UNVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA

ESTUDOS DA FAUNA FLEBOTOMÍNICA (DIPTERA:

PSYCHODIDAE: PHLEBOTOMINAE), SUA INFECÇÃO
NATURAL POR Leishmania spp. E ASPECTOS
BIOGEOGRÁFICOS DA LEISHMANIOSE VISCERAL,
NA REGIONAL NORDESTE DO MUNICÍPIO DE BELO
HORIZONTE, MINAS GERAIS – BRASIL.

LARA SARAIVA

Belo Horizonte
2008
 LARA SARAIVA

ESTUDOS DA FAUNA FLEBOTOMÍNICA (DIPTERA:

PSYCHODIDAE: PHLEBOTOMINAE), SUA INFECÇÃO
NATURAL POR Leishmania spp. E ASPECTOS
BIOGEOGRÁFICOS DA LEISHMANIOSE VISCERAL, NA
REGIONAL NORDESTE DO MUNICÍPIO DE BELO
HORIZONTE, MINAS GERAIS – BRASIL.

Dissertação apresentada ao Programa

de Pós-Graduação em Parasitologia
do Instituto de Ciências Biológicas da
Universidade Federal de Minas Gerais
como requisito parcial para obtenção
do título de Mestre em Parasitologia.

Área de Concentração: Protozoologia

ORIENTADORA
Dra. Maria Norma Melo

UNVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
2008

II
Trabalho desenvolvido no Laboratório de Biologia de Leishmania do Departamento de
Parasitologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas
Gerais, Belo Horizonte, MG, em parceria com Centro Nacional e Internacional para
Flebotomíneos e o Laboratório de Leishmanioses do Instituto de Pesquisas René Rachou
e com financiamento da Comunidade Econômica Européia pelo projeto LeishEpiNetSA.

III
 Dedico este trabalho a todos aqueles que,
belamente, se encontram citados nas
justificativas de artigos de impacto na área da
parasitologia, e tão raramente são beneficiados
pelos mesmos.

IV
 Colaboradores

Alda Lima Falcão

José Dilermando Andrade Filho
Deborah Aparecida Alves de Carvalho (Estudante de Iniciação Científica)
Estudo da Fauna Flebotomínica
Centro de Referência Nacional e Internacional para Flebotomíneos
Instituto de Pesquisas René Rachou

Célia Maria Ferreira Gontijo

Estudo de Infecção Natural
Laboratório de Leishmanioses
Instituto de Pesquisas René Rachou

Carina Margonari de Souza

Christian Rezende de Freitas
Análises de Geoprocessamento

Elizabeth de Castro Moreno

Camila Ragonezi Gomes (Estudante de Iniciação Científica)
Caracterização ambiental
Departamento de Parasitologia
Instituto de Ciências Biológicas
Universidade Federal de Minas Gerais

Financiamento e suporte

Comunidade Econômica Européia. Projeto: Control Strategies for Visceral Leishmaniasis

(VL) and Mucocutaneous Leishmaniasis (MCL) in South America: Application of molecular
Epidemiology – LeishEpinetSA. Contrato nº 015407;

Fundação Oswaldo Cruz – Instituto de Pesquisas René Rachou;

CAPES – Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior;

CNPq – Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico;

Departamento de Parasitologia – Instituto de Ciências Biológicas – Universidade Federal

de Minas Gerais.

V
 Agradecimentos
Agradeço às instituições que permitiram a realização deste trabalho, tanto pela minha formação
acadêmica, quanto pelo apoio e financiamento: Departamento de Parasitologia do Instituto de Ciências
Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Pesquisas René Rachou, Comunidade
Econômica Européia e Prefeitura Municipal de Belo Horizonte;

È com muita felicidade que vejo que tenho muitas pessoas para agradecer, para não esquecer de
ninguém vou citá-las por blocos:

IRR - CRNIF
Agradeço, muito especialmente, a Alda Lima Falcão, que me iniciou de forma tão carinhosa nos
estudos dos flebotomíneos, por todo carinho e dedicação, pelo exemplo de paixão pelo trabalho. A senhora
sempre será a minha “mãe preta”.
Ao José Dilermando, Leco, que apenas por motivos burocráticos não receberá o merecido título de
coorientador. Obrigada por todos os ensinamentos, confiança, paciência e incentivos. Por me salvar em
todas as situações e por ler e corrigir tão rápido.
A Regina, Regis, pela amizade e carinho que sempre teve comigo, pelo exemplo de calma e fineza.
E pela organização do material referente aos flebotomíneos.
A Deborah por toda alegria e empenho como estudante de iniciação, pelo esforço e iniciativa. Por
todos os momentos engraçados dos quais nunca vou me esquecer (huuuuuuu).
A Cristiani e ao Gustavo pela ajuda em diversos momentos do trabalho.
IRR - LALEI
Agradeço a Célia, Celinha, por todas as dicas, ensinamentos e conversas esclarecedoras e
acalmadoras. E por todo o auxílio neste trabalho, por me ceder espaço para trabalhar no LALEI.
A minha querida Tina, doidinha, você sabe que tenho por você um sentimento todo especial !!!!!!!!
Te adoro, obrigada por toda ajuda e paciência, e por ser tão especial e engraçada e tornar a nossa vida
muito mais legal.
A Kenya pela amizade e conversas de sonhos. Obrigada por tudo, por me ouvir rir e chorar !!!!!
A Lutiana, Lut, pela amizade e por compartilhar comigo algumas angústias do processo e os dados
também.
A Patrícia, Paty, simplesmente uma grande amiga!!!! Muito obrigada por me ouvir sempre, me
entender. Me desculpe se assim que te via já queria falar dos meus problemas, mas era inevitável. Para
mim você é um exemplo de fé e confiança na vida, obrigada!!!! Agradeço também ao Igor (noivo da Paty -
casal ultra legal) pelas oportunidades e palavras de apoio.
A Cíntia pela amizade e por todos os momentos de alegria, infelizmente nos afastamos um pouco
mas, serei sempre sua amiga. Ao Rafael, Felipe e Eduardo pela colaboração em todos os momentos em
que precisei e pelos momentos de risos !!!!
A Dani e a Carla, pela amizade e por sempre lembrarem de minha na hora das festas do LALEI.
A todos os demais colegas do LALEI e do IRR, pela convivência e colaboração !!!!!!!!!!!!
Meu agradecimento especial aos motoristas do IRR: Toninho, Cláudio, Ronaldo, Augusto, Cleber e

VI
Gilvan pela colaboração nos trabalhos de campo, pela alegria, e excelente atuação profissional.
ICB
Aos meus amigos da graduação: Ana Flávia (você aparece de novo), Ariane, Daniele, Fabiana,
Izaque, Lucas e Rafael. Pela amizade e momentos de descontração. Aris e Dani obrigada pelo apoio e por
sempre se preocuparem comigo.
ICB - Parasitologia
Aos funcionários do Departamento de Parasitologia: Sumara, Vandro, Reginaldo, Sr. Edson, Sr,
Néri, Maria pelo carinho, apoio e paciência.
A todos os professores do Curso de Mestrado pelo apoio em minha formação acadêmica, pessoal e
profissional.
A minha ótima turma de mestrado, sem a qual teria desistido, nela cada um à sua maneira me
ensinou coisas muito importantes. Agradeço a todos!!! Gente, eu terei de fazer agradecimentos especiais a
alguns, não fiquem com ciúmes.
Minha querida amiga e companheira Ju, obrigada por tudo. Por compartilharmos tantas angústias
parecidas acho que nos identificamos muito. Sua companhia e amizade foram fundamentais para mim,
especialmente na etapa final. Obrigada por me compreender e apoiar, sempre.
Minha amiga Fátima, obrigada pelo carinho e compreensão de mãe, pelo apoio e exemplo de calma
e princípios.
A doce Érika, pelo conversar tão bom...., por me deixar participar de forma tão especial de sua vida.
Para mim você é um exemplo de serenidade diante das mudanças da vida. Obrigada!!!!!!!!
A incrível “Show me the parasite” Lílian, obrigada pelo exemplo de retidão de caráter e de princípios
que você sempre foi e será para mim, te admiro muito.
A turma Família Mexicana, pela adoção parcial, por todas as festas e momentos de alegria.
Agradeço especialmente a Ceres Luciana, querida Ceres muito obrigada por todo carinho e amizade. Te
admiro demais, amo seu bom humor!!!
ICB – Parasitologia – L4
Aos amigos do corredor, muito obrigada pela ótima convivência e agradeço especialmente a:
Ana Flávia, muito obrigada pela amizade, aceitação e bom humor. Com você aprendi na prática a
importância da assertividade na vida. Obrigada por me desculpar nos deslizes de birutice que às vezes
cometo. Você é minha amiga várias vezes !!!!
A Sílvia pelo carinho e amizade, a Helen pela doçura e por nos fazer rir tanto, pena que te conheci
só nos últimos meses.
Aos colegas de laboratório pela convivência.
A Rosângela e a Soraia, por todo apoio e ensinamentos técnicos. E lógico, por me aturarem, apesar
de todo estresse que causei.
A Camila pela colaboração na parte de caracterização ambiental e geoprocesamento.
A Ângela e a Janaína pela convivência, conversas e conselhos valiosos.
Ao meu trio favorito de jovens parasitologistas, que me escolou na arte do cafezinho e de como
sobreviver ao estresse da dissertação: Cíntia, Belinha e Sidney.
Cíntia, sem palavras!!!!!!! Muito obrigada por toda atenção e carinho, por me entender e não me
achar exagerada. Você foi fundamental para mim neste processo, te desejo todo sucesso do mundo,

VII
obrigada!!!
Belinha, obrigada pelo exemplo de princípios, como gostaria de ter um norte forte como o seu, te
admito muito. Obrigada por todas as conversas e momentos de brincadeiras.
Sidney obrigada pelo excelente e diferente bom humor, por ter me ajudado todas as vezes em que
precisei, pode até ser que o departamento não pare se você sair mas com certeza vai ficar bem
campenga!!!
A todos do Laboratório de Sorologia pela boa convivência e especialmente a professora Marilene
pelo exemplo profissional e pelas festas de natal (ótimas!!!!) e a Eloísa pela colaboração no campo e pelo
exemplo de amor aos cães.
Todos os amigos do gole da parasito (butecos de sexta) e especialmente a Vânia, exemplo de aluna
e de pessoa, muito obrigada por seu engajamento nas nossas causas e pela amizade e alegria.
Ao Professor Evaldo por me permiti utilizar o freezer -70ºC.
Aos professores Pezzy e Cidinha por cederem espaço em seus laboratórios para a capela de PCR.
A Elizabeth pela colaboração na parte de caracterização ambiental.
Ao Daniel pelo auxílio com a técnica de dissecação a professora Daniela pelas dicas com as PCR´s.
Ao Professor Nelder pela relatoria deste manuscrito.
Aos Professores Reginaldo Peçanha Brazil e Álvaro Eduardo Eiras por formarem, de forma tão
atenciosa, a banca avaliadora da dissertação.
PBH
A Gerente de Controle de Zoonoses da Regional Nordeste Neide e a Sofia por todo empenho para
que este trabalho fosse realizado. A Fernanda e a Vanessa do nível central do Controle de Zoonoses da
PBH, por toda a colaboração e explicações importantes.
Ao Felipe da PRODABEL, por toda a colaboração e apoio na aquisição e manipulação das
coordenadas, a Palmira pela ajuda com o banco de dados humano, ao Jota do Comitê de Ética da PBH,
pela paciência.
Aos meus amigos de trabalho em Venda Nova: Daniela pela maravilhosa e espontânea amizade,
estímulo e apoio. Ao Aluísio pelos sábios conselhos e momentos divertidíssimos e a Ana pela compreensão
e sinceridade.
Demais pessoas que comigo colaboraram
A Carina pelo entusiasmo em ajudar tanto na etapa de infecção natural como de
geoprocessamento, pela disponibilidade e por sempre me animar e ter falas de apoio nos momentos em
que mais precisei. Você para mim é um grande exemplo, obrigada!!!
Ao Christian pelas análises em geoprocessamento, mas principalmente pela boa vontade com que
participou deste processo e pelas correções e sugestões.
Ao Antero pela colaboração na técnica de dot-blot.
A minha querida professora de inglês Rosa, pelo apoio desde a época da preparação para os
exames até a etapa final com a revisão dos textos. Obrigada por todo apoio e pelas aulas mais alegres do
mundo.
Aos moradores da Regional Nordeste que por mais de 25 vezes abriram a porta de suas casas para
nós pudéssemos realizar este trabalho. Obrigada pela confiança e paciência, espero que os resultados
sejam benéfico de algum modo.
Aos que mais amo

VIII
 As minhas amigas Cíntia e Débora por todo apoio, por sempre estarem presentes em minha vida,
mesmo que às vezes espacialmente distante. Obrigada pelos momentos de extrema descontração e alegria!
Ao meu grande amigo Rodrigo. Muito obrigada, para mim, você é mais que o corpo de bombeiros
pois: é o amigo certo nas horas incertas e nas horas certas também. Obrigada pelo apoio, por sempre me
ouvir e lógico pelos churrascos e conversas. Te adoro!!!
A minha MÃE, a você com lágrimas nos olhos agradeço por TUDO. Te amo. Nossa história não tem
preço, obrigada por estar sempre comigo, me aceitar do jeito que sou e me ajudar a enfrentar o mundo. E é
claro por cuidar tão bem de mim!!
A minha amada irmã Adda por toda a nossa história, pela inabalável amizade e por todos os
momentos de cumplicidade, carinho e humor. Ao meu cunhado, César, pela amizade e por cuidar da minha
irmã muito bem.
Ao meu amado sobrinho Lucas, que tão pequenino me ensina tanto. Você mudou minha forma de
ver a vida e sempre que recebo um sorriso seu volto a acreditar que ainda vale a pena lutar por um mundo
melhor.
Ao meu Leo, pelo amor a mim dedicado durante todo tempo, pelo companheirismo, amizade e
carinho. Por me mostrar que valia a pena acreditar em meus sonhos, pelo apoio computacional e
automotivo, e por sempre ser tão presente na minha vida, mesmo estando a muitos, muitos quilômetros de
distância. Te amo, ti ati ut.
A minha sogra-mãe Rose e a minha vô emprestada Dona Inízia por todo carinho, apoio e
compreensão.
Aos meus cães pela convivência e momentos engraçados e pela alegria com que me recebem,
sempre, todos os dias.
Aos meus guias invisíveis e a grande força que de alguma forma rege este universo, por não me
deixarem desesperar, mesmo nos momentos de maior revolta. Meu agradecimento especial a Iemanjá por
todos os momentos de rara inspiração!!!

Agradecimento especial
Agradeço muito especialmente a minha Orientadora Maria Norma, por ter me aceitado no
laboratório, pelo exemplo profissional e pessoal. Pela extrema empolgação e alegria para trabalhar. Mas,
principalmente por ter entendido as diversas crises pelas quais passei durante este processo e por aceitar,
mesmo um pouquinho, contrariada, nossas diferenças. Sei que causei um pouco de tumulto, mas juro que
não foi por mal, obrigada por relevar meu jeito meu estranho e ter tanta atenção comigo. Serei eternamente
grata por esses dois anos de importantes aprendizados.

Não ficou do jeito que eu queria, pois estava muito cansada ao escrever, mas ao ver as amizades
que criei, os laços que fortaleci, os problemas que superei e os fracassos que tive de aceitar vejo que
absolutamente valeu a pena. As experiências afetam cada pessoa de forma muito singular, por isso só seu o
significado de cada desafio para mim, mas também só eu sei a importância de cada pessoa que comigo
colaborou. Assim agradeço também a todos aqueles que por ventura não estão citados aqui, mas, que de
alguma forma me apoiaram, mesmo que com um único sorriso ou gesto gentil: OBRIGADA!!!!

IX
“(...) não importa o tanto que você pode
bater, mas sim o quanto consegue
apanhar e continuar (...)”
Sylvester Stallone
(Rock IV)
 Resumo
Resumo

Nos últimos vinte anos, ocorreu um aumento no número de casos humanos de

todas as formas de leishmaniose no mundo, sendo estas emergentes em algumas áreas,
e reermegentes em outras. No Brasil, as ações de controle da leishmaniose visceral (LV)
mostram-se ineficazes, mesmo em municípios com um ofensivo programa de eliminação
de cães sorologicamente positivos e borrifação de inseticidas. Belo Horizonte é hoje o
município brasileiro com alta densidade populacional, que mais sofre com a ocorrência de
LV. De 1994 a 2007 foram registrados 891 casos humanos, com 22 óbitos, nos três
últimos anos e altas taxas de prevalência canina. Neste município, a Regional Nordeste é
prioritária para estudos de leishmanioses, por apresentar a maior média histórica de
casos humanos de LV. Nosso trabalho teve os seguintes objetivos: estudar o padrão de
flutuação sazonal das espécies de flebotomíneos; caracterizar as espécies de
Leishmania presentes nos mesmos; descrever as situações ambientais de ocorrência de
LV, utilizando análise por geoprocessamento e caracterização ambiental.
Coletas quinzenais sistematizadas foram realizadas com armadilhas luminosas HP,
em 15 pontos da Regional, seguindo a localização de casos humanos de LV em 2005. O
período de coletas compreendeu o intervalo entre julho de 2006 a junho de 2007. Coletas
não sistematizadas foram feitas com armadilha luminosa de Shannon em locais onde
foram encontrados flebotomíneos infectados. As fêmeas foram submetidas à extração de
DNA e a reações de PCR para averiguar a infecção natural por Leishmania sp., e
identificação das espécies do parasito. Foi efetuada a caracterização ambiental de todos
os locais de estudo através de uma ficha e fotografias. Além disso, foi executada a análise
por geoprocessamento quando os mapas temáticos da Regional Nordeste –
representativos das áreas de vegetação, de vilas e aglomerados urbanos, altitude e áreas
de influência dos cursos de água a céu aberto – foram analisados conjuntamente com os
mapas de distribuição dos vetores de Leishmania, dos casos humanos de LV e casos
caninos de leishmaniose.
Foram coletados 633 espécimes de flebotomíneos pertencentes a nove espécies –
todas do gênero Lutzomyia. As espécies mais prevalentes foram L.whitmani (75%) e
L.longipalpis (11%), perfazendo juntas 85% do total de espécimes coletados. As taxas de
infecção natural encontradas foram: L. longipalpis 19%, L. whitmani 3,8% e L. termitophila
33,3% – todas para a espécie L. chagasi. Para fêmeas do complexo cortellezzi as taxas
foram de 3,2% para L. braziliensis e 3,2% Leishmania sp.. L. intermedia apresentou
14,3% de positividade para Leishmania sp. A maioria dos lotes estudados apresentou
cuidado inadequado, sendo que esses mantinham condições propícias ao
desenvolvimento de flebotomíneos. Nenhum dos fatores biogeográficos analisados
apresentou forte influência na ocorrência de casos humanos e caninos de leishmaniose
na Regional Nordeste. Quanto aos flebotomíneos, apenas a vegetação mostrou influência
na sua distribuição, especialmente, nos locais de maior média de ocorrências desses
insetos. Tanto os casos humanos como os caninos de leishmaniose concentram-se em
áreas de médias baixas de ocorrência de flebotomíneos. Nossos dados confirmam a
urbanização de L. longipalpis e apontam para a urbanização de L. whitmani. Além disso,
podemos afirmar que há importante circulação de L. chagasi na Regional, visto que
mesmo espécies que nunca foram encontradas infectadas apresentaram infecção natural
por L. chagasi. As análises biogeográficas mostram que os quintais podem ter grande
importância na manutenção dos flebotomíneos em áreas urbanas e também apontam
para um novo perfil de ocorrência da LV, uma vez que os fatores classicamente
relacionados a ela, não apresentaram influência sobre a LV no período e locais de estudo.

XI
 Abstract

Abstract

Over the last 20 years, an increase of the number of human cases from all clinical
forms of leishmaniasis occurred in the world. They are considered emergent in some
areas and reemergent in others. This group of tropical diseases does not have effective
control measures. The control of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is inefficient even in
municipalities with a huge program of euthanasia of serological positive dogs and
insecticide spraying in areas with high incidence rates of human and canine cases.
At the present time, Belo Horizonte is the Brazilian city with high population which
suffers more with the occurrence of VL. From 1994 to 2007, 891 human cases were
notificated, 22 deaths in the last three years and high rates of canine prevalence. Regional
Nordeste presents the highest historical average of human cases of VL. Therefore the
leishmaniasis studies are prior. In this work, we established these goals: to study the
seasonal variation of sand flies fauna, to characterize the Leishmania species infecting
them, and to describe the environmental situations through geoprocessing analyses and
the peridomestic characterization.
We carried out fortnightly entomological captures during one year using HP light
traps, in 15 places following the location of human cases of VL in 2005. Captures using
Shannon light trap were performed out in places where infected sand flies were found. The
females were submitted to DNA extraction and PCR and PCR-RFLP reactions to verify the
natural infection rate by Leishmania sp., and the identification of the parasite species. The
environmental characterization from all places was carried out through a form and
photographs. The geoprocessing analyzed the influence of vegetation, hydrograph,
altitude and poverty pockets in the occurrence of human cases of LV, canine cases of
leishmaniases and sand flies vectors.
A total of 633 sand flies belonging to the genera Lutzomyia were captured,
L.whitmani accounted for 75% and L. longipalpis 11%, together responding to 85% of the
total. The natural infection rates were: L. longipalpis 19%, L. whitmani 3,8% e L.
termitophila 33,3% these ones with L. chagasi. The females of the complex cortellezzi
present 3,2% with L. braziliensis and 3,2% Leishmania sp. L. intermedia presents 14,3%
with Leishmania sp.
The majority of the peridomestic places have shown inadequate hygienic care
conditions allowing the development of sand flies. The geoprocessing analyses reveal no
relevant correlation between biogeographical aspects and human and canine cases of
leishmaniases and the presence of sand flies. Apart from the vegetation and the insect
presence the high average class of sand flies took place in wooded areas.
Both human and canine cases occurred in the areas with low average of sand
flies occurrence. This study confirms the urbanization of the L. longipalpis and suggests
the same pattern to L. whitmani, furthermore we show the important circulation of L.
chagasi in that Regional, even species that have never been infected with Leishmania
presented infection with L. chagasi. The biogeographical analyses suggested that the
peridomestic places are important to keep the sand flies populations in urban areas, and
pointed out a new profile of occurrence not related to classic factors.

XII
 Lista de Figuras

Lista de Figuras
FIGURA 1: Divisão administrativa do Município de Belo Horizonte e sua localização no 45
Estado de Minas Gerais e no Brasil.

FIGURA 2: Aspecto geral da Regional Nordeste, área urbanizada. 46

FIGURA 3: Aspecto geral de um bairro da Regional Nordeste, área verde. 46

FIGURA 4: Armadilha luminosa HP. 48

FIGURA 5: Armadilha luminosa de Shannon. 48

FIGURA 6: Capturador Manual de Castro. 48

FIGURA 7: Localização da Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, e 50

locais de coletas de flebotomíneos, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

FIGURA 8: Diagrama resumo do processamento realizado com os espécimes 52

fêmeas

FIGURA 9: Georreferenciamento de casos humanos de leishmaniose visceral, notificados 66

pela Gerência de Epidemiologia e Informação da Prefeitura Municipal de Belo Horizonte, na
Regional Nordeste, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

FIGURA 10: Georreferenciamento de casos de leishmaniose canina na Regional Nordeste, 67

cães soropositivos, pelos métodos de RIFI e ELISA realizados pelo Laboratório do Centro de
Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de Belo Horizonte, no período de julho de 2006
a junho de 2007.

FIGURA 11: Mapa das áreas verdes da Regional Nordeste, PRODABEL 2007. 68

FIGURA 12: Mapa dos cursos d’água a céu aberto da Regional Nordeste, PRODABEL 1995. 69

FIGURA 13: Mapa das vilas e aglomerados urbanos da Regional Nordeste, PRODABEL 70
2006.

FIGURA 14: Mapa hipsométrico da Regional Nordeste, PRODABEL 1989. 71

FIGURAS 15 E 16: Formas flageladas visualizadas em intestino de fêmeas L. longipalpis. 87

Aumento 1000X. Coloração de Giemsa.

FIGURA 17: Gel de agarose 10%, corado pelo brometo de etídio, mostrando os produtos da 88
reação de PCR com iniciadores para o fragmento do gene da cacofonia do gênero
Lutzomyia. Canaletas: 1) PM: Padrão de massa molecular 120 pb, 2) C+: Controle positivo
(DNA extraído de L. longipalpis de colônia), 3 a 12) amostras de DNA de Lutzomyia
spp.estudo, 13) Controle negativo (todos os componentes da reação sem o acréscimo de
DNA).

FIGURA 18: Gel de poliacrilamida 6%, corado pela prata, mostrando os produtos da PCR 89
com os iniciadores para a região conservada do minicírculo do K-DNA de Leishmania sp. em
amostras de DNA extraídas de fêmeas de flebotomíneos. Canaletas: 1 e 18: Padrão de
massa molecular 100 pb, 2: Controle positivo (DNA de promastigotas de L. chagasi
(MHOM/BR/1967/BH46); 3: Controle negativo sem DNA. Canaletas 4 a 17 amostras 1 a 14
referentes a coletas do mês de julho de 2007.

FIGURA 19 : Gel de poliacrilamida 10%, corado pela prata, mostrando os produtos da 90

reação de PCR-RFLP. Canaleta: 1) Padrão de massa molecular 50pb 2) cepa PH8 de L.
amazonensis, 3) cepa M2903 de L. braziliensis, 4) cepa PP75 de L. chagasi. Canaletas 5 a 9
amostras: positivas para Leishmania chagasi.

FIGURA 20: Autoradiografias de produto de PCR hibridizado com sonda específica de kDNA 90
de L. chagasi. Amostras: 1,6,17,19,22,47,48,51,52,70,62,64,84,79,82,88. Cepas controles:
PH8 de L. amazonensis, M2903 de L. braziliensis, PP75 de L. chagasi.

FIGURA 21: Lote 1, A: Imediações do lote. B: Aspecto de uma das casas, notar parede sem 97
reboco. C: Cães criados no lote. D: Aspecto geral do quintal, notar locais sombreados e

XIII
 Lista de Figuras

restos vegetais (galhos e folhas) e entulho (pneu) espalhados.

FIGURA 22: Lote 2, A: Vista geral do quintal, notar grande área cimentada. B: Vista geral de 97
duas das casas. C: Detalhe do quintal, notar armazenamento de lenha. D: Detalhe do
quintal, notar acúmulo de entulhos.

FIGURA 23: Lote 3, A: Localização da residência, notar mato alto e arborização. B: Aspecto 98
geral do quintal, notar grande acúmulo de entulhos. C: Área em frente a casa, notar lixo
descartado inadequadamente. D: Criação de cães, cadela com filhotes.

FIGURA 24: Lote 4, A: Detalhe do quintal, notar: acúmulo de entulhos. B: Aspecto geral do 98
quintal, notar locais sombreados, folhas no chão e acúmulo de entulhos. C: Detalhe do
quintal, notar acúmulo de entulhos.

FIGURA 25: Lote 5, A: Aspecto geral do quintal, com casa ao fundo. Notar presença de 99
árvores e locais sombreados. B: Grande quantidade de vasos de plantas. C: Grande
variedade e quantidade de materiais acumulados. D: Criação de galinhas.

FIGURA 26: Lote 6, A: Imediações do lote. B: Parte interna, notar área cimentada. C: Parte 99
interna, notar pequeno canteiro. D: Parte interna, notar área cimentada.

FIGURA 27: Lote 7, A: Árvore de grande porte, que propicia sombra em parte do quintal e 100
criação de pássaros. B: Cão criado no lote. C: Pequeno canteiro. D: Galinheiro, notar
limpeza do mesmo.

FIGURA 28: Lote 8, A: Lote e imediações B: Aspecto da residência, notar estrutura da 100
mesma. C e D: Aspecto geral do quintal, notar variedade de espécies vegetais, materiais
acumulados e locais sombreados.

FIGURA 29: Lote 10, A: Aspecto externo do lote, notar casa ao fundo, árvores e locais 101
sombreados. B: Horta, notar lenha empilhada. C: Variedade de materiais acumulados. D:
Cão criado no lote.

FIGURA 30: Fazenda SL (Lote 11), A: Um dos currais e cães. B: Criação de pavões e 101
galinhas. C: Área de mata. D: Rio das Velhas.

FIGURA 31: Lote 13, A: Aspecto externo. B: Cão, notar piso de ardósia. C: Madeira 102
empilhada. D: Vasos de plantas.

FIGURA 32: Lote 15, A: Cão criado no lote. B: Pequena mata no entorno. C: Plantas em 102
local sombreado. D: Aspecto geral do quintal, notar grande acúmulo de materiais.

FIGURA 33: Lote 16, A: Aspecto geral do lote. B: Criação de galinhas e outras aves. C: 103
Pinguela sobre o córrego (esgoto a céu aberto). D: Cão.

FIGURA 34: Médias de ocorrência de casos caninos de leishmaniose na Regional Nordeste, 109
notificados pela Gerência de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de Belo
Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

FIGURA 35: Média de ocorrência de flebotomíneos vetores, a partir de coletas quinzenais 113
realizadas com armadilhas HP na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte, no
período de julho de 2006 a junho de 2007.

FIGURA 36: Sobreposição dos casos humanos de leishmaniose visceral e casos caninos de 115
leishmaniose na Regional Nordeste, notificados pela Gerência de Epidemiologia e
Informação da Prefeitura Municipal de Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a junho
de 2007.

XIV
 Lista de Gráficos

Lista de Gráficos

GRÁFICO 1: Porcentagem de flebotomíneos, por espécie, coletados na Regional Nordeste, 75

Município de Belo Horizonte-MG/Brasil,no período de julho de 2006 a junho de 2007

GRÁFICO 2: Média de Flebotomíneos coletados, por localidade de estudo, na Regional Nordeste, 78

Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007

GRÁFICO 3: Proporções de L. longipalpis e L. whitmani coletados nos ambientes de áreas 80

verdes e urbano da Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de
julho de 2006 a junho de 2007 (p valorlor<0,0001)

GRÁFICO 4: Porcentagem de flebotomíneos coletados mensalmente na Regional Nordeste, 81

Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 5: Média de Flebotomíneos coletados mensalmente na Regional Nordeste, Município 84

de Belo Horizonte-MG/Basil, em comparação com os parâmetros climáticos: temperatura média,
pluviosidade total e média da umidade relativa do ar, no período de julho de 2006 a junho de
2007.

GRÁFICO 6: : Média de Flebotomíneos coletados mensalmente na Regional Nordeste, Município 85

de Belo Horizonte-MG/Basil, em comparação com o parâmetro climático: temperatura média, no
período de julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 7: Características presentes nos quintais dos lotes de estudo, que possivelmente 96
favorecem a ocorrência de flebotomíneos.

GRÁFICO 8: Ocorrência de Casos de LV humana por faixa hipsométrica na Regional Nordeste, 106
Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007

GRÁFICO 9: Ocorrência de Casos de LVA considerando os parâmetros: vegetação, vilas e 106

aglomerados e cursos d’água a céu aberto, na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-
MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de influência

GRÁFICO 10: Ocorrência de Casos de leishmaniose canina, por faixa hipsométrica na Regional 107
Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 11: Ocorrência de Casos de leishmaniose canina considerando os parâmetros: 107

vegetação, vilas e aglomerados e cursos d’água a céu aberto, na Regional Nordeste, Município
de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de influência

GRÁFICO 12: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmanioses, por faixa 110
hipsométrica na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de
julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 13: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmanioses considerando as 110

áreas de vegetação,na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de
julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 14: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmanioses considerando os 111

parâmetros: áreas de vilas e aglomerados urbanos e cursos d’água a céu aberto, Regional
Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de influência

GRÁFICO 15: Ocorrência de casos de LV humana em relação às classes de ocorrência média de 114
flebotomíneos vetores de leishmanioses na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-
MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

GRÁFICO 16: Ocorrência de casos de LV humana em relação às classes de ocorrência média de 114
casos de leishmaniose canina na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no
período de julho de 2006 a junho de 2007.

XV
 Lista de Gráficos

GRÁFICO 17: Ocorrência média de casos de leishmaniose canina em relação às classes de 116
ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmanioses na Regional Nordeste, Município de
Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

XVI
 Lista de Quadros

Lista de Quadros

QUADRO 1: Espécies de flebotomíneos já relatadas para as regionais do Município 33

de Belo Horizonte
QUADRO 2: Relação dos locais de coleta e número de armadilhas utilizadas em cada um 51
deles

QUADRO 3: Ciclos da PCR para amplificação de fragmento do gene da cacofonia de 55

flebotomíneos

QUADRO 4: Ciclos da PCR para amplificação de fragmentos da região conservada do k- 56

DNA de Leishmania sp

QUADRO 5: Características que foram pesquisadas nos peridomicílios e que podem estar 59
relacionadas com a ocorrência de flebotomíneos

QUADRO 6: Resultado do teste de correlação entre o total de flebotomíneos coletados e as 83

variáveis climáticas, na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil,no
período de julho de 2006 a junho de 2007

QUADRO 7: Quantidade de amostras de flebotomíneos analisadas, de acordo com o 88

número de exemplares presentes

QUADRO 8: Amostras de flebotomíneos positivas para infecção por Leishmania sp., 91

segundo local e data de coleta, tipo de amostra e técnicas utilizadas para estudo da
infecção natural

QUADRO 9: Taxas de Positividade para Leishmania sp. por espécie de flebotomíneo e tipo 92
de amostra

QUADRO 10: Distribuição de freqüências das características das residências presentes nos 94
lotes trabalhados, Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período
de julho de 2006 a junho de 2007

QUADRO 11: Distribuição de freqüências das características das peridomicílios dos lotes 95
trabalhados na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período
de julho de 2006 a junho de 2007

QUADRO 12: Animais domésticos presentes nos lotes estudados na Regional Nordeste, 95
Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007

QUADRO 13: Características dos anexos presentes nos lotes estudados na Regional 104
Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de
2007

XVII
 Lista de Tabelas

Lista de Tabelas

TABELA 1: Total de espécies de flebotomíneos coletadas na Regional Nordeste, Município 74

de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

TABELA 2: Freqüência relativa das espécies de flebotomíneos coletadas na Regional 75

Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil,no período de julho de 2006 a junho de
2007.

TABELA 3: Média de Flebotomíneos coletados, por localidade de estudo, na Regional 77

Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil,no período de julho de 2006 a junho de
2007.

TABELA 4: Comparação dos números de flebotomíneos por espécie, coletados nos 79

ambientes urbanos e áreas verdes da Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-
MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

TABELA 5: Ocorrência de flebotomíneos, por número de espécimes, coletadas 80

mensalmente por ambiente de estudo, na Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-
MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

TABELA 6: Flebotomíneos coletados mensalmente por espécie, na Regional Nordeste, 82

Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

TABELA 7: Resultados das coletas com armadilha luminosa de Shannon, na Regional 86

Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil,no período de julho de 2006 a junho de
2007.

TABELA 8: Ocorrência mensal de flebotomíneos, considerando o total de espécimes, em 105

lotes de área urbana da Regional Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no
período de junho de 2006 a julho de 2007.

XVIII
 Abreviaturas

Abreviaturas

DNA – Ácido desoxirribonucléico

dNTP – Desoxirribonucleotídeos 5´fosfato

ELISA – Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Ensaio

Imunoenzimático)

kDNA – DNA do cinetoplasto

LIT – Liver infusion tryptose (Infusão de fígado triptose)

LTA – Leishmaniose tegumentar americana

LV – Leishmaniose visceral

MG – Minas Gerais

PBH – Prefeitura Municipal de Belo Horizonte

PCR – Polymerase Chain Reaction – (Reação em cadeia da

polimerase)

PM – Padrão de massa molecular

pmol – pico mol

RFLP – Restriction Fragment Lenght Polimorfism – (Polimorfismo de

tamanho dos fragmentos de restrição)

RIFI – Reação de Imunofluorescência Indireta

RNA – Ácido ribonucléico

U – Unidades

XIX
 Sumário

Sumário
1. Introdução 20
1.1. Revisão de Literatura 24
1.1.1. Importância das Leishmanioses 24
1.1.2. Flebotomíneos – Estado da Arte 28
1.1.3. Técnicas moleculares no estudo da infecção natural de flebotomíneos por
Leishmania spp. 29
1.1.4. Leishmanioses no município de Belo Horizonte 31
1.1.5. Leishmanioses na Regional Nordeste 34
1.1.6. Comunidade e os processos da doença 34
1.1.7. Estudos por Geoprocessamento 36
2. Justificativa 38
3. Objetivos 42
4. Metodologia 44
4.1. Área de Estudo 44
4.2. Coletas de Flebotomíneos 47
4.2.1. Métodos de Coleta 49
4.2.2. Metodologia das Coletas 49
4.3. Processamento e acondicionamento dos Flebotomíneos coletados 51
4.3.1. Machos 51
4.3.1.1. Preparação e Montagem dos espécimes 51
4.3.2. Fêmeas 52
4.4. Identificação específica 52
4.5. Pesquisa da infecção natural por Leishmania sp. nas fêmeas de flebotomíneos 53
4.5.1. Dissecação 53
4.5.2. Extração de DNA 54
4.5.3. Reação de PCR para avaliar a presença de DNA de flebotomíneos após a extração 54
4.5.4. Reação de PCR para identificação do gênero Leishmania 55
4.5.5. PCR-RFLP (polimorfismos de comprimento dos fragmentos de restrição)
para a identificação específica de Leishmania 56
4.5.6. Hibridização de produtos de PCR (DOT-BLOT) 57
4.6. Inferência da taxa de infecção natural 57
4.7. Caracterização ambiental das residências 57
4.8. Análise por Geoprocessamento 60
4.8.1. Banco de dados humano 60
4.8.2. Banco de dados caninos 61
4.8.3. Banco de dados entomológicos para análises das espécies vetoras 61
4.8.4. Georreferenciamento 62
4.8.5. Tratamento prévio dos mapas 62
4.8.6. Análises dos mapas - Assinaturas 64
4.9. Análise de Resultados 72
4.10. Aprovação por Comitês de Ética 73
4.11. Aproveitamento dos resultados pelo setor público 73
5. Resultados 74
5.1. Estudo da Fauna Flebotomínica 74
5.1.1. Coletas com armadilhas luminosas HP 74
5.1.2. Coletas com armadilha de Shannon e Capturador de Castro 86
5.2. Estudos da Infecção Natural 87
5.2.1. Inferência das taxas de infecção natural por Leishmania 92
5.3. Caracterização ambiental dos locais de estudo 93
5.3.1.Caracterização fotográfica 96
5.3.2. Análise por geoprocessamento 106
6. Discussão 117
7. Considerações finais 146
8. Conclusões 147
9. Referências bibliográficas 150
10. Adendos 165
11. Anexos 171

XX
Introdução
 Introdução

1. Introdução

Os flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) dos gêneros

Lutzomyia França, 1924 no Novo Mundo e Phlebotomus Rondani & Berté, 1840 no
Velho Mundo são os hospedeiros invertebrados das espécies do gênero
Leishmania Ross, 1903, que causam as leishmanioses em humanos e outros
mamíferos.
As leishmanioses são as mais complexas e diversas de todas as doenças
transmitidas por vetores, em sua ecologia e epidemiologia, englobando cerca de
21 espécies de parasitos, capazes de infectar o homem e diversas espécies de
reservatórios e flebotomíneos vetores. Cerca de 30 espécies de flebotomíneos são
vetores comprovados de Leishmania. Estes agravos apresentam uma ampla
variação topogeográfica em sua ocorrência, apresentando uma distribuição,
geralmente, focal. Em relação ao seu envolvimento com humanos ocorrem em
mais de 100 países do mundo, de clima subtropical ou tropical, em ciclos
antroponóticos e zoonóticos (ASHFORD, 2000; CATTAND et al., 2006; LAINSON
& SHAW, 1987).
O gênero Leishmania pertence à ordem Kinetoplastida, família
Trypanosomatidae, e está dividido em dois sub-gêneros, Viannia e Leishmania, de
acordo com o tipo de desenvolvimento no trato intestinal dos flebotomíneos
(LAINSON et al., 1979).
• Leishmania: com desenvolvimento predominante nos intestinos
médio e anterior – desenvolvimento suprapilário;
• Viannia: cujo processo de desenvolvimento apresenta uma fase que
se passa no intestino posterior – desenvolvimento peripilário;
Esses protozoários são unicelulares, digenéticos, e todas as espécies são
morfologicamente muito similares e vivem no sistema mononuclerar fagocitário de
seus hospedeiros mamíferos e no trato intestinal dos flebotomíneos. Existem dois
estágios principais no ciclo de vida destes parasitos: as formas amastigotas e
promastigotas. As amastigotas são encontradas principalmente em células do
sistema mononuclear fagocitário dos hospedeiros mamíferos, dividem-se

21
 Introdução

repetidamente por divisão binária longitudinal e infectam novas células quando a

célula hospedeira inicial se rompe (ASHFORD, 2000; SHAW, 2003).
No intestino dos flebotomíneos, as amastigotas presentes no conteúdo do
repasto sanguíneo sofrem divisões binárias e se transformam em promastigotas.
Estas se dividem por divisão binária longitudinal passando por mudanças
morfológicas e fisiológicas, cuja biologia ainda não está completamente
esclarecida.
Inicialmente, ainda no interior da matriz peritrófica, as amastigotas
diferenciam-se em promastigotas procíclicas que são formas com baixa
motiltidade e que se replicam. Alguns dias após o repasto, os parasitos
diferenciam-se em formas alongadas, com alta motilidade, chamadas nectomonas.
Estas são formas migratórias que se dirigem para o exterior da matriz peritrófica e
aderem-se ao epitélio intestinal. As nectomanas se diferenciam em leptomonas
que são formas curtas que continuam o processo de replicação. Alguns parasitos
nesta forma podem se diferenciar em haptomonas. As promastigotas metacíclicas
também se originam a partir das leptomonas.
Estas formas são capazes de infectar um novo hospedeiro vertebrado,
apresentam alta motilidade, flagelo livre e longo, não mais se dividem e nem se
aderem à superfície intestinal dos insetos vetores (ASHFORD, 2000; BATES,
2007; KILLICK-KENDRICK & RIOUX, 1991).
Uma grande variedade de mamíferos pode atuar como hospedeiros.
Embora os mais comuns sejam os roedores e os canídeos, outros grupos podem
albergar a infecção tais como: edentados, marsupiais, procionídeos, ungulados e
primatas (SHAW, 2003).
Os flebotomíneos são insetos pequenos que, em geral, medem de dois a
quatro milímetros de comprimento, têm o corpo revestido de cerdas finas e longas.
As asas grandes e hialinas permanecem divergentes em posição semi-ereta
quando vivos e em repouso, o que lhes confere um aspecto peculiar. Os olhos são
proeminentes e arredondados e bem separados em ambos os sexos. As antenas
são compostas de um escapo basal e pedicelo, ambos globosos com 14 a 16
flagelômeros cilíndricos. As peças bucais são do tipo sugador picador pungitivo,

22
 Introdução

constituídas de labro, um par de mandíbulas, hipofaringe, um par de maxilas e

lábio. Os machos têm mandíbulas rudimenares. As pernas são longas e esbeltas,
e a extremidade posterior do abdome é bem diferenciada nos dois sexos: nos
machos é diferenciada em órgão copulador formado por cinco estruturas pares e
nas fêmeas é formada por estruturas pares ligeiramente arredondada, os cercos
(FORATTINI, 1973).
Em comparação com outras famílias de Nematocera de importância
médica e veterinária, muito pouco é conhecido sobre os sítios onde os
flebotomíneos se desenvolvem. A maior parte das informações sobre os estágios
imaturos resultam de observações de espécies criadas em laboratório. O ciclo
biológico é dividido nas seguintes fases: ovo (período de incubação de
aproximadamente de seis a sete dias); quatro estádios larvais (durando cerca de
20 a 25 dias); pupa (duração de oito a doze dias) e adulto (vive cerca de um mês),
períodos referentes às condições de criação em laboratório (FORATTINI, 1973).
As larvas dos flebotomíneos são ativas, terrestres e saprófagas, se
deslocando com rapidez em busca de alimento, sendo essa uma das razões pela
quais os criadouros naturais dos flebotomíneos são difíceis de serem encontrados.
Estes fatos contribuem para a dificuldade no controle das leishmanioses, ao se
considerar ações direcionadas ao vetor (SHERLOCK, 2003).
Os flebotomíneos machos não são hematófagos, mas as fêmeas
necessitam de se alimentarem de sangue, o qual é fonte de aminoácidos e
proteínas necessários para o desenvolvimento dos ovos.
A maior ocorrência destes vetores é nos meses quentes e chuvosos para
algumas espécies, e nos meses quentes e secos para outras (FORATTINI, 1973).
As leishmanioses humanas apresentam duas formas clínicas básicas:
• Visceral
• Cutânea
A grande importância delas reside não apenas em sua ampla distribuição
geográfica, como também nas altas taxas de mortalidade e morbidade,
relacionadas à forma visceral e à alta morbidade relacionada às formas cutânea e
mucosa (CATTAND et al., 2006, TAVARES et al., 2003).

23
 Introdução

1.1. Revisão de Literatura

1.1.1. Importância das Leishmanioses

Conforme classificação da Organização Mundial de Saúde (TDR-WHO,

2006), as leishmanioses estão entre as doenças de grande importância
epidemiológica, que necessitam de medidas de controle efetivas, e que
apresentam o potencial de surtos epidêmicos, dada a sua transmissão por insetos
vetores (CATTAND et al., 2006).
São endêmicas em 88 países, e estima-se que 500 mil casos novos de
Leishmaniose Visceral (LV) e 1,5 milhões de casos de Leishmaniose Tegumentar
(formas cutâneas e mucosas) ocorram a cada ano em todo mundo.

As Leishmanioses encontram-se entre as seis doenças infecto-parasitárias

de maior importância no mundo, 90% dos casos de Leishmaniose Visceral (LV)
ocorrem em Bangladesh, Brasil, Índia e Sudão e a maioria dos casos de
leishmaniose cutânea ocorre no Afeganistão, Brasil, Irã, Peru, Arábia Saudita e
Síria, com 90% dos casos de leishmaniose mucosa ocorrendo na Bolívia, Brasil e
Peru (WHO, 2006).

Leishmaniose Visceral

A LV é endêmica em 65 países, e nas Américas cerca de 90% dos casos

humanos são registrados no Brasil (DESJEUX, 2004). No continente americano
este agravo é, tradicionalmente, considerado uma zoonose de canídeos e
roedores, transmitida ao homem em ambientes silvestres e localidades rurais.
Mas, atualmente, também apresenta distribuição peri-urbana e urbana em
diversas cidades da América Latina (LAINSON & RANGEL, 2005; MORENO,
2002, MORENO et al., 2005).

O mapeamento da LV é um empreendimento complexo, uma vez que a

24
 Introdução

distribuição da doença é multifocal, com grandes variações de incidência e

prevalência. Muitos casos clínicos não são nem tratados, nem registrados,
existindo um importante problema de subnotificação. E é grande o número de
infecções subclínicas e assintomáticas (HAILU et al., 2005).

Atualmente, a LV apresenta um novo caráter reemergente, além da

urbanização e da periurbanização. Com o advento da Síndrome da
Imunodeficiência Humana (AIDS/SIDA), a LV tornou-se uma doença oportunista.
Em determinadas regiões ocorreu uma mudança importante no padrão
epidemiológico da LV, onde pacientes HIV positivos podem atuar como
reservatórios da doença (ASHFORD, 2000; DESJEUX, 1999; HAILU et al.,2005).

O agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas é a Leishmania

(Leishmania) chagasi Cunha e Chagas, 1937 e a principal espécie vetora é a
Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis Lutz & Neiva, 1912. Um dos fatores
determinantes da ampla urbanização da LV, nas Américas, é a grande
adaptabilidade desta espécie ao ambiente antropicamente modificado (LAINSON,
1989; LAINSON & RANGEL, 2005; SHAW, 2003).
Diversos grupos de mamíferos silvestres atuam como hospedeiros, dentre
eles: canídeos, marsupiais e roedores (LAINSON, 1989; SHAW, 2003).
No Brasil, os cães domésticos são considerados os principais reservatórios
do parasito nas regiões periurbanas e urbanas. No país ocorre uma alta
prevalência da doença canina e aumento da infecção humana. Processos
migratórios e hábitos das populações, especialmente nas periferias, como a
criação de galinhas, são importantes na cadeia epidemiológica da LV (LAINSON,
1989).
Apesar de galináceos não possuírem capacidade de albergar Leishmania,
estes animais representam importante elo na cadeia epidemiológica da LV por se
constituírem em uma fonte de alimentação e atração para as fêmeas de L.
longipalpis (ALEXANDER et al., 2002).
A susceptibilidade humana para a L. chagasi é considerada baixa, e
infecções assintomáticas são comuns em populações saudáveis (MORENO et al.,
2005). Em geral, quadros de doença clínica são associados: à idade, crianças
25
 Introdução

abaixo dos dois anos são as mais acometidas, à desnutrição e imunossupressão

dos indivíduos. Casos não tratados, invariavelmente, podem culminar com o óbito
do paciente (GRAMACCIA & GRADONI, 2005; HAILU et al., 2005).
Atualmente, em focos urbanos da doença, observa-se uma tendência de
modificação na distribuição dos casos por faixas etárias, com ocorrência de altas
taxas também em adultos e jovens (SILVA et al., 2001).

No Brasil, a LV encontra-se distribuída em 20 dos 27 Estados e Territórios,

atingindo quatro das cinco regiões do país. Sua maior incidência encontra-se no
Nordeste, com aproximadamente 70% do total de casos, seguido pelas regiões
Sudeste, Norte, e, finalmente, a região Centro-Oeste. Tem-se registrado em média
3.500 casos da doença por ano (BRASIL, 2006 A).
Até 1980, em nosso país, a LV era considerada uma endemia zoonótica
restrita a áreas rurais, mas, atualmente, em diversas cidades a doença já
apresenta padrões de ocorrência periurbanos e urbanos, como em Belo Horizonte,
Campo Grande, São Luís, Natal, Aracaju, dentre outras (ANTONIALLI et al., 2006;
BRASIL, 2006 A ;MORENO, 2002; SOUZA, 2005).

Leishmaniose Tegumentar Americana

Nas Américas Central e do Sul, a leishmaniose tegumentar causada pelas

espécies Leishmania (Viannia) braziliensis Vianna, 1911 emend Matta, 1916,
Leishmania (Leishmania) amazonensis Lainson & Shaw, 1972 e Leishmania
(Leishmania) mexicana Biagi 1953 emend Garnham, 1962, L. (Viannia)
guyanensis Floch, 1954 encontram-se amplamente distribuídas, sempre com o
padrão zoonótico de ocorrência (ASHFORD, 2000).
A LTA era considerada uma doença ocupacional, de incidência limitada aos
que se expunham aos focos silvestres da doença, mas hoje passou a incidir em
ambientes periurbanos e mesmo urbanos, podendo-se observar a adaptabilidade
de algumas espécies vetoras a esstes ambientes (SABROZA et al., 1992;
TEODORO et al., 2003B).
O processo de urbanização tem sido relatado para L. braziliensis, e para
26
 Introdução

algumas espécies de flebotomíneos vetores desta espécie de Leishmania, tais

como: Lutzomyia (Nyssomyia) whitmani (Antunes & Coutinho, 1939) e Lutzomyia
(Nyssomyia) intermedia (Lutz e Neiva, 1912) (SOUZA et al., 2004; YOUNG &
LAWER, 1987).
Considerando-se as diversas formas clínicas da LTA, enquanto entidade
mórbida têm-se diversos agentes etiológicos e, para estes, diferentes espécies de
flebotomíneos vetores e reservatórios mamíferos (SHAW, 2003; YOUNG &
LAWER, 1987).
Apesar da baixa mortalidade da LTA, mesmo lesões auto limitantes podem
ocasionar desfiguração e são associadas a processos estigmatizantes, ocorrendo
casos mais graves em formas com múltiplas lesões ou recidivas, que são de difícil
tratamento (CATTAND et al., 2006).
No Brasil, a doença apresenta-se como importante problema de saúde
pública nas periferias de diversas cidades brasileiras, tais como Belo Horizonte,
Rio de Janeiro e Manaus (MARZOCHI, 1992; MARZOCHI & MARZOCHI, 1994).
No período de 1980 a 2004, a LTA no Brasil apresentou coeficientes de
detecção que oscilaram entre 3,8 a 22,9 por 100.000 habitantes. Ao longo desse
período observou-se uma tendência ao crescimento do número de casos, com o
registro de coeficientes mais elevados nos anos de 1994/1995, quando atingiram
níveis de 22,83 e 22,94 por 100.000 habitantes, respectivamente.
Ao analisar a evolução da LTA no Brasil, observa-se uma expansão
geográfica. No início da década de 80 foram registrados casos em 20 unidades
federadas (UF) e a partir de 2001 todas as UF registraram casos autóctones da
doença. No ano de 1994 houve um registro de casos autóctones em 1.861
municípios, o que representa 36,9% dos municípios do País; em 2002 houve uma
expansão da doença para 2.302 municípios (41,1%) (BRASIL, 2006).

27
 Introdução

1.1.2 Flebotomíneos – Estado da Arte

Os flebotomíneos são hospedeiros invertebrados de diversos grupos de

patógenos, tais como bactérias (Bartonella bacilliformes), vírus (Phlebovirus,
Orbivirus, Vesiculovirus) e protozoários (como os pertencentes aos gêneros
Leishmania e Endotripanum), sendo que os últimos são os responsáveis pelas
variadas formas clínicas das leishmanioses humanas (KILLICK-KENDRICK, 1979;
YOUNG & DUNCAN, 1994).
A epidemiologia das leishmanioses somente pode ser compreendida
através da ecologia dos flebotomíneos, e tais estudos baseiam-se, principalmente,
na cuidadosa identificação da fauna flebotomínica em focos da doença. Assim, o
fator primordial que impulsiona os estudos dos flebotomíneos é a sua capacidade
vetorial para Leishmania.
Atualmente, já foram descritas mais de 800 espécies de flebotomíneos e
estima-se que 81 delas sejam capazes de transmitir Leishmania. Tal capacidade já
foi evidenciada em 19 espécies, das quais 11 pertencem ao gênero Phlebotomus
e oito ao gênero Lutzomyia. Há também fortes evidências de que outras 14
espécies, nove do gênero Phlebotomus e cinco do gênero Lutzomyia, também
sejam vetoras de leishmanioses (KILLICK-KENDRICK, 1990).
Segundo MARCONDES et al., (2001) o estudo da variação sazonal em
populações de flebotomíneos é muito importante para a compreensão da biologia,
e da possível importância epidemiológica dos mesmos. Estudos destas variações
têm originado dados sobre os riscos de transmissão de parasitos ao homem,
através dos flebotomíneos.
Estudos de fauna flebotomínica, além de sua importância ecológica ao
determinar a diversidade e riqueza de parte da entomofauna de uma região,
auxiliam na determinação das principais espécies vetoras, e mesmo a elucidar a
participação de espécies secundárias, na transmissão de leishmanioses.
Um aspecto interessante e de grande importância é a participação da saliva
dos flebotomíneos injetada nos hospedeiros mamíferos, não só durante a
realização de repasto sanguíneo, mas também no momento da sondagem que o

28
 Introdução

precede, no processo de infecção por Leishmania. A saliva destes insetos

apresenta diversas proteínas imunomodulatórias que têm papel fundamental no
processo de infecção (KAMHAWI, 2000).
A descrição morfológica das espécies é ainda o método primário de
identificação dos flebotomíneos. A proposta do GRUPO CIPA (1991), para
padronizar as descrições de flebotomíneos americanos, indica que a morfologia
permanecerá, ainda, por muitos anos como o principal método no reconhecimento
das espécies destes dípteros. A necessidade de diferenciar espécies dentro de
grupos e complexos de espécies estimulou a introdução de novos métodos
genéticos, bioquímicos e de biologia molecular para a identificação específica dos
flebotomíneos.
Estudos de diversidade genética são fundamentais e auxiliam na
compreensão da diversidade de padrões clínicos, que as leishmanioses podem
assumir. Por exemplo, o fato de L. longipalpis ser, atualmente, considerada um
complexo de espécies, ajudaria a explicar as diferentes manifestações clínicas da
LV nas Américas (BOTTECHIA et al., 2004; LAINSON & RANGEL, 2005, WARD et
al., 1983.

1.1.3. Técnicas moleculares no estudo da infecção natural de flebotomíneos

por Leishmania sp.

Atualmente, diversos autores têm utilizado técnicas de biologia molecular

em estudos sobre as leishmanioses. Especialmente em trabalhos que visam a
correta detecção, identificação e caracterização dos parasitos, em infecções
humanas, caninas e em reservatórios (CARVALHO, 2006; CORTES et al., 2004;
GONTIJO, 2000; VOLPINI et al., 2004,).

Considerando-se os vetores, as técnicas de biologia molecular podem

aumentar a sensibilidade de detecção de infecção natural por Leishmania sp.. A
determinação da capacidade e da competência vetorial de uma espécie de
flebotomíneo é de fundamental importância, e esses estudos podem ajudar na
compreensão do papel vetorial destas espécies.
29
 Introdução

Fatores como a baixa sensibilidade dos métodos usuais, como a

dissecação seguida de análise microscópica, e do isolamento em meio de cultura,
bem como a dificuldade de se processar um grande número de amostras,
desfavoreciam estes estudos, antes do advento de técnicas mais modernas. Nos
últimos anos, métodos moleculares têm sido empregados, com sucesso, na
determinação das taxas de infecção natural de flebotomíneos (ARANSAY et
al.,2000, PERRUOLO et al., 2006).

Para a detecção e identificação de Leishmania através da Reação em

Cadeia da Polimerase (PCR/RCP), diversas regiões do DNA desses parasitos têm
sido utilizadas como alvo, tais como: o gene do RNA ribossômico (rRNA), o gene
do miniexon derivado de RNA, seqüências repetidas no genoma e o minicírculo do
kDNA (ARANSAY et al., 2000; PAIVA et al., 2006).

O minicírculo do kDNA é um alvo ideal para a detecção de Leishmania

através de PCR. Ele apresenta 10.000 cópias por célula, e estas estão distribuídas
em cerca de dez classes diferentes de seqüências. Além disso, a seqüência do
minicírculo já é conhecida para maioria das espécies de Leishmania e apresenta
variações que possibilitam a diferenciação dos diversos grupos ou complexos de
espécies (ARANSAY et al., 2000).

Conforme descrito por PITA-PEREIRA et al., (2005) devem ser utilizados

controles, nas reações de PCR, para se evitar resultados falso negativos. Tais
autores utilizam um par de iniciadores que amplificam uma região de 220 pares de
bases de um gene constitutivo do gênero Lutzomyia, o gene da cacofonia. Dessa
forma tem-se um controle interno dos resultados das PCR’s realizadas.

Para a identificação dos complexos de espécies de Leishmania nos

flebotomíneos, diversas técnicas podem ser utilizadas tais como: reações de PCR
específicas, utilização de enzimas de restrição - RFLP-PCR e hibridização com
sondas específicas (CARVALHO, 2006; PITA-PEREIRA et al., 2005; VOLPINI et
al., 2004).

As principais vantagens dos métodos moleculares são a sensibilidade e

especificidade, independente do número, estágio e localização dos parasitos no
30
 Introdução

tubo digestivo dos flebotomíneos (PEREZ et al., 1994). Teoricamente, a presença

de apenas um parasito é suficiente para que seu DNA seja detectado por uma
PCR, mesmo em situações em que o DNA do inseto esteja em excesso (DE
BRUIJN & BARKER,1992).

As técnicas de biologia molecular apresentam algumas peculiaridades que

podem dificultar sua utilização e representar dificuldades em sua execução tais
como: a necessidade de, muitas vezes, se trabalhar em ambientes separados,
ocorrência de contaminações que dificultam a análise de resultados e levam a
repetição de experimentos e a necessidade de técnicas bem padronizadas. Além
disso, os reagentes e equipamentos apresentam custo relativamente elevado.

No Brasil, foram realizados poucos estudos que avaliam as taxas de

infecção natural de flebotomíneos, principalmente utilizando métodos moleculares
(PITA-PEREIRA et al., 2005).

1.1.4. Leishmanioses no Município de Belo Horizonte

Nos últimos, anos a incidência de casos de LV aumentou na região Sudeste

do Brasil, sendo a doença registrada em diversas cidades, incluindo a capital do
Estado de Minas Gerais, Belo Horizonte (LUZ et al., 2001).
Belo Horizonte é hoje o município com alta densidade populacional que
mais sofre com a ocorrência de LV. Os primeiros casos humanos ocorreram no
ano de 1994, na Regional Leste. Desde então, a doença atingiu Regionais
limítrofes como Nordeste, Norte, Venda Nova e, mais recentemente, Noroeste. No
período de 1994 a 2004, foram confirmados 637 casos humanos da doença,
sendo que 63% destes concentram-se nas últimas quatro Regionais citadas
acima. A partir da ocorrência do primeiro caso, a doença apresentou processo de
expansão territorial no município, com aumento significativo de casos humanos
nos últimos anos. As taxas de letalidade são altas (a média dos últimos 11 anos é
de 13%) e passou de 9,9%, em 2003, para 18,1% em 2004 (PBH, 2006).

31
 Introdução

A leishmaniose visceral canina também apresentou aumento no número de

casos e expansão territorial (PBH, 2006). Em Belo Horizonte a leishmaniose
visceral é uma doença de padrão emergente e encontra-se, majoritariamente,
concentrada em áreas desprivilegiadas, tendo uma série de fatores que
contribuem para a sua ocorrência (CAIAFFA, 2005).
No ano de 2006 foram registrados 61 casos de LV, com a ocorrência de oito
óbitos. Também foi registrada alta soroprevalência canina com um total de 7.682
cães positivos (PBH, 2006).
Com relação à LTA, esta é considerada endêmica na região metropolitana
do Município de Belo Horizonte. Em estudo realizado por PASSOS et al., (2001)
há descrição da doença em pacientes de todas as idades e em ambos os sexos.
Assim, acredita-se que ocorram no município ciclos de transmissão tanto
extradomiciliar como intra e/ou peridomiciliar. Considerando-se apenas o
Município de Belo Horizonte, no ano de 2006, foram registrados 23 casos de LTA
(SINAN, 2007).
Trabalhos sobre a fauna flebotomínica no Município de Belo Horizonte
demonstram a presença de espécies vetoras de LV e LTA. (RESENDE et al., 2004;
SOUZA et al., 2004). Em estudo realizado entre os anos de 2001 e 2003, cobrindo
todas as Regionais da capital, SOUZA (2005) relata a presença de 15 espécies do
gênero Lutzomyia com a predominância de L. longipalpis, principal espécie vetora
de L. chagasi. Há também o registro de espécies vetoras de L. braziliensis, tais
como: L.whitmani e L. intermedia. A s espécies de flebotomíneos já relatadas no
município de Belo Horizonte encontram-se listadas no quadro 1.
Assim, a adaptabilidade de flebotomíneos vetores ao ambiente
antropicamente modificado é um dos fatores ligados ao crescimento das
leishmanioses em Belo Horizonte, mas outros, não menos importantes, estão
relacionados aos novos hábitos e meios de ocupação pela população do espaço
urbano, os quais terminam por propiciar contato entre o homem, reservatórios e
vetores (LAINSON, 1989; MORENO et al., 2005; SOUZA, 2005).

32
 Introdução

QUADRO 1
Espécies de flebotomíneos já relatadas para as regionais do Município de Belo Horizonte

REGIONAIS
DO
MUNICÍPIO ESPÉCIES DE FLEBOTOMÍNEOS JÁ RELATADAS AUTORES, ANO
DE BELO
HORIZONTE

Brumptomyia sp., L. firmatoi , L. lenti , L. longipalpis,

SOUZA et al., 2004,
Barreiro L.migonei, L. misionensis, L. monticola, L. pessoai,
RESENDE et al., 2004
L.quinquefer, L. sallesi, L. termitophila, L. whitmani

Centro Sul L. longipalpis, L. monticola, L. pessoai, L. sallesi SOUZA et al., 2004

L. firmatoi , L. intermedia, L. lenti, L. longipalpis, SOUZA et al., 2004,

Leste
L.monticola, L. quinquefer, L. termitophila, L. whitmani RESENDE et al., 2004

L. firmatoi , L. intermedia, L. lenti, L. longipalpis, SOUZA et al., 2004,

Nordeste
L.termitophila, L. sallesi, L. whitmani RESENDE et al., 2004

Noroeste L. longipalpis, L. sallesi, L. whitmani SOUZA et al., 2004

L. intermedia, L. lenti, L. longipalpis, L. longipennis,

Norte L.monticola, L. pessoai, L. quinquefer, L. termitophila, SOUZA et al., 2004
L.sallesi, L. whitmani
L. intermedia, L. longipalpis, L. termitophila, L. sallesi,
Oeste SOUZA et al., 2004
L.whitmani

Pampulha L. lenti, L. longipalpis, L. sallesi, L. whitmani SOUZA et al., 2004

Brumptomyia sp., L. aragaoi, L. intermedia , L. lenti ,

Venda Nova SOUZA et al., 2004
L.longipalpis, L. sallesi, L. whitmani

* As espécies L. evandroi, L. edwardsi, L. intermedia, L. lenti, L. longipalpis, L. lloyd, L. longipennis, L.monticola, L.

mogonie, L. pessoai, L. quinquefer, L. termitophila, L.sallesi, L. whitmani foram coletas por RESENDE et al 2006, mas
estes não relatam quem quais das três regionais trabalhadas cada uma delas foi coletada.

33
 Introdução

1.1.5. Leishmanioses na Regional Nordeste

Segundo a Secretaria Municipal de Saúde de Belo Horizonte (PBH, 2006)

foram registrados na Regional Nordeste, 50 casos humanos de LV e 18 casos de
LTA no período de 2003 a 2005, ficando esta em segundo lugar no número de
casos de LV registrados no município, neste período. Os casos ocorreram em
diferentes bairros da Regional, não ficando constatada uma área de maior
concentração. No ano de 2006 ocorreram nesta Regional 14 casos de LV humana,
e um óbito devido a esta enfermidade.

A Regional acumula o maior número de casos humanos de LV, por

Regional, em Belo Horizonte, considerando o período entre 1994 e 2007. Com
relação à ocorrência da doença em cães domésticos, as prevalências para testes
sorológicos nos anos de 2002, 2003 e 2004 foram respectivamente: 6,3%, 10,0%
e 8,5% (PBH, 2006).

Em levantamento entomológico realizado no município de Belo Horizonte,

por SOUZA (2005), a Regional Nordeste apresentou a maior taxa de coleta de
flebotomíneos, sendo responsável por 28,8% do total de espécimes coletados. A
espécie predominante na Regional foi a L. longipalpis, mas outras com
importância vetorial para leishmanioses foram capturadas como: L. whitmani e L.
intermedia.

1.1.6. Comunidade e os processos da doença

O comportamento das comunidades tem sido pouco considerado no estudo

dos processos endêmicos, tanto para as leishmanioses como para outros agravos
da saúde (GAMA et al.,1998). Alguns autores mostram que as populações de
zonas rurais e periferias são carentes de informações acerca das doenças que as
afligem (NETO et al.,1985; VÁZQUES et al., 1991).
É necessário que, para o controle de determinadas endemias, além do

34
 Introdução

conhecimento de sua epidemiologia, se compreenda os conceitos, atitudes e

crendices da população acerca da mesma (NETO et al., 1985). Apenas
conhecendo as atitudes da população, pode-se orientá-la da melhor forma
possível para a profilaxia de determinadas enfermidades (ESTESO, 1984).
Além disso, conforme citado por DIAS (1998), o êxito das estratégias contra
as doenças endêmicas que, em geral, ocorrem em áreas de pobreza e
subdesenvolvimento, depende da disponibilidade de recursos econômicos, e
necessariamente, do conhecimento das competências e atitudes da população
diante do problema. Deve-se sempre considerar que a participação comunitária
ativa e permanente é fator fundamental para a execução, consolidação e vigilância
das ações de controle de endemias e demais agravos à saúde.
COSTA et al., (1994) enfatizam que a relativa conscientização dos
indivíduos, frente a morbidade de uma doença, no caso referindo-se a LTA em
Corte de Pedra na Bahia, é capaz de mobilizar a comunidade em ações sanitárias
e na implantação de projetos de controle com a participação da população.
A organização espacial que a sociedade adquire, historicamente, viabiliza a
circulação de agentes patogênicos, ao estabelecer conexões entre grupos
populacionais com características sociais que podem magnificar efeitos adversos,
e fontes de contaminação, locais de proliferação de vetores, dentre outros
(BARCELLOS & MACHADO, 1998).
A urbanização extensiva avança para além das fronteiras do ambiente
urbano, ocupando todo o espaço social. Tal ocupação pode determinar a
reemergência, em áreas urbanas do Brasil, de doenças tradicionalmente
entendidas como rurais, como a leishmaniose visceral (PROIETTI & CAIAFFA,
2005).
Conforme relatado por BARCELOS & QUITÉRIO (2006) no campo da
vigilância ambiental em saúde, deve-se priorizar a exposição, ou seja, deve-se
deslocar o foco tradicional da vigilância dos agravos para a vigilância dos fatores
de risco coletivos.
Assim, uma das tarefas principais para o estudo da relação ambiente e
saúde é a seleção de indicadores para esses níveis de manifestação de

35
 Introdução

problemas ambientais.
A vigilância ambiental, considerando-se o uso de atributos vetoriais, deve
centrar-se no resgate de processos ecológicos, epidemiológicos, climáticos e
socais envolvidos na domiciliação e urbanização dos insetos (GOMES, 2002).
A incidência das leishmanioses está ligada a diversos processos de
ausência de saúde ambiental. KAWA & SABROZA (2002) relatam que o aumento
da incidência de LTA no Rio de Janeiro é conseqüência de diversos fatores
envolvendo a degradação ambiental, como: desmatamento, queimadas, invasões
de terras e especulação imobiliária.
Para o Município de Belo Horizonte existe uma correlação entre a área de
residência, o perfil socioeconômico da população, e a carga de agravos à saúde a
que tal área está sujeita. Esta carga pode ser determinada pela pobreza e
ausência de políticas públicas efetivas em saúde, (CAIAFFA et al., 2005).

1.1.7. Estudos por Geoprocessamento

Uma vez que o processo saúde-doença sempre teve uma dimensão

espaço-temporal, a Geografia representa um importante papel na pesquisa em
saúde (SOUZA, 2005).
A Geografia Médica compreende o estudo das variações geográficas na
distribuição das doenças e na provisão de cuidados de saúde. Isto inclui o estudo
das relações entre saúde e ambiente, dentro do objetivo do entendimento das
relações entre a distribuição e difusão das doenças e o ambiente (clima,
vegetação, água e qualidade do ar) (COSTA & TEIXEIRA, 1999; MEDRONHO,
1995).
Os primeiros registros sobre a relação entre a doença, e o local e o
ambiente onde ela ocorre, são atribuídos a Hipócrates (480 A.C.), em seu livro
Ares, Águas e Lugares, onde ele enfatiza a importância do modo de vida dos
indivíduos e a influência dos ventos, água, solo e localização das cidades, na
ocorrência da doença (PESSOA, 1978 apud COSTA & TEIXEIRA, 1999).
Já o mapeamento geográfico de eventos relacionados a doenças data de

36
 Introdução

1859, quando Dr. John Snow traçou a origem de um surto de cólera em Londres,
identificando o veículo de transmissão da doença antes mesmo da descoberta dos
micróbios, desde então mapas são utilizados para seguir a dispersão de agravos,
identificar origens, determinar áreas alvo e avaliar epidemias (WHO, 2008).
A análise de dados distribuídos pelo espaço geográfico é cada vez mais
valorizada na gestão da saúde. Ela aponta subsídios para o planejamento e
avaliação de ações baseadas na análise da distribuição de doenças, localização
dos serviços de saúde e dos riscos ambientais (BARCELLOS & BASTOS, 1996).
A Geografia Médica tem se desenvolvido: na análise dos padrões de
distribuição espacial e temporal das doenças; no mapeamento das doenças;
ecologia das doenças, usando conceitos da análise sistêmica e aplicação de
conceitos geográficos ao planejamento para a localização e administração de
serviços de saúde.
Este quadro de evolução da ciência geográfica apresenta uma tecnologia
de grande significado para as pesquisas na área da saúde: o Geoprocessamento
(SOUZA, 2005).
Geoprocessamento é um termo amplo, que engloba diversas tecnologias
de tratamento e manipulação de dados geográficos, através de programas
computacionais. Dentre essas tecnologias, destacam-se: a utilização de Sistemas
de Posicionamento Global – GPS e os Sistemas de Informações Geográficas –
SIG.
Uma das maneiras de se conhecer mais detalhadamente, as condições de
saúde da população, é através de mapas que, permitem observar a distribuição
espacial de situações de risco e dos problemas de saúde. A abordagem espacial
permite a integração de dados demográficos, socioeconômicos e ambientais,
promovendo o interrelacionamento das informações de diversos bancos de dados
(BARCELLOS et al., 1998; BARCELLOS & BASTOS, 1996; SUSSER, 1994)
Desde 1993, a Organização Mundial de Saúde e o UNICEF (Fundo das
Nações Unidas para a Infância) utilizam o sistema de informações geográficas no
projeto de erradicação da dracunculose. Os sistemas de computação utilizados
permitem a visualização de focos da doença, o monitoramento de casos novos e a

37
 Introdução

efetividade das intervenções realizadas. Projetos para o controle de outras

doenças também são desenvolvidos, como oncocercose, tracoma,
tripanossomíase africana, filariose, poliomielite e malária (WHO, 2008).
No Brasil, o departamento de processamento de imagens do INPE (Instituto
Nacional de Pesquisas Espaciais), em colaboração com outras instituições,
também desenvolve projetos como o GeoSchisto que realiza desenvolvimento de
modelos de análise, representação e construção de cenários espaciais que
permitam a caracterização de fenômenos relacionados à distribuição da
esquistossomose em Minas Gerais.
E o projeto SAUDAVEL (Sistema de Apoio Unificado para a Detecção e
Acompanhamento em Vigilância Epidemiológica), que busca produzir instrumentos
de Tecnologia da Informação Espacial, métodos, algorítmos e produtos de
software, para dotar os sistemas de vigilância epidemiológica e de controle de
endemias, de capacidade de antecipação, a partir da possibilidade de tratar
grandes bases de dados espaço-temporais, com dados dos SIS (Sistema de
Informação em Saúde) e com dados caracterizadores da população e de seu lugar
(BRASIL, 2008).
Outra iniciativa é o programa de Monitoramento Inteligente do Mosquito da
Dengue (M.I. Dengue) desenvolvimento por empresa mineira em colaboração com
a Universidade Federal de Minas Gerais (M.I.DENGUE, 2008). Que permite a
melhora no monitoramento deste vetor, auxiliando significativamente em seu
controle.
As leishmanioses, por sua vez, têm sido estudadas utilizando-se técnicas
de Geoprocessamento por vários pesquisadores, como SOUZA et al., (2006) que
relacionou a ocorrência das leishmanioses e seus vetores aos parâmetros
geográficos do Município de Belo Horizonte, e ANTONIALLI et al., (2006) que,
através da análise espacial da ocorrência de LV no Mato Grosso, determinou a
rota de dispersão da doença, bem como os fatores a ela relacionados.

38
Justificativa
 Justificativa

2. Justificativa

A Regional Nordeste foi escolhida para a realização deste trabalho

juntamente com as autoridades municipais de saúde de Belo Horizonte (Gerência
de Controle de Zoonoses), por apresentar nos últimos cinco anos número
significativo de casos humanos de LV (maior média histórica de casos humanos
entre as Regionais) e casos de LTA, aliados à alta soroprevalência canina para
leishmanioses. Concomitantemente, ao estudo sobre flebotomíneos foi realizado
um estudo sobre reservatórios silvestres: Detecção de Leishmania sp. em
mamíferos domésticos e sinantrópicos, e em seus ectoparasitos na mesma
Regional do Município de Belo Horizonte, Minas Gerais/Brasil. Os mamíferos
foram coletados nas mesmas áreas em que as armadilhas para coleta de
flebotomíneos foram expostas. Ambos estudos foram financiados pela
Comunidade Econômica Européia, e fazem parte de um projeto mais amplo que
inclui outras Universidades e Centros de Pesquisas da Europa e América Latina:
Control Strategies for visceral leishmaniasis (VL) and mucocutaneous
leishmaniasis (MCL) in South America: Application of molecular epidemiology.
Segundo ANDRADE FILHO et al., (2001), a enorme adaptabilidade dos
flebotomíneos ao ambiente antrópico propicia o aumento do número de casos de
leishmanioses. Dessa forma, estudos sobre esses insetos, considerando seus
diversos aspectos, são de extrema importância em um país como o Brasil onde as
leishmanioses estão em expansão e constituem um sério problema de saúde
pública. O estudo detalhado da fauna flebotomínica na Regional Nordeste, bem
como a determinação das espécies de Leishmania que infectam as mesmas,
propiciará um entendimento mais completo da epidemiologia das leishmanioses
nesta área.
A Regional Nordeste é prioritária para a vigilância epidemiológica com
relação às leishmanioses (SOUZA, 2005). Os resultados do presente estudo
poderão ser utilizados para o monitoramento da fauna flebotomínica, e o
conhecimento de sua distribuição sazonal permitirá estabelecer medidas de
controle mais eficazes e objetivas para controle dos vetores.

39
 Justificativa

Para o controle das leishmanioses é necessário o conhecimento de sua

ecologia e epidemiologia, e para a compreensão dessas é fundamental o
conhecimento das espécies de Leishmania que se encontram nos vetores e
reservatórios, que associados às características do ambiente podem permitir a
definição de fatores de risco ambiental para a ocorrência da doença. A utilização
de técnicas de biologia molecular nesses estudos aumenta sua acurácia
(ARANSAY et al., 2000, PITA-PEREIRA et al., 2005).
Os métodos da biologia molecular, apesar de pouco utilizados em estudos
de infecção natural em flebotomíneos, são importantes, pela sua maior
sensibilidade, quando comparados aos métodos tradicionais de estudo de dessa
infecção, podendo melhorar a compreensão das relações existentes entre os
vetores e os parasitos, na natureza (PITA-PEREIRA et al., 2005).
Uma vez que as leishmanioses apresentam padrão de distribuição focal, as
características dos domicílios e peridomicílios podem propiciar a ocorrência de
flebotomíneos, sendo o manejo ambiental preconizado como medida de controle
(BRASIL, 2006B). A associação das informações sobre a distribuição da fauna e
das condições ambientais pode indicar novos caminhos para a profilaxia das
leishmanioses.
Como a abordagem espacial permite a integração de dados demográficos,
socioeconômicos e ambientais, promovendo o interrelacionamento das
informações de diversos bancos de dados (SOUZA et al., 1996), a análise por
geoprocessamento dos fatores relacionados à ocorrência das leishmanioses
poderá contribuir para a compreensão deste agravo, em uma perspectiva mais
ampla.
Dessa forma, é necessário não só conhecer as características do ambiente,
caracterizar detalhadamente a fauna flebotomínica, identificar as espécies de
Leishmania que infectam os vetores, mas também buscar desenhar o perfil
geográfico de ocorrência destas variáveis em conjunto com os casos humanos e
caninos de leishmanioses.
Uma vez que nenhum campo do saber, ou qualquer categoria de estudo
isolada, tem dado conta da pluralidade de fatores implicados no processo

40
 Justificativa

saúde/doença, há a necessidade de esforço conceitual e metodológico para a

identificação de recortes mais adequados e de métodos mais sensíveis para
apreendê-los concretamente na prática investigativa. Sendo necessárias práticas
inter ou trans disciplinares (COSTA & TEIXEIRA 1999).

41
OBJETIVOS
 Objetivos

3. Objetivos

Objetivo Geral

Caracterizar a fauna flebotomínica e as taxas de infecção por Leishmania

na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte, Minas Gerais,
caracterizando sua infecção natural por Leishmania sp. e os aspectos
biogeográficos relacionados a mesma.

‘Objetivos específicos

Estudar o padrão de flutuação sazonal das espécies de flebotomíneos na

Regional Nordeste;

Isolar e caracterizar as espécies de Leishmania presentes nos flebotomíneos

da área;

Caracterizar as situações ambientais para a ocorrência de leishmanioses na

Regional Nordeste, utilizando análise por geoprocessamento e caracterização dos
domicílios onde ocorreram casos de LV.

43
Metodologia
 Metodologia

4. Metodologia:

4.1. Área de Estudo

Fundada em 12 de dezembro de 1897, Belo Horizonte foi a primeira

cidade planejada do país e tornou-se capital do Estado de Minas Gerais na
recém criada República Federativa do Brasil. Nasceu de uma invenção
política, com um traçado urbano feito aos moldes de Paris e Washington,
onde viveriam 250 mil habitantes. Hoje com 1,4 % do PIB nacional e 2,3
milhões de habitantes, a cidade é o centro de uma região metropolitana de
4,5 milhões de habitantes. O principal pólo de serviços, conhecimento e
tecnologia do Estado de Minas Gerais. A cidade é dividida em nove Distritos
Sanitários os quais têm definido: espaço geográfico, populacional e
administrativo (PBH, 2008) (Figura 1).
Belo Horizonte localiza-se entre as coordenadas 19 55' Sul e 43 57'
Oeste, apresenta clima tropical de altitude, com temperatura média anual em
torno de 21ºC.
A Regional Nordeste possui uma população de 274.060 habitantes,
distribuídos em 69 bairros. Sua extensão territorial é de 39,60 km2, sendo
19,46 km2 de áreas verdes, parte destas localizadas em 17 parques
ecológicos. Localiza-se entre as Regionais Leste, Noroeste, Pampulha,
Norte e o Município de Sabará (PBH, 2008).
A história da Regional está intimamente ligada à história do antigo
Arraial de Belo Horizonte, que possuía extensa área rural. Ocupada por
bairros populares a partir da década de 20, a Regional começou a passar
pelo processo de industrialização no final dos anos 30 (Figura 2) (PBH,
2008).
Caracteriza-se por grandes diferenças sócio-econômicas em sua
população e na sua infra-estrutura sanitária. Cumpre ressaltar que "bolsões
de miséria" são encontrados em todos os bairros, existindo áreas com
esgoto a céu aberto, lixo acumulado, e aglomerados residenciais do tipo
vilas ou invasão dos "sem casa" (PBH, 2008).
A Regional, apesar de localizada em uma grande metrópole,
apresenta áreas que podem ser consideradas como rurais, que mantêm
44
 Metodologia

extensas áreas verdes e propriedades com criação de animais. Tais

localidades estão majoritariamente no Bairro Ribeiro de Abreu, Capitão
Eduardo, Gorduras e Belmonte, que perfazem juntos uma área de 12,75 km2
de áreas verdes (Figura 3) (PBH 2006).

BELO HORIZONTE

FIGURA 1: Divisão administrativa do Município de Belo Horizonte e sua localização no Estado de Minas
Gerais e no Brasil

45
 Metodologia

FIGURA 2: Aspecto geral da Regional Nordeste, área urbanizada

FIGURA 3: Aspecto geral de um bairro da Regional Nordeste, área verde.

Notar armadilha luminosa HP no centro da figura.

46
 Metodologia

4.2. Coletas de Flebotomíneos

4.2.1. Métodos de Coleta

Os flebotomíneos foram coletados utilizando-se os seguintes métodos

de coleta:

Armadilha luminosa HP
A armadilha luminosa automática HP (PUGEDO et al., 2005) utilizada
para coletas noturnas de 12 horas. Trata-se de tecnologia nacional, o
modelo da armadilha baseia-se no modelo já consagrado de armadilha CDC
(desenvolvida pelo Centers for Disease Control – USA – CDC, 2008). A
armadilha HP já foi testada em campo para a captura de flebotomíneos,
conforme descrito por PUGEDO et al. (2005) (Figura 4).

Armadilha de Shannon
A armadilha de Shannon (SHANNON, 1939) (Figura 5) utiliza fonte
luminosa e/ou isca animal, para atrair os insetos, sendo estes coletados com
o capturador manual de Castro. Em nosso estudo utilizamos isca luminosa.

Capturador manual de Castro

O Capturador manual de Castro (CASTRO, 1937) é feito utilizando-se
um tubo de vidro de cerca de 20 cm de comprimento e um cm de diâmetro,
em uma de suas extremidades acopla-se uma tela de cobre com a malha
muito fina e um tubo de borracha, por onde se aspira de modo a sugar os
insetos para dentro do tubo de vidro (Figura 6).

47
 Metodologia

FIGURA 4: Armadilha
luminosa HP

FIGURA 5: Armadilha luminosa de Shannon

FIGURA 6: Capturador Manual de

Castro

48
 Metodologia

4.2.2. Metodologia das Coletas

Coletas sistematizadas

As coletas de flebotomíneos com armadilhas luminosas HP foram

realizadas em residências onde foram notificados casos humanos de LV, no
ano de 2005, e em ambientes de áreas verdes. Os pontos de 1 a 10 e de 14
a 16 mostrados no mapa da figura 7 representam estes locais. Os pontos 11
e 12 representam as áreas verdes.
A maioria dos locais de coleta coincidiram com os locais das coletas
de roedores silvestres e locais de coleta de material biológico de cães
domésticos.
Foram realizadas coletas quinzenais no período de Julho de 2006 a
Junho de 2007. Foram expostas 14 armadilhas em ambiente peridomiciliar, e
10 armadilhas em dois fragmentos de áreas verdes (fazendas), sendo cinco
por área, totalizando 24 armadilhas luminosas HP (Figura 7). As armadilhas
eram expostas de entre 18:00 horas da tarde do primeiro dia e 06:00 horas
da manhã do dia seguinte. O esforço amostral para este tipo de coleta foi de
288 horas por armadilha e 6.912 horas no total.

Coletas não sistematizadas

Foram realizadas coletas com armadilha de Shannon ao longo do

período amostral, sendo feita uma coleta por estação do ano. A escolha dos
locais de coleta foi avaliada de acordo com os resultados obtidos com
armadilhas luminosas HP, que antecediam as coletas com armadilha de
Shannon.
Foram priorizados os locais onde houve coleta de fêmeas positivas
para Leishmania, bem como as áreas verdes, uma vez que as coletas
sistematizadas precederam as com armadilha de Shannon. A coleta
realizada na primavera ocorreu no bairro Nazaré e as demais, verão, outono
e inverno, ocorreram na Fazenda SL. O esforço amostral para este tipo de
coleta foi de 16 horas, sendo quatro horas por coleta, das 18:00 às 22:00
horas. O horário de verão não foi considerado neste estudo.
49
 Metodologia

FIGURA 7: Localização da Regional Nordeste no Município de Belo Horizonte,

e locais de capturas de flebotomíneos, nessa Regional, no período
de julho de 2006 a junho de 2007 – Coletas com armadilha luminosa
HP: 1 ao 16. Coletas com armadilha de Shannon: 11 e 13.

Como o número de armadilhas expostas em cada local foi diferente,

para a comparação faunística entre eles, foi utilizada a média aritmética do
número de flebotomíneos coletados (Quadro 2).

50
 Metodologia

QUADRO 2
Relação dos locais de coleta e número de armadilhas expostas em cada um deles
Lotes da Localidade, de
Número de
Localidade de Estudo acordo com numeração da
armadilhas utilizadas
figura 7
Bairro Fernão Dias 1, 2 2
Bairro Goiânia 3, 4 2
Bairro Maria Goreti 5 1
Bairro Eymard 6 1
Bairro Pirajá 7 1
Bairro São Gabriel 8, 9,10 3
Fazenda CA* 12 5
Fazenda SL* 11 5
Bairro Nazaré 13, 14 2
Bairro Paulo VI 15 1
Conjunto Ribeiro de Abreu 16 1
* Códigos de identificação das Fazendas, o nome das mesmas foi mantido em sigilo, por questões éticas.

4.3. Processamento e acondicionamento dos flebotomíneos coletados

4.3.1. Machos

Todos os espécimes machos coletados foram acondicionados em

tubos de hemólise contendo álcool a 70%, e armazenados para posterior
preparação, montagem e identificação.

4.3.1.1. Preparação e Montagem dos espécimes

Os espécimes machos foram preparados e montados de acordo com

as técnicas de rotina do Centro de Referência Nacional e Internacional para
Flebotomíneos do Instituto René Rachou (CRNIF-IRR).
Resumidamente, as técnicas consistiram em: imersão dos insetos em
solução de hidróxido de potássio a 10% por 24 horas, três lavagens de 15
minutos cada, em água destilada, uma passagem de 20 minutos em álcool a
70%, uma passagem de 15 minutos em álcool a 90% e uma passagem,
também de 15 minutos, em álcool absoluto. Após estes procedimentos, os

51
 Metodologia

insetos foram imersos por 24 horas, no mínimo, em Creosoto de Faia.

Em seguida, os insetos foram montados entre lâmina e lamínula em
Bálsamo do Canadá, com a cabeça voltada para a direita, com a face dorsal
voltada para cima, o tórax e o abdômen montados lateralmente, com as
pernas e asas distendidas.

4.3.2. Fêmeas

As fêmeas coletadas foram submetidas aos seguintes procedimentos:

dissecação, identificação e extração de DNA, para posterior realização de
reações em cadeia da polimerase (PCR) e reações de PCR-RFLP (cortes
com enzimas de restrição), para pesquisa e identificação de Leishmania. O
quadro 3, resume o esquema de processamento dos espécimes fêmeas.

4.4. Identificação específica dos flebotomíneos

A identificação específica dos flebotomíneos seguiu a classificação

proposta por YOUNG & DUNCAN (1994).

Espécimes fêmeas

Dissecação

Exame ao microscópio óptico

Fêmeas com formas flageladas Fêmeas sem formas flageladas

½ do tubo digestório ½ do tubo digestório + restante do inseto Inseto inteiro

Congelados em freezer a -70ºC

Ependord salina com
antibiótico;
Centrifugado e Agrupadas por espécie, dia e local de coleta – até 10 espécimes;
ressuspendido em meio LIT,
e transferido para tubo Extração de DNA;
contendo NNN Técnicas moleculares;

Lâminas coradas pelo Giemsa

FIGURA 8: Diagrama resumo do processamento realizado com os espécimes

fêmeas

52
 Metodologia

4.5. Pesquisa da infecção natural por Leishmania sp. nas fêmeas de

flebotomíneos

4.5.1. Dissecação

A dissecação foi realizada para a pesquisa visual de parasitos e

tentativa de isolamento de Leishmania spp. em meio de cultura. Neste
momento, as fêmeas eram identificadas pelo exame das espermatecas,
situadas no último segmento abdominal. Também foram utilizadas as
características do cibário, mantendo no momento da dissecação a parte
ventral da cabeça voltada para cima.
O tubo digestório dos insetos foi retirado em solução salina estéril
com o auxílio de duas seringas de insulina, que eram utilizadas penas uma
vez. Tal procedimento foi realizado a partir da cabeça até o final do
abdômen, sobre uma lâmina de vidro para microscopia. O material foi
recoberto com lamínula para pesquisa de parasitos ao microscópio óptico
(GONTIJO, 1989).
Antes da dissecação, para aumentar a probabilidade de isolamento de
parasitos em cultura, as fêmeas foram submetidas ao seguinte protocolo
(CARAVALHO,1973), com modificações:
Em um tubo Ependorf as fêmeas foram imersas em solução de
micostatin (Squibb) a 100.000 U/ ml por 15 minutos. A seguir, foram imersas
em solução aquosa a 1:1000 de cloreto de benzalcônio (Zephiran, Winthrop)
durante dois minutos. Após estes procedimentos foram lavadas duas vezes
em água destilada estéril. Todos os instrumentos, vidrarias e soluções foram
esterilizados e as etapas de emersão e lavagem foram executadas em
ambiente asséptico (capela de fluxo laminar). A dissecação foi realizada em
salina com antibiótico (50 U/ml de sulfato de amicina).

Metade dos tubos digestivos das fêmeas que se mostraram positivas

foi transferida para tubo Eppendorf contendo salina com antibiótico (50 U/ml
de sulfato de amicina). Os tubos foram centrifugados a 500xg
(microcentrífuga Eppendorf 5415) por cinco minutos e o sobrenadante era

53
 Metodologia

descartado. O material restante foi ressuspendido em cerca de 300 L de

meio LIT (Liver Infusion Tryptose) (CAMARGO 1964) e transferido para tubo
de ensaio contendo NNN (Meio de Novy, MacNeal e Nicolle 1908), acrescido
de meio de LIT. O restante do material foi guardado em eppendorfs e
congelado em freezer a –70ºC, para posterior realização dos métodos
moleculares.

As lâminas em que as fêmeas que apresentaram formas flageladas

no intestino eram dissecadas, foram coradas pelo Giemsa DOLES conforme
técnica do fabricante.
Todas as fêmeas foram congeladas em freezer a –70ºC, para
posterior realização dos métodos de extração de DNA e reações de PCR
genérica para Leishmania e PCR-RFLP (polimorfismos de comprimento de
fragmentos de restrição) para a identificação das espécies: L. chagasi, L.
braziliensis e L. amazonensis.

4.5.2. Extração de DNA

As fêmeas da mesma espécie, provenientes do mesmo dia e ponto de

coleta foram processadas individualmente ou em grupos de até dez
espécimes, de acordo com o número de espécimes coletados. As fêmeas
com presença de sangue no intestino, bem como aquelas com formas
flageladas, ao exame microscópico, foram processadas individualmente.
Para a extração do DNA foi utilizado o Kit da Puregene/Gentra – DNA
Purification System – Genomic DNA Purification KIT (D-7000A), conforme
protocolo do fabricante.

4.5.3. Reação de PCR para avaliar a presença de DNA de flebotomíneos

após a extração

Para avaliar a presença de DNA de flebotomínoes foi realizada uma

PCR com os iniciadores [5´-GTGGCCGAACATAATGTTAG–3` e 5`-
CCACGAACAAGTTCAACATC-3`] que amplificam a região IVS6 do gene da
cacofonia, constitutivo do gênero Lutzomyia (LINS et al., 2002).

54
 Metodologia

As reações foram realizadas com Kit para PCR da Promega – GoTaq

Green Master Mix (M1722), utilizando-se 2µL da solução de DNA hidratado
de cada amostra, com o seguinte esquema de ciclos de amplificação, o
protocolo utilizado foi baseado em PITA –PEREIRA et al., (2005).

QUADRO 3
Ciclos de amplificação da PCR para amplificação de
fragmento do gene da cacofonia

Ciclos de Amplificação
12’ – 94ºC desnaturação e ativação enzimática
30” – 94ºC desnaturação
30” – 55ºC anelamento
35 X
30” – 72ºC extensão
10’ – 72ºC extensão final
4ºC – para finalizar as reações

Dez microlitos de produto amplificado foram corridos em gel de

agarose a 2%, corado pelo brometo de etídeo, e visualizados sob luz U.V,
em transluminador, e fotografados com câmera Polaroid (SAMBROOK et al.,
1989). Em todas as reações foram utilizados controles positivos (DNA de L.
longipalpis obtidos em colônia cedidos pelo LALEI-IRR) e negativos (reação
sem DNA).

4.5.4. Reação de PCR para identificação do gênero Leishmania

Foram utilizados iniciadores para a região conservada do kDNA de

Leishmania spp. [5’CCG CCC CTA TTT TAC ACC AAC CCC3’, 5’GGC
CCA CTA TAT TAC ACC AAC CCC3’ e 5’GGG GAG GGG GGT TCT
GCG AA3’] (Degrave 1994). O protocolo foi adaptado de PITA –PEREIRA et
al., (2005).
Para um volume final de 10µL foram utilizados: 1µL dNTP´s, 1µL de
tampão da enzima (Applied Biosystem - Roche), 0,6µL de Cloreto de
Magnésio (Applied Biosystem - Roche), 0,2 µL de Taq Gold (Applied
Biosystem - Roche), 1 µL (5 pmoles) de iniciadores, 5,2µL de água
(bidestilada e deionizada) e 1µL de DNA da amostra. O esquema de ciclos
de amplificação utilizado foi:

55
 Metodologia

QUADRO 4
Ciclos de amplificação da PCR para amplificação de fragmentos da
região conservada do k DNA de Leishmania sp.

Ciclos de Amplificação
4’ – 94ºC desnaturação e ativação enzimática
30” – 94ºC desnaturação
30” – 60ºC anelamento
30 X
30” – 72ºC extensão
10’ – 72ºC extensão final
4ºC – para finalizar as reações

Quatro microlitos de produto amplificado foram corridos em gel de

poliacrilamida a 5%, corado pela prata, para visualização dos resultados
(SANTOS et al., 1993).

4.5.5. PCR-RFLP (polimorfismos de comprimento dos fragmentos de

restrição) para a identificação específica de Leishmania

Para a identificação das espécies de Leishmania infectando as

fêmeas de flebotomíneos foi utilizada uma reação de PCR-RFLP.
O kDNA das espécies L. amazonensis, L. braziliensis e L. chagasi
apresentam seqüências suficientemente distintas para serem utilizadas na
separação entre essas espécies. Segundo VOLPINI (2003), a digestão com
a endonuclease Hae III distingue entre essas três espécies de Leishmania.
As demais espécies foram identificadas apenas ao nível de gênero.
Utilizamos protocolo de acordo com os descritos por VOLPINI (2003)
e ANDRADE et al. (2006) resumidamente: para um volume final de 10µL de
reação foram utilizados 5µL de produto amplificado da reação de PCR
descrita acima, 0,1 µL de endonuclease Hae III (1U/µL), 1µL de tampão da
enzima e 3,9 µL de água (bidestilada e deionizada).
Os tubos com os reagentes foram incubados por três horas a 37ºC,
em banho maria. Os resultados das reações foram visualizados em gel de
poliacrilamida a 10% corado pela prata (SANTOS et al., 1993).

56
 Metodologia

4.5.6. Hibridização de produtos de PCR (DOT-BLOT)

A maioria das amostras foi caracterizada como L.chagasi utilizando as

análises de PCR-RFLP, para a confirmação destes resultados foi realizada a
técnica de hibridização de produtos de PCR. Os protocolos foram baseados
em ANDRADE et al., (2001).
Resumidamente a técnica consiste na desnaturação de 10µL de
produto amplificado do fragmento de interesse (no caso o fragmento de 120
pb de Leishmania sp.). Para tal, as amostras foram acrescidas de 90µ L de
água destilada e mantidas por três minutos a 100ºC e transferidas para o
gelo. Após este processo foram acrescidos 11µ L de solução de 4N NaOH
por amostra. Após este processo, as amostras foram aplicadas em uma
membrana de nylon (Amersham: Hybond N plus; NEN, Gene Screen Plus,
Gelman, biotrace), através do processo de dot-blot. A membrana foi
hibridizada com o minicírculo clonado de L. chagasi, utilizado como sonda,
32
marcada com fósforo radioativo P{α}DCTP através do sistema: Random
Primer DNA Labeling System (Gibco BRL). As membranas foram secadas e
expostas a autoradiografia a -70ºC, segundo os autores acima.

4.6. Inferência da taxa de infecção natural

Considerando-se os agrupamentos de espécimes, dada a

impossibilidade de se saber a real taxa de infecção natural para cada um, foi
considerado que pelo menos um dos exemplares estava infectado. As taxas
de infecção natural foram calculadas com base neste critério.

4.7. Caracterização ambiental das residências

Para a caracterização dos locais de estudo, foi utilizada uma ficha

(Apêndice 1) baseada no estudo de MORENO (2002). O preenchimento das
fichas foi realizado por uma dupla de profissionais previamente treinados,
com um morador adulto das residências dos locais em que as armadilhas

57
 Metodologia

foram instaladas.
As fichas de caracterização apresentavam questões tanto sobre as
casas como sobre os peridomicílios. A avaliação dos parâmetros
considerados foi restrita à presença/ausência dos mesmos, sendo as
análises descritivas. Em relação à estrutura das casas, alguns indicadores
da condição sócio econômica foram avaliados: tipo de parede, tipo de piso,
tipo de teto, condição do banheiro e instalação sanitária da casa.
Estes indicadores foram relacionados à ocorrência de flebotomíneos,
pois as condições das paredes, pisos e tetos das casas podem criar abrigos
para este grupo de insetos, uma vez que paredes sem reboco, rachaduras,
buracos, infiltração, tetos apenas de telha ou apenas de laje, e piso de terra
batida aumentam a umidade no interior das casas e favorecem a existência
de abrigos. A ocorrência de mofo foi considerada fator indicativo de alta
umidade.
Quanto aos peridomicílios, foi realizada uma classificação avaliando
os aspectos referentes à limpeza e cuidado, inferidos a partir da
caracterização. Além de condições que conhecidamente podem favorecer a
ocorrência de flebotomíneos, foram avaliadas condições que também podem
facilitar a ocorrência de outros agravos urbanos.
Os indicadores utilizados foram os presentes nos itens 12,13 e 14 da
ficha de caracterização e estão resumidos no quadro 4 tais definições são
embasadas pelos Manuais de Controle das Leishmanioses (BRASIL 2006,
BRASIL 2002A, BRASIL 2002B).

58
 Metodologia

QUADRO 5
Características que foram pesquisadas nos peridomicílios e que podem estar
relacionadas com a ocorrência de flebotomíneos
Características dos peridomicílios que
Condição que tais características
podem relacionar-se à ocorrência de
podem propiciar
flebotomíneos
Árvores Abrigo e Criadouros
Plantas e hortas Criadouros
Madeira empilhada Criadouros
Entulho Abrigo e Criadouros
Lixo não acondicionado Criadouros
Montes de folhas e troncos podres Criadouros
Esterco Criadouros
Esgoto a céu aberto Criadouros
Canais de águas pluviais Criadouros
Animais domésticos Fontes de alimento

Para avaliar o cuidado e limpeza consideramos: a presença de

madeira e entulho empilhados, de lixo doméstico não acondicionado e
montes de folhas.
A análise dos dados foi descritiva e restrita a este pequeno grupo,
sem a realização de inferências para a população da Regional como um
todo. Todos os participantes assinaram um termo de consentimento livre e
esclarecido (Apêndice 2) atestando a sua vontade de participar da pesquisa,
podendo se retirar do projeto a qualquer momento que quisesse.
Também foi realizado o registro fotográfico dos ambientes, e a análise
do entorno de cada local estudado, através do GoogleMaps. Foram
verifivadas as imagens em escala de 50 metros, a uma altura de 200 pés
(60,96 metros) de altura, os pontos de estudo foram centralizados em cada
visualização. Esta análise buscou identificar áreas verdes e lotes
arborizados no entorno dos pontos de estudo.
Para diferenciação entre lotes e áreas verdes foram considerados os
limites das áreas dos locais e as áreas que ultrapassavam os limites de lotes
foram consideradas áreas verdes. As imagens utilizadas não são mostradas
em respeito aos termos de uso do GoogleMaps, que não autoriza a exibição
pública delas, bem como sua manipulação em outros softwares (GOOGLE,
2008).

59
 Metodologia

4.8. Análise por Geoprocessamento

Para a análise por Geoprocessamento utilizamos metodologia

semelhante à utilizada por SOUZA (2005), em estudo entomológico e
biogeográfico no Município de Belo Horizonte.
Através das seguintes etapas:

Georreferenciamento dos casos humanos e caninos de leishmaniose
ocorridos no período de julho de 2006 a junho de 2007 no município
de Belo Horizonte. Dados que foram fornecidos pela Secretaria de
Saúde do Município de Belo Horizonte (Figuras 7 e 8).

Georreferenciamento dos domicílios participantes da pesquisa e
organização do banco de dados referentes à pesquisa entomológica
(Figura 6).

Análise conjunta utilizando mapas temáticos relacionados à
biogeografia de Belo Horizonte.
Os mapas utilizados foram: das áreas de vegetação, da área de
influência dos cursos d’água a céu aberto, áreas de vilas e
aglomerados urbanos e de hipsometria. Estes foram cedidos pela
Empresa de Informática e Informação do Município de Belo Horizonte
S.A. (PRODABEL) (Figuras 9 a 12).

Análise conjunta dos dados utilizando softwares compatíveis.

4.8.1. Banco de dados humano

Este banco refere-se a todos casos notificados de LV e LTA no

Município de Belo Horizonte pelo setor de Epidemiologia e Informação.
Não houve notificação de casos de LTA na Regional Nordeste no
período de estudo. Foram notificados 23 casos de LV nos anos de 2006 e
2007, mas no período de estudo (de julho de 2006 a junho de 2007) 10
casos foram notificados e georreferenciados.

60
 Metodologia

4.8.2. Banco de dados caninos

Este banco refere-se a todos os cães sorologicamente positivos para

a infecção por Leishmania, com exames realizados pelo Laboratório do
Centro de Controle de Zoonoses da PBH. As técnicas utilizadas são a RIFI
(Reação de Imunofluorescência Indireta) e ELISA (Enzyme Linked
Immunosorbent Assay), sendo a primeira o padrão ouro e a segunda a
técnica de triagem.
Cada cão examinado pela prefeitura possui um boletim
epidemiológico que foi preenchido e digitado nas Regionais, o qual possui
informações tais como: data de ocorrência do caso, endereço da residência,
número de nome e número do logradouro, entre outros. Através dos dados
dos logradouros foram feitos os georreferenciamentos dos casos caninos
nas bases de dados de endereços da PBH.
Em nosso período de estudo foram registrados na Regional Nordeste
2041 cães sorologicamente positivos e 1736 foram georreferenciados. Esta
perda deve-se a diversos tipos de falhas existentes no sistema da PBH
como: endereço não georreferenciados e nome ou número de logradouros
digitados incorretamente.

4.8.3. Banco de dados entomológicos para análise das espécies

vetoras

Foi criado um banco de dados de todas as espécies vetoras, com os

respectivos locais de coleta. Este banco foi composto por um código para
cada local, as coordenadas do mesmo e o total de espécies vetoras
coletadas.
As espécies implicadas na transmissão de Leishmania coletadas em
nosso estudo (L. longipalpis, L. whitmani e L. intermedia) foram analisadas
conjuntamente para a realização de uma análise mais robusta, uma vez que
foram coletados poucos exemplares de cada espécie.

61
 Metodologia

4.8.4. Georreferenciamento

O georreferencimento de todas as bases tanto cartográficas, como as

referentes à ocorrência dos vetores e casos de leishmaniose visceral foi
realizado através da associação ao sistema de coordenadas planas UTM D
(South American Datum) 69, que permitiu a associação de mapas distintos.
O sistema SAD 69 foi adotado em 1979, como o de referência para trabalhos
geodésicos e cartográficos no Brasil.
As coordenadas dos pontos de coleta entomológica foram colhidas
com o aparelho de Sistema de Posicionamento Global (GPS - Garmin-
eTrex), durante as visitas de campo.
As bases tabuladas cedidas pela Secretaria Municipal de Saúde
apresentavam os nomes e os códigos de logradouros, a geocodificação foi
realizada pela PRODABEL para obtenção das coordenadas dos pontos de
casos humanos e caninos de Leishmaniose. Quando a base não possuía as
coordenadas do endereço do caso foram utilizadas as coordenadas dos
vizinhos.
Houve perda de registros de casos caninos de leishmaniose (305),
mas este fator foge de nossa governabilidade e é um problema do sistema
de informação da PBH, que ainda se encontra em construção e passa por
processos de correção diariamente.
O mapeamento de todas as bases de dados foi realizado através do
Software MapInfo 8.5 para Windows (Figuras 8 e 9).

4.8.5. Tratamento prévio dos mapas temáticos da Regional Nordeste

Para que as análises fossem possíveis, todos os componentes

vetoriais dos mapas foram convertidos em componentes de formato do tipo
Raster (pixels, imagem) que possibilitam maior interação entre as variáveis
geográficas. Este processo foi realizado no ArcGis 9.2, o qual permitiu a
geração de relatórios que estabeleceram correlações entre os dados
analisados.

62
 Metodologia

Mapa de Vegetação
O mapa foi cedido pela PRODABEL, do ano de 2007, em extensão
.TAB do MapInfo. Foi realizada uma classificação no ArcGis 9.2 com o
seguinte parâmetro:

0: ausência de vegetação, branco;

1: presença de vegetação, verde.

Este mapa apresenta as áreas verdes de maior extensão e os

parques da Regional, sem considerar a vegetação presente em quintais
(Figura 10).

Mapa de Cursos d’água a céu aberto

O mapa cedido pela PRODABEL, do ano de 1995, em extensão .TAB
do MapInfo e representa apenas os cursos d’água a céu aberto.
Foi criada, no Software ArcGis 9.2 uma área de influência de 50
metros de cada lado dos cursos d’água. A classificação teve o seguinte
parâmetro:
0: fora da área de influência do curso d’água, branco;
1: curso d’água ou área de influência do curso d’água, azul;
(Figura 11).

Mapa de Vilas e aglomerados urbanos

O mapa cedido pela PRODABEL, do ano de 2006, em extensão .TAB
do MapInfo e representa as áreas de vilas e aglomerados da Regional,
segundo critério da própria PBH. Foi realizada uma classificação no ArcGis
9.2 com o seguinte parâmetro:
0: fora de áreas de vilas e aglomerados, branco;
1: área de vilas e aglomerados, laranja;
(Figura 12).

Mapa de Hipsometria
O mapa cedido pela PRODABEL, do ano de 1989, em extensão .TAB
do MapInfo, e representava as curvas de nível da Regional. Através do
ArcGis 9.2 foi feita a classificação das faixas altimétricas: abaixo de 700m,

63
 Metodologia

entre 701m e 750m, entre 751m e 800m, entre 801m e 850m, entre 851m e
900, e acima de 901m, representadas no mapa por um “dégradé” de tons de
marrom (Figura 13).

4.9. Análises dos mapas - Assinaturas

Os mapas foram comaparados conjuntamente através da

sobreposição deles, procedimento chamado assinatura. Os mapas de casos
caninos, casos humanos e fauna flebotomínica foram confrontados com
todos os mapas temáticos da Regional e entre si.
Em todos os mapas foi realizado um gradeamento de 20mX20m; o
tamanho desta célula foi estipulado de acordo com o tamanho de um lote
grande no Município de Belo Horizonte, 400m2.
Essa metodologia possibilitou a análise vertical do conteúdo das
células em todos os mapas sobrepostos.
O gradeamento foi realizado no MapInfo (8.5) e a análise de
sobreposição no ArcGis 9.2.
Além dos mapas comparativos, foram gerados mapas de densidade
de casos caninos e de ocorrência de flebotomíneos vetores. O pequeno
número de casos humanos de LV inviabilizou a construção deste tipo de
mapa para esta variável.

Mapa de casos caninos de Leishmaniose

O mapa de ocorrência de casos caninos, já em formato Raster, foi

submetido a uma metodologia de filtro de média, do software ArcGis, que
gera uma média móvel de 3x3 pixels. Este quadrado de pixels percorre todo
mapa gerando médias a cada pixel de acordo com o valor dos pixels do
entorno, assim são atribuídos valores aos pixels, que representam a variável
estudada.
A classificação das médias de ocorrências de casos na regional seguiu o
seguinte parâmetro: até 1: média de ocorrência de 0 a 1 caso em cada pixel,
de 1 a 2: média de ocorrência de 1 a 2 casos em cada pixel, e 2 a 3: média
de ocorrência de 2 a 3 casos em cada pixel.

64
 Metodologia

Mapa de ocorrência de flebotomíneos vetores

O mapa de distribuição de vetores foi montado a partir dos pontos de

coleta entomológica, considerando-se o total de espécies vetoras capturadas
em cada ponto durante o período de estudo. Para as fazendas, onde eram
expostas cinco armadilhas, foi utilizada a média do número de flebotomíneos
coletados em todas as armadilhas.
Usou-se o modelo de interpolação com peso inverso à distância no
software ArcGIS 9.2. Este método calcula a área de influência de um evento
de forma proporcionalmente inversa à distância do ponto de ocorrência dele.

Como a escolha dos pontos de coleta não foi aleatória e não cobriu
toda a área da Regional, pois se baseou nos locais de ocorrência de casos
humanos de leishmaniose visceral no ano de 2005, esta metodologia não
pode considerar a distribuição da fauna de vetores da regional como um
todo, trata-se de uma análise exploratória que descreve um evento referente
a local e tempo determinados.

65
 Metodologia

FIGURA 9: Georreferenciamento de casos humanos de leishmaniose visceral,

notificados pela Gerência de Epidemiologia e Informação da Prefeitura
Municipal de Belo Horizonte, na Regional Nordeste, no período de julho
de 2006 a junho de 2007

66
 Metodologia

FIGURA 10: Georreferenciamento de casos de leishmaniose canina na Regional

Nordeste, soropositivos pelos métodos de RIFI e ELISA realizados pelo
Laboratório do Centro de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de
Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

67
 Metodologia

FIGURA 11: Mapa das áreas verdes da Regional Nordeste, PRODABEL 2007.

68
 Metodologia

FIGURA 12: Mapa dos Cursos d’água a céu aberto da Regional Nordeste,
PRODABEL 1995.

69
 Metodologia

FIGURA 13: Mapa das Vilas e aglomerados urbanos da Regional Nordeste,

PRODABEL 2006

70
 Metodologia

FIGURA 14: Mapa hipsométrico da Regional Nordeste, PRODABEL 1989.

71
 Metodologia

4.9. Análise de Resultados

Os dados foram organizados em planilhas e as análises descritivas

foram registradas no programa Microsoft Excel (Office 2003).

Para as análises estatísticas, utilizou-se os programas Graph Pad Prisma

4.0 e GraphPad Instat. Como as variáveis não apresentaram distribuição
normal foram utilizados apenas testes não paramétricos tanto para a
comparação entre as localidades e lotes de coleta como para a avaliar a
correlação entre a curva sazonal de flebotomíneos e os parâmetros
climáticos. Os testes utilizados foram:

• Kruskal-Wallis seguido pelo teste Dunn para a comparação entre mais

de dois grupos,
• Mann-Whitney para a comparação entre dois grupos,
• Coeficiente de Pearson para avaliar a correlação entre os parâmetros
climáticos e a curva sazonal de flebotomíneos;
• Qui-quadrado para a comparação de proporções.

Para as análises das fichas de caracterização foram empregrados os

programas Epidata 3.1 e EpiInfo 3.4.1 e para as análises de
Geoprocessamento os programas: MapInfo 8.5, e ArcGis 9.2.

Os dados climatológicos avaliados neste estudo foram obtidos junto

ao Ministério da Agricultura e Abastecimento, Instituto Nacional de
Meteorológica, 5º Distrito de Meteorologia (DISNE) – Belo Horizonte, MG.

72
 Metodologia

4.10. Aprovação por Comitês de Ética

Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com

Seres Humanos da Universidade Federal de Minas Gerais, parecer nº: ETIC
154/07 e pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Prefeitura Municipal de Belo
Horizonte, parecer n º: 072/2007. Nos anexos 1 e 2.

4.11. Aproveitamento dos resultados pelo setor público – Prefeitura

Municipal de Belo Horizonte, Regional Nordeste.

Após a defesa da dissertação será entregue um relatório detalhado à

Secretaria da Regional Nordeste. Provavelmente, as informações deste
trabalho poderão subsidiar melhores estratégias de controle das
leishmanioses na Regional.

73
 Resultados
“E se o conhecer do mundo pelo homem é verdadeiro ou falso, disse
ele. Pouco importa sejam verdadeiros ou falsos as hipóteses, a fé, o
cálculo, desde que descrevam e reproduzam o que tem existência,
que eu não temesse as contradições...”
Ana Miranda
 Resultados

5. Resultados

5.1. Estudo da Fauna Flebotomínica

5.1.1. Coletas com armadilhas luminosas HP

Foram coletadas nove espécies de flebotomíneos, todas pertencentes ao

gênero Lutzomyia. Sendo elas: Lutzomyia cortellezzi (Brèthes, 1923), Lutzomyia
(Nyssomyia) intermedia (Lutz & Neiva, 1912), Lutzomyia lenti (Mangabeira, 1938),
Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva, 1912), Lutzomyia (Psathyromyia)
lutziana (Costa Lima, 1932), Lutzomyia (Psychodopygus) lloydii, (Antunes, 1937)
Lutzomyia sallesi (Galvão & Coutinho, 1939), Lutzomyia termithophila (Martins,
Falcão & Silva, 1964) e Lutzomyia (Nyssomyia) whitmani (Antunes & Coutinho,
1939) (Tabela 1).
As fêmeas das espécies L. sallesi e L. cortellezzi foram identificadas como
pertencentes ao complexo cortellezzi. Tal procedimento foi adotado, porque essas
são indistinguíveis ao estudo morfológico, a identificação é possível apenas em
associação com os machos (ANDRADE FILHO comunicação pessoal).
Como em nosso estudo foram coletados machos das duas espécies optamos
pela denominação acima referida.

TABELA 1
Total de espécies de flebotomíneos coletados na Regional
Nordeste, Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de
julho de 2006 a junho de 2007
Números absolutos
Espécies Coletadas Machos Fêmeas Total
Complexo cortellezzi 0 31 31
Lutzomyia cortellezzi 7 0 7
Lutzomyia intermedia 22 7 29
Lutzomyia lenti 5 1 6
Lutzomyia longipalpis 47 21 68
Luzomyia lloydii 1 0 1
Lutzomyia lutziana 2 2 4
Lutzomyia sallesi 2 0 2
Lutzomyia termitophila 0 3 3
Lutzomyia whitmani 294 181 475
Lutzomyia sp. 7 0 7
Total 387 246 633

74
 Resultados

A tabela 2 e o gráfico 1 mostram a composição percentual da fauna

flebotomínica da Regional Nordeste, durante o ano de estudo.

TABELA 2
Freqüência relativa das espécies de flebotomíneos coletadas na
Regional Nordeste Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no
período de julho de 2006 a junho de 2007.
Freqüência Relativa por espécie e
Espécies Coletadas sexo (%)
Machos Fêmeas Total
Lutzomyia whitmani 46,40 28,60 75,00
Lutzomyia longipalpis 7,40 3,30 10,70
Complexo cortellezzi 0,00 4,90 4,90
Lutzomyia intermedia 3,50 1,100 4,60
Lutzomyia lenti 0,80 0,15 0,95
Lutzomyia cortellezzi 1,10 0,00 1,10
Lutzomyia sp. 1,10 0,00 1,10
Lutzomyia lutziana 0,32 0,30 0,62
Lutzomyia termitophila 0,00 0,50 0,50
Lutzomyia sallesi 0,32 0,00 0,32
Luzomyia lloyd 0,16 0,00 0,16
Total 61,00 39,00 100,00

4%
5% Lutzomyia whitmani
5% Lutzomyia longipalpis

Complexo cortellezzi

11% Lutzomyia intermedia

Lutzomyia cortellezzi

Lutzomyia sp.

Lutzomyia lenti

Lutzomyia lutziana

Lutzomyia termitophila

75% Lutzomyia sallesi

Lutzomyia lloyd

GRÁFICO 1: Porcentagem de flebotomíneos, por espécie, coletados na Regional Nordeste do

Município de Belo Horizonte-MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho de
2007.

75
 Resultados

Conforme apresentado na tabela 2 e no gráfico 1, a espécie L. whitmani

correspondeu a 75% do total de espécimes coletados, L. longipalpis correspondeu a
11 %, as fêmeas do complexo cortelezzi a 4,9%, L. intermedia a 4,6% e as demais
espécies juntas a 4,5%.
Considerando-se a relação entre espécimes machos e fêmeas 61% dos
espécimes coletados eram machos e 39% fêmeas.
Conforme apresentado na tabela 3 e no gráfico 2, nenhuma das espécies foi
encontrada em todas as localidades de estudo. As espécies L. whitmani e L.
longipalpis foram encontradas em 10 das 11 localidades. As espécies L. lenti e L.
lloydii foram encontradas em apenas uma das localidades (Tabela 3, Gráfico 2).
As fazendas apresentaram maior riqueza específica do que as localidades de
área urbana. Na fazenda SL foram coletadas sete diferentes espécies e na CA nove
espécies, este foi o único local de estudo para o qual todas as espécies relatadas
foram coletadas.
As localidades urbanas apresentaram riqueza de no máximo quatro espécies
e L. longipalpis foi registrada em todas elas, pelo menos uma vez.

76
 Resultados

TABELA 3
Média de Flebotomíneos coletados, por localidade de estudo, na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte/MG, no período de julho de 2006 a junho
de 2007.
Localidades de Estudo
Espécies Coletadas
Fernão Dias Goiânia Maria Goreti Eymard Pirajá São Gabriel Faz. SL Faz. CA Nazaré Paulo IV Ribeiro de Abreu
Complexo cortellezzi 0 1 0 0 1 0 1 3 1 2 6
Lutzomyia cortellezzi 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1
Lutzomyia intermedia 1 0 0 0 0 0 1 4 1 0 2
Lutzomyia lenti 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0
Lutzomyia longipalpis 1 2 3 5 16 2 0 1 14 2 1
Luzomyia lloydii 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0
Lutzomyia lutziana 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0
Lutzomyia sallesi 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0
Lutzomyia termitophila 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0
Lutzomyia whitmani 3 1 1 1 0 1 44 48 2 1 1
Lutzomyia sp. 1 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0

77
 Resultados

44 48

1
0 0
3 0 0
1 1 0 0 2
1 0
0 0 0 1 0
0 2 0 Lutzomyia sp.
0 0 0 1
0 0 0 1 1
0 1 Lutzomyia whitmani
1 0 0 0 0
0 0 1 1 0 Lutzomyia termitophila
0 0
0 0 16 0 0 1 0 0
0 0 1 Lutzomyia sallesi
1 2 3 5 0 0 0 0
0 1 14 0 Lutzomyia lutziana
0 2 0 0
0 0 0 1 0 Luzomyia lloyd
1 0 0 2
0 0 0 1 1 Média de
0 1 Lutzomyia longipalpis
0 0 0 4 0 0
0 0 1 0 Lutzomyia lenti Flebotomíneos
0 0 1 1
1 1 1 0 2 capturados por espécie
0 0 1 Lutzomyia intermedia
1 0 1
0 1 3 1
Fernão Dias

6 Lutzomyia cortellezzi
Goiânia

1
Maria Goreti

2
Eymard

Pirajá

São Gabriel

Complexo cortellezzi
Faz. Souza-Lima

Faz. CICA

Nazaré

Paulo IV

Ribeiro de Abreu

Localidades de Estudo

GRÁFICO 2: Média de Flebotomíneos coletados, por localidade de estudo, na Regional Nordeste do

Município de Belo Horizonte/MG, no período de julho de 2006 a junho de 2007

78
 Resultados

A tabela 4 compara as localidades de estudo agrupadas por áreas

verdes e urbanas. Dos 633 espécimes coletados apenas 16% foram coletados
em ambiente urbano e 84% em ambiente rural.

TABELA 4
Comparação dos números de flebotomíneos por espécie, coletados nos ambientes
urbanos e áreas verdes da Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte, no
período de julho de 2006 a junho de 2007.
Ambiente de Estudo
Espécies Coletadas Urbano Área Verde
Nº absoluto Nº relativo (%) Nº absoluto Nº relativo(%)
Complexo cortellezzi 13 12,75 18 3,39
Lutzomyia cortellezzi 4 3,92 3 0,56
Lutzomyia intermedia 4 3,92 25 4,71
Lutzomyia lenti 0 0 6 1,13
Lutzomyia longipalpis 64 62,75 4 0,75
Lutzomyia lloydii 0 0 1 0,19
Lutzomyia lutziana 1 0,98 3 0,56
Lutzomyia sallesi 0 0 2 0,38
Lutzomyia termitophila 0 0 3 0,56
Lutzomyia whitmani 15 14,71 460 86,63
Lutzomyia sp. 1 0,98 6 1,13
Total 102 16 531 84

Com relação à espécie L. whitmani 75% dos espécimes (460) foram

coletados em áreas verdes e 15% (3) em ambiente urbano. Para L. longipalpis
ocorreu o contrário, com 94 % (64) dos espécimes coletados em ambiente
urbano e apenas 6% (4) dos espécimes coletados em áreas verdes. Esta
diferença nas proporções de ocorrências para os ambientes de áreas verdes e
urbanas das espécies citadas, é estatisticamente significativa (p-valor <0,0001,
gráfico 3).
A espécie L. intermedia apresentou padrão semelhante ao de L.
whitmani com 14% (4) dos espécimes coletados em ambiente urbano e 86%
(25) em áreas verdes.
As espécies L. lenti, L. lloydii, L.sallesi, e L. termitophila foram coletadas
apenas em áreas verdes e as demais em ambos os ambientes.

79
 Resultados

Porcentagem de Flebotomíneos
100%
90% Urbana
80%
70% Rural

Coletados
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
L. longipalpis L. whitmani
Espécies de Estudo

GRÁFICO 3: Proporções de L. longipalpis e L.

whitmani coletados nos ambientes
rural e urbano da Regional Nordeste
do Município de Belo Horizonte. No
Período de julho de 2006 a junho de
2007 (Qui-quadrado - p<0,0001).
A diferença de ocorrência de flebotomíneos ao longo do período de
estudo nestes dois ambientes também foi estatisticamente significativa (p-
valor= 0,0073, tabela 5).

TABELA 5
Ocorrência de flebotomíneos, por número de
espécimes, coletadas mensalmente por ambiente
de estudo, na Regional Nordeste do Município de
Belo Horizonte - MG/Brasil, no período de julho a
junho de 2007.
(Mann-Whitney - p-valor: 0,0073)

Ocorrência de Flebotomíneos por

Meses de
Ambientes de Estudo
Estudo
Urbano Área Verde
Julho 6 128
Agosto 11 131
Setembro 9 77
Outubro 6 14
Novembro 17 20
Dezembro 15 35
Janeiro 11 9
Fevereiro 5 4
Março 8 23
Abril 7 6
Maio 3 33
Junho 4 51
Totais 102 531

80
 Resultados

O gráfico 4 apresenta a percentagem de flebotomíneos capturados

mensalmente na regional Nordeste.
Porcentagem de Flebotomíneos

25%

20%
capturados

15%

10%

5%

0%
jul/06 ago/06 set/06 out/06 nov/06 dez/06 jan/07 fev/07 mar/07 abr/07 mai/07 jun/07

Meses
Lutzomyia whitmani Lutzomyia longipalpis Lutzomyia intermedia

Demais espécies Total

GRÁFICO 4: Porcentagem de flebotomíneos coletadas mensalmente na Regional Nordeste do Município

de Belo Horizonte - MG/Brasil, no período de julho de 2006 a dezembro de 2007.

Considerando-se a sazonalidade dos flebotomíneos, observamos três

picos de captura que ocorreram nos meses de dezembro, março e junho e
julho. O padrão da curva sazonal é delineado, majoritariamente, pela espécie L.
whitimani.
Analisando-se o padrão apresentado pelas espécies L. intermedia e L.
longipalpis, vemos que a primeira registrou um pico de ocorrência no mês de
dezembro e a segunda apresentou picos nos meses de novembro e janeiro.
As espécies L. whitmani e L. longipalpis foram as únicas coletadas em
todos os meses de estudo, as demais não foram coletadas em pelo menos um
dos meses. As espécies L. lenti e L. lloydii foram coletadas apenas no mês de
dezembro (Tabela 6).
.

81
 Resultados

TABELA 6
Flebotomíneos capturados mensalmente por espécie, na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte - MG/Brasil, no período de julho de 2006 a junho
de 2007.
Total de espécies capturadas por mês e porcentagem com relação ao total coletado (N/%)
Espécies Coletadas Julho Agosto Setembro Outubro Novembro Dezembro Janeiro Fevereiro Março Abril Maio Junho Total
Complexo cortellezzi 0 (0) 1 (0,16) 1 (0,16) 3 (0,5) 8 (1,3) 7 (1,1) 4 (0,6) 0 (0) 1 (0,16) 3 (0,5) 2 (0,3) 1 (0,16) 31 (4,9)
Lutzomyia cortellezzi 0 (0) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 2 (0,31) 4 (0,6) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 7 (1,07)
Lutzomyia intermedia 3 (0,5) 6 (0,95) 2 (0,32) 0 (0) 3 (0,5) 9 (1,4) 0 (0,16) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 0 (0) 5 (0,8) 29 (4,57)
Lutzomyia lenti 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 6 (1) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 6 (1,0)
Lutzomyia longipalpis 5 (0,78) 8 (1,26) 6 (0,95) 3 (0,5) 11 (1,7) 5 (0,8) 9 (1,4) 5 (0,8) 7 (1,1) 4 (0,6) 2 (0,3) 3 (0,5) 68 (10,63)
Lutzomyia lloydii 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (0,16)
Lutzomyia lutziana 2 (0,32) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 0 (0) 4 (0,64)
Lutzomyia sallesi 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 2 (0,32)
Lutzomyia termitophila 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (1,6) 0 (0) 0 (0) 1 (0,16) 0 (0) 1 (0,16) 3 (0,5)
Lutzomyia whitmani 124 (19,5) 125 (19,7) 76 (12) 7 (1,1) 12 (1,9) 18 (2,8) 6 (1) 3 (0,5) 23 (3,6) 4 (0,6) 32 (5,0) 45 (7,0) 475 (75)
Lutzomyia sp. 0 (0) 0 (0) 0 (0) 7 (1,1) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 7 (1,1)
Total 134 (21,1) 141 (22,23) 86 (13,58) 20 (3,14) 37 (5,84) 50 (7,86) 20 (3,16) 9 (1,43) 32 (5,02) 13 (1,99) 36 (5,6) 55 (8,59) 633 (100,0)

82
 Resultados

O gráficos 5 e 6 apresentam a variação mensal das espécies de

flebotomíneos em comparação aos parâmetros climáticos: temperatura média,
pluviosidade total e a média da umidade relativa do ar.
As temperaturas médias durante o período de estudo variaram entre
19,3ºC e 24,6ºC. Este foi o único parâmetro que apresentou correlação
estaticamente significativa com a variação mensal de espécimes de
flebotomíneos capturados (Quadro 6).
Os valores médios de precipitação variaram entre 0,0mm3 e 350,9mm3 e
a umidade relativa do ar variou entre 53% e 74%. Ao nível de significância de
5% estes valores não apresentaram correlação significativa com o número de
flebotomíneos coletados (Quadro 6).

QUADRO 6

Resultado do teste de correlação entre o total de flebotomíneos coletados e as variáveis

climáticas, na Regional Nordeste do município de Belo Horizonte – MG/Brasil. No período de
julho de 2006 a junho de 2007

Temperatura Pluviosidade Umidade relativa do ar

Total de Flebotomíneos
Coletados - 0,65 - 0,45 - 0,49 Coeficiente de Pearson
0,02 0,15 0,11 Valor de P

Observa-se que a ocorrência de maior número de flebotomíneos

coincidiu com os períodos antes e após as chuvas, com umidade relativa do ar
mais baixa e as temperaturas mais amenas (variando entre 19,3°C a 20,5°C).
Estes períodos ocorreram entre julho e setembro de 2006 e maio e junho de
2007.
No período de outubro de 2006 a maio de 2007, ocorreram intensas
chuvas no Município de Belo Horizonte, com médias pluviométricas mensais
que variaram entre (98,0mm3 e 350,9mm3) e, apesar de discretos picos de
ocorrência de flebotomíneos (outubro e novembro de 2006 e março de 2007), a
média de coleta neste período foi baixa. A variação da umidade relativa do ar
acompanha a da pluviosidade e neste período esteve entre 57% e 78%.

83
 Resultados

25% 30

25
Porcentagem de Flebotomíneos Coletados

20%

Temperatura Média Mensal

20
15%

15

10%
10

5%
5

0% 0
jul/06 ago/06 set/06 out/06 nov/06 dez/06 jan/07 fev/07 mar/07 abr/07 mai/07 jun/07
Meses

Total de Flebotomíneos Capturados Lutzomyia whitmani Temperatua média

GRÁFICO 5: Média de Flebotomíneos capturados mensalmente na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte – MG/Basil, em comparação
com os parâmetros climático temperatura média, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

84
 Resultados

25% 400

350
Porcentagem de Flebotomíneos Coletados

20%
300

Referência Climática
250
15%

200

10%
150

100
5%
50

0% 0
jul/06 ago/06 set/06 out/06 nov/06 dez/06 jan/07 fev/07 mar/07 abr/07 mai/07 jun/07
Meses

Total de Flebotomíneos Capturados Lutzomyia whitmani Umidade relativa média Precipitação total
GRÁFICO 6: Média de Flebotomíneos capturados mensalmente na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte – MG/Basil, em
comparação com os parâmetros climáticos: pluviosidade total e da umidade relativa do ar média, no período de julho de
2006 a junho de 2007.

85
 Resultados

5.1.2. Capturas com armadilha de Shannon e Capturador de Castro

Apenas as espécies L. longipalpis e L. whitmani foram coletadas com a

armadilha luminosa de Shannon. O resultado total destas capturas encontra-se
na Tabela 7.
A coleta da primavera (Dezembro 2006) foi responsável pela quase
totalidade dos exemplares coletados, 19 espécimes de L. longipalpis e dois de L.
whitmani. Nas demais coletas (Abril 2007, Maio 2007, Junho 2007) apenas oito
espécimes destas mesmas espécies foram coletados.

TABELA 7
Resultados das coletas com armadilha luminosa de Shannon, na Regional Nordeste do
Município de Belo Horizonte/MG, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
Número de espécimes capturados por sexo
Espécies Coletadas
Machos Fêmeas Totais
Lutzomyia longipalpis 16 3 19
Lutzomyia whitmani 3 5 8
Totais 19 8 27

86
 Resultados

5.2.1. Estudos da infecção natural

Das 246 fêmeas coletadas, 245 foram dissecadas, apenas uma foi
preparada e montada, conforme protocolo descrito para os espécimes machos,
por falha no momento da triagem. Das 245 fêmeas dissecadas 19 apresentam
sangue no intestino, destas três apresentaram infecção natural por Leishmania.
Considerando as análises ao microscópico óptico, apenas três espécimes
apresentaram formas flageladas no intestino. Nos três achados, os flagelados
apresentaram-se livres e em movimento na porção mediana do intestino
(Figuras: 15 e 16). As fêmeas pertenciam à espécie L. longipalpis e foram
provenientes do mesmo ponto de coleta no bairro Nazaré (Quadro 8). Não foi
possível o isolamento dos flagelados em meio de cultura, devido à contaminação
por fungos filamentosos nas três amostras.

FIGURAS 15 E 16: Formas flageladas visualizadas em intestino de fêmeas L.

longipalpis. Aumento 400X. Coloração de Giemsa.

No tocante às análises utilizando técnicas de biologia molecular, os 246

espécimes fêmeas foram agrupados em 120 amostras como observado no
Quadro 7.

87
 Resultados

QUADRO 7
Quantidade de amostras de flebotomíneos
analisadas, de acordo com o número de exemplares
presentes

Quantidade de
Tipo de amostra amostras
Um espécime 85
Grupo de 2 espécimes 13
Grupo de 3 espécimes 4
Grupo de 4 espécimes 3
Grupo de 5 espécimes 3
Grupo de 6 espécimes 4
Grupo de 9 espécimes 2
Grupo de 10 espécimes 6
Total de amostras 120

Considerando os resultados obtidos na reação de PCR para o fragmento

do gene de cacofonia, podemos afirmar que todas as extrações de DNA foram
realizadas com sucesso, dado que para todas as amostras houve amplificação
do fragmento esperado de 200 pb. A figura 16 ilustra um exemplo de algumas
amostras.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Amostras
PM C+ C-

120 pb

200 pb

FIGURA 17: Gel de agarose 10%, corado pelo brometo de

etídio, mostrando os produtos da reação de
PCR com iniciadores para o fragmento do gene
da cacofonia do gênero Lutzomyia. Canaletas:
1) PM: Padrão de massa molecular 120 pb, 2)
C+: Controle positivo (DNA extraído de L.
longipalpis de colônia), 3 a 12) amostras de
DNA de Lutzomyia sp.estudo, 13) Controle
negativo (todos os componentes da reação sem
o acréscimo de DNA).

Considerando a positividade das fêmeas de flebotomíneos para a

presença de Leishmania sp., 15 amostras de DNA apresentaram positividade
para Leishmania, utilizando os iniciadores descritos por DEGRAVE (1994),
88
 Resultados

para a região conservada do minicírculo do K-DNA do gênero Leishmania.

A figura 18 ilustra alguns dos resultados obtidos.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

120 pb

FIGURA 18: Gel de poliacrilamida 6%, corado pela prata, mostrando os produtos
da PCR com os iniciadores para a região conservada do minicírculo
do K-DNA de Leishmania sp. em amostras de DNA extraídas de
fêmeas de flebotomíneos. Canaletas 1 e 18: Padrão de massa
molecular 100 pb, 2: Controle positivo (DNA de promastigotas de L.
chagasi (MOHOM/BR/1967/BH46); 3: Controle negativo sem DNA.
Canaletas 4 a 17: amostras referentes a coletas do mês de julho de
2007.

Das 15 amostras positivas para o gênero Leishmania, 13 puderam ser

caracterizadas ao nível específico pelo corte com enzima de restrição.
Em 13 das 15 amostras positivas para Leishmania sp., realizou-se a
identificação específica dos parasitos, utilizando o corte com a enzima de
restrição HaeIII, que permitiu diferenciar L. chagasi e L. braziliensis. Em duas
amostras, este resultado não foi alcançado. Provavelmente, a pequena
quantidade de DNA presente nestas amostras, e conseqüentemente a pequena
quantidade de produto amplificado obtido, pode ter inviabilizado a técnica de
PCR-RFLP, ou as espécies presentes em tais flebotomíneos não puderam ser
identificadas pelas técnicas empregadas (Quadro 8). Alguns resultados
encontram-se ilustrados na figura 19.
A positividade das amostras contendo L. chagasi foi confirmada através
da técnica de hibridização utilizando sondas radioativas de minicírculo total para
o Complexo L. donovani. Conforme mostrado na Figura 20.
A amostra 70 apresentou resultado conflitante uma vez que a digestão
pela Hae III não apresentou perfil claro para realizar a caracterização, mas a
hibridização foi positiva para L.chagasi.

89
 Resultados

FIGURA 19: Gel de poliacrilamida 10%, corado pela FIGURA 20: Autoradiografias de produto de PCR
prata, mostrando os produtos da reação hibridizado com sonda específica de kDNA
de PCR-RFLP. Canaleta 1: Padrão de de L. chagasi. Amostras:
massa molecular 50pb 2: cepa PH8 de L. 1,6,17,19,22,47,48,51,52,70,62,64,84,79,8
amazonensis, 3: cepa M2903 de L. 2,88 . Cepas controles: PH8 de L.
braziliensis, 4: cepa PP75 de L. chagasi. amazonensis, M2903 de L. braziliensis,
Canaletas 5 a 9 amostras: amostras P75 de L. chagasi.
positivas para Leishmania chagasi.

O quadro 8 apresenta os resultados para as amostras positivas, indicando

o local e a data de captura dos insetos.

90
 Resultados

QUADRO 8

Amostras de flebotomíneos positivas para infecção por Leishmania sp, segundo local e data de captura,
tipo de amostra e técnicas utilizadas para estudo da infecção natural
Nº da Data da Exemplar Flagelados no
Local Espécie PCR-RFLP Hibridização
amostras Coleta es Intestino

1 10/7/2206 Faz. CICA L.whitmani 3 L. chagasi L. chagasi

Bairro
4 10/7/2206 L.whitmani 1 L. chagasi L. chagasi
Nazaré
6 24/7/2006 Faz. CICA L.whitmani 1 L. chagasi L. chagasi
17 10/8/2006 Faz. CICA L.whitmani 2 L. chagasi L. chagasi
Bairro
19 10/8/2006
Nazaré
L.longipalpis 1 L. chagasi L. chagasi +
22 10/8/2006 Faz. CICA L.whitmani 1 L. chagasi L. chagasi
Não pertence
Faz. Souza Complexo
47 23/10/2006 1 Leishmania sp. ao complexo
Lima cortellezzi
L. donovani
Faz. Souza Complexo
51 6/11/2006 2 L.braziliensis
Lima cortellezzi
Bairro
52 6/11/2006
Nazaré
L.longipalpis 1 L. chagasi L. chagasi +
Shannon Bairro
62
(6/12/2006) Nazaré
L.longipalpis 1 L. chagasi L. chagasi +
Bairro
70 18/12/2006 L.intermedia 1 Leishmania sp. ?
Nazaré
Faz. Souza
79 22/1/2007 L.termitophila 1 L. chagasi L. chagasi
Lima
Bairro
82 22/1/2007 L.longipalpis 1 L. chagasi L. chagasi
Nazaré
Faz. Souza
84 26/2/2007 L.whitmani 1 L. chagasi L. chagasi
Lima
Shannon Faz. Souza
88 L.whitmani 1 L. chagasi L. chagasi
(10/3/2007) Lima

A ocorrência de flebotomíneos infectados concentrou-se em três locais de

coleta: o Bairro Nazaré que apresentou três amostras de L. longipalpis e uma de
L. whitmani positivas para L. chagasi, e uma amostra de L. intermedia positiva
para Leishmania sp.. A Fazenda CA apresentou quatro amostras de L. whitmani
positivas para L. chagasi. A Fazenda SL apresentou duas amostras de L.
whitmani e uma de L. termitophila positivas para L. chagasi, e duas amostras do
complexo cortellezzi, uma positiva para L. braziliensis e outra positiva para
Leishmania sp.

91
 Resultados

5.2.1. Inferência das taxas de infecção natural para Leishmania nos

flebotomíneos coletados

A maior parte das infecções naturais encontradas foi por L. chagasi. Para
L. longipalpis, a principal vetora desta espécie, a taxa de positividade foi de 19%.
A infecção por L. chagasi também foi encontrada em espécies de flebotomíneos
que não são consideradas vetoras da mesma: L. whitmani apresentou de 3,8%
de positividade e L. termitophila 33,3%. Para essa espécie de flebotomíneo
foram coletados apenas três espécimes sendo um deles positivo para L.
chagasi.
Para o Complexo cortellezzi as taxas foram de 3,2% para L. braziliensis e
3,2% Leishmania sp. A espécie L. intermedia foi capturada em pequeno número,
sete, apresentado 14,3% de positividade para Leishmania sp. O quadro 9
apresenta estes resultados em detalhes.

QUADRO 9
Taxas de Positividade para Leishmania por espécie de flebotomíneo e tipo de amostra.
Número de Número de
Espécie de Taxa de Infecção
Espécies espécimes espécimes/grupos
Leishmania Natural
coletados infectados
L. whitmani 181 7 L. chagasi 3,8%
L.longipalpis 21 4 L. chagasi 19%
Complexo cortellezzi 31 1 L. braziliensis 3,2%
Complexo cortellezzi 31 1 Leishmania sp. 3,2%
L.intermedia 7 1 Leishmania sp. 14,3%
L.termitophila 3 1 L. chagasi 33,3%

92
 Resultados

5.3. Caracterização ambiental dos locais de estudo

Dos 16 locais relatados para a pesquisa entomológica, 13 participaram do

estudo de caracterização ambiental de forma completa, em dois, os moradores
se recusaram a participar e em um os moradores não permitiram que a
caracterização fotográfica fosse realizada. Seguindo o protocolo ético da
pesquisa tais atitudes foram aceitas naturalmente.
Desta forma foram caracterizados 14 lotes, 25 residências e uma fazenda,
sendo esta o único local representante da área verde.
As características dos locais encontram-se resumidas nos quadros 10,11
e 12. Apenas quatro lotes (28,6%) apresentaram residências com paredes sem
reboco. A cobertura e piso das casas foram, em geral, adequados. Em apenas
três lotes (21,4%), foram observadas casas com cobertura de telha e sem laje. O
piso das casas era de cerâmica ou misto de cerâmica ou outro material similar, e
cimento queimado. Não foram observadas casas com piso de terra batida.
A presença de umidade no interior das casas foi avaliada pela existência
de mofo e marcas de infiltração. A presença de casas com mofo foi observada
em cinco lotes (35,7%), e a presença de infiltrações, em quatro (28,6%), sendo
que, em três dos lotes estudados foram encontradas ambas as características.
Quanto às rachaduras, metade dos lotes estudados apresentou paredes
com essa característica. A maioria dos lotes (64,3%) analisados possuía casas
com paredes sem presença de buracos. Quatro lotes apresentaram casas com
rachaduras e buracos.
Apenas um lote não possuía rede de esgoto, sendo este a céu aberto.
Dentre os que possuíam rede de esgoto, 72,7% eram ligados à rede da
prefeitura. O restante era ligado à fossa ou ligado diretamente ao córrego. Todos
os lotes apresentaram casas com banheiro completo (vaso, chuveiro e lavabo).

93
 Resultados

QUADRO 10
Distribuição de freqüências das características das residências presentes nos lotes
trabalhados na Regional Nordeste de Belo Horizonte/MG, no período de julho de 2006 a junho
de 2007
N°° de lotes Porcentagem de lotes que
Característica das casas
(n=14) apresentou a característica
Tipo de parede
Tijolo sem reboco 4 28,6%
Tijolo com reboco 10 71,4%
Tipo de teto
Laje 5 35,7%
Telha 3 21,4%
Laje e telha 6 42,9%
Tipo de piso
Cerâmica, ardósia, porcelanato, ladrilho 3 20,0%
Cimento queimado 3 24,0%
Misto 8 56,0%
Presença de mofo
Sim 5 35,7%
Não 9 64,3%
Presença de infiltração
Sim 4 28,6%
Não 10 71,4%
Presença de rachaduras
Sim 7 50,0%
Não 7 50,0%
Presença de buracos
Sim 5 35,7%
Não 9 64,3%
Rede de esgoto
Sim 13 92,9%
Não (esgoto a céu aberto) 1 7,1%
Tipo de esgoto (1)
Ligado à rede da prefeitura 8 72,7%
Ligado à fossa 2 18,2%
Ligado ao córrego 1 9,1%
Presença de banheiro nas casas
Sim 14 100,00%
Não 0 100,00%
Tipo de Banheiro das casas
Completo 14 100,00%
Incompleto 0 100,00%

Considerando-se os peridomicílios dos lotes estudados, constataram-se

características predominantes tais como: presença de árvores em 12 (85,7%),
plantas em vasos em 11 (78,6%), madeira empilhada em 13 (92,9%), presença
de montes de folhas em oito (57,1%). É interessante apontar que tais
características podem criar ecótopos favoráveis ao desenvolvimento de diversos
animais, entre eles os insetos vetores.
Outras características tais como criação de galinhas (5 - 35,7%), cultivo
de hortas (5 - 35,7%), utilização de esterco (5 - 35,7%), acúmulo de entulho (12 -
85,7%) e lixo não acondicionado adequadamente (3 - 21,4%) apesar de serem
menos freqüentes são importantes de serem indicadas.

94
 Resultados

QUADRO 11
Distribuição de freqüências das características dos peridomicílios dos lotes trabalhados na
Regional Nordeste de Belo Horizonte/MG, no período de julho de 2006 a junho de 2007
Características do peridomicílio dos N°° de lotes que apresentaram a % de lotes que apresentaram a
característica característica
lotes estudados
Presença de árvores
Sim 12 85,7%
Não 2 14,3%
Presença de plantas em vasos
Sim 11 78,6%
Não 3 21,4%
Presença de Horta
Sim 5 35,7%
Não 9 64,3%
Presença de madeira empilhada
Sim 13 92,9%
Não 1 7,1%
Presença de entulhos
Sim 12 85,7%
Não 2 14,3%
Presença de lixo doméstico não
acondicionado
Sim 3 21,4%
Não 11 78,6%
Presença de montes de folhas
Sim 8 57,1%
Não 6 42,9%
Presença de esterco
Sim 5 35,7%
Não 9 64,3%
Presença de esgoto a céu aberto
Sim 1 7,1%
Não 13 92,9%
Presença de águas pluviais
Sim 3 21,4%
Não 11 78,6%
Presença de gaiolas de passarinho
Sim 6 42,9%
Não 8 57,1%
Destino do lixo
Recolhido pelo serviço municipal 13 92,9%
Colocam na caçamba 1 7,1%
Localização da casa
Urbana 13 92,90%
Área Verde 1 7,10%

Quanto à presença de animais de criação, os cães foram os animais

predominantes nos locais de estudo, com uma média de dois por lote, sendo que
em 11 (78,57%) dos 14 locais estudados os mesmos estavam presentes.

QUADRO 12
Animais domésticos presentes nos lotes estudados na Regional Nordeste
do Município de Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de
2007
Animais de N°° de lotes que Porcentagem de lotes que Quantidade
apresentam a apresentaram a média de
criação/ característica animais por lote
característica
estimação
Cão 11 78,57% 2,0
Gato 1 7,14% 0,21
Pássaros 6 42,85% 1,92
Galinhas 6 42,85% 10,0

O gráfico 7 mostra as características presentes nos quintais dos lotes que

95
 Resultados

poderiam favorecer a ocorrência de flebotomíneos.

16

Número de ocorrência - lotes

14

12

10

0
Árvores Plantas em Horta Madeira Entulhos Montes de Presença de Criação de Criação de Criação de Criação de
vasos empilhada folhas águas cães pássaros galinhas gatos
pluviais

Características dos quintais

GRÁFICO 7: Características presentes nos quintais dos lotes de estudo que possivelmente favorecem a
ocorrência de flebotomíneos.

5.3.1. Caracterização fotográfica

A caracterização fotográfica revelou-se um método eficiente para uma

análise pormenorizada e individualizada de cada local, e esta foi enriquecida
pela análise do entorno das residências via imagens de satélite do GoogleMaps.
Este pode ser considerado um método de estudo caso a caso para locais
de ocorrência de leishmaniose visceral.
Foram caracterizados fotograficamente os peridomicílios de 14 locais de
estudo. Os lotes 9, 12 e 14 não participaram desta etapa da pesquisa.
Os lotes que apresentaram condições que podem propiciar o
desenvolvimento e permanência de flebotomíneos foram: 1, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 11,
13,15 e 16. As principais características encontradas foram: matéria orgânica em
decomposição espalhada pelo quintal, locais sombreados e úmidos, com a
presença de espécies vegetais, tanto arbóreas como arbustivas, criação de cães
e de galinhas.
Os lotes 2 e 6 não apresentaram condições que poderiam favorecer o
desenvolvimento dos flebotomíneos; não havia nenhuma das condições acima
citadas. O resumo dos resultados da caracterização fotográfica estão expostos
nas figuras 20 a 30.

96
 Resultados

A B

C D

FIGURA 21: Lote1, A: Imediações do lote. B: Aspecto de uma das

casas, notar parede sem reboco. C: Cães criados no
lote. D: Aspecto geral do quintal, notar locais
sombreados, restos vegetais (galhos e folhas) e
entulho (p.ex: pneu) espalhados.

A B

C D

FIGURA 22: Lote 2, A: Vista geral do quintal, notar grande área

cimentada. B: Vista geral de duas das casas. C: Detalhe
do quintal, notar armazenamento de lenha. D: Detalhe
do quintal, notar acúmulo de entulhos.

97
 Resultados

A B

C D

FIGURA 23: Lote 3, A: Localização da residência, notar mato alto e

arborização. B: Aspecto geral do quintal, notar grande
acúmulo de entulhos. C: Área em frente a casa, notar lixo
descartado inadequadamente. D: Criação de cães,
cadela com filhotes.

B
C

FIGURA 24: Lote 4, A: Detalhe do quintal, notar: acúmulo de entulhos. B:

Aspecto geral do quintal, notar locais sombreados, folhas
no chão e acúmulo de entulhos. C: Detalhe do quintal, notar
acúmulo de entulhos.

98
 Resultados

A B

C D

FIGURA 25: Lote 5, A: Aspecto geral do quintal, com casa ao fundo. Notar
presença de árvores e locais sombreados. B: Grande
quantidade de vasos de plantas. C: Grande variedade e
quantidade de materiais acumulados. D: Criação de galinhas.

A B

C D

FIGURA 26: Lote 6, A: Imediações do lote. B: Parte interna, notar área

cimentada. C: Parte interna, notar pequeno canteiro. D: Parte
interna, notar área cimentada.
99
 Resultados

A B

C D

FIGURA 27: Lote 7, A: Árvore de grande porte, que propicia sombra

em parte do quintal e criação de pássaros. B: Cão
criado no lote. C: Pequeno canteiro. D: Galinheiro,
notar limpeza do mesmo.

A B

C D

FIGURA 28: Lote 8, A: Lote e imediações B: Aspecto da residência, notar

estrutura da mesma. C e D: Aspecto geral do quintal, notar variedade
de espécies vegetais, materiais acumulados e locais sombreados.
100
 Resultados

A B

C D

FIGURA 29: Lote 9, A: Aspecto externo do lote, notar casa ao fundo,

árvores e locais sombreados. B: Horta, notar lenha
empilhada. C: Variedade de materiais acumulados. D: Cão
criado no lote.

C D

A B

C D

FIGURA 30: Fazenda SL (lote 11), A: Um dos currais e cães. B: Criação de

pavões e galinhas. C: Área de mata. D: Rio das Velhas.

101
 Resultados

A B

C D

FIGURA 31: Lote 13, A: Aspecto externo. B: Cão, notar piso de

ardósia. C: Madeira empilhada. D: Vasos de plantas.

A B

C D

FIGURA 32: Lote 15, A: Cão criado no lote. B: Pequena mata no entorno. C:
Plantas em local sombreado. D: Aspecto geral do quintal, notar
grande acúmulo de materiais.

102
 Resultados

A
B

C D

FIGURA 33: Lote 16, A: Aspecto geral do lote. B: Criação de galinhas e

outras aves. C: Pinguela sobre o córrego (esgoto a céu
aberto). D: Cão.

Os resultados da análise fotográfica, bem como os da análise do entorno

via imagens de satélite estão sintetizados no quadro 12.

103
 Resultados

QUADO 13
Características dos lotes do estudo e do entorno analisado via imagens de satélite
Condições Análise de imagens via satélite –
Condições propícias
Número do propícias a GoogleMaps pontos e áreas verdes
Higiene dos quintais ao desenvolvimento
lote outros problemas (retângulo de 110.000 m2 com o ponto de
de flebotomíneos
urbanos estudo ao centro)
1 Inadequado Sim Sim Lotes arborizados no entorno.
2 Regular Não Sim Lotes arborizados no entorno.
3 Inadequado Sim Sim Área verde no entorno.
4 Inadequado Sim Sim Lotes arborizados no entorno.
5 Inadequado Sim Sim Lotes arborizados no entorno.
6 Adequado Não Não Lotes arborizados no entorno.
7 Adequado Sim Não Lotes arborizados no entorno.
Lotes arborizados no entorno e pequena
8 Regular Sim Não
área verde.
Não foi realizada pesquisa Lotes arborizados no entorno e pequena
9
de caracterização área verde.
10 Regular Sim Sim Lotes arborizados no entorno.
Entorno de áreas verdes, com áreas
11 Regular Sim -
descampadas próximas.
Não foi realizada pesquisa Entorno de áreas verdes, com áreas
12 - -
de caracterização descampadas próximas.
Apenas o preenchimento
13 Sim - Lotes arborizados no entorno.
da ficha foi realizado
Lotes arborizados no entorno e extensa
14 Adequado Não Sim
área verde.
Lotes arborizados no entorno e extensa
15 Inadequado Sim Sim
área verde.
16 Inadequado Sim Sim Lotes arborizados no entorno.

Através do quadro 12, fica claro que na maioria dos lotes estudados
registraram-se condições de cuidado sanitário inadequadas com os quintais.
Apenas três lotes estavam em condições sanitárias adequadas, ou seja,
não foram identificadas situações que favorecem a ocorrência de flebotomíneos,
ou outros problemas urbanos relacionados à saúde humana ou ambiental. Para
todos os lotes foram averiguados espaços arborizados ou áreas verdes no
entorno. Tal fato explica a ocorrência destes insetos mesmo em locais onde
aparentemente não há condições para seu desenvolvimento.
Considerando-se a ocorrência de flebotomíneos durante o período de
estudo, foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os ambientes
de áreas verdes e o urbano, conforme já apresentado (tabela 5). Considerando-
se os lotes da área urbana, apenas para o lote 14 verificou-se diferença
estatisticamente significativa em relação a alguns dos demais (tabela 8).
Infelizmente os proprietários da fazenda CA não quiseram participar desta etapa
da pesquisa e os moradores do lote 14 não autorizaram a caracterização

104
 Resultados

fotográfica. Assim as considerações sobre o ambiente de áreas levaram em

conta apenas a fazenda SL e as considerações sobre o lote 14 foram baseadas
apenas nas informações das fichas de caracterização.

TABELA 8
Ocorrência mensal de flebotomíneos, considerando o total de espécimes, em lotes de área urbana da
regional Nordeste do município de Belo Horizonte, no período de junho de 2006 a julho de 2007
Total de espécimes de flebotomíneos capturados, mensalmente, por lotes na área urbana
Meses de
estudo Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote
Lote 1* Lote 4* Lote 5* Lote 6 Lote 7 Lote 14** Lote 15
2* 3* 8* 9* 10* 13* 16*
Julho 0 0 0 0 0 0 2 0 0 1 0 3 0 0
Agosto 6 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 3 0 0
Setembro 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 4 2 0 0
Outubro 1 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 3 0 0
Novembro 0 0 2 0 0 0 7 0 0 0 0 3 1 4
Dezembro 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 6 2 5
Janeiro 0 0 0 1 0 1 3 1 1 0 1 2 1 0
Fevereiro 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 2 0 0
Março 0 0 0 1 0 1 1 0 0 1 0 3 1 0
Abril 1 1 0 0 0 1 2 0 0 0 0 1 0 1
Maio 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1

Junho 0 0 0 0 2 0 1 0 0 0 0 1 0 0
**apresentou diferença estatisticamente significativa em relação aos lotes marcados com*
(p-valor<0,05).

105
 Resultados

5.3.2. Análise por geoprocessamento

Todos os resultados apresentados referem-se ao período entre julho de

2006 e junho de 2007. As médias de ocorrência dos eventos foram calculadas
com base nos registros deste período.
As assinaturas realizadas entre os mapas temáticos da Regional e os
mapas de ocorrência de casos LV humana, leishmaniose canina e vetores de
leishmanioses são mostrados nos gráficos a seguir.

Leishmaniose visceral humana

Porcentagem de casos de LV
Porcentagem de Casos de LV

60% 120%
50% 96% 97%
50% 100% 84%
40% 80%
30%
30% 60%

20% 40%
10% 10% 16%
10% 20% 4% 3%
0% 0%
0%
0%
A/AI FA/FAI A/AI FA/FAI A/AI FA/FAI
Abaixo 701 a 751 a 801 a 851 a Acima
de 700 750 800 850 900 de 901 Vegetação Vilas e Cursos d'água a
Faixas Hipsométricas (metros) aglomerados céu aberto

GRÁFICO 8: Ocorrência de Casos de LV por faixa GRÁFICO 9: Ocorrência de Casos de LVA considerando
hipsométrica na Regional Nordeste do os parâmetros: vegetação, vilas e
Município de Belo Horizonte, no período aglomerados e cursos d’água a céu
de julho de 2006 a junho de 2007 aberto, na Regional Nordeste do Município
de Belo Horizonte, no período de julho de
2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de
influência

Conforme mostrado no gráfico 8, a maioria dos casos de LV no período de

estudo, ocorreram entre as altitudes de 751 metros a 850 metros. Não houve
registro de casos em altitudes abaixo de 700 metros ou acima de 901 metros.
A ocorrência de casos parece não ser influenciada pelos parâmetros
vegetação, vilas e aglomerados e cursos d’água a céu aberto (Gráfico 9).
Apenas 16% dos casos ocorreram em áreas de vegetação, 4% em áreas de
vilas e aglomerados e 3% em áreas de influência de cursos d’água a céu aberto.
Estas proporções indicam a baixa correlação espacial entre os parâmetros

106
 Resultados

biogeográficos analisados e os casos de LV. Não foi possível gerar um mapa de

média de ocorrência de casos de LV devido ao pequeno número de eventos
para esta variável.

Leishmaniose canina

Porcentagem de casos de
60%

leishmaniose canina
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Abaixo 701 a 751 a 801 a 851 a Acima
de 700 750 800 850 900 de 901
Até 1 caso 1 a 2 casos 2 a 3 casos

GRÁFICO 10: Ocorrência de Casos de leishmaniose

canina, por faixa hipsométrica na
Regional Nordeste do Município de Belo
Horizonte, no período de julho de 2006
a junho de 2007.

Assim como ocorreu com os casos de LV, os casos de leishmaniose

canina também concentraram-se na faixa de altitude entre 751 e 850, e poucos
casos ocorreram abaixo de 700 metros e acima de 900 metros.
Porcentagem de ocorrência de casos de LVC

120%
100% 98% 97%
100%
100% 98% 99%
96% 97%
80% 83%

60%

40%

20%
17%0% 0% 3%
4% 2% 2% 3% 1%
0%
A/AI FA/FAI A/AI FA/FAI A/AI FA/FAI

Vegetação Vilas e aglomerados Cursos d'água a céu

urbanos aberto
Até 1 caso 1 a 2 casos 2 a 3 casos

GRÁFICO 11: Ocorrência de Casos de leishmaniose canina considerando os

parâmetros: vegetação, vilas e aglomerados e cursos d’água a
céu aberto, na Regional Nordeste do Município de Belo
Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de influência

107
 Resultados

Os casos de leishmaniose canina também parecem não sofrer influência

dos parâmetros biogeográficos estudados. Com relação à influência da
vegetação, 100% dos casos das classes entre 1 e 2 casos e entre 2 e 3
ocorreram fora das áreas de vegetação. Apenas 17% dos casos da faixa até 1
caso, ocorreram em área de vegetação.
Considerando os parâmetros aglomerados urbanos e cursos d’água mais
de 96% dos casos das três classes de médias de casos caninos de leishmaniose
ocorreram fora da área, ou fora da área de influência das vilas e aglomerados
urbanos e cursos de água a céu aberto.
A figura 34 apresenta o mapa de distribuição de médias de ocorrências de
casos caninos de leishmaniose na Regional no período de estudo. Apesar de
tratarmos dados coletados de forma não uniforme, pois os métodos de coleta de
sangue canino da prefeitura são diversos, pode-se inferir que em toda a
Regional houve uma probabilidade média de ocorrência de até um caso canino
de leishmaniose canina, durante o período de estudo. Alguns focos de
ocorrência puderam ser caracterizados em áreas de ocorrência de médias de 2
a 3 casos. Os focos estavam circundados por áreas de ocorrência de 1 a 2
casos. Estas áreas podem ser identificadas tanto nas porções sudoeste, central
e norte da Regional.

108
 Resultados

FIGURA 34: Médias de ocorrência de casos caninos de leishmaniose na Regional Nordeste,

notificados pela Gerência de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de
Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

109
 Resultados

Flebotomíneos vetores

O grafico 12 apresenta o perfil de ocorrência dos flebotomíneos vetores

por faixas de médias de ocorrência e de altitude.

60%
Porcentagem de ocorrência das

50%
40%
classes de estudo

30%
20%
10%
0%
Abaixo de 700 701 a 750 751 a 800 801 a 850 851 a 900 Até 960
Faixas Hipsométricas

Classes de médias de ocorrência de flebotomíneos vetores

Abaixo de 10 11 a 20 21 a 30 31 a 40 Acima de 41

GRÁFICO 12: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmanioses, por faixa hipsométrica
na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a
junho de 2007.

A ocorrência média de flebotomíneos vetores na Regional Nordeste

concentrou-se nas altitudes abaixo de 851 metros. Apesar da maioria das
classes (abaixo de 10, 11 a 20, 21 a 30, 31 a 40 flebotomíneos) ter apresentado
maior ocorrência entre as faixas de 701 a 850 metros. A classe que apresentou a
maior média de ocorrência de vetores (acima de 41) concentrou-se abaixo de
750 metros de altitude.
Porcentagem de ocorrência

100%
das clases de estudo

80%

60%

40%
40%
20% 29% 31%
25%
9%
0%
Abaixo de 10 11 a 20 21 a 30 31 a 40 Acima de 41
Classes de Médias de Ocorrência de Flebotomíneos

Área de Vegetação Fora da área de vegetação

GRÁFICO 13: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmaniose considerando as áreas de

vegetação, Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte, no período de julho de
2006 a junho de 2007.

110
 Resultados

A ocorrência de flebotomíneos vetores concentrou-se fora das áreas de

vegetação, principalmente para classe abaixo de 10 insetos. As classes de
médias de ocorrência mais altas apresentaram valores maiores de ocorrência
em áreas de mata. Para a classe de média de ocorrência acima de 41
flebotomíneos, 40% das ocorrências foram em áreas verdes.
Porcentagem de ocorrência das clasees de média de

98% 100% 98%

100% 95%
100%
98% 97% 96%
95%
91%
80%
flebotomíneos vetores

60%

40%

20%
5%
5% 2% 2% 0% 0% 3% 2% 4% 9%
0%
A/AI FA/FAI A/AI FA/FAI

Vlias e aglomerados urbanos Cursos d'água a céu aberto

Abaixo de 10 11 a 20 21 a 30 31 a 40 Acima de 41

GRÁFICO 14: Ocorrência média de flebotomíneos vetores de leishmaniose considerando os parâmetros: áreas
de vilas e aglomerados urbanos e cursos d’água a céu aberto, Regional Nordeste do Município
de Belo Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.
A/AI: área/área de influência
FA/FAI: fora da área/fora da área de influência

Todas as classes de média de ocorrência de flebotomíneos tiveram sua

maior concentração fora das áreas de vilas e aglomerados. Para a influência dos
cursos d’água a céu aberto na ocorrência de flebotomíneos temos um padrão
similar ao encontrado para as áreas de vilas e aglomerados, onde a ocorrência
de flebotomíneos não parece ser influenciada pela presença de cursos d’água.
A análise da média de ocorrência de flebotomíneos vetores consiste em
um processo exploratório para descrever apenas o período e locais de estudo.
Como os pontos de coleta não abrangeram toda a área da Regional, pois foram
selecionados domicílios com casos de LV no ano de 2005, o perfil apresentado
para a porção sudoeste da regional consiste apenas de extrapolação estatística.

111
 Resultados

Os dados apresentados não podem ser considerados como representativos da

distribuição da fauna flebotomínica na Regional, tanto qualitativa, quanto
quantitativamente.
Para o restante da Regional, é possível perceber que a maior ocorrência
de flebotomíneos vetores coincide com as áreas verdes da Regional, e na maior
parte das porções urbanizadas a média de ocorrência é abaixo de 10 vetores
(Figura 35).

112
 Resultados

FIGURA 35: Média de ocorrência de flebotomíneos vetores a partir de coletas quinzenais

realizadas com armadilhas HP na Regional Nordeste do Município de Belo
Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

113
 Resultados

Os dados referentes à distribuição espacial dos casos de LV humana e

dos casos de leishmaniose canina sobrepostos com a ocorrência média de
vetores, gerarão os gráficos números 15 e 16 respectivamente.
Porcentagem de Casos de LV

Porcentagem de casos de
100% 100%

80% 80%
60% 60%

LV
40% 40%
20% 20%
0% 0%
Abaixo 11 a 20 21 a 30 31 a 40 Acima Até 1 1a2 2a3
de 10 de 41
Classes de médias de ocorrência de casos de
Classes de médias de ocorrência de vetores
leishmaniose canina

GRÁFICO 15: Ocorrência de casos de LV humana GRÁFICO 16: Ocorrência de casos de LV humana
em relação às classes de ocorrência em relação às classes de
média de flebotomíneos vetores de ocorrência média de casos de
leishmanioses na Regional Nordeste leishmaniose canina na Regional
do Município de Belo Horizonte, no Nordeste do Município de Belo
período de julho de 2006 a junho de Horizonte, no período de julho de
2007. 2006 a junho de 2007.

No período de estudo, os casos de LV humana concentraram-se nas

áreas de médias mais baixas de ocorrência de flebotomíneos (classes abaixo de
10 e 11 a 20 flebotomíneos), e de menor média de casos caninos de
leishmaniose (classes: até 1 caso e de 1 a 2 casos caninos de leishmaniose)
(Gráficos 15 e 16).

Ainda que a figura 36 consista apenas na sobreposição dos dados

georreferenciados de casos de LV humana e caninos de leishmaniose, ela
mostra a correlação espacial destes dois eventos, apenas em uma análise
visual. Os casos humanos concentraram-se nas áreas onde a média de
ocorrência de casos de leishmaniose canina está entre 1 e 2 casos. Nesta figura,
fica clara a dispersão tanto de casos de LV humana como de leishmaniose
canina em toda a Regional à exceção da porção nordeste na divisa com os
Municípios de Sabará e Santa Luzia onde há predominância de áreas verdes.

114
 Resultados

FIGURA 36: Sobreposição dos casos humanos de leishmaniose visceral e casos

caninos de leishmaniose na Regional Nordeste, notificados pela Gerência
de Epidemiologia e Informação da Prefeitura Municipal de Belo Horizonte,
no período de julho de 2006 a junho de 2007.

115
 Resultados

das classes de estudo- Casos

100%

Porcentagem de ocorrência

de leishmaniose canina
80%
60%
40%
20%
0%
Abaixo de 10 11 a 20 21 a 30 31 a 40 Acima de 41

Classes de m édias de ocorrência de vetores

Classes de m édias de ocorrência de casos de leishm aniose canina

Até 1 caso 1 a 2 casos 2 a 3 casos

GRÁFICO 17: Ocorrência média de casos de leishmaniose canina em relação às

classes de ocorrência média de flebotomíneos vetores de
leishmanioses na Regional Nordeste do Município de Belo
Horizonte, no período de julho de 2006 a junho de 2007.

Conforme mostrado no gráfico 17, a ocorrência de casos de leishmaniose

canina concentrou-se nas áreas de menor ocorrência de flebotomíneos vetores.
A classe de ocorrência de 2 a 3 casos concentrou-se apenas nas áreas de
ocorrência média de flebotomíneos abaixo de 10 e de 11 a 20 flebotomíneos.
Pequena porcentagem das classes de até 1 caso e de 1 a 2 casos ocorreu nas
áreas de ocorrência média de flebotomíneos acima de 21.

116
 DISCUSSÃO
...as circunstâncias adversas
perdem a amargura, pela
esperança que o sonho acende ao
longe...
Cecília Meireles
 Discussão

6. Discussão

Situação das leishmanioses

As doenças transmitidas por vetores estão entre as principais morbidades

que acometem a humanidade, e assim, como ocorre para a grande maioria dos
agravos, os grupos mais acometidos são as populações em condição de pobreza
(OPAS, 2008).
As leishmanioses são consideradas eventos eco-epidemiológicos
extremamente complexos e, atualmente, um novo fator soma-se a esta
complexidade, tornando as leishmanioses um desafio para a saúde pública
mundial: a urbanização. Durante os últimos vinte anos ocorreu um aumento no
número de casos de todas as formas de leishmanioses no mundo, sendo que
alguns especialistas as consideram como doenças emergentes em algumas
áreas, e reermegentes em outras (ASHFORD, 2000).
Este grupo de agravos faz parte das doenças tropicais graves, que
necessitam de medidas de controle efetivas (WHO, 2006). Em nosso país, as
medidas de controle da leishmaniose visceral, por exemplo, mostram-se
ineficazes, mesmo em municípios com um ofensivo programa de eliminação de
cães sorologicamente positivos para leishmanioses e borrifação de inseticida em
áreas de maior incidência de casos humanos e caninos, como no Município de
Belo Horizonte.
Desde 1994, quando ocorreram os primeiros casos da doença em Belo
Horizonte, essa apresenta-se em expansão, tanto em número de casos, como em
relação às áreas geográficas de ocorrência. Em 1994, a Regional Leste notificou
17 casos de LV e a Regional Nordeste 12, apenas dez anos depois, em 2004,
todas as nove regionais da capital mineira já notificavam casos de LV, com um
total de 128 em 2004. Em Belo Horizonte, no ano de 2005 foram notificados 111
casos, 113 em 2006 e 96 em 2007 (PBH, 2008).
Com relação à LTA, não há base de dados sistematizada, mas ocorre
também aumento do número de casos no município de Belo Horizonte (PBH,

118
 Discussão

2008).
A prefeitura de Belo Horizonte realiza intenso trabalho de controle de LV,
conforme ações preconizadas pelo Ministério da Saúde. Entre os anos de 2005 e
2007, cerca de 140.000 amostras de sangue canino foram analisadas para
leishmanioses, 10.000 cães sorologicamente positivos foram eutanasiados, e
cerca de 160.000 casas foram borrifadas, em cada ano (PBH, 2008).
Desta forma, torna-se clara a necessidade de se mudar o olhar sobre a
ocorrência deste agravo, especialmente nas áreas urbanas, onde a doença
apresenta características ainda desconhecidas.
Uma vez que as condições de vida de determinada população acometida
por algum agravo, que apresenta vetores invertebrados, são determinantes para a
compreensão da ocorrência do agravo, a análise ambiental dos locais de
ocorrência pode ser uma ferramenta fundamental, talvez não para o controle, mas
para que se possa começar a entender o perfil do agravo, no caso as
leishmanioses no meio urbano. Ressaltamos que os fatores ambientais, tais
como: água, umidade do ar, vegetação e as formas de ocupação do espaço pelo
homem são condicionantes da ocorrência dos vetores de doenças (OPAS, 2008A).
Os estudos de caracterização de fauna flebotomínica se devem,
principalmente, à importância desses dípteros como vetores de leishmanioses
(MARCONDES, 2001). Em nosso país, apesar dos diversos trabalhos realizados,
ainda há muito para se conhecer sobre as espécies, sua distribuição geográfica,
sendo que descrições de novas espécies não são eventos raros (ANDRADE-
FILHO et al., 2007; GALATI et al., 2007; PINTO & DOS SANTOS, 2007). Ainda
que, na cidade de Belo Horizonte, vários trabalhos tenham sido desenvolvidos
sobre leishmanioses, incluindo aqueles que permitiram caracterizar sua fauna
flebotomínica, não há, todavia, nenhum trabalho sistemático que tenha avaliado
as oscilações da fauna e a eficácia das ações de controle sobre a população de
vetores.
Tratando-se de doenças metaxênicas, a dinâmica populacional dos vetores
possui especial importância, à medida que representa um dos principais fatores
que determina o grau de contato entre infectantes e susceptíveis.

119
 Discussão

A vigilância ambiental baseada nos artrópodes vetores provê bases para

intervenções adequadas no controle de doenças, e os indicadores por ela
delineados devem considerar a diversidade das atividades enzoóticas, a
abundância das espécies e suas taxas de infecção natural (GOMES, 2002).
Nesta ótica, a integração disciplinar e o uso de novas tecnologias, como o
geoprocessamento, mostram-se como caminhos que podem apontar novas
formas de abordagem dos problemas em saúde pública.

Estudos de fauna flebotomínica e sua infecção natural

Das nove espécies de flebotomíneos coletadas na Regional Nordeste, no

período de junho de 2006 a julho de 2007, três são incriminadas como vetoras de
leishmanioses no Novo Mundo: L. longipalpis (LAINSON & RANGEL 2003),
principal vetora de L. chagasi e L. intermedia e L. whitmani vetoras de L.
braziliensis (ANDRADE FILHO et al., 2007; LUZ et al., 2000; QUEIROZ et al.,
1994;). A ocorrência destas espécies na Regional Nordeste também foi registrada
por SOUZA et al., (2004).
Considerando-se a Regional Nordeste como um todo, a espécie que
apresentou maior densidade populacional durante nosso estudo foi L. whitmani,
que correspondeu a 75% dos espécimes coletados, seguida pela espécie L.
longipalpis que correspondeu a 11% do total (Tabelas 1 e 2). Estes resultados
contrapõem-se aos encontrados por outros autores em estudos entomológicos
realizados em Belo Horizonte, onde L. longipalpis foi apontada como a espécie
predominante (RESENDE et al., 2004, SOUZA et al.,2004). Além disso, L.
longipalpis foi a espécie mais coletada na Regional Nordeste em estudo realizado
entre abril de 2001 e março de 2003 por SOUZA et al.,(2004).
Entretanto, ao analisarmos a fauna da Regional Nordeste separadamente,
em áreas urbanas e áreas verdes (rurais), constatamos perfil semelhante ao
descrito pelos autores acima, uma vez que na área urbana da Regional, L.
longipalpis foi a espécie mais abundante, correspondendo a 63% dos espécimes
capturados, e L. whitmani foi a segunda espécie mais coletada, correspondendo a

120
 Discussão

15% do total (Tabela 4).

Nesta perspectiva, nossos dados são compatíveis com os estudos
anteriormente relatados, por RESENDE et al., (2004), entre os anos de 1997 e
1999 em Belo Horizonte, que relataram o encontro de L. longipalpis no intra e
peridomicílios. Neste estudo, L. longipalpis representou 69% das espécies
coletadas, e no estudo realizado por SOUZA et al., (2004), a taxa foi de 68%.
Ambos os estudos avaliaram áreas urbanas do Município de Belo Horizonte.
Em nosso estudo, L. longipalpis foi a espécie mais prevalente em cinco das
nove localidades urbanas estudadas, apresentando médias altas de ocorrência,
não alcançadas por nenhuma outra espécie. Novamente, nossos dados condizem
com os apresentados por SOUZA (2005) onde L. longipalpis foi a espécie mais
prevalente em seis das nove Regionais de Belo Horizonte. Tais resultados são
fator indicativo da grande adaptabilidade desta espécie ao ambiente
antropicamente modificado (Tabela 3).
A adaptabilidade desta espécie tem sido comprovada por diversos autores
desde a década de 30, quando o ciclo da LV começou a ser elucidado. Sua
presença no peridomicílio e seus hábitos oportunísticos de alimentação já eram
relatados anteriormente (LAINSON & RANGEL, 2005).
O perfil de distribuição das espécies L. longipalpis e L. whitmani em áreas
urbanas e áreas verdes (rurais) próximas, encontrado na Regional Nordeste foi
similar ao perfil descrito por CARVALHO (2006), em estudo realizado em área
endêmica de leishmaniose visceral, no Município de Santa Luzia, região
metropolitana de Belo Horizonte. Na Regional Nordeste, as duas espécies
intercalam a prevalência entre as áreas urbanas e áreas verdes (rurais), assim
como descrito por aquele autor, na área já citada, limítrofe ao Município de Belo
Horizonte.
A partir destes padrões, podemos inferir que as populações de L. longipalpis
que ocorrem em Belo Horizonte, bem como na região metropolitana, estão
adaptadas ao ambiente antrópico, conforme descrito por diversos autores, tanto
para a mesma região, como para outras localidades do Brasil.
Na cidade de Natal a ocorrência de L. longipalpis foi associada às áreas de

121
 Discussão

mata presentes no ambiente urbano, apesar desta espécie também ser capturada
em bairros totalmente urbanizados (XIMENES et al., 2007).
O perfil de ocorrência descrito para L. whitmani confirma estudos que a
descrevem como uma espécie com alta capacidade de adaptação a diferentes
condições ambientais, tanto de variações climáticas, como de vegetação (SOUZA
et al., 2002; TEODORO et al., 2003). Conforme descrito por alguns autores, esta
espécie apresenta padrão de periurbanização, já reconhecido (LEONARDO &
REBÊLO, 2004), mas pesquisas recentes apontam para sua urbanização
(SOUZA, 2005; CARVALHO, 2006; TEODORO et al., 2003B).
Em nosso trabalho, considerando o ambiente urbano, L. whitmani
correspondeu a 14,7 % dos espécimes coletados na Regional Nordeste, valor
similar ao encontrado por SOUZA (2005) que foi de 16,7%. Em ambos os
estudos, L. whitmani foi a segunda espécie mais capturada, o que foi também
observado por CARVALHO (2006) em Santa Luzia. SOUZA (2005) relata que
L.whitmani foi encontrada em oito das nove Regionais de Belo Horizonte, e que o
número de espécimes coletados no intra e no peridomicílio, não apresentou
diferença estatisticamente significativa, o que aponta para a domiciliação da
mesma.
L. whitmani apresenta importância crescente enquanto espécie vetora de L.
braziliensis. Em 1985, DEANE & GRIMALDI apenas citaram esta espécie que
apresentou infecção por promastigotas em alguns focos de LTA, sem maiores
considerações. Atualmente, ela é considerada uma das principais vetoras de L.
braziliensis em diversas partes do Brasil, sendo sua prevalência em localidades
de ocorrência de LTA freqüentemente mencionada (LOIOLA et al., 2007; RANGEL
& LAINSON, 2003).
A adaptabilidade de L. whitmani, bem como sua capacidade vetorial, tem
sido foco de discussão de diversos trabalhos. PETERSON & SHAW (2003),
utilizando modelos complexos de análises de nichos ecológicos, vão além, e
apontam que, a adaptabilidade de L. whitmani para sobreviver em ambientes
modificados é tão grande, que ela pode torna-se capaz de sobreviver às
mudanças climáticas atuais do planeta.

122
 Discussão

A espécie L. intermedia representou 5% dos espécimes coletados no total,

4% na zona urbana e 5% dos espécimes da zona de áreas verdes (rurais). Ainda
assim, sua ocorrência merece ser discutida dada sua importância epidemiológica,
principalmente no Sudeste do país (ANDRADE FILHO, 2007; MARCONDES et
al., 1997). LUTZ & NEIVA (1912) quando da descrição da espécie, já relatavam a
freqüência de L. intermedia em residências. Esta espécie já foi encontrada
naturalmente infectada por L. braziliensis (RANGEL et al; 1986) e é incriminada
como principal suspeita de transmitir LTA em diversas localidades (ANDRADE
FILHO, 2003).
Em Minas Gerais, L. intermedia (sensu lato) é prevalente ou bastante
abundante em áreas de transmissão de LTA (ANDRADE FILHO, 2007). GONTIJO
et al.,(2002) em trabalho realizado em um surto de LTA no Vale do Jequitinhonha,
Minas Gerais, descreveram a prevalência de L. intermedia na região, bem como
sua preferência por ambientes com maior grau de modificação antrópica.
A presença simpátrica de L. intermedia e L. whitmani já foi registrada em
diversas localidades do Brasil. TEODORO & KÜHL (1997) relataram a ocorrência
dessas espécies no Município de São Jorge do Ivaí, no Estado do Paraná, com
predominância de L. intermedia. Fato similar foi descrito por SARAIVA et al.,
(2006) em estudo realizado nos Municípios mineiros de Caparaó e Alto Caparaó,
e também por SOUZA et al., (2002) no Distrito de Posse no Rio de Janeiro,
ambas áreas de ocorrência de LTA. Neste último estudo, os autores descrevem a
alternância sazonal das duas espécies, com o predomínio de L. intermedia nos
meses quentes e de L. whitmani nos meses frios, sugerindo que tal fato poderia
explicar a transmissão L. braziliensis durante todo ano.
Apesar de ter sido coletada em pequeno número, é necessário destacar a
ocorrência de L. lenti na Regional Nordeste. Esta espécie pode picar o homem,
cavalos e cães e já foi encontrada naturalmente infectada por promastigotas em
Jacobina, BA (SHERLOCK, 1996). Apesar desse relato, BRAZIL et al.,(1997) em
estudo realizado sobre a biologia desta espécie, declararam que a mesma não
apresenta hábitos antropofílicos e é refratária ao desenvolvimento de Leishmania
sp. Recentemente foi relatada sua infecção natural por L. braziliensis em

123
 Discussão

avaliação utilizando técnicas de biologia molecular (XAVIER, 2007). Assim, o

possível papel epidemiológico de L. lenti precisa ser melhor esclarecido.
Em nosso trabalho não foi possível diferenciar as fêmeas das espécies L.
sallesi e L. cortellezzi, uma vez que ambos os machos foram coletados, os dados
são apresentados considerando-se a possibilidade de se tratar de qualquer uma
das duas espécies. Ambas são comuns no Estado de Minas Gerais (CARVALHO
et al., dados não publicados).
L. sallesi já foi encontrada naturalmente infectada por tripanossomatídeos
(MAYRINK et al., 1979), mas não é suspeita de possuir capacidade vetorial
(RANGEL& LAINSON, 2003; YOUNG & DUNCAN 1994). Sua infecção natural por
L.chagasi já foi relatada por SARAIVA et al., (dados não publicados).
Na região metropolitana de Belo Horizonte foi assinalada a infecção natural
de L. cortellezzi por L. chagasi (CARVALHO, 2006). Entretanto, não há outros
relatos que possam indicar que tal espécie apresente importância epidemiológica.
L. termithophila já foi registrada em nosso município, e é freqüentemente
citada em levantamentos entomológicos no Estado de Minas Gerais (LOIOLA et
al., 2007). Não há relatos de que a mesma possua importância epidemiológica no
ciclo das leishmanioses. Esta espécie foi descrita em 1964, em Minas Gerais,
quando teve sua ocorrência associada a ninhos de térmitas (MARTINS et al.,
1977).
A espécie L. lutziana foi descrita em 1932, por Costa Lima, e sua ocorrência
é comum em Minas Gerais (AGUIAR & MEDEREIROS, 2003). Entretanto, este é
o primeiro registro da espécie no município de Belo Horizonte. Não há registro ou
mesmo suspeita na literatura de que esta possa atuar como vetora de Leishmania
sp.
Quanto a L. lloydi, não há suspeita de que ela tenha importância
epidemiológica nos ciclos de transmissão de leishmanioses, ainda que diversas
espécies relacionadas, do mesmo sub-gênero (YOUNG & DUNCAN 1994,
CARVALHO et al., 2006) sejam vetoras. Esta espécie já foi registrada no município
de Belo Horizonte (SOUZA et al., 2004, RESENDE et al., 2006) e também é
comum em Minas Gerais (AGUIAR & MEDEIROS, 2003).

124
 Discussão

Ao se comparar as localidades de estudo da Regional Nordeste, quanto à

distribuição da fauna flebotomínica como um todo, vemos que as áreas verdes
(rurais) apresentaram maior riqueza de espécies que as localidades urbanas. Ao
se comparar a ocorrência sazonal de flebotomíneos, entre os ambientes de
estudo, verificou-se que há diferença estaticamente significativa entre elas.

O padrão de variação sazonal das espécies de flebotomíneos sofre

influência de diversos fatores abióticos, e o perfil deste também depende da
espécie de estudo e da área geográfica em que o mesmo é realizado. Ainda
assim, devido à variação dos fatores climáticos ao longo do tempo, uma mesma
espécie pode apresentar diferentes padrões sazonais em uma mesma área
geográfica (XIMENES et al., 2006).
Considerando nosso intervalo de estudo, o padrão da curva sazonal dos
flebotomíneos deve-se, majoritariamente, a L. whitmani. Os picos de coleta
ocorreram antes e após o período de chuvas intensas (Gráficos 5 e 6). Estes
dados contradizem outros autores, que apontam para a maior ocorrência de
flebotomíneos durante as estações chuvosas (SOUZA 2005, GALATI et al., 1997).
Talvez este fato possa ser explicado pelos altos índices pluviométricos
ocorridos entre outubro de 2006 e março de 2007, em Belo Horizonte. Eles
provavelmente acarretaram elevada umidade, em possíveis criadouros, e podem
ter dificultado o desenvolvimento dos insetos. Apesar de que, em geral, as
espécies de flebotomíneos se desenvolvem bem na faixa de umidade relativa do
ar entre 80 e 85%, conforme descrito por BRAZIL et al., (1997), em estudos de
laboratório. Sabe-se, no entanto, que as formas imaturas não se desenvolvem em
locais encharcados (LAINSON, 1982).
Foram coletados flebotomíneos em todos os meses de estudo, e mesmo na
época de chuvas mais intensas foram observados picos de ocorrência, ainda que
discretos. Estatisticamente, apenas a temperatura média apresentou correlação
significativa com a variação sazonal dos flebotomíneos, mas considerações sobre
os demais fatores são válidas, uma vez que os valores de p para os parâmetros
de umidade relativa do ar e pluviosidade estavam próximos de 0,10. Houve
portanto uma tendência para a influência dessas variáveis na curva sazonal dos

125
 Discussão

flebotomíneos capturados (Tabela 6 e quadro 6).

L. whitmani foi coletada em todos os meses de estudo, ocorrendo em maior
número nos meses secos e frios, e o mesmo perfil foi observado para L.
longipalpis. O perfil encontrado para L. whitmani é similar àquele descrito por
SOUZA (2005) no Município de Belo Horizonte. Para L. longipalpis, a autora
encontrou, entre os anos de 2001 e 2002, predomínio em meses secos e frios,
enquanto entre 2002 e 2003 os picos de coletas foram nos meses quentes e
chuvosos.
XIMENES et al., (2006) em estudo realizado no Rio Grande do Norte,
verificou picos de ocorrência para L. longipalpis nos meses quentes e chuvosos.
Os autores correlacionaram os machos e fêmeas, separadamente, aos
parâmetros climáticos. Os machos apresentaram correlação significativa apenas
com a umidade relativa do ar e as fêmeas com todos os parâmetros avaliados.
SHERLOCK (1996) em estudo realizado na Bahia, relata a maior ocorrência
de L. longipalpis nos meses mais chuvosos do ano, tanto os mais quentes, como
os mais frios. Este autor demonstra a importância de se conhecer o perfil sazonal
de uma espécie vetora, ao estabelecer a correlação entre a ocorrência sazonal de
L. longipalpis, casos humanos de LV e a freqüência de gambás nos
peridomicílios.
Nas coletas realizadas com a armadilha de Shannon, apenas as espécies
L. whitmani e L. longipalpis foram coletadas, o que concorda com autores que
afirmam que os diferentes tipos de armadilhas auxiliam na melhor descrição da
fauna flebotomínica (Tabela 7).
Considerando-se a descrição da fauna de flebotomíneos, um aspecto
interessante do nosso estudo foi a caracterização mais detalhada da fauna da
Regional Nordeste. Em 2005, SOUZA descreveu uma riqueza de seis espécies
para a Regional, utilizando seis armadilhas em três pontos, com coletas de quatro
dias consecutivos por mês, durante dois anos. Em nosso trabalho, encontramos
uma riqueza de nove espécies, utilizando 16 pontos de coleta, 24 armadilhas, em
coletas quinzenais de uma noite, durante um ano. Apenas Lutzomyia firmatoi
Barreto, Martins & Pelegrino, 1956, que estava presente no levantamento

126
 Discussão

realizado por SOUZA (2005), não foi coletada em nosso estudo.

Desta maneira torna-se clara a necessidade de estudos pormenorizados
para a melhor caracterização da fauna flebotomínica da Regional Nordeste. Pois,
os resultados até agora obtidos apontam que ainda não se conseguiu caracterizar
inteiramente a fauna deste grupo de insetos na Regional, ao se considerar
critérios ecológicos de curva de acumulação de espécies (SANTOS, 2004).
Como descrito por FELICIANGELI, (1987) o conhecimento sobre a
diversidade e abundância relativa das espécies de flebotomíneos auxilia no
entendimento da história natural da transmissão de determinados parasitos. Na
Regional Nordeste, a presença das leishmanioses pode estar vinculada à
ocorrência das três espécies vetoras já citadas, e suas correlações com outros
fatores. Mas nossos resultados de análise de infecção natural apontam a
possibilidade de eventos mais complexos.
As taxas de infecção foram altas, considerando-se a maioria dos relatos
existentes na literatura. Tradicionalmente, as taxas de infecção natural dos
flebotomíneos nos focos endêmicos variam em torno de 0,2% (RODRIGUEZ et
al., 1999; LUZ et al., 2000).
Nossos resultados podem ser explicados pela utilização de métodos de
biologia molecular, para determinação da taxa de infecção natural. Esses métodos
são mais sensíveis e específicos, e têm substituído os procedimentos de
dissecação e busca visual de parasitos, ao microscópio óptico. Encontramos
apenas três exemplares com promastigotas no tubo digestivo, quando utilizamos a
dissecação e a busca visual ao microscópio óptico.

No presente estudo, para L. longipalpis, a taxa de infecção natural por L.

chagasi foi de 19%, para L. whitmani, importante vetora de L. braziliensis, a taxa
de infecção por L. chagasi foi de 3,8%. L. intermedia apresentou uma taxa de
14,3% de infecção natural para Leishmania sp (Quadro 9).
PAIVA et al., (2006) em estudo realizado na localidade de Antônio João,
estado do Mato do Grosso do Sul, relataram as seguintes taxas de infecção para
L. longipalpis: 10,4% para infecção por tripanossomatídeos e 3,9% para L.
chagasi, além de uma amostra positiva para L. amazonensis, utilizando reações

127
 Discussão

de PCR, que tinham como alvo regiões do gene do miniexon. A taxa para infecção
por tripanossomatídeos, utilizando o método de dissecação foi de apenas 1,24%.
A infecção natural de L. whitmani por L. braziliensis já foi verificada na
região metropolitana de Belo Horizonte, em estudo utilizando reações de PCR
genérica e espécie específicas (CARVALHO, 2006).
Um exemplar dos três coletados de L. termithopila apresentou infecção por
L. chagasi, o que originou a elevada taxa de 33,3% de infecção natural. Esse
resultado deve ser analisado com cuidado, devido ao pequeno número de insetos
coletados. O encontro de L. termithopila infectada por L. chagasi é um relato
inédito na literatura.
PITA-PEREIRA et al., (2005) registraram uma taxa de infecção de 15, 6%
para L. intermedia por L. braziliensis no Município do Rio de Janeiro.
Neste estudo, um exemplar de L. intermedia foi encontrado infectado por
Leishmania sp., mas não foi possível a identificação específica do parasito.
Para a amostra do complexo cortellezzi infectadas por Leishmania sp
sabemos que não se trata de nenhuma das espécies do subgênero Leishmania,
uma vez que esta amostra foi negativa para a hibridização com sonda específica
para esse subgênero. Supomos que ambas as infecções encontradas para este
complexo sejam por L. braziliensis, devido fato de termos encontrado uma
amostra positiva para L. braziliensis. Este é o primeiro relato da infecção de
fêmeas do complexo cortellezzi pela espécie L. braziliensis, e demonstra a
presença e circulação deste parasito na região de estudo.
Os espécimes do complexo cortellezzi infectados foram coletados na
fazenda SL, área verde (rural). Nesta mesma área, no mesmo período de estudo,
foram coletados 16 espécimes de pequenos mamíferos, entre roedores e
carnívoros, positivos para a infecção por L. braziliensis (MELO, 2008). Maiores
estudos sobre o comportamento das espécies do complexo cortellezzi são
necessários, para que se possa inferir sobre sua possível participação no ciclo de
transmissão de L. braziliensis.
CARVALHO (2006) e SARAIVA (dados não publicados) relataram a
infecção natural das espécies L. cortellezzi e L. sallesi por L. chagasi, no estado

128
 Discussão

de Minas Gerais.
As técnicas de biologia molecular contribuem significativamente para a
correta identificação das espécies de Leishmania que ocorrem nos vetores, pois
reações de PCR, cujo alvo são seqüências de DNA de Leishmania, são
específicas e sensíveis. O uso destas técnicas em estudos de infecção natural é
crescente, e alguns autores já propõe padronizações de metodologias para serem
utilizadas com esta finalidade (PAIVA et al., 2007). As reações de PCR que
identificam parasitos do gênero Leishmania, além de serem mais sensíveis e
específicas que as técnicas de dissecação e procura dos flagelados ao
microscópio óptico, permitem a diferenciação entre os complexos ou grupos de
flagelados que os flebotomíneos podem albergar em seu intestino, muito mais
rapidamente (PAIVA et al., 2007).
PEREZ et al., (2007) em estudo com metodologia semelhante a nossa,
utilizando dissecação, observação ao microscópio, e reação de PCR gênero
específica, seguida de uma reação de RFLP espécie específica, caracterizou a
infecção de Lutzomyia peruensis Shannon, 1929, por Leishmania (Viannia)
peruviana. Estes autores ressaltam a praticidade e rapidez dos métodos
moleculares neste tipo de estudo, uma vez que em poucos dias pode-se ter os
resultados de identificação específica do parasito.

Em nosso trabalho utilizamos os insetos inteiros, no processo de extração

de DNA e as taxas de infecção natural foram calculadas segundo o critério de
taxa mínima de infecção, quando se tratava de grupos de espécimes. Atualmente
estes dois passos metodológicos estão se consagrando como os melhores para
este tipo de estudo (PAIVA et al., 2007; PITA-PEREIRA et al., 2005).
Neste estudo as fêmeas foram congeladas em freezer a –70ºC logo após a
dissecação, mas mesmo métodos de armazenamento mais simples como: manter
os insetos secos a 4ºC, ou em solução de álcool a 70%, mantém íntegro o DNA,
tanto dos insetos como dos parasitos (PAIVA et al., 2007). Este fato reforça a
praticidade do uso de técnicas de biologia molecular em estudos de infecção
natural, pois muitas vezes o local de coleta é distante do laboratório em que os
insetos serão processados.

129
 Discussão

Apesar do pequeno número de amostras, o que não nos permite realizar

maiores inferências, das 15 amostras de flebotomíneos positivas para Leishmania
nas análises utilizando técnica de biologia molecular, apenas três foram positivas
na análise feita com microscopia óptica. Isto representa um acréscimo de 500%
em números relativos de diferença na positividade de uma técnica para outra.
Razão pela qual sugerimos as técnicas moleculares como mais práticas para o
estudo de infecção natural de flebotomíneos, em áreas endêmicas.
A técnica de PCR-RFLP, com digestão de produto amplificado a partir de
PCR gênero específica, pela enzima Hae III, para diferenciação de L. braziliensis,
L. amazonensis e L. chagasi, desde a sua padronização por VOLPINI (2003), tem
sido usada com sucesso para identificação de parasitos de cultura, de amostras
clínicas de reservatórios, como por exemplo, para identificação de Leishmania em
infecções caninas. A técnica foi utilizada com sucesso tanto por ANDRADE et al.,
(2006), quanto por QUARESMA (2007) em estudos de leishmaniose canina
realizados em Belo Horizonte. MELO (2008) também a usou com sucesso para
identificação de Leishmania em tecidos de pequenos mamíferos das ordens
Rodentia e Carnivora.

Este é o primeiro relato do emprego desta técnica para identificação de

Leishmania em flebotomíneos naturalmente infectados. A técnica mostrou-se
exeqüível e prática: com uma única reação pode-se caracterizar três espécies
Leishmania, que são as principais espécies encontradas nas infecções humanas,
pelo menos na região Sudeste do Brasil. Este é ponto de fundamental importância,
dado que a quantidade de DNA extraída dos flebotomíneos é pequena e não há
possibilidade de novas extrações, como ocorre para tecidos de vertebrados. Além
disso, parte das amostras foi submetida à técnica de hibridização com sonda
radioativa para confirmação dos resultados, e houve concordância em todas as
amostras testadas. Técnicas de hibridização são usadas com sucesso tanto na
identificação de Leishmania em tecidos de vertebrados como em tecidos de
flebotomíneos (ANDRADE et al., 2001, OLIVEIRA et al., 2005; PITA-PEREIRA et
al., 2005, MELO 2008).

Nossos resultados apontam para uma importante circulação de L.chagasi

130
 Discussão

nos ecótopos estudados na Regional Nordeste. Podemos inferir uma intensa

circulação deste parasito, a vetora clássica desta espécie L. longipalpis que
apresentou taxa de infecção muito alta 19%. E até mesmo espécies que nunca
foram encontradas naturalmente infectadas por qualquer espécie de Leishmania,
revelaram-se infectadas com L. chagasi na Regional. L. whitmani, importante
espécie vetora de L. braziliensis e que comprovadamente suga o homem e
animais domésticos e sinantrópicos (LAINSON & RANGEL, 2003) teve expressiva
taxa de positividade para L. chagasi.

É importante ressaltar que o fato da ocorrência de infecção natural não é

suficiente para que se possa suspeitar da participação de uma espécie como
vetora no ciclo das leishmanioses.
Como estabelecido por KILLICK-KENDRICK (1990), para se definir que
uma espécie de flebotomíneo é vetora de uma determinada espécie de
Leishmania, é preciso que ela se enquadre nos parâmetros descritos pelo autor,
que são aceitos e adotadas pelo Ministério da Saúde (BRASIL, 2007). Os critérios
são: ser abundante no foco de leishmaniose, ser antropofílica, apresentar o
desenvolvimento dos parasitos no intestino na ausência de sangue, apresentar a
maior taxa de infecção natural dentre todas as espécies de flebotomíneos do local
de estudo, e o parasito isolado do inseto deve ser indistinguível daqueles isolados
de casos humanos.

Desta forma, nossos dados apenas atestam a circulação de L. chagasi e

não que as espécies L. whitmani e L. termitophila sejam vetoras da mesma.
A densidade relativamente baixa de L. longipalpis em nosso estudo e a
presença de outras espécies de flebotomíneos com taxas de infecção natural
expressivas para L. chagasi, bem como as elevadas taxas de positividade canina
para este parasito na Regional Nordeste, levantam algumas considerações a
respeito de aspectos ainda não esclarecidos da epidemiologia da LV.
Alguns trabalhos registraram a baixa densidade de L. longipalpis em áreas
onde ocorre LV e também LTA, como a situação descrita por SALOMÓN et al.,
(2001) para a Argentina. Dentre as hipóteses formuladas, por estes autores, para
explicar tal fato estão: a investigação insuficiente da fauna flebotomínica, e a
131
 Discussão

possibilidade de outras espécies atuarem como vetoras de L. chagasi.

No município de Dom-Pedro, Maranhão, área de ocorrência de LV, também
foi registrada a predominância L. whitmani, correspondendo a 82% do total de
espécimes, enquanto L. longipalpis correspondeu a 18% (LEONARDO &
REBÊLO, 2004).
Apesar de classicamente a distribuição de L. longipalpis determinar a de LV
no Brasil (DEANE & GRIMALDI, 1985), BARBOSA DE SOUZA et al., (2003)
relataram a ausência desta espécie em localidades com ocorrência de LV no
estado do Rio de Janeiro. Estes autores também sugerem a participação de
outras espécies, como L. migonei (França, 1920) (vetora de L. braziliensis), e L.
firmatoi (Barreto, Martins & Pelegrino, 1956), no ciclo de transmissão de L.
chagasi.
A participação de L. cruzi (Mangabeira, 1938) e L. forattinii (Galati, Rego,
Nunes & Teruya, 1985) como vetoras de L. chagasi em Corumbá, Mato Grosso do
Sul foi sugerida por GALATI et al., (1997). Estas espécies apresentaram elevada
prevalência nesse Estado, onde L. longipalpis foi raramente registrada.
Ainda que todas estas considerações possam ser feitas e embasadas em
dados atuais, a importância de L. longipalpis como vetora de L. chagasi
permanece inalterada, inclusive com dados que mostram a grande eficiência
desta espécie como vetora, e na capacidade de componentes de sua saliva
interferir no processo de infecção causado pela L. chagasi (MONTOYA-LERMA et
al., 2003).

Caracterização ambiental e análise biogeográfica

Mudanças na estrutura agrária do país resultaram na transferência de um

contingente populacional significativo para os centros urbanos, criando condições
favoráveis para ocorrência de eventos emergentes e reemergentes entre as
doenças infecciosas (GOMES, 2002). Estimativas indicam que em 2030, 5 bilhões
de pessoas viverão em áreas urbanas em todo o mundo e este crescimento da
população urbana pode acarretar o aumento de surtos de doenças transmitidas

132
 Discussão

por vetores nestas áreas. Na América do Sul, mais de 70% da população é

considerada urbana (WHO, 2002).
Atualmente, têm-se um problema conceitual do que seria o meio urbano e o
que seria o meio rural: DIAS (1998) relata que a urbanização de determinadas
doenças poderia advir da ruralização de espaços urbanos periféricos. Conforme
discutido por ALBUQUERQUE & PIMENTEL (2004), estes conceitos são de
grande importância para a saúde pública, mas na maioria das vezes permanecem
vagos.
Conforme PROIETTI & CAIAFFA (2005) a saúde urbana possui uma
dimensão peculiar, o papel do ambiente físico e social do “lugar” e sua
participação em moldar a saúde das pessoas. A importância do lugar na saúde
urbana apontada por CAIAFFA et al., (2005), em especial com relação à
ocorrência de flebotomíneos vetores, é referendada por CAMARGO-NEVES et al.,
(2001), uma vez que estes autores sugerem que alguns domicílios podem ser
responsáveis pela ocorrência destes insetos, contribuindo para o perfil focal da LV
e apontam a importância de se conhecer os peridomicílios.
Em nosso trabalho, buscamos analisar cada local de ocorrência de caso de
humano de LV e de coleta de flebotomíneos vetores, tentando elucidar quais as
características presentes no ambiente que poderiam favorecer tais eventos.
Ao se comparar os lotes de área urbana, participantes do estudo, em
relação à ocorrência sazonal de espécimes de flebotomíneos, apenas o lote 14
revelou diferença estatisticamente significativa em relação aos demais. As
fazendas SL e CA, também apresentaram diferença significativa em relação às
localidades urbanas. A pesquisa de caracterização ambiental foi realizada apenas
na fazenda SL, e por isso considerações pormenorizadas são traçadas sobre a
mesma.
Em nosso trabalho, o perfil geral da estrutura das residências foi razoável, a
maioria das casas apresentou boa estrutura de alvenaria, mas houve casos de
precariedades, onde inclusive materiais alternativos, como fragmentos de madeira
compensada e lona, eram utilizados na construção das residências (Lotes 3 e 15
– Figuras 23 e 32).

133
 Discussão

Considerando a umidade como fator de atração dos flebotomíneos para o

interior das residências, algumas delas apresentaram características que
aumentam a umidade em construções, sendo: paredes sem reboco (28,6%),
presença de rachaduras (50,0%) e de buracos (35,7%), teto apenas de telha
(20,0%) ou laje sem telhado (36,0%). A presença de mofo que, claramente, indica
uma umidade alta, foi constatada em 35,7% dos lotes.
Os flebotomíneos são insetos de hábitos crepusculares que durante o dia
buscam se abrigar em locais onde não há grandes alterações de microclima
(BRAZIL & BRAZIL, 2003), assim as próprias residências poderiam propiciar este
abrigo aos insetos. L. longipalpis, em localidades da Bahia, é encontrado com
maior freqüência no interior das residências durante os períodos de seca
(SHERLOCK, 1996), o que corrobora nossa suposição.
AGUIAR & MEDEIROS (2003) também relatam que, devido a sua estrutura
delgada, estes insetos precisam se proteger de mudanças bruscas de temperatura
em locais com alto teor de umidade, pouca luminosidade e circulação de ar, o que
também apóia nossa hipótese das residências poderem atuar como abrigos para
os flebotomíneos.
Apenas um lote apresentou casa com esgoto a céu aberto, não houve
registro de ausência de piso nas residências e todas elas apresentaram banheiro
completo. Segundo OLIVEIRA et al., (2006) a ausência de banheiro, de rede de
esgoto e de piso representaram fatores de risco para a LV.
Os peridomicílios estudados apresentaram características que podem
favorecer tanto a ocorrência das leishmanioses, como de outras doenças urbanas,
como a dengue e a leptospirose, uma vez que grande parte dos lotes apresentou
condições propícias à presença de roedores e acúmulo de inservíveis (BRASIL,
2002A; BRASIL, 2002B). Estas condições demonstram a ausência de cuidado
higiênico adequado com os quintais, situação comum nos grandes centros
urbanos brasileiros, fato este que vai ao encontro da visão de DIAS (1998) sobre a
importância fundamental da participação comunitária, ativa, consciente e
permanente no controle de determinadas endemias.
De acordo com nossos resultados, as residências apresentaram apenas a

134
 Discussão

umidade como um fator favorável à presença de flebotomíneos, assim, supomos

que os quintais (peridomicílios) apresentem as características mais importantes,
que poderiam explicar a ocorrência destes insetos.
As principais características presentes nos peridomicílios, que podem estar
relacionadas à ocorrência destes dípteros, foram: presença de árvores (85,7%), de
hortas (35,7%), pilhas de madeira (92,9%), entulhos (85,7%), montes de folhas
(57,1%), utilização de esterco (35,7%), lixo não acondicionado e águas pluviais
(ambos ocorreram em 21,4% dos lotes), além dessas, a criação de pelo menos
um tipo de animal (85,7%).
Os cães foram os animais de criação mais presentes, ocorrendo em
78,57% dos lotes estudados. Esta espécie, além de servir como fonte de alimento
para as fêmeas de flebotomíneos, pode albergar a infecção por L. chagasi, sendo
importante reservatório deste parasito (MARZOCHI et al., 1994). Além disso, os
cães também se infectam com L. braziliensis e seu papel na epidemiologia da LTA
precisa ser esclarecido (BASANO, 2004).
Depois dos cães, as galinhas e os pássaros foram os animais mais
presentes nos locais de estudos. A criação de galinhas foi uma característica
presente em 43% dos locais estudados, a atração de flebotomíneos por estes
animais, que atuam como fonte de alimento, já está consagrada na literatura.
Fêmeas de L. longipalpis se alimentam com extrema facilidade em galinhas
(Gallus gallus), e a abundância de flebotomíneos em galinheiros é considerada
fato de importância epidemiológica para a ocorrência de LV (ALEXANDER et al.,
2002; LAINSON & RANGEL, 2005).
A associação entre espécies de flebotomíneos vetores de L. braziliensis e
galinheiros também é comum. TEODORO & KÜHL (1997) relataram a ocorrência
tanto de L. whitmani como de L. intermedia em pocilgas e ambientes
peridomésticos com a presença de galináceos. LEONARDO & REBÊLO (2004)
verificaram a alta freqüência de flebotomíneos em abrigos de animais e apontam
a importância dos mesmos para atração dos vetores para áreas periurbanas.
SARAIVA et al., (2006) registraram a maior ocorrência de flebotomíneos em
abrigos de animais, quando comparados com os ambientes de mata, cafezal, e

135
 Discussão

parede externa de residências. Na região metropolitana da cidade de Natal, houve

uma associação entre a criação de animais no peridomicílio, e o risco de
transmissão de L. chagasi (XIMENES et al.,2006; 2007).
MELO (2008), em estudo realizado concomitantemente ao nosso e nos
mesmos locais, mostrou a presença de espécies de mamíferos sinantrópicos nas
residências da Regional. Nas áreas urbanas, em ambiente peridomiciliar, a autora
relatou as seguintes espécies de roedores: Rattus novergicus, Rattus rattus, Mus
musculus e o marsupial: Didelphis albiventris. Nas áreas de matas (fazendas CA e
SL) além das espécies citadas, foram encontradas: Akodon sp., Oryzomys sp
(roedores), Didelphis aurita (marsupial), Galactis sp.(carnívoro). A ocorrência de
tais espécies pode favorecer tanto a presença de flebotomíneos, como a sua
infecção por Leishmania, uma vez que roedores são incriminados como
reservatórios de L. braziliensis (BRANDÃO FILHO, 2003; OLI VEIRA et al., 2005).
Conforme descrito por SOUZA (2005), a presença de ambiente favorável
aos flebotomíneos, associados à presença de animais domésticos e sinantrópicos
podem representar fatores que explicariam as populações urbanas de
flebotomíneos. Em estudo feito em todo município de Belo Horizonte, esta autora
apontou a ocorrência de cães em 66,7% dos domicílios estudados, aves em
48,2%, gatos em 7,4%, caprinos e/ou eqüinos em 3,7% e gambás em 3,7%.
Nossos resultados mostram, na área de estudo, a presença de árvores, lixo,
hortas, mato (ervas daninhas) e áreas de solo úmido, características já
associadas ao risco de se adquirir LV na região metropolitana de Belo Horizonte
(OLIVEIRA et al., 2006).
Apenas os lotes 2 e 6 não apresentaram condições propícias ao
desenvolvimento de flebotomíneos, mas houve registro de lotes arborizados no
entorno, o que pode explicar a ocorrência destes insetos, pois esses se
encontravam à uma distância dentro do intervalo de vôo de um flebotomíneo, em
torno de 500 a 700 metros.
Todos os demais lotes pesquisados (1, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 11, 13,15 e 16)
apresentaram, pelo menos, algumas das condições consideradas como propícias
à ocorrência de flebotomíneos. O lote 7, apesar de limpo e organizado, tinha uma

136
 Discussão

criação de galinhas e estas podem atuar como atrativo para os flebotomíneos e,

como no lote também havia locais sombreados, este foi considerado um local
propício à ocorrência destes insetos, apesar de apresentar condições sanitárias
adequadas, ao se considerar as ações cabíveis aos moradores.
O lote 14 apresentou a maioria das características que podem favorecer a
ocorrência de flebotomíneos. Em relação à residência, as características
presentes foram: teto apenas de laje, paredes sem reboco, presença de infiltração,
rachaduras e buracos nas paredes. Quanto ao peridomicílio, registrou-se:
presença de árvores, sendo uma de grande porte (mangueira) que proporcionava
ambiente sombreado e úmido em quase toda área. Havendo também plantas em
vasos, madeira e entulhos empilhados, montes de folhas, lixo não acondicionado
espalhado e criação de quatro cães. Mas tais descrições não explicam a
significância estatística encontrada ao se comparar este local com os demais, uma
vez que havia lotes semelhantes ao lote 14, como o 3 e o 16.
A fazenda SL merece consideração especial por apresentar peculiaridades
que podem explicar a maior ocorrência, tanto em número de espécies como de
espécimes neste local. A fazenda possui criação de canídeos, bovinos, eqüinos,
além de diversas espécies de aves de grande porte (galinhas, emas e pavões) e
estes representam farta fonte alimentar para os insetos. A fazenda possui área de
mata onde os animais têm livre acesso, o que gera matéria orgânica em solo
sombreado e possibilidades de locais que podem atuar como criadouros (Figura
29).
As áreas de mata, classicamente, apresentam maior riqueza de espécies
de insetos, e isto vale também para os flebotomíneos (ANDRADE FILHO et al.
2001; DE LUCA et al. 2003), a fazenda apresentou também uma maior
diversidade de animais de criação, além de apresentar o maior número de
pequenos mamíferos capturados na Regional (MELO, 2008), os quais podem
exercer atração sobre as fêmeas destes insetos (TEODORO & KÜHL, 1997,
LAINSON & RANGEL 2005). Estes fatores poderiam explicar a riqueza e
abundância de espécies de flebotomíneos ali encontradas.
As amostras de flebotomíneos positivas para a infecção por Leishmania sp.

137
 Discussão

foram provenientes apenas das áreas verdes (Fazendas SL e CA) e do lote 14.
Não podemos fazer nenhuma afirmação sobre este fato, mas inferimos que as
condições ambientais presentes propiciam uma maior densidade de espécimes,
tanto de vetores quanto de reservatórios, e a circulação dos parasitos.
Em estudo de caso controle, realizado na região metropolitana de Belo
Horizonte, OLIVEIRA et al., (2006) utilizando metodologia semelhante a nossa,
para a caracterização ambiental das residências de pessoas que tiveram LV,
comparando-as com residências de vizinhos que não apresentavam testes
sorológicos positivos para LV, demonstraram que a ocorrência de determinadas
características são mais comuns nas casas com casos de LV. As características
que foram relacionadas ao risco de infecção para a doença foram: presença de
animais, matéria orgânica em decomposição, sombra e umidade nos quintais.
Estes autores também relataram que a freqüência de limpeza dos quintais e
a localização da residência em áreas de urbanização em condições de pobreza,
são fatores importantes para o risco de infecção.
TEODORO et al., (2003) confirmam o exposto acima e relatam que a
limpeza da matéria orgânica, a poda de árvores evitando sombreamento
excessivo e a drenagem de áreas alagadas, auxiliam na diminuição da densidade
populacional de flebotomíneos.
MORENO (2002) em estudo sobre a epidemiologia das infecções
assintomáticas por L. chagasi na comunidade de General Carneiro, município de
Sabará, descreve fatores de risco para este tipo de infecção. A autora utilizou
quatro critérios diagnósticos para os pacientes participantes, de acordo com os
resultados das técnicas utilizadas no diagnóstico, separando os pacientes em
grupos. Os fatores de risco que foram identificados em mais de um dos grupos
foram: o morador encontrar-se fora de casa entre 18 e 22 horas, presença de
matéria orgânica no quintal, criação de pássaros e lixo doméstico não recolhido
pelo serviço municipal, ou não enterrado, ou não dispensado.
Na Bahia, a LV espalhou-se rapidamente para áreas costeiras e para a
periferia das grandes cidades, em locais em que as condições ecológicas eram
consideradas inadequadas ao desenvolvimento do vetor. O que pode ser

138
 Discussão

explicado pelas drásticas mudanças ambientais produzidas pelo homem, criando

situações que propiciaram a interação dos elos epidemiológicos da LV nos
ambientes urbanos e periurbanos (SHERLOCK, 1996).
Tais relatos deixam evidente a necessidade de se repensar as medidas de
controle das leishmanioses, sendo que uma das mudanças que deve ser
realizada é a ênfase no manejo ambiental. Apesar dessa estratégia de controle
ser preconizada nos Manuais de Controle da LV e da LTA, ainda é pouco utilizada
em nosso país (BRASIL 2006B, BRASIL 2007).
Conforme mostrado por GOMES (2002) no contexto da vigilância ambiental,
os indicadores se baseiam em determinantes biológicos e não biológicos. Na
subárea dos fatores de risco biológicos, levam-se em conta as características de
vetores, hospedeiros e reservatórios, sem desconsiderar os fatores do clima que
influenciam suas inter-relações. A esse quadro deve-se acrescentar a influência
do contexto social e as mudanças na organização do espaço antrópico.
A tríade clássica de controle da LV: tratamento dos casos humanos,
eutanásia de cães sorologicamente positivos para leishmanioses e uso de
inseticida para diminuir as populações de flebotomíneos vetores, pode obter
sucesso temporário, mas se ações sobre o vetor não são efetivas, o ciclo da
doença tende a seguir seu curso natural (SHERLOCK, 1996). O controle químico
por si só apresenta problemas, como a não sustentabilidade devido aos fatores
logísticos, e os altos custos (DESJEUX, 2004). As condições favoráveis de
criadouros e abrigos mantidas nos quintais aumentam o problema.
A metodologia por nós utilizada, já foi apontada por outros autores como um
dos aspectos necessários nas ações de controle das leishmanioses. CAMARGO-
NEVES et al., (2001), utilizando ferramentas de análise espacial para a vigilância
epidemiológica, mostram a necessidade de se correlacionar a densidade vetorial
com os aspectos ambientais dos peridomícilios, tais como: presença de
vegetação, raízes e troncos de árvores e matéria orgânica no solo, que
representam possíveis criadouros e abrigos para os insetos e a criação de
animais, tais como cães, galinhas e outros, que são possíveis fontes de alimentos
para as fêmeas.

139
 Discussão

A maioria dos estudos de características dos peridomicílios, ou são

descritivos, ou precisam se pautar em avaliações subjetivas. Há necessidade de
novas abordagens sobre o lugar geográfico dos acontecimentos, nos eventos
considerados no campo da saúde. Como descrito por CUTCHIN (2006) é
necessário agregar às análises os conceitos da “nova geografia” onde se
considere o lugar e os processos referentes ao mesmo, não realizando apenas
análises que sejam passíveis de generalizações.
Neste trabalho, a utilização de uma ferramenta simples, disponível na
Internet, propiciou uma análise interessante. A visualização dos entornos dos lotes
estudados permitiu a verificação da presença de áreas verdes e lotes arborizados
em todos os locais estudados, a uma distância menor do que a capacidade de
vôo relatada para os flebotomíneos. Segundo FORATINI (1973) estes insetos
possuem uma capacidade média de vôo de 500 metros e a área analisada foi um
retângulo de 375 metros por 255 metros. Este fato poderia explicar a captura de
flebotomíneos mesmo em locais que não apresentavam condições para a
ocorrência deles, como o lote 2 e 6 ( Figuras 22 e 26 ).
Nosso trabalho buscou aliar a análise dos peridomicílios com as
ferramentas de geoprocessamento disponíveis para o tratamento de nossos
dados. As análises espaciais da distribuição da fauna de flebotomíneos vetores,
em conjunto com fatores biogeográficos e os locais de ocorrência de casos
humanos e caninos de leishmanioses podem auxiliar na compreensão destes
fenômenos no espaço-tempo.
Em nossas análises, utilizamos dados da Secretaria Municipal de Saúde de
Belo Horizonte, que possui seu próprio banco de dados e sistema de localização
geográfica. Nesse aspecto, a capital mineira inova nas ações de controle de
agravos urbanos ao desenvolver seus próprios programas computacionais e
possuir eficiente sistema de geo-localização. Por essa razão, pudemos realizar o
mapeamento dos cães sorologicamente positivos para Leishmania, com uma
perda relativamente pequena.
No período de estudo, foram notificados 10 casos de leishmaniose
visceral humana na Regional, número este que pode ser considerado alto, e

140
 Discussão

caracteriza aquela região geográfica como de intensa transmissão de LV (BRASIL

2006B). Em relação aos cães sorologicamente positivos, nos anos de 2006 e
2007, foram registrados 2041 cães positivos para Leishmania sp. dos quais 1736
foram mapeados.
Ao analisarmos nossas três variáveis de estudo: casos de LV, cães
sorologicamente positivos para Leishmania sp. e presença de flebotomíneos
vetores, frente aos parâmetros altimétricos, vemos que a ocorrência de casos
humanos e caninos concentrou-se nas faixas de 750 a 850 metros de altitude.
Não ocorreram casos humanos nas faixas altimétricas abaixo de 700 metros e
acima de 901 metros. Apenas pequena porcentagem (8,5%) da classe de médias
de ocorrência até um caso de leishmaniose visceral estava na faixa abaixo de 700
metros, e 1% da classe de 1 a 2 casos ocorreu na faixa acima de 900 metros.
Como não foram realizadas coletas de insetos em todas as faixas
altimétricas, as considerações traçadas referem-se apenas aos pontos de estudo.
Para os flebotomíneos, as classes de médias de ocorrência mais altas (acima de
41) concentram-se nas faixas abaixo de 700 metros e de 701 a 750 metros, que
coincidem com os locais de coleta em áreas verdes (Figuras 7, 11 e 14). A classe
de menor média (abaixo de 10 flebotomíneos) também teve sua ocorrência
concentrada no mesmo intervalo altimétrico dos casos humanos e caninos de
leishmaniose.
Ao analisarmos a influência dos parâmetros áreas de vegetação, vilas e
favelas e áreas de influência de cursos d´água a céu aberto, na ocorrência dos
eventos de estudo, vimos que essas exercem pouca influência sobre os mesmos.
Para os casos humanos de leishmaniose visceral apenas, 16%
ocorreram em áreas de vegetação, 4% em áreas de vilas e aglomerados urbanos
e 3% em áreas de influência de cursos d’água a céu aberto. Para as classes de
médias de ocorrências de cães positivos, com relação a estes três fatores, foram
encontrados perfis muitos semelhantes ao de casos humanos. Apenas a classe
de média de ocorrência de até 1 caso de leishmaniose canina apresentou
ocorrência um pouco maior em áreas verdes (16%). Para as demais classes a
ocorrência concentrou-se fora da área ou na área de influência dos fatores

141
 Discussão

biogeográficos analisados.
Estes dados reforçam o perfil de urbanização da leishmaniose visceral,
uma vez que, a mesma está ocorrendo em locais onde as condições
classicamente relacionadas a ela não estão presentes, e demonstram a alta
correlação espacial entre os casos humanos e caninos (ALVAR et al., 2006;
AHLUWALIA et al., 2003), mas, há relatos da correlação entre áreas de vilas e
favelas e áreas de vegetação com a presença de leishmanioses no Brasil, como
descrito por WERNECK & MAGUIRE (2002) para a cidade de Teresina e por
XIMENES et al., (2006) para a cidade de Natal.
Quanto à ocorrência de flebotomíneos vetores, todas as faixas de médias
de ocorrência, apresentaram predominância fora das áreas de vilas e favelas e
das áreas de influência de cursos de d’água a céu aberto. Considerando as áreas
de vegetação, vimos que os valores de ocorrência das classes nas mesmas foram
mais expressivos, sendo que para a classe de maior média (acima de 41
flebotomíneos) 40% das ocorrências estiveram relacionadas a áreas de mata
(áreas verdes).
Como apontado por KING (2004) e referendado por SOUZA (2005), em
estudos de tal natureza é importante considerar não apenas as áreas verdes de
maior extensão (parques, restos de vegetação, e propriedades rurais), mas
também a vegetação presente nos quintais. THOMSON et al ,(1999) utilizaram a
caracterização dos tipos de solos e de espécies de plantas na construção de
mapa de risco para ocorrência de Kalazar no Sudão, e observaram que os
flebotomíneos vetores estavam associados a duas espécies vegetais da região.
Em nosso estudo a análise de geoprocessamento levou em conta
apenas as áreas verdes de maior extensão da Regional, mas a caracterização
fotográfica e a análise do entorno através de imagens de satélite (GoogleMaps)
reforçam o estabelecido por KING (2004). Conforme já descrito, a maioria dos
lotes de estudo apresentou arborização, ou lotes arborizados no entorno, o que
pode favorecer a ocorrência de flebotomíneos.
O mapa de densidade média de casos caninos mostra que, a partir das
médias geradas, houve a probabilidade de ocorrência de casos em toda a

142
 Discussão

Regional, no período de estudo. Foi possível identificar focos de ocorrência de

leishmaniose canina em 15 locais da Regional (Figura 34), em que a média de
casos esteve entre 2 a 3 casos por pixel (área de 400m2). Este mapa deixa
evidente a preocupante situação da leishmaniose canina na Regional.
Os casos humanos da LV localizaram-se nas áreas de médias de casos
caninos até 1, e de 1 a 2 casos, concentrados na segunda (70%). No período de
estudo, não foram relatados casos humanos em áreas com médias de ocorrência
de 3 casos caninos. É preciso lembrar que as áreas de análise são de apenas
400m2, ou seja, uma pequena distância pode determinar a não coincidência
destes dados, além disso, a ocorrência de um caso humano deflagra ações de
controle da LV, preconizadas pelo Ministério da Saúde e executadas pela PBH,
que podem aumentar a descoberta e notificação de cães positivos.
O planejamento anual das ações de controle da LV pela PBH é
executado através de núcleos, isto é, áreas de maior ocorrência de casos caninos
e humanos, neles são realizados o inquérito canino censitário e a borrifação de
inseticidas. Os núcleos trabalhados em um ano são definidos pela análise dos
dados do ano anterior. Este fato explica a não ocorrência de casos humanos em
áreas com médias de casos caninos entre 2 a 3 casos, o que corrobora nossos
dados.
Apenas a análise visual da sobreposição de ocorrência de casos
humanos e caninos no período de estudo na Regional, mostra que os mesmos
estão geograficamente relacionados. Apesar de aparentemente simples, a
sobreposição espacial dos dados em mapas, já permite correlacionar a ocorrência
de eventos e mesmo embasar ações mais localizadas de controle. (CAMARGO-
NEVES et al., 2001).
O padrão de ocorrência geográfica de casos humanos e caninos descrito
em nosso estudo foi muito similar ao padrão descrito para a Regional entre os
anos de 2001 e 2002 (SOUZA, 2005). As mesmas áreas de concentração de
casos humanos foram observadas, o que também é verdade para os focos de
casos caninos de leishmaniose e, além disso, o número de casos também foi
similar. Assim podemos dizer que, apesar das ações de controle realizadas, a

143
 Discussão

situação da Regional permanece preocupante. Em Belo Horizonte, a eutanásia

canina nos últimos três anos foi praticada em cerca de 79% dos cães
sorologicamente positivos para Leishmania sp., mas a rápida reposição de cães
para os mesmos ambientes, pode reduzir os efeitos desta ação.
Um exemplo disto foi descrito por ANDRADE et al., (2007), no Município
de Araçatuba, em um período de um ano, em cerca de 45% dos domicílios. Os
cães eram repostos após outro ter sido eutanasiado devido à leishmaniose. Como
o cão doméstico é o principal reservatório de L. chagasi em áreas urbanas,
considerado fonte de infecção para flebotomíneos por apresentar intenso
parasitismo cutâneo (GONTIJO & MELO 2004; MARZOCHI et al., 1994), nossos
dados reafirmam a importância dos cães na epidemiologia da LV no Município de
Belo Horizonte e a correlação deles com os casos humanos de LV.
Quanto à análise conjunta dos vetores em relação aos casos humanos e
caninos de leishmanioses, ambos se concentraram nas regiões de médias baixas
de ocorrência de vetores. É importante frisar que a distribuição dos vetores
baseou-se apenas nas coletas por nós executadas e que não abrangeram toda a
extensão da Regional, devido ao critério utilizado para escolha dos locais de
coleta. Assim esta abordagem é exploratória e não pode ser profundamente
elucidativa a este respeito.
Entretanto, uma vez que indicadores de densidade vetorial são difíceis
de obter para grandes áreas urbanas, devido à complexidade logística das coletas
de dados, que além de trabalhosas, necessitam de grande número de armadilhas,
nossos resultados são de interesse no entendimento da dinâmica de transmissão
da LV na Regional. Mesmo considerando apenas nossa área de estudo de forma
mais restrita, eles mostram a presença das três principais espécies de
flebotomíneos vetores de Leishmania sp. que ocorrem em nosso país, em
considerável extensão geográfica da Regional. Como as áreas com casos
humanos são borrifadas, nossos dados também reafirmam a ineficácia das ações
de controle, dada a importante presença de vetores nos ambientes de estudo.
Como o período entre a infecção e o desenvolvimento de sintomas e
sinais da doença em humanos e cães é longo e variável, é difícil definir uma

144
 Discussão

correlação estatística entre a densidade vetorial e as taxas de incidência da

doença (OLIVEIRA et al., 2006; SOUZA et al., 2004). Isto corrobora nossa
argumentação anterior sobre a utilidade de nossos resultados.
A análise espacial dos dados referentes à ocorrência da LV pode subsidiar
a melhoria das ações de controle dela, como mostrado por nossos resultados.
Entretanto, vale à pena considerar que, apesar da sofisticação dos Sistemas
Informativos Geográficos, que tendem a passar da análise descritiva para a
prognóstica, e que em lugar de simplesmente descrever elementos ou fatos, poder
traçar cenários, simulações de fenômenos, com base em tendências observadas
ou julgamentos de condições estabelecidas, quase sempre isso não resulta em
uma aplicação prática em saúde pública (CUTCHIN, 2006; MOURA, 2000).
Provavelmente, este quadro se deve à difícil implementação dos avanços
tecnológicos pelos órgãos executores dos sistemas públicos de saúde, o que
representa importante desafio, pelo menos no Brasil.
Uma política pública para enfrentamentos dos vários problemas, tanto
morbidade quanto mortalidade, necessita de uma base de informações confiável,
que sustente e direcione as tomadas de decisões. As novas possibilidades de uso
de bases cartográficas e dados de saúde para o geoprocessamento podem
constituir estratégias de melhoria das ações e programas para controle dos
agravos (MARINHO DE SOUZA, 2008).

145
 Considerações finais

7. Considerações finais

Afirmamos a necessidade de rever as medidas de controle atualmente

preconizadas para as leishmanioses, em especial a leishmaniose visceral nos
municípios brasileiros. Conforme mostrado por CAMARGO-NEVES et al., (2001)
apenas a execução isolada das ações de controle (eliminação de cães
sorologicamente positivos para leishmanioses e aspersão de inseticidas de efeito
residual), sem análise sistemática do impacto de tais ações, acaba por torná-las
inócuas.
Melhores condições de urbanização podem proteger as populações
contra a ocorrência de leishmanioses (OLIVEIRA et al., 2006). Grande parte da
população enfrenta problemas logísticos em relação a necessidade de tratamento
das leishmanioses, tais como: dificuldade no transporte para os centros de
tratamento, que em geral são distantes, e comunicação com os profissionais de
saúde (DESJEUX, 2004). Há de se considerar os contextos pormenorizados, uma
vez que, especialmente no meio urbano, generalizações não podem ser feitas, já
que as pessoas não são atingidas igual e linearmente pelas transformações
sociais. As metrópoles não podem ser consideradas homogeneamente
globalizadas e modernizadas. (COSTA & TEIXEIRA, 1999).
Nossos dados indicam a necessidade de estudos mais aprofundados a
respeito da ocorrência dos casos de LV, que permitam redimensionar e re-analisar
as estratégias de controle da doença atualmente empregadas, pelo menos na
Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte.
Novas estratégias de controle precisam ser elaboradas, programas
educativos serem considerados, e os próprios moradores instruídos e habilitados
a melhorar as condições ambientais de seus quintais, reduzindo as possibilidades
associadas à presença de vetores de leishmanioses (OLIVEIRA et al., 2006).
As informações apresentadas envolvem importantes características
epidemiológicas das leishmanioses na Regional Nordeste. Com os dados que
obtivemos, esperamos contribuir para a formação e divulgação de ampla base de

146
 Considerações finais

dados sobre esta endemia no município de Belo Horizonte, destinadas a subsidiar

as tomadas de decisões dos gestores públicos e dos cidadãos, de uma maneira
geral.
Mas, não responsabilizando apenas o poder público pela solução deste
problema, temos consciência de que as causas e repercussões da urbanização
desordenada, migração, aumento populacional e degradação ambiental em
diferentes regiões do país são múltiplas e complexas, tanto quanto a compreensão
do processo de adaptação de insetos vetores, aos novos ambientes antropizados
(XIMENES et al.,2007)
A organização do esforço conjunto da população, instituições acadêmicas, e
os setores público e privado da saúde é um processo de construção intricada que
envolve diversas questões. A complexidade da formação de recursos para a
Saúde é grande, sendo necessário situar, pelo menos minimamente o contexto
sócio-histórico e evolutivo, em que ela ocorre. Nossa entrada no século XXI impôs
à saúde pública a necessidade de treinamento e capacitação dos seus agentes,
para utilizar as tecnologias disponíveis e para a boa gestão político-administrativa
das instituições de saúde, públicas ou privadas. A identificação das dificuldades
técnicas e operacionais precisam se tornar uma prioridade dos órgãos de Saúde
Pública, bem como a melhoria dos seus quadros profissionais, visando o
entendimento da complexidade biológica, social, política e econômica, no controle
de doenças zoonóticas transmitidas por vetores.
A Organização Pan-Americana de Saúde (OPAS, 2008B) ao analisar a
história da Saúde mostra que esta é um conjunto de construções e significações
sobre a natureza. O grande número de fatores ambientais que afetam a saúde
humana é um indicativo da complexidade e das interações homem-meio ambiente.
A maioria dos problemas ambientais têm causas múltiplas e, como resultado,
podem ter efeitos múltiplos. Há uma relação intrínseca entre saúde, meio
ambiente e desenvolvimento. O desenvolvimento depende dos esforços de
melhorar a saúde e reduzir os riscos ambientais. Ao mesmo tempo, a melhoria da
saúde só será atingida mediante uma visão holística dos serviços de saúde, do
setor público, do setor privado, da comunidade e do indivíduo.

147
 Conclusões
“Não sou nada. Nunca serei nada.
Não posso querer ser nada. À parte
isso, tenho em mim todos os sonhos
do mundo.”
Fernando Pessoa
 Conclusões

8. Conclusões

A fauna flebotomínica da Regional Nordeste apresentou nove espécies,

entre elas importantes espécies vetoras de LV e LTA, sendo que as
espécies mais prevalentes foram L. whitmani e L. longipalpis.

A curva sazonal dos flebotomíneos teve picos de ocorrência nos meses de

dezembro, março e junho e julho, sendo que o perfil da mesma deve-se
majoritariamente a L. whitmani;

As áreas verdes (rurais) e urbanas mostraram diferença de composição

faunística tanto em riqueza, quanto em abundância de espécies de
flebotomíneos;

L. longipalpis teve a taxa de infecção natural mais alta por Leishmania

chagasi 19% e L. whitimani e L termotiphila apresentaram respectivamente
3,8% e 33,3% de taxas de infecção natural para esta espécie;

Fêmeas do complexo cortellezzi apresentaram infecção tanto por L.

braziliensis (3,2%) como Leishmania sp. (3,2%), e L. intermedia apresentou
infecção natural por Leishmania sp. (14,3%).

As técnicas de biologia molecular (reações de PCR e PCR-RFPL) utilizados

para avaliar a infecção natural dos insetos revelaram-se exeqüíveis e
práticas;

A maioria dos lotes residenciais demonstrou cuidado higiênico inadequado,

com características que podem explicar a ocorrência de flebotomíneos nas
áreas urbanas;

148
 Conclusões

Os casos humanos e caninos de leishmaniose concentraram-se nas faixas

de 750 a 850 metros de altitude, e a ocorrência de flebotomíneos vetores
concentrou-se nas faixas abaixo de 851 metros de altitude;

Os fatores biogeográficos: áreas de influência dos cursos d’água a céu

aberto, áreas de vilas e aglomerados urbanos não apresentaram grande
influência na ocorrência de casos humanos de LV, caninos de
leishmanioses e flebotomíneos vetores na Regional Nordeste, no período
de estudo;

A presença vegetação foi o fator que apresentou maiores índices de

correlação com casos humanos de LV e caninos de leishmaniose, além de
ter importante influência na ocorrência de flebotomíneos;

Nosso estudo indica a necessidade de se reavaliar as ações de controle da

LV na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte;

149
Referências Bibliográficas
 Referências bibliográficas

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164
 Adendos

10. Adendos

Ficha de caracterização do domicílio

Instruções
Ler o Consentimento Pós informado para o entrevistado
Caso o entrevistado concorde em participar, pedir que assine o Consentimento.
Deixar uma copia do Consentimento com o entrevistado

Data da entrevista: ___ / ___/___

Nome do entrevistador: ________________________________

REGIONAL NORDESTE, MUNICÍPIO DE BELO HORIZONTE/MINAS GERAIS

Ficha de caracterização do domicílio

Identificação: Codificação
(não preencher)
1. Identificação (ID) ___ ___ ___ 1. ___ ___ ___
Nome:_______________________________________________________
2. Endereço: Bairro: ____________________________________ 2. ___

Rua Avenida: __________________________________________ Nº: ____

Morador (adulto) que acompanhou o preenchimento da ficha:

______________________________________________________________

Caracterização do domicilio
3. Número de casas no lote: __ __ 3 __ __

Se houver mais de uma casa, caracterizar cada uma separadamente e anexar

as fichas de cada uma

4. Tipo de Paredes:

165
 Adendos

1- Tijolo sem reboco 4. ____

2- Tijolo com reboco
3- Madeira
4- Outros
5- Mista
9- NR
0- NS

5. Estado de conservação da casa: há presença de:

1- Mofo 5. ____
2- Rachaduras
3- Buracos
4- Infiltração

6. Tipo de teto 6 ____

1. Laje
2. Telha

7 Tipo de piso: 7 ____

1. Cerâmica,ardósia, porcelanato
2. Cimento queimado
3. Taco
4. Terra batida
5. Misto
6. Outro:________________________________________________

8. Possui banheiro? Se Não, vá para questão 10 8 ____

0. Sim

1. Não

9. Descrever o tipo do banheiro

a. Lavabo 9a ___

b. Vaso 9b ___

c. Chuveiro 9c ___

10. Possui rede de esgoto? 10

166
 Adendos

0. Sim

1. Náo

11. Tipo de esgoto: 11 ____

1- ligado à rede da Prefeitura.
2- ligado a fossa
3- Outro:___________________________________________________
9- NR
0- NS

Caracterização geral do quintal

12 Assinalar a presença de :

a. Árvores (somente se duas ou mais) 12a ____

b. Plantas no chão, em vasos ou latas 12b ____

c. Horta 12c ____

d. Monte de madeira, telha 12d ____

e. Entulhos 12e ____

f. Lixo doméstico não acondicionado 12f ____

g. Montes de folhas, troncos podres 12g ____

h. Esterco 12h ____

j. Esgoto a c[eu aberto 12i ____

j. Canais de águas pluviais 12j ____

k. Gaiolas de passarinho 12k ____

13. O que fazem com o lixo?

a. Recolhido pelo serviço municipal 13a ____

b. Colocam na caçamba 13b ____

c. Queimam 13c ____

d. Jogam perto de casa (lote vago, córrego, rio) 13d ____

e. Enterram 13e ____

167
 Adendos

14. A casa apresenta anexos ou outras construções no quintal?

14a ____

a. Canil
b. Galinheiro 14b ____

14c ____
c. Depósito
d. Chiqueiro 14d ____

e. Porão 14e ____

14f ____
f. Paiol
14g ____
g. Viveiro
14h ____
h. Outros

15. Tem animais de criação/estimação em casa? Quantos?

a. Cão - Quantos: ___ ___ 15ª ____

b. Gatos - Quantos:___ ___ 15b ____

c. Pássaros - Quantos: ___ ___ 15c ____

d.Outros: ________________ Quantos: ___ ___ 15d ____

Verificar se os cães apresentam algum sinal aparente de leishmaniose

Fotografar aqueles com algum sinal aparente de leishmaniose

168
 Adendos

Deverão ser fotografados os seguintes ambientes, se houver :

• Local onde e armazenado o lixo

• Entulhos, monte de madeira, telha

• Local com acumulo de matéria orgânica (Montes de folhas, troncos

podres, esterco)

• Local onde os cães dormem

16. Localização da casa

0. Urbana 16. ____

1. Rural – Fazenda

17. O ambiente próximo a casa apresenta:

a. Vegetação Natural 17ª ____

b. Pastagens 17b ____

c. c. Córregos 17c ____

d. d. Terrenos baldios no quarteirão 17d ____

e. Outros . Descrever:_______________________________________

Fotografar o ambiente próximo a casa:

Ambiente acima descrito, visto do portão de entrada da casa, dos fundos ou

em frente á casa

169
 Adendos

Universidade Federal de Minas Gerais

Termo de Consentimento
___________________________________________________________________________

A Universidade Federal de Minas Gerais está realizando uma pesquisa sobre

leishmanioses na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte. Algumas casas serão
visitadas e os moradores terão sua residência caracterizada, através de uma ficha e
fotografias. As informações dadas ao entrevistador, bem com as fotografias, serão confidenciais
e utilizadas apenas para pesquisa.
Os moradores têm liberdade para se recusar a participar da pesquisa ou retirar seu
consentimento a qualquer momento.

Vimos solicitar a autorização para a realização da pesquisa em sua casa. Se você

concorda, favor assinar a autorização abaixo.

Autorizo:

- caracterização de minha residência através do preenchimento de uma ficha;

- registro fotográfico do meu quintal e anexos à minha casa;

Belo Horizonte, ______/______/2007

______________________________________

Chefe da Família

____________________________________________________________________________

Projeto de Pesquisa: Estudo da Fauna Flebotomínica e de sua Infecção Natural por Leishmania
sp. na Regional Nordeste do Município de Belo Horizonte – Minas Gerais / Brasil
Pesquisadores responsáveis: Maria Norma Melo, Lara Saraiva.
Laboratório de Biologia de Leishmania Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de
Parasitologia 4º andar , bloco L4, sala: 244. Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha – Belo
Horizonte/MG CEP: 31270-901
Telefone: 3499-2969/3499-2850

COEP - Comitê de Ética em Pesquisa

Unidade Administrativa II – 2º andar – Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha – Belo
Horizonte/MG CEP: 31270-901 Telefone: 3499-4592

170
 Anexos

11. Anexos

Parecer do Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Minas

Gerais

171
 Anexos

Parecer do Comitê de Ética em Pesquisa da Secretaria Municipal de Saúde de

Belo Horizonte

172