2013
metodologia espectrofotométrica para quantificação dos
Marques G S, Monteiro, RPM, Leão WF, Lyra MAM, flavonóides de Bauhinia cheilantha (Bongard)
PeixotoMS, Rolim-Neto PJ, Xavier HS, Soares Steudel. Rev. Bras. Cienc. Farm.44(4) 683-689, 2008.
AL. Avaliação de procedimentos para quantificação
Souza TM, Severi J Á,Silva VYA, Santos E, Pietro RCLR
espectrofotométrica de flavonoides totais em folhas de
Bioprospecção de atividade antioxidante e antimicrobiana
Bauhinia forficata Link. Quím. Nova , 35 (3): 517-522,
da casca de Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville
2012.
(Leguminosae-Mimosoidae) Rev. Ciênc. Farm. Básica
Mendes LPM, Maciel KM, Vieira ABR, Mendonça LCV, Apl., 28 (2): 221-226, 2007.
Silva RMF, Rolim Neto, PJ, Barbosa WLR, Vieira JMS.
Souza, TM, Santos LE, Moreira, RRD, Rangel
Atividade antimicrobiana de extratos etanólicos de
VLBI. Avaliação da atividade fotoprotetora de Achillea
Peperomia pellucida e Portulaca pilosa. Rev Ciênc Farm
millefolium L. (Asteraceae). Rev. Bras. Farmacogn. 15(1):
Básica Apl., 32(1):121-125, 2011.
36-38, 2005.
Monge M. Trixis in Lista de Espécies da Flora do Brasil.
Victorio C P, Lage C L S, Kuster, R M. Flavonoid
Jardim Botânico do Rio de Janeiro, 2010. Disponivel em
extraction from Alpinia zerumbet (Pers.) Burtt et Smith
<http://floradobrasil.jbrj.gov.br/2010/FB005532> Acesso
leaves using different techniques and solvents. Eclet.
em 21/07/2011.
Quím. 34(1): 19-24, 2009.
Monteiro JM, Albuquerque UP, Araujo EL, Amorim E L
Villas Boas GK, Gadelha CAG. Oportunidades na
C. Taninos: uma abordagem da química à ecologia. Quím.
indústria de medicamentos e a lógica do desenvolvimento
Nova 28 (5): 892-896, 2005.
local baseado nos biomas brasileiros: bases para a
Omes, SVF, Nogueira PCL, Morae SVRS. Aspectos discussão de uma política nacional. Cad. Saúde Pública
químicos e biológicos do gênero Lippia enfatizando Lippia 23(6): 1463-1471,2007.
gracilis Schauer. Eclet. Quím. 36(1):64-77, 2011.
Wagner H & Bladt S. Plant drug analysis. 2ª ed. New
Pereira FH, Guimarães SLAF, Cerutti SM, Rodriques York: Springer Verlag, 1996.
RFO, Araujo CEP. Preliminary anti-ulcerogenic and
Waterman PG & Mole S. Analysis of phenolic plant
chemical analysis of the aerial parts of Trixis divaricata
metabolites. Oxford: Balckwell Scientific Publications,
Sprengel. Acta Farm. Bonaerense. 24 (1): 80-84, 2005.
1994.
Reicher F, Sierakowski MR, Correa JBC. Determinação
espectrofotometrica de taninos pelo reativo fosfotungstico-
fosfomolibdico. Arq. Biol. Tecnol. 24(4): 407-411, 1981.
135
Granato et al.