OBTENÇÃO DE EXTRATO DE ROSAS VERMELHAS E USO NO

DESENVOLVIMENTO DE FORMULAÇÃO DE USO TÓPICO

Gisele Mara Silva Gonçalves1*

Caroline O. M. Gomes1
Tatiane M. C. Ferreira1
Gustavo H. Silva1
Orlando M. Soeiro 1

1. Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Pontifícia Universidade Católica de Campinas, Campinas, SP. Av. John
Boyd Dunlop, s/n, Jardim Ipaurussurama, 13059‑900 Campinas, SP

INTRODUÇÃO meira escolha para tratamento de lesões herpéticas. Possui

o melhor índice terapêutico de todos os antivirais, devido
O uso mundial de fitoterápicos tem tido o apoio da à ausência de efeitos tóxicos (Santos, 2002). A resistência
Organização Mundial de Saúde (WHO, 2002). Apesar da ao aciclovir® acontece através de mutações no gene viral
extensa e diversificada flora existente no Brasil, o país que codifica a enzima timidina‑quinase (TK), gerando mu‑
não tem uma atuação destacada nesse mercado, fican‑ tantes deficientes em TK, ou pela seleção de mutantes que
do inclusive atrás de países menos desenvolvidos tec‑ possuem uma TK incapaz de fosforilar o aciclovir®. Estas
nologicamente (Yunes, 2001). Para garantir a qualidade cepas resistentes foram identificadas como causadoras de
da matéria‑prima, é necessária a realização de diversos pneumonia, encefalite, esofagite e infecções mucocutâne‑
estudos de forma a padronizar o extrato a ser utilizado as em pacientes imunodeprimidos (Fonseca, 1999).
no desenvolvimento de formulações (Bara et al., 2006). Em relação a outras formas de combate ao herpes
O combate de doenças a partir de extratos vegetais tem vírus, a quercetina é uma substância promissora e pode
sido relatado desde a antiguidade. No caso das doenças ser encontrada em extratos vegetais (Chiang et al., 2003;
virais, apesar de já terem sido desenvolvidos alguns fár‑ Middleton, 1998). A quercetina é a aglicona (flavonóide
macos eficazes, na sua maioria ainda pesquisa‑se maneiras sem açúcar ligado). A quercetina, ligada a açúcares pode
de curá‑las. Isso ocorre porque os vírus possuem vários formar rutina, o quercitrósido, o isoquercitrósido e o hipe‑
mecanismos de resistência e, ainda, podem ficar latentes rósido. Estas moléculas têm a mesma estrutura que a quer‑
no organismo humano, tornando‑se de difícil detecção e cetina, a não ser por uma molécula específica de açúcar no
tratamento (Santos, 2002). As infecções ocasionadas pelo C3, que muda dramaticamente a atividade da molécula. A
vírus Herpes humano (HSV – 1 e 2) em geral provocam quercetina pode ser encontrada em vegetais como cebola,
erupções características. Estima‑se que cerca de 70 a 90% maçã, brócolis, sementes e flores, como por exemplo, as
da população seja portadora desse vírus de fácil transmis‑ rosas, sendo encontrada em maior concentração nas rosas
são, apresentando infecção latente sem manifestações clí‑ vermelhas e freqüentemente é o componente principal da
nicas. A comunidade científica tem um especial interesse atividade medicinal das plantas (Lima et al., 2003; Fritz
na busca de substâncias ativas para o combate e/ou cura et al., 2007; Wang et al, 1998). As rosas, genericamente,
das diversas doenças virais (Pereira, 2002). possuem em sua composição várias substâncias, dentre
Após a infecção primária, anticorpos neutralizantes elas óleo essencial, taninos, quercetrósidos e antocianó‑
para HSV são detectados no soro de indivíduos infectados. sidos (De Vries et al., 1980). Considerando a composição
Alguns indivíduos soropositivos desenvolvem lesões labiais mencionada, presume‑se que o extrato de rosas verme‑
ou genitais recorrentes, expressando clinicamente a pro‑ lhas possa apresentar efeito adstringente, antidiarreico,
priedade biológica própria dos HSV de recorrer periodica‑ cicatrizante, antibacteriano e antiinflamatório devido à
mente na presença de imunidade humoral, fato conhecido presença de taninos, bem como efeito anti‑séptico devido
por reativação da infecção latente (Fonseca, 1999). O her‑ aos óleos essenciais e aos antocianósidos.
pes vírus humano tipo 1 está distribuído em todo o mundo, O presente trabalho teve por objetivos a obtenção
tanto em países em desenvolvimento, incluindo tribos in‑ do extrato de rosas vermelhas, a análise quali e quanti‑
dígenas, quanto em países mais desenvolvidos. Não existe tativa do extrato em relação à quercetina, bem como a
prevalência de soro positividade do HSV 1 em nenhum gru‑ utilização do extrato obtido no desenvolvimento de uma
po racial (Santos, 2002). O aciclovir® é o fármaco de pri‑ formulação de uso tópico.

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MATERIAL E MÉTODOS Avaliação das formulações objeto de estudo. Os
estudos subseqüentes foram baseados no “Guia de estabi‑
Material Vegetal. As rosas vermelhas foram adquiri‑ lidade de produtos cosméticos”, uma publicação brasileira,
das na cidade de Holambra, SP, Brasil, onde são cultivadas. da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Guia, 2004).
Foi realizada a descrição farmacobotânica, macroscópica e Foram realizados: teste preliminar de estabilidade por
microscópica das flores utilizadas. centrifugação (centrifugação de 5g da formulação por 30
Preparação de extratos. O método foi baseado em minutos a 3000 rpm e verificação da separação de fases),
Silva et al (2005). As pétalas foram secas durante 24 horas determinação potenciométrica do pH das formulações di‑
em temperatura ambiente e a seguir em estufa com circu‑ luídas a 10% com água destilada, avaliação do aspecto,
lação mecânica de ar, a 40°C por 2 horas até peso cons‑ cor e odor. Essas avaliações foram consideradas como tem‑
tante, seguidas de trituração em processador. A extração po zero. Em seguida, as formulações foram acondicionadas
foi realizada por refluxo, em triplicata, utilizando‑se 30 g em potes de plástico de fundo falso de capacidade de 30g,
de pétalas secas e 300 ml de uma mistura de etanol: água em bisnagas de alumínio e também em potes de vidro, e
destilada (7: 1) a 60°C durante 30 minutos, seguida de armazenadas em temperaturas ambiente, em geladeira a
filtração a vácuo enquanto o extrato ainda estava quente. 5°C e em estufas a 25, 40 e 60°C, sendo periodicamente
O refluxo foi repetido com o resíduo obtido, por três vezes. reavaliadas durante 28 dias.
Para a hidrólise do extrato, adicionaram‑se 10% de ácido
sulfúrico, a 30°C por 5 minutos. Em seguida, os extratos
permaneceram em repouso por alguns minutos e filtrados à RESULTADOS
vácuo cuidadosamente. O resíduo foi desprezado.
Análise do extrato. O extrato foi analisado por cro‑ Descrição Farmacobotânica: As rosas vermelhas
matografia em camada delgada. O método foi baseado em utilizadas no trabalho são comercializadas no Brasil com o
Silva et al (2005). A fase móvel foi composta de acetato nome de Rosa Carola, cultivadas em Holambra, São Paulo,
de etila: ácido fórmico: ácido acético: água destilada (100: Brasil. A rosa é resultado do cruzamento de duas espécies
11: 11: 27) e o revelador foi solução de cloreto férrico a diferentes, ou seja, híbrida, e pertence ao gênero Rosa-
5%. A primeira placa cromatográfica foi preparada com as ceae e de nome científico desconhecido. Foram utilizadas
alíquotas separadas dos extratos não hidrolisados e padrões dois dias após a coleta.
de quercetina a 1 e 0,5 mg/ml em metanol. Foram realiza‑ Descrição Macroscópica: O tamanho do botão floral
dos 5 aplicações no spot de quercetina e 15 aplicações nos da rosa varia de 5,5 a 6,5 cm. Os botões têm cada um de
demais spots. Após o desenvolvimento por 10 cm e, em se‑ 34 a 38 pétalas, as quais têm tamanho variado. As pétalas
guida, a placa foi seca e revelada. A segunda placa croma‑ mais externas variam seu tamanho de 6,2 a 6,5 cm de
tográfica foi preparada com as alíquotas separadas dos ex‑ comprimento por 6,5 a 7,0 cm de largura; as pétalas inter‑
tratos hidrolisados, seus resíduos e o padrão de quercetina. mediárias variam de 7,0 a 7,5 cm de comprimento por 7,5
A terceira placa cromatográfica foi apenas confirmatória, a 7,8 cm de largura; e as pétalas mais internas variam de
para comparar a intensidade de coloração das manchas. 5,2 a 5,8 cm de comprimento por 5,6 a 6,3 cm de largura.
Procedimento de concentração do extrato obtido. O cálice é regular, dialissépalo e pentadenteado, a corola
O extrato foi concentrado em evaporador rotatório. possui formato rosáceo, é regular e dialipétala. O receptá‑
Neutralização do extrato. O extrato final foi neutra‑ culo possui formato côncavo. As flores são hermafroditas,
lizado com hidróxido de sódio. Esse extrato foi deixado em sendo o gineceu dialicarpelar e policarpelar, com o ovário
repouso para decantar, filtrado à vácuo e armazenado em médio e em formato piriforme. O estilete é terminal e o
frasco de vidro âmbar, sob refrigeração. estigma é bilobado. O androceu é regular e composto por
Desenvolvimento de formulações tópicas conten‑ inúmeros estames livres, sendo que as anteras apresentam
do o extrato obtido formato sagitado. As pétalas possuem formato oboval a
Em estudos preliminares foram elaborados diversos ti‑ orbicular, sendo o ápice obtuso e a base arredondada. A
pos de formulações para a adição do extrato obtido a partir margem é lisa, o contorno da pétala não possui recortes
das rosas vermelhas, sendo que foram preparadas 31 formu‑ e a nervação é palmatinérvia. A face superior das péta‑
lações a base de géis e emulsões. Essas formulações foram las é aveludada e suculenta apresentando uma coloração
submetidas a testes preliminares de estabilidade e os resul‑ vermelha intensa. Já a face inferior é membranácea com
tados obtidos não foram satisfatórios. Assim, para aperfeiço‑ coloração vermelha tendendo ao lilás.
ar a estabilidade foi desenvolvida uma pomada, que consis‑ Descrição Microscópica das pétalas: A epiderme
tiu de Polioxietilenoglicol 4000 (20 %), Polioxietilenoglicol adaxial é composta por uma única camada de células que
1500 (24 %), Polioxietilenoglicol 400 (16 %), Fenoxietanol apresentam papilas. O mesófilo é homogêneo composto
e Parabenos (0,6 %), Edetato de Dissódico (0,1 %), Sulfito por parênquima lacunos. A epiderme abaxial é constituída
de sódio (0,1 %), Propilenoglicol (35,2 %), tendo sido acres‑ por uma única camada de células e o mesófilo apresenta
cida de 4 % do extrato de rosas obtido em nosso estudo. delicados feixes vasculares dispostos no arranjo palma‑

4 Infarma, v.21, nº 3/4, 2009

tinérvio. Nos feixes vasculares são observados frequen‑ extração preliminar foi realizada com pétalas frescas, as‑
temente vasos escalariformes. Não ocorre a presença de sim como indicado no trabalho de referência. Porém, a
inclusões de substâncias inorgânicas ou orgânicas na cé‑ água presente provocou a diluição do líquido extrator e
lula das pétalas. diminuiu a eficácia da extração, visto que a quercetina,
Análise dos extratos por cromatografia em ca‑ substância ativa a ser extraída, tem baixa solubilidade
mada delgada. Nenhuma das manchas da primeira placa em água. Assim, o método foi adaptado e utilizaram‑se
apresentou quercetina, que estava ausente no extrato não pétalas secas e moídas, para aumentar a superfície de
hidrolisado. A segunda placa demonstrou a presença de contato com o líquido extrator, aumentando a eficiência
quercetina na triplicata dos extratos hidrolisados. Como os da extração. Além dessa modificação, alterou‑se também
resíduos não apresentaram quercetina, estes foram descar‑ o líquido extrator, tendo vista que o metanol utilizado
tados. Na terceira placa, o resultado se repetiu inicialmente não deveria ser empregado, já que o ob‑
Desenvolvimento de formulações. Os resultados jetivo do extrato é o uso medicamentoso. Assim, como
obtidos no estudo de estabilidade das formulações estão a quercetina é solúvel em etanol a quente, o etanol foi
demonstrados na Tabela 1. selecionado.
Para a análise qualitativa de quercetina no extrato
foi adotada a cromatografia em camada delgada (CCD). A
DISCUSSÃO primeira análise do extrato, assim como já era esperado,
apontou a ausência de quercetina. Isso aconteceu por‑
A busca de formas de tratamento da infecção pelo que a quercetina está presente na rosa vermelha na forma
herpesvírus humano que reduzam o tempo de manifestação de quercetrósido, ou seja, a quercetina está ligada a um
da doença e retardem o tempo de reincidência da mesma é pirano e uma manose (Index Merck, 1999). Para quebrar‑
de importância fundamental. A quercetina é um flavonóide mos essa ligação e obtermos a quercetina livre no extrato,
presente nas pétalas das rosas vermelhas e tem conhecida foi adotada a hidrólise ácida utilizando ácido sulfúrico a
ação antiviral. Nesse trabalho, obteve‑se o extrato de ro‑ 10%, assim como indica a literatura (Oliveira, 1998). Para
sas vermelhas contendo quercetina, que foi incorporado a confirmar o sucesso da hidrólise, o extrato hidrolisado
uma formulação de uso tópico, para atuar de maneira local foi analisado em CCD, sendo confirmada a presença de
no combate ao Herpes simples tipo 1. quercetina. O processo de hidrólise gerou um precipitado
Uma dificuldade observada nesse trabalho foi identifi‑ no extrato, o qual foi analisado em CCD para confirmar
car a espécie da rosa empregada, sendo que foi realizada a a ausência de quercetina no mesmo, podendo assim ser
classificação farmacobotânica, bem com descrições macro e desprezado após filtração.
microscópicas. Entretanto, ainda assim não foi possível de‑ Antes de incorporar o extrato na formulação, o mes‑
terminar a espécie selecionada, pois verificamos que se tra‑ mo teve de ser neutralizado com hidróxido de sódio, pois
tava de um híbrido, ou seja, um cruzamento de espécies. o pH após a hidrólise ácida fica muito baixo, em torno de
O método de extração foi baseado no método uti‑ 1,0, o que é inviável para uso tópico. O pH final do extrato
lizado no trabalho de Silva e colaboradores (2005). Uma ficou entre próximo a 7, considerado ideal para a pele.

Tabela 1. Variação de odor, cor, aspecto e pH da formulação objeto de estudo em função do tempo, temperatura e ma‑
terial de acondicionamento.

5°C A AC H 7,50 A AC H 7,50 A AC H 7,50

0 25°C A AC H 7,50 A AC H 7,50 A AC H 7,50
40°C A AC H 7,50 A AC H 7,50 A AC H 7,50
5°C A AC H 7,26 A AC H 7,60 A AC H 7,25
14 25°C A AC H 7,00 A AC H 7,30 A AC H 7,00
40°C A E H 6,49 A E H 6,85 A AC H 6,95
5°C A AC H 7,00 A AC H 7,40 A AC H 7,10
28 25°C A AC H 6,80 A AC H 6,90 A AC H 6,80
40°C A H 6,20 A E H 6,10 A AC H 6,55

A = agradável; AC = amarelo claro; E = amarelo escuro; H = homogêneo.

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 A princípio, para avaliar qual a forma farmacêutica REFERÊNCIAS
ideal para a veiculação do extrato, foram realizados estu‑
dos preliminares com emulsões e alguns polímeros forma‑ BARA, M. T. F.; RIBEIRO, P. A. M.; ARANTES, M. C. B.; AMORIM, L. L.
dores de gel. Com o andamento do trabalho, foi também S.S.; PAULA, J. R. Determinação do teor de princípios ativos em
incluída a forma farmacêutica pomada. Assim, as formas matérias‑primas vegetais. Rev. Bras. Farmacogn. 16:2, 2006.
farmacêuticas de gel, emulsão O/A e pomada foram acres‑ CHIANG, L.C.; CHIANG, W.; LIU, M. C.; LIN, C. C. In vitro antiviral
cidas de extrato de rosas vermelhas e submetidas a dife‑ activities of Caesalpinia pulcherrima and its related flavonoids.
rentes condições de armazenamento e avaliadas quanto à J. Antimicrob. Chemother. 52: 194‑198, 2003
estabilidade para definir‑se a melhor a ser sugerida para
VRIES, D. P.; GARRETSEN, F.; DUBOIS, L. A. M.; VAN KEULEN, H. A.
o novo medicamento. Nestes estudos, a pomada mostrou Breeding research on rose pigments. II. Combining ability analy‑
ser a mais estável. Todas as formulações mostraram resul‑ ses of variance of four flavonoids in F1 populations. Euphytica.
tados adequados, quase sem nenhuma alteração signifi‑ 29(1)115‑120, 1980.
cativa. Esses resultados superiores são devido ao fato que
FONSECA, BENEDITO A. LOPES DA. Clínica e tratamento das infecções
as pomadas têm menos ou nenhuma água em sua compo‑ pelo vírus herpes simplex tipo 1 e 2. Medicina, 32:147‑153, 1999.
sição, fato este que evita reações de hidrólise e diminui
muito a oxidação de seus componentes. Em seguida, a fim FRITZ, D.; VENTURI, C. R.; CARGNIN, S.; SCHRIPSEMA, J.; ROEHE,
P. M.; MONTANHA, J. A.; POSER, G. L. Herpes virus inhibitory
de determinar o melhor tipo de acondicionamento para
substances from Hypericum connatum Lam., a plant used in sou‑
a formulação objeto de estudo, foram avaliadas algumas thern Brazil to treat oral lesions. Journal of Ethnopharmacology.
condições e embalagens. As formulações acondicionadas 113(3):517‑520, 2007.
em bisnagas de alumínio apresentaram‑se com maior
GUIA de Estabilidade de Produtos Cosméticos – Séries Temáticas,
estabilidade, mostrando que essa forma de acondiciona‑
volume 1, maio de 2004. Disponível em: <www.anvisa.gov.br>.
mento é a ideal, dentre as avaliadas. Acesso em 05 de março 2006.
Após todas as avaliações realizadas a melhor for‑
mulação foi a pomada, que foi então re‑submetida a INDEX MERCK. CHAPMAN & HALL. USA. 1999. CD‑ROM.
um último estudo, confirmatório, pelo mesmo período LIMA, L. R. P.; OLIVEIRA, T. T.; NAGEM, T. J. Efeitos do flavonóide
que as outras e após dois meses da sua formulação. quercetina e dos corantes bixina e norbixina sobre parâmetros
Baseando‑se nos resultados anteriores, sugere‑se que sanguíneos de coelhos. Rev. Nutr. 16(3): 2003.
essa ultima formulação proposta é a ideal para a veicu‑
MIDDLETON, A.; KAULT, T.N. Antiviral effect of flavonoids on human
lação do extrato de rosas vermelhas obtido e proposto viruses. J. Med. Virol. 15: 71‑79, 1985.
no presente trabalho.
Considerando‑se que o Herpes provoca uma doença OLIVEIRA, F.; AKISUE, G.; AKISUE, M.K. Farmacognosia. Editora
Atheneu: São Paulo. 1998 418 pág.
viral que não tem cura, essa é uma doença perigosa em
pessoas imunodeprimidas e a busca por formas de trata‑ PEREIRA, M.B.C. Detecção do herpes virus humano 1 e 2e do cito‑
mento que reduzam o tempo de manifestação da doença megalovirus nos gânglios trigeminais de cadáveres, através da
e que retardem o tempo de reincidência da mesma é de técnica imunoenzimática, utilizando anticorpos monoclonais.
2002. 82f. Tese de doutorado: Curso de Pós‑Graduação em Medi‑
suma importância. Assim sendo, a formulação proposta
cina Área de Concentração: Dermatologia, Universidade Federal
nesse trabalho pode contribuir para esse tratamento. do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2002.
Porém, vale salientar que são necessários ainda, estudos
de toxicidade e de estabilidade dessas formulações. SANTOS, N. S. O.; ROMANOS, M. T. V.; WIGG, M. D. Introdução à vi‑
rologia humana. Editora Guanabara Koogan: Rio de Janeiro‑RJ.
2002. pág 75‑85

CONCLUSÃO SILVA, C. C. A.; MIRANDA, E. M.; OLIVEIRA, I. G.; ALVARENGA, J. R.;

CHAVES, M. A.; OLIVEIRA, P. C. P. Desenvolvimento de fitoderiva‑
dos oriundos da espécie dimorphandra mollis. Revista iniciação
Nas condições experimentais do presente trabalho
científica 3, p.225‑234.
foi possível concluir que o uso de uma rosa vermelha hí‑
brida dificulta a padronização do extrato, uma vez que, WANG, H. K.; XIA, Y.; YANG, Z. Y.; NATSCHKE, S. L.; LEE, K. H. Recent
a cada cruzamento, a quantidade das substâncias ativas advances in the discovery and development of flavonoids and
their analogues as antitumor and anti‑HIV agents. Adv Exp Med
varia (dentre elas, a quercetina). Foi possível obter o ex‑
Biol. 439:191‑225, 1998.
trato contendo quercetina, sendo que dentre as formula‑
ções avaliadas a que apresentou a melhor estabilidade e, WHO 2002. Report on infectious diseases. World Health Organiza‑
portanto, a proposta para veiculação do extrato de rosas tion, Geneva, Switzerland.
vermelhas foi a formulação de pomada. Além disso, dentre YUNES, ROSENDO A. Fármacos e fitoterápicos: a necessidade do de‑
os diversos materiais de acondicionamentos avaliados, o senvolvimento da indústria de fitoterápicos e fitofármacos no
mais adequado foram as bisnagas de alumínio. Brasil. Quim. Nova, 24(1): 147‑152, 2001.

6 Infarma, v.21, nº 3/4, 2009