As perguntas sublinhadas são as do exame e da freq do ano passado

Verdadeiros /Falsos

1. No processo de replicação do DNA das células, as mutações que se

observam ocorrem com mais facilidade:

Na cadeia avançada aquando da ligação dos fragmentos de Okasaki F

Na cadeia avançada por ineficiência do processo de reparação F
Na cadeia atrasada aquando a ligação dos fragmentos de Okasaki F
Na cadeia atrasada por ineficiência do processo de reparação F
Na cadeia atrasada por ineficiência do processo de polimerização F

2. A glicosilação das proteínas ocorre principalmente:

Nas proteínas intracelulares citoplasmáticas sintetizadas nos ribossomas livres F

Nas proteínas intracelulares citoplasmáticas sintetizadas nos ribossomas ligados ao
retículo endoplasmático V
Nas proteínas de secreção sintetizadas nos ribossomas livres F
Nas proteínas de secreção sintetizadas nos ribossomas ligados ao retículo
endoplasmático V
Nas proteínas que detém o sinal de glicosilação em -N, independentemente do seu
local de síntese F

3. A existência de uma sequência de DNA num gene recombinante que

codifique um péptido de sinal serve para:

Marcar esse DNA para transcrição F

Marcar o RNA transcrito para migração para o citoplasma F
Marcar o RNA transcrito para mais frequente tradução F
Marcar a proteína traduzida para migração para o citoplasma F
Marcar a proteína traduzida para secreção V

4. O promotor pT7 (promotor do fago T7) nos microrganismos recombinados é

regulado: (Não tenho a certeza)

Pela expressão da polimerase do fago F

Pela regulação da expressão da proteína reguladora CI F
Pela temperatura por desnaturação do promotor F
Pela temperatura por desnaturação da proteína reguladora F
Pelas disponibilidades energéticas na célula recombinante V

5. As fases para obtenção de um baculovírus recombinante para a expressão

biotecnológica incluem:

A adequação das extremidades do gene de interesse com os locais de integração

no DNA do baculovírus e utilização da ligase para recombinante
Co-trasnfeção das células hospedeiras com DNA viral selvagem e DNA da proteína
de interesse.
Co-trasnfeção das células hospedeiras com DNA viral selvagem e plasmídeo
recombinado com o DNA da proteína de interesse.
Seleção de recombinantes por resistência a antibiótico V
Seleção de recombinante por expressão de marcador metabólico

6. Um YAC tem como elementos essenciais para a expressão nas células

hospedeiras:

Centrómero e telómero V
Um marcador de seleção metabólica F
Dois marcadores de seleção metabólica V ( tem um marcador em cada braço)
Gene de resistência antibiótico V
Promotor procariótico para regulação da expressão F

7. Processos usados na purificação de proteínas recombinantes:

Precipitação diferencial V(??)

Centrifugação F(??)
Cromatografia de troca iónica V
Cromatografia de afinidade V
Cromatografia de exclusão molecular V

8. A cromatografia de afinidade em oligo(dT)-celulose destina-se:

Preparar o DNA do gene de interesse a clonar F

Preparar o DNA dos genes em expressão em determinada célula F
Prepara o RNA do gene de interesse a clonar V
Prepara o RNA dos genes em expressão em determinada célula V
Viabilizar a preparação do cDNA dos genes de interesse a clonar V

9.A estrutura primário de uma proteína numa determinada célula hospedeira

depende:

Da sequência de nucleótidos do gene dessa proteína

Da sequência de aminoácidos dessa proteína
Dos elementos da estrutura secundária dessa proteína
Da existência das hsp (Heat shock protein) apropriadas na célula
Da existência das ubiquitinas apropriadas na célula

10. A estrutura terciária de uma proteína numa determinada célula hospedeira

depende:

Da sequência de nucleótidos do gene dessa proteína F

Da sequência de aminoácidos dessa proteína V
Dos elementos da estrutura secundária dessa proteína V
Da existência das hsp (Heat shock protein) apropriadas na célula F
Da existência das ubiquitinas apropriadas na célula F

11. Um animal é considerado transgénico para um gene recessivo:

Tem esse gene especificamente alterado em alelo de células somáticas F

Tem esse gene especificamente alterado em todas as suas células germinais V
Do cruzamento com animal não transgénico toda a descendência tem as novas
características F
Do cruzamento com animal transgénico nem toda a descendência tem as novas
características V
Do cruzamento com animal transgénico toda a descendência tem as novas
características V(?)
12. Uma mutação designa-se de “hot-spot” quando:

Ocorre numa zona de fragilidade do cromossoma F

É mais frequente que outras mutações que se observam no mesmo gene V
A célula em que ocorre deixa de ser viável pela ocorrência dessa mutação F
A célula em que ocorre tem maior viabilidade que as células em que ocorrem outras
mutações V
Confere resistência a um antibiótico F

13. A concessão de uma patente para um processo biotecnológico está

dependente do:

Tipo de material biológico usado no processo inovador F

Nível de inovação identificável no novo processo V
Aplicação real do processo inovador V
Aplicação potencial do processo inovador F
Risco potencial para a saúde humana F

14. A atenuação da expressão nos genes que codificam as enzimas

responsáveis pela síntese do triptofano envolve:

Terminação precoce da transcrição V

Terminação precoce da tradução F
Degradação parcial do mRNA sintetizado F
Alteração nos níveis de cAMP para repressão da expressão dos genes envolvidos F
Ligação da molécula do triptofano ao operador para controlo da expressão F

15.A utilização do CaCl na preparação de bactérias competentes destina-se

a:(?)

Suplementar os nutrientes para maior viabilidade da bactéria hospedeira V

Solubilizar o DNA recombinante para melhor penetração na bactéria hospedeira V
Precipitar o DNA recombinante para penetração facilitada na célula hospedeira F
Fragilizar a bactéria hospedeira para minimizar a sua capacidade de destruição do
DNA recombinante V
Constituir uma fonte energética complementar para melhor crescimento da bactéria
hospedeira F

16. No âmbito dos processos de Engenharia Genética, a transformação

artificial bacteriana pretende:

Induzir mutações nas bactérias para uma mais eficiente adaptação ao meio V
Alterar o fenótipo bacteriano para metabolização de diferentes substratos F
Fragilizar as bactérias para estas mais facilmente aceitarem DNAs estranhos V
Alterar o genótipo bacteriano pela inclusão de gene estranho de interesse F
Adicionar capacidade de resistência a antibiótico V

17. Na replicação de genomas eucarióticos há perda de DNA nas extremidades

porque:

A polimerase do DNA não pode começar a cópia no início da cadeia

A polimerase do DNA termina a cópia antes do fim da cadeia
As topoisomerases não sintetizam quantidades de DNA suficientes para compensar
Se perdem alguns fragmentos de Okasaki
Ocorrem mutações espontâneas V

18. Dizer que replicação dos ácidos nucleicos ocorre no sentido 5’-3’ da nova
molécula, significa que:

As polimerases só adicionam nucleótidos às extremidades 5’-fosfato F

As polimerases só adicionam nucleótidos às extremidades 3’-fosfato F

As polimerases só adicionam nucleótidos às extremidades 5’-OH F

As polimerases só adicionam nucleótidos às extremidades 3’-OH V

As polimerases só adicionam nucleótidos às extremidades 5’-fosfato e 5’-OH F

19. As mutações pontuais mais penalizadoras dos processos de expressão

biotecnológica são:

Mutações silenciosas F

Mutações “missense” F
Mutações “non-sense” V

Mutações de “frameshift” V

Mutações de reversão verdadeiras F

20. A transcrição do mRNA termina:

No codão de terminação F

No local de poliadenilação F

Quando se inicia o processo de splicing nos procariotas F

Quando se inicia o processo da tradução nos eucariotas F

A polimerase chega ao fim do gene e não tem mais molde para continuar F

21. Os mRNAs eucarióticos citoplasmáticos são protegidos da degradação

intracelular:

Pelo “cap” que impede a hidrólise por exonucleases V

Pelo “cap” que impede a hidrólise por endonucleases F

Pelas caudas de Poli-A que inibem a hidrólise por exonucleases antes das
sequências codificantes V

Pelas caudas que Poli-A que inibem a hidrólise por endonucleases em vez das
sequências codificantes F

Pelos intrões que não são substratos de nucleases F

22. Na regulação da expressão genética típica dos genes das vias catabólicas
da E.coli:

O substrato funciona como indutor V

O substrato funciona como repressor F

O substrato funciona como co-repressor F

A regulação é independente da concentração do substrato F

A regulação só ocorre na ausência do substrato F

23. A presença de glucose num meio de cultura interfere com a expressão dos
genes das vias catabólicas por:

Indução da expressão por analogia da glucose com o indutor natural F

Repressão da expressão por competição da glucose com o indutor natural V

Aumento dos níveis de cAMP que promove a expressão dos genes catabólicos F

Diminuição dos níveis de cAMP que reprime a expressão dos genes catabólicos V

A glucose não intefere com a expressão dos genes das vias catabólicas F

24.Elementos genéticos dispensáveis em plasmídeos para a expressão de

proteínas recombinantes em procariotas:

Origem de replicação procariótica F

Origem de replicação eucariótica V

Marcador antibiótico para seleção F

Marcador metabólico para seleção V

MCS nas três grelhas de leitura F

25. Como primeira opção, se quisesse obter uma proteína de mamífero por
recombinação de DNA em E. coli, partiria de uma sequência nucleotídica:

Isolada do respetivo gene F

Isolada do gene homólogo de procariota F

Artificialmente construída V

Isolada a partir do respetivo mRNA V

Isolada de gene homólogo de S. cerevisiae F

26. Na situação da questão anterior, que elementos de regulação necessitaria

no seu vetor recombinante:

Promotor eucariótico reprimível F

Promotor eucariótico indutível V

Promotor distal (enhancer) F

Promotor procariótico reprimível F

Promotor procariótico indutível F

27. As enzimas de restrição mais úteis para as tecnologias de recombinação

do DNA são:

As que reconhecem grandes sequências palindrómicas V

As que cortam na proximidade da sequência de reconhecimento V

As que geram fragmentos de extremidades cegas (“blunt”) F

As que reconhecem um número ímpar de bases F

As que também têm atividades exonucleásicas F

28. Na transformação artificial de hospedeiros procarióticos para clonagem

molecular podem usar-se como vetores: (Não tenho a certeza)

BAC V

YAC F

HAC F

Transposões F

Fator de conjugação F ou HFR F

29.De uma mistura de ligação entre um vetor e um fragmento de DNA

recombinante são suscetíveis de transformar o hospedeiro.

Múltiplas cópias do vetor ligadas entre si V

Múltiplas cópias do DNA recombinante ligadas entre si F
Vetor fechado sobre si próprio V
DNA recombinante fechado sobre si próprio F
Vetor ligado a fragmento de DNA recombinante V

30.O sucesso de transformação de um hospedeiro com um DNA recombinante

pode ser verificado por: (???)
Hibridação com o DNA do vetor de clonagem V
Hibridação com fragmento do DNA clonado V
Expressão do DNA por Western blotting V
Aquisição de resistência a antibiótico codificada por gene do vetor em que se insira
o MCS V
Aquisição de resistência a antibiótico codificada por gene do vetor em que não se
insira o MCS F

31.Um plasmídeo para a expressão de uma proteína recombinante em

hospedeiro eucariótico por integração no genoma precisa de ter os seguintes
elementos genéticos:
a. Promotor procariótico.
b. Gene de resistência a antibiótico.
c. Locais de enzimas de restrição a flanquear o gene.
d. Promotor eucariótico.
e. Gene marcador para seleção auxotrófica.

32.São estratégias para o aumento da produção industrial de proteínas

recombinantes:
a. Implementação de processos de fermentação em cultura descontínua.
b. Aumentar o número de genes inserido no hospedeiro.
c. Aumentar a capacidade respiratória da célula recombinante.
d. Aumentar a concentração do antibiótico seletor.
e. Selecionar os recombinantes por hibridação molecular.

33.São vantagens das técnicas biotecnológicas no diagnóstico clínico de

infeções: (???)
a. A rapidez. V
b. A especificidade V
c. O custo. F
d. A automatização.V
e. A indicação da viabilidade do agente infecioso. F

34.A estratégia de construção de bancos sequenciais de células

recombinantes pretende:
Assegurar uma melhor adaptação fisiológica das células ao sistema de produção F
Minimizar as mutações que ocorrem durante a propagação das células na produção
F (??)
Manter inalterada a matéria prima biológica para os ciclos de produção V
Garantir uma maior durabilidade do sistema de expressão V
Garantir a otimização progressiva das condições de produção F

35.Para aumento da produção relativa em determinado sistema de expressão

pode-se:
Adaptar os codões às suas frequências de uso na célula hospedeira.
Promover a minimização da precipitação intracelular da proteína recombinante.
Aumentar o número de genes que expressão o produto recombinante.
Aumentar o número de plasmídeos recombinantes.
Induzir maior secreção da proteína recombinante.

36.São vantagens do sistema de baculovírus relativamente aos sistema

procarióticos:
Menores exigências nutricionais das células hospedeiras. F
Maiores taxas de crescimento das células hospedeiras. F
Maior facilidade nos processos de construção dos vetores recombinantes. F
Processamento pós-tradução mais adequado às proteínas eucarióticas. V
Processamento pós-tradução mais adequado às proteínas procarióticas. F

37.São objetivos genéricos consensuais da terapêutica genética no homem:

Adicionar genes com novas funcionalidades.
Aumentar o número de genes para amplificação dos produtos da sua expressão. F
Modificar genes para invalidar progenia defeituosa. V
Modificar genes para potenciar progenia otimizada. F
Substituir genes para alterar características fisiológicas não patológicas.

38.São métodos utilizados para a obtenção de animais transgénicos:

Micro-injeção em células somáticas.
Transformação de células somáticas.
Transfeção em células embrionárias.
Transferência nuclear em células embrionárias.
Recombinação com RNAs antisenso.

39.O milho transgénico recentemente aprovado para uso na alimentação

humana na Europa (Bt11), relativamente ao mesmo milho antes da
transgénese:
Tem melhores características nutritivas e organolépticas.
É resistente aos antibióticos.
Não é suscetível ao inseticida de Bacillus thuringlensis.
Não é suscetível aos glifosatos (herbicida)
Tem um maior período de conservação pós-colheita.

40.São vantagens das culturas contínuas industriais para a obtenção de

produtos de Biotecnologia:
Maior estabilidade genética do organismo recombinante durante a produção.
Maior constância nas características fisiológicas do organismo produtor.
A continuação do processo empregue no desenvolvimento à escala laboratorial e
piloto.
Possibilidades de processamento de menores volumes pós-fermentação.
Melhor rentabilidade temporal do equipamento industrial.
41.Alguns transgénicos são apelidados de knock-out quando:
Têm o genoma recombinado.
Não exprimem um produto génico por deleção do gene respetivo.
Não exprimem um produto génico por modificação no gene respetivo.
Não exprimem um produto génico por perturbação do mecanismo de regulação da
sua expressão
Exprimem um produto génico novo não existente na espécie.
42. Uma digestão enzimática parcial ocorre quando: (???)
-O tempo de reação da enzima de restrição se revelou insuficiente para uma
digestão completa F
-Não se utilizou a quantidade de enzima suficiente para uma digestão completa F
-Se pretendem preparar fragmentos de DNA que incluam no seu interior a
sequência reconhecida pela enzima de restrição em uso V
-O DNA a digerir é de dimensões muitos grandes V
-O DNA a digerir é de pequena dimensão relativa F

43.Todos os vetores para a expressão biotecnológica de proteínas

recombinante têm uma região designada de MCS que se destina a:
Multiplicar a complexidade das sequênciash do gene recombinante
Facilitar a inserção do DNA do gene recombinante no local apropriado
Garantir a replicação do vetor recombinado em células eucarióticas
Garantir a replicação do vetor recombinado em organismos procarióticos
Facilitar a ligação do ribossoma nesse local

44.Uma célula hospedeira em fermentador pode sobreviver a uma rotura no

seu DNA porque:
O sistema de reparação de roturas repõe sempre a sequência anterior
A perda de DNA viabiliza uma maior rapidez na replicação dessa célula
O gene perturbado pela rotura codifica para proteína indispensável ao
funcionamento da célula
Existe em todas as células hospedeiras capacidade para repor o DNA perdido
Existe vantagem para a célula com a perda da funcionalidade da proteína do gene
danificado

45.A célula de mamífero ideal para a expressão biotecnológica é derivada de

uma cultura primária porque:
A célula estará fisiologicamente mais próxima do tecido que exprime esse gene
As células de culturas primárias têm uma maior longevidade
As células de culturas primárias são geneticamente mais estáveis que as células
antes estabelecidas
Não foram alvo de transformação oncogénica
Tem taxas de crescimento mais elevadas
46.São enzimas indispensáveis para a replicação do DNA em organismos
procarióticos:
As polimerases de DNA
As polimerases de RNA
As ligases de DNA
As topoisomerases
As telomerases

Parte escrita

1. Na expressão biotecnológica de procariotas é desejável que ocorra splicing

alternativo. Qualifique a afirmação e justifique. (está corrigido)

A afirmação é falsa. O splicing alternativo permite que, a partir de um mesmo

mRNA, sejam obtidas várias proteínas. Tal não é desejável uma vez que se
pretende apenas a obtenção da proteína de interesse original, para a qual a
recombinante foi concebido. (tinha isto nos meus resumos)

2. Diferenciar a iniciação da tradução em procariotas e eucariotas.

Nos procariotas a iniciação começa na extremidade 5-10 bases a montante do
codão de iniciação. Nos eucariotas o ribossoma reconhece o capping e faz um
scanning até ao primeiro codão AUG.

3. Explique a atenuação do operão trp na e.coli.

No caso de metade do meio intracelular for triptofano existe uma atenuação da
expressão dos genes logo a transcrição acaba mais cedo.

4.O que entende por gene indutível?

São genes de baixo nível de expressão devido à presença de um repressor ou falta
de indutor, estando geralmente associados às reações catabólicas relacionadas
com os glúcidos. Ex. operão lac.

5. Considere um DNA circular com 2 locais de reconhecimento assimétrico

para uma enzima de restrição. Qual o número de fragmentos que observa por
digestão total e digestão parcial a 50% com essa enzima?
Teremos dois fragmentos com a digestão total e 3 fragmentos com a digestão
parcial.

6. Discuta o objetivo dos “bancos de genes” e “banco de celulas”.

O “banco de genes” tem como objetivo ….
O objetivo do “banco de células" é obter uma célula com as características ideais e
o recombinante, onde esta tem de estar bem caracterizadas para que depois seja
colonada e no final congelado o lote de células onde estas têm todas as mesmas
características.( diminui o número de mutações e aumenta o tempo de conservação
das células/genes,assegurar 106 ciclos de produção controlados e idênticos, com
conservação da estabilidade genética do recombinante.)

7. Baculovirus, vantagens da sua utilização?

É um vírus que cresce em suspensão, é infeccioso de células de inseto várias
espécies e tem o sistema biológico com a maior produtividade associada, pois
infectar células e produzir enormes quantidades de virões já está na sua natureza.

8. Como exprimir uma proteína multimérica numa célula de mamífero?

Utilizando dois genes num vetor separados por IRES , consiste em colocar uma
sequência de reconhecida pelo ribossoma (de origem viral) entre os genes,
permitindo que haja uma expressão equilibrada de ambas as proteínas.

9. Explicar o semáforo molecular e a sua aplicação na engenharia genética.

São oligonucleótidos que hibridam com certos ácidos nucleicos por
complementaridade de bases.Na extremidade têm duas cadeias de 5 nucleótidos
que são complementares entre si.Os semáforos têm um fluoróforo na extremidade
5’ ao qual é ligado covalentemente um corante fluorescente e um corante quencher
na extremidade 3’ que não é fluorescente. Podem ser usados para identificar
mutantes homo e heterozigotos.

10. Limitação para aplicação generalizada da terapêutica genética e descrever

porque.
Falar sobre o facto de nem todas as doenças que se pretendem corrigir são de facto
doenças e falar da parte da ética (ex: asma, síndrome de Down ,..) É uma resposta
um pouco de cada um

11. CRISPR é uma nova tecnologia para a edição de DNAs. Que perspetivas
tem da sua utilização futura?
Pode ser usado na substituição de genes que causam doenças, e preveni-las
também antes de um bébé nascer. +/-

Como o CRISPR pode manipular o DNA, pode mexer no genoma do vírus,

obtendo assim informação o que facilita a produção de uma vacina. A sua
utilização tem o potencial de transformar medicamentos, dando não só para tratar,
mas para prevenir doenças. No futuro até poderemos mudar os genomas de
fetos. (Não sei se está certo!!)

12. A eletroforese de um DNA plasmídico purificado e não digerido por

enzimas de restrição revela a presença de três bandas. A que correspondem
essas bandas?
13. Os baculovírus são frequentemente usados como sistemas para a
expressão eucariótica de proteínas recombinantes. Quais as suas mais
significativas vantagens face a outros sistemas?
Tem produtividade mais elevada, uma vez que a sua natureza consiste em infetar as
células e produzir enormes quantidades de viriões (extremamente resistentes por
terem uma cápsula proteica), e por isso vai também produzir grandes quantidades
do nosso recombinante.

14. Considere um processo de purificação industrial de proteínas dos mais

frequentemente usados e descreva o seu princípio de funcionamento.

Cromatografia de imunoafinidade, consiste na afinidade entre a matriz de suporte

cromatográfico e os componentes a separar, sendo específica para um grupo de
proteínas. A mistura que tem a proteína de interesse atravessa a coluna e apenas
essa proteína se liga à matriz. Para retirar a proteína de interesse da matriz
alteram-se as condições de eluição.
OU
Cromatografia de troca iónica, em que a separação é feita pela carga elétrica, numa
coluna com uma matriz que é um polímero contendo grupos ligados carregados. A
matriz pode ser de troca catiónica ou de troca aniónica, sendo que haverá troca de
catiões ou aniões ,respetivamente, com os grupos ionizáveis das proteínas ,
retendo-as.

15. Considere um DNA linear com dois locais de reconhecimento assimétricos

para uma enzima de restrição. Qual o número de fragmentos diferentes que
pode observar em gel após digestão total e digestão parcial a 50% com essa
enzima?
Na digestão total de DNA celular, observam-se 3 bandas (Fragmento A, Fragmento
B e Fragmento C) e na digestão parcial a 50% observam-se 2 bandas.

16. Porque não se usam enzimas de restrição dos tipos I, III e IV?
As enzimas de restrição do tipo I, III e IV são complexas, multiméricas e combinam
sistema de restrição e modificação e nesta área não nos interessam células
modificadas.
A de tipo I não se usa porque elas modificam as células o que não nos interessa, as
de tipo III e IV não se usam devido a serem grandes demais e combinam restrição e
modificação, e as do tipo III cortam fora das sequências de reconhecimento e
raramentes têm digestões completas, e as de tipo IV também cortam fora das
sequências de reconhecimento e raramente são contínuas ou descontínuas (nos
meus resumos)
17. Como evitar que num processo de clonagem molecular se obtenham
demasiados vetores fechados sobre si próprios após a etapa da ligação do
vetor ao DNA insert?

Para evitar que os vetores fechem, recorre-se à enzima fosfatase que desfosforila
os extremos 5’ do plasmídeo (a ligase não vai unir dois extremos OH), permitindo
assim que este ligue apenas a DNA insert, embora uma das cadeias, como não tem
P, não vai ficar ligada - nicks

18. Quando com sucesso, a terapêutica genética humana origina indivíduos

transgénicos para o gene corrigido. Justifique a afirmação.

Este tipo de tratamento consiste em provocar mudanças no DNA das células

afetadas pela doença e ativar as defesas do corpo com o objetivo de reconhecer o
tecido danificado e promover a sua eliminação.

Ela é feita alterando-se o material genético do tecido comprometido pela doença por
outro que seja benéfico através de tecnicas moleculares (CRISPR e Car T-Cell)
portanto apenas afeta a zona afetada tornando apenas estes transgénicos.

19. Na purificação industrial de proteínas é frequente a separação entre

células e meio de cultura ser efetuada por centrifugação. Qualifique e
justifique a afirmação.
A afirmação é falsa, uma vez que a purificação é realizada através de
cromatografias tais como a de afinidade, a de exclusão molecular e a de troca
iónica.

20. Aponte as diferenças que considera mais significativas na preparação de

plantas e animais transgénicos.
Uma das principais diferenças é o facto das células vegetais serem totipotentes e as
animais não. Assim, embora se possam ter animais transgênicos, a descendência
resultante de um cruzamento poderá não ser transgênica.

21.O código genético é universal. Concorda com a afirmação? Justifique a sua

resposta.

Afirmação é verdadeira, mas o código tem as suas limitações, a universalidade do

código genético é limitada, porque é comum a todos os organismos, mas não se
aplica às mitocondrias (apenas abrange o DNA do núcleo).

22.Qual o seu conceito de mutação e reversão de mutações?

Mutação- é uma alteração genética (envolvem apenas nucleótidos) ou cromossomal
(envolve muito DNA) que ocorrem em todas as replicações tornando-as instáveis.

Reversão de mutações- consiste numa mutação que repõe o codão anterior a

primeira mutação

23.Indique as principais diferenças entre um tipo de regulação em "cis" de um

tipo de regulação em "trans".

Os genes que codificam os fatores de regulação “cis” localizam-se na mesma

molécula de DNA em que atuam enquanto na regulação “trans” os fatores de
regulação atuam numa molécula de DNA diferente da qual em que atuam e por isso
tem de migrar.

24.Descreva brevemente o processo de atenuação da expressão genética no

operão do triptofano de E. coli?

Caso haja 50% de triptofano no meio intracelular há uma atenuação da expressão
dos genes. Quando há abundância de triptofano é sintetizado o peptídeo completo
permitindo a formação de uma alça que para a transcrição. Quando há pouco
triptofano o ribossoma para nos codões UGG repetidos.

25.Que entende por genes policistrónicos e onde pode encontrar genes deste
tipo?

Genes policistrónicos - genes que podem atuar em vários ribossomas

simultaneamente e do mesmo gene podem surgir diferentes proteínas. Podem ser
encontrados nos procariotas.

26. Como explica o uso de semáforos moleculares no esclarecimento de

heterozigóticas?
Quando há um homozigótico wild type o semáforo molecular emite uma cor ,
quando há um homozigótico mutante emite outra cor, caso haja um heterozigótico
emite as duas cores.

27. A ELISA é uma técnica fundamental na aplicação clínica de diagnósticos

das tecnologias de DNA recombinante. Descreva o princípio desta técnica.

A ELISA é um ensaio imunológico realizado numa microplaca onde é possível

detectar e quantificar proteínas, peptídeos, anticorpos e hormonas, e esta técnica é
muito usada para o diagnóstico de diversas doenças que induzem a produção de
imunoglobulinas.

28. Que características deve possuir um processo biotecnológico para ser

elegível para a atribuição de uma nova patente?
Não pode existir antes nem ter sido publicado nada sobre si há pelo menos 1 ano
Não pode ser apenas uma descoberta, mas sim algo “não óbvio” para conhecedores
da área.
Deve ser útil e aplicável (ou seja, facilmente reproduzido).
Têm de ter descrição completa e serem implementadas por um conhecedor da área.
Tem de ser feito pelo Homem

29. Que entende por reversão de uma mutação por supressão extragénica?

O efeito de uma mutação pode ser revertido, ou seja, a sequência de pares de

bases volta ao seu estado original face a uma nova mutação. Ocorre uma
supressão extragénica quando o efeito da mutação é suprimido num gene diferente
daquém em que ocorrem a mutação original.

30. As mutações espontâneas têm maiores probabilidades de afetar o fenótipo

de um hospedeiro procariótico ou eucariótico? Justifique.

De um hospedeiro procariótico uma vez que ao contrário do eucariótico, o seu

transcrito não sofre splicing, pelo que qualquer mutação ocorrida no mesmo sofrerá
expressão em eucariotas, a remoção dos intrões garante que mutações, ocorridas
naquela região não são traduzidas reduzindo desta forma a taxa de incidência das
mesmas.

31. Indique as limitações do uso da lactose como indicador da expressão de

genes regulados pelo promotor lac.
A lactose é metabolizada e satura o AMP cíclico(?)

32. Indique limitações ao uso da temperatura como regulador da expressão de

promotores sensíveis à temperatura.
Desnaturação das moléculas, tempo de alteração elevado, consumo energético
elevado e exige fermentadores especiais.

33.Defina o conceito de ‘banco de cDNA’.

Um banco de cDNA é uma combinação de fragmentos de cDNA clonados (DNA

complementar) inseridos numa coleção de células hospedeiras, que constituem uma
parte do transcriptoma do organismo e são armazenados como um "banco". O
cDNA é produzido a partir do mRNA totalmente transcrito encontrado no núcleo e
contém apenas os genes expressos de um organismo. Desta forma, podem ser
produzidas bibliotecas de cDNA específicas de tecido.

As informações nas bancos de cDNA são uma ferramenta extremamente útil, uma
vez que os produtos genéticos são facilmente identificados, as bancas carecem de
informações sobre intensificadores, íntrons e outros elementos reguladores
encontrados em uma banca de DNA genômico.

34. Indique brevemente os principais passos para a clonagem e expressão de

proteínas recombinantes em sistema de baculovírus. Qual a principal razão
por que são frequentemente usados?

Os sistemas de expressão de baculovírus oferecem altos níveis de expressão de

proteína com glicosilação simples e modificações pós-tradução, facilidade de
aumento de escala e crescimento celular simplificado que podem ser prontamente
adaptados à cultura de suspensão de alta densidade para expressão de proteína
em grande escala em células de inseto.

A geração de baculovírus por transposição específica de local de um vetor de

transporte em células bacterianas especializadas para gerar um bacmid de
expressão contendo o gene de interesse. O DNA de vetor de expressão é então
transfetado em células para gerar baculovírus recombinante

35. Que tipo de hospedeiro escolheria para exprimir uma proteína globular
humana com função de receptor de membrana? Justifique.

36.No que se baseia ‘Nothern bloting’?

O northern baseia-se em ligar-se o RNA ao alvo num suporte sólido, depois
adicionar DNA marcado com bioluminescência, depois incubar em condições de
hibridação, para se ter a certeza que a sonda se liga por pontes de hidrogênio ao
ácido nucleico, depois lavar-se o material não hibridado e por fim revelar a sonda
que ficou retida no suporte por autoradiografia.

37. Discrimine as diferenças entre”banco de cDNA” e “ banco de células

recombinante”.
São uma coleção de DNA complementar derivados de toda a população de
mensageiros da célula ao tecido de interesse.

O Banco de células recombinante garante a manutenção da integridade dos

recombinantes pelo menos durante 100 anos.

38.O que são anticorpos monoclonais e em que diferem dos anticorpos

policlonais?

Anticorpos monoclonais são anticorpos produzidos por um único clone de um único

linfócito B parental, produzindo este sempre os mesmos anticorpos em resposta a
um agente patogénico. São iguais em estrutura, propriedades físico-químicas e
biológicas, especificidade e afinidade, ligando-se por isso ao mesmo epítopo no
antigénio. Estes podem ser gerados em laboratório para reconhecer e ligar a
qualquer antigénio de interesse. A existência de anticorpos diferentes para um
mesmo agente patogénico torna a resposta pouco eficiente, sendo os anticorpos
monoclonais bem mais eficientes.
NOTA: Anticorpo humanizado – não é rejeitado pelo organismo humano.

39. Qual a relevância da dimensão das caudas poli-A nos processos de

expressão em Engenharia Genética?

Sendo as extremidades do mRNA susceptíveis à ação dos exonucleases, a adição

de caudas poli (A) permite retardar a digestão do RNA pelas mesmas, mantendo a
integridade da sequência codificante durante mais tempo.

40.Aponte as principais diferenças que identifica na iniciação da tradução de

eucariotas e procariotas.

Em procariotas, a tradução tem início com o reconhecimento por parte do ribossoma

da sequência de Shine-Dalgarno, a montante do codão AUG. Em eucariotas este
processo dá-se por reconhecimento do cap localizado em 5’, mediado pela
interação entre fatores de iniciação e as sub-unidades ribossomais.