ROTEIRO DE ESTUDO PROVA 3 - BEG 7012 – Profa Luciane e Prof.

Rafael D Rosa

- Conteúdo Teórico: Ribossomos, Retículo Endoplasmático Rugoso; Complexo

de Golgi e secreção celular; Tráfego e endereçamento de vesículas (Rabs e
SNAREs); Retículo Endoplasmático Liso, Peroxissomos, Processos de Morte
Celular

1. Comente alguns aspectos gerais sobre os ribossomos: em que tipos de células

ocorrem; qual sua localização intracelular (eucariontes) e como participam da
formação dos polirribossomos. O que se pode dizer da atividade funcional dos
polirribossomos livres e dos aderidos à membrana do RE?

- Ocorrem em células eucariontes e procariontes.

- Nos eucariontes ocorrem livres no citosol ou aderidos momentaneamente na parede
do RE durante a síntese proteica, nas mitocôndrias e também nos cloroplastos.
- Nos procariontes ocorrem livres

2. Explique a composição química e ultra-estrutural dos ribossomos de procariontes e

eucariontes.

- Diferenças dos ribossomos de procariontes e eucariontes: procarionte tem

quantidade menor de proteínas, menor peso molecular que eucarionte
- Procarionte (70S): subunidade maior (50S): formada por 2 rRNA (sendo um
deles 5S e o outro 23S) e 34 proteínas. Subunidade menor (30S): formada
por 1 rRNA (16S) e 21 proteínas. Peso molecular total: 2 500 000.
- Eficiência - Em procariontes: a cada segundo, 20 aminoácidos são
adicionados à cadeia polipeptídica (20 aa/s)
- Eucarionte (80S): subunidade maior (60S): formada por 3 rRNA (5S, 28S e
5,8S) e cerca de 49 proteínas. Subunidade menor (40S): formada por 1 rRNA
(18S) e cerca de 33 proteínas. Peso molecular total: 4 200 000.
- Eficiência - Em eucariontes a cada segundo, dois aminoácidos são
adicionados à cadeia polipeptídica (2 aa/s).

4. Porque se diz que a peptidil transferase é uma “enzima” especial? Do que é feita,
onde se localiza no ribossomo e qual sua função. Qual RNAr é responsável pela
atividade de ribozima?

- rRNA são responsáveis pela estrutura geral dos ribossomos:

- Constituem o cerne dos ribossomos
- Posicionam RNAt sobre RNAm (SUBUNIDADE MENOR)
- O RNAr 23S (procariontes) e o RNAr 28S (eucariontes) da subunidade maior
catalisam as ligações peptídicas entre os aminoácidos = função de ribozima
peptidil transferase
c. Quais as funções das proteínas que formam os ribossomos?

Elas preenchem as frestas, fornecendo estabilidade para o cerne do

ribossomo, onde se encontra a ribozima, e auxiliam a ribozima no início da
síntese de proteínas. Também auxiliam na atividade catabólica (mudanças
conformacionais)

- Localizam-se na superfície dos RNA ribossomais e preenchem frestas

- Com função de “estabilizar” o cerne do ribossomo, contendo os rRNAs
- Auxiliam na atividade catalítica, não como uma enzima → responsáveis pelas
mudanças conformacionais dos rRNA
- Auxiliam na montagem inicial dos rRNAs

d. Descreva a biogênese dos ribossomos no nucléolo)

1. Entrada de proteínas ribossomais, que são produzidas no citosol
2. Vai ocorrer a transcrição de um precursor de um RNA
3. Essas proteínas se juntam com esses precursores de RNA formando uma grande
partícula ribonucleoproteina.
4. Essa partícula vai sofrer modificações até ter duas subunidades separadas
5. Uma maior e uma menor, que quando estão montadas com suas proteínas e seus
RNAs vão sair do núcleo pelos poros nucleares, vão se encontrar no citosol para
poderem trabalhar na tradução do RNA mensageiro.

O rRNA precursor 45S é empacotado em uma grande partícula ribonucleoproteica contendo

várias proteínas ribossômicas importadas do citoplasma. Enquanto essa partícula
permanece no nucléolo, componentes selecionados são adicionados e outros descartados
conforme ela é processada em subunidades ribossômicas imaturas maiores e menores. As
duas subunidades ribossômicas atingem sua forma funcional final apenas após serem
transportadas individualmente através dos poros nucleares para o citoplasma. Lá no
citoplasma, elas podem se juntar para poderem trabalhar na tradução do RNA mensageiro,
lembrando que as subunidades não são sempre as mesmas, elas podem juntar-se com
qualquer uma, desde que sejam 1 maior e 1 menor.

- RNA mensageiro tbm foi produzido aqui no mesmo local.

- Existem 4 tipos de RNA ribossomais nos eucariontes.
- O precursor de RNA vai ser clivado em diferentes RNAs. No caso de
ribossomais de eucariontes vai ser um 18s (que vai ser incorporado na
subunidade menor) e um 5,8 s e um 28 s (que vai ser incorporado na
subunidade maior).
- Uma cópia de cada por ribossomo.

e. Qual a vantagem dos polirribossomos?

- No mesmo RNA mensageiro vai ter vários ribossomos aderidos e eles vão se
movimentando até o final próximo à cauda poli-A onde vão encontrar o códon de
 terminação onde a proteína vai ser liberada para o citosol, se ela tiver um
peptídeo-sinal ela vai ter uma localização diferente.

- O Ribossomo da região 3” pode entrar na região 5‘ e isso aumenta a eficiência de

tradução desse RNA. Um RNA mensageiro pode ser várias vezes traduzido por
vários ribossomos, a mesma proteína sendo sintetizada várias vezes. Eficiência na
síntese proteica é aumentada

- 5’ próximo ao 3’ : rápida reciclagem ribossomos→aumenta muito a eficiência da

síntese (20 seg – min); ribossomos distam entre si de 80 nucleotídeos no mRNA.

f. Onde são produzidos os ribossomos (montados e sintetizados)?

- Nucléolo - Local de síntese e montagem dos ribossomos.

- As subunidades são sintetizadas separadamente e montadas (rRNA + proteínas)
nessa região do núcleo. As proteínas que compõem os ribossomos são sintetizadas
pelos polirribossomos que são RNAs mensageiros aderidos a ribossomos (já tem uns
ribossomos prontos no citosol junto com RNAs mensageiros específicos que vão ser
traduzidos em proteínas, algumas dessas proteínas vão ter uma sinalização de
entrada no núcleo e algumas vão compor as subunidades dos ribossomos.). Sendo
assim, proteínas que formam subunidades ribossomais são sintetizadas pelos
polirribossomos livres no citosol, NÃO SÃO sintetizadas pelos RETÍCULOS
ENDOPLASMÁTICOS.

g. Uma célula pode produzir organelas do zero?

- Uma célula não pode produzir suas organelas do zero, a maioria das organelas é
produzida por organelas pré-existentes. Elas aumentam de tamanho por
incorporação de moléculas (proteínas, carboidratos…) → células se dividem.

h. Por que o papel dos ribossomos é fundamental?

- Porque são eles que realizam a síntese de proteínas, são responsáveis pela
tradução do RNA mensageiro.

I. Posso diferenciar grupos/filos de bactérias de que forma?

- Através do RNA ribossomal, fazendo um sequenciamento, pode-se determinar o
grupo de organismos presentes em uma amostra.

j. O que diferencia os ribossomos de eucariotos e procariotos?

Ambos tem a mesma estruturas e funcionam iguais.

Eucariontes: com um peso de 80 s
- Subunidade maior - com 3 rRNA
- Subunidade menor - 18 s
- Tem uma quantidade maior de proteínas

Procariontes: com um peso de 70 s

Subunidade maior - com 2 rRNA
Subundade menor - 16 s

k. Comente sobre o rRNA (maquinaria catalítica).

- É o componente primário dos ribossomos. O RNAr é uma ribozima que realiza a

síntese de proteínas nos ribossomos. O RNAr é a forma predominante de RNA;
representa cerca de 80% do RNA celular, apesar de nunca ser traduzido em
proteínas. Os ribossomos são compostos por aproximadamente 60% de RNAr e 40%
de proteínas ribossomais em massa.

rRNA são responsáveis pela estrutura geral dos ribossomos:

- Constituem o cerne dos ribossomos
- Posicionam RNAt sobre RNAm (SUBUNIDADE MENOR)
- O RNAr 23S (procariontes) e o RNAr 28S (eucariontes) da subunidade maior
catalisam as ligações peptídicas entre os aminoácidos=função de ribozima peptidil
transferase

l. Qual a localização Intracelular dos ribossomos?

- Aderidos a membrana do Retículo Endoplasmático (fazendo a tradução dos RNAs
ribossomais) temporariamente ou livres no citosol (na forma de polirribossomos).
- Localizações diferenciadas: nas mitocôndrias e nos cloroplastos, ribossomos
semelhantes aos dos procariontes.
5. Diferencie estruturalmente o Retículo Endoplasmático Liso (REL), R E Rugoso
(RER) e Complexo de Golgi. Em que tipos de células são abundantes? Qual a relação
entre RER - REL e membrana nuclear?

- Retículo Endoplasmático Liso: rede de membranas de formato tubular e

desorganizado. Ausência de ribossomos. O REL e RER se interconectam. RER e
REL são a mesma organela, porém sua organização funcional é distinta.
- Abundante em células hepáticas
- Retículo Endoplasmático Rugoso: rede de membranas intracelulares de formato
achatado e bem organizado, com ribossomos aderidos.
- Abundante em células pancreáticas
- Complexo de Golgi: pilha de cisternas achatadas e superpostas (3-10), com uma
face cis voltada para o núcleo e uma fase trans voltada para a membrana plasmática.
Ambas regiões apresentam inúmeras vesículas nas proximidades,que chegam(cis)ou
saem(trans).
- Abundante em células secretoras

2. Porque se diz que o REL é uma organela multifuncional?

- Porque ele tem várias funções a ele atribuído bem como:

- Síntese de lipídeos, Armazenamento e distribuição de Cálcio, Glicogenólise,
Biotransformação de Substâncias Hidrofóbicas, Detoxificação de substâncias
hidrofóbicas.

3. Porque se diz que o Complexo de Golgi e o REL trabalham em conjunto para

produzir glicolipídeos e glicoproteínas? E as mitocôndrias e REL trabalham em
conjunto para produzir quais moléculas? Explique dando exemplo.

- Complexo de Golgi recebe vesículas do RE: Lipídeos do REL. no c. golgi ocorre a

maturação (glicosilação começa no RE).
- As mitocôndrias e o REL trabalham juntas para converter o colesterol em hormonios
esteróides - No REL E MITOCÔNDRIAS das células intersticiais dos testículos, do
corpo lúteo dos ovários e da glândula adrenal, o colesterol é convertido em
PROGESTERONA, TESTOSTERONA, ESTRADIOL OU
DESOXICORTICOSTERONA

4. Detalhe as maneiras de ocorrer a transferência de lipídios produzidos no REL para

outras
organelas/estruturas celulares.

- Através de
1. Transporte por difusão entre as bicamadas: RE e envelope nuclear
2. Transporte vesicular : C. Golgi - endossomos, lisossomos e membrana plasmática.
3. Transporte individual: Proteínas carreadoras solúveis (proteínas trocadoras de
fosfolipídeos) → transferem um a um os fosfolipídeos para as membranas das
mitocôndrias e peroxissomos
 4. Pontos de contato: mitocôndrias, peroxissomos, endossomos, membrana plasmática

.
 Retículo Endoplasmático

a. Como é a ultraestrutura do retículo rugoso e liso?

- Visível apenas no microscópio eletrônico

Ambos são constituídos por uma rede de membranas que delimitam cavidades das mais
diversas formas. Essas cavidades podem ser chamadas de cisternas. O RE se estende a
partir do envoltório nuclear e percorre grande parte do citoplasma, formando uma rede
tridimensional de cavidades que se intercomunicam.

Retículo Endoplasmático Rugoso (RER) - apresenta ribossomos acoplados à face

citoplasmática de suas durante a síntese de proteínas, o REL não possui isso. Na maioria
das células, é constituído por lâminas achatadas dispostas paralelamente (Suas cavidades
podem apresentar- se mais ou menos dilatadas, de acordo com o estado funcional da
célula). A enzimas que atuam no RER tem sua parte ativa voltada para o lúmen. Participa da
síntese de Proteínas.

Retículo Endoplasmático Liso (REL) - rede de membranas de formato tubular e

desorganizado. Ausência de ribossomos. O REL e RER se interconectam. RER e REL
são a mesma organela, porém sua organização funcional é distinta. As enzimas que atuam
no REL tem sua parte ativa voltada para o citosol. Participa do metabolismo de Lipídios.

b. Descreva o processo de tradução dos ribossomos quando ligados ao retículo

(importante explicar: PRS, peptídeo sinal, uni/bi/multipasso).

1. Um mRNA que tem uma é reconhecido pelo ribossomo que então começa a
tradução - sintetizar a proteína nascente. A primeira parte da cadeia nascente
contém uma sequência de sinal, nos primeiros 30 ou mais aminoácidos do peptídeo
nascente estão as sequências de sinal que serão reconhecidas pela SRP. Uma vez
que o peptídeo sinal começa a ser sintetizado, a sequência sinal é reconhecida pelo
SRP.
2. No RER o peptídeo sinal faz ligação peptídica com a Partícula Reconhecedora de
Sinal (PRS), que se liga. A partir dessa ligação, a PRS muda sua conformação, para
que a subunidade maior do ribossomo também se ligue. O fator de alongamento é
bloqueado, parando a síntese proteica.
3. A outra parte da PRS se liga a um receptor de PRS (proteína transmembrana na
membrana do RER). Assim, a PRS liga o ribossomo a uma proteína translocadora. A
PRS e o receptor são liberados e a proteína transportadora ( proteína de canal) se
une ao ribossomo.
4. Com a saída da PRS, a síntese contínua. O translocador insere a cadeia
polipeptídica no lúmen e/ou membrana e a transfere através da bicamada lipídica.
5. O translocador permanece fechado até que o ribossomo tenha se ligado, mantendo a
barreira de permeabilidade da membrana do RE em todos os momentos
6. No lúmen, são enoveladas com o auxílio de chaperonas..
O que ocorre com o peptídeo sinal? : Se ele está nas extremidades da proteína, é
clivado por ação da peptidase sinal.
Se está no meio da proteína, a proteína translocadora se abre, inserindo a proteína
na membrana. (lembre: peptídeo sinal é apolar)

d) Como e porquê ocorre a inserção parcial das proteínas unipasso e bipasso? E as

multipasso?

No interior do peptídeo nascente existe uma sequência hidrofóbica ou de finalização, que

paralisa a injeção e a proteína se torna transmembrana. O peptídeo-sinal das sequências
proteicas transmembranas pode não existir na extremidade N-terminal, mas estar localizado
no meio da sequência ou na extremidade C-terminal. As proteínas transmembranas podem
ser classificadas dependendo do número de sequências hidrofóbicas determinadas
geneticamente (classes topológicas de proteínas integradas na membrana sintetizadas pelo
RER é em relação ao número de vezes que a cadeia cruza a membrana e a orientação dos
segmentos).

- Unipasso: tem uma sequência hidrofóbica (stop); a sequência sinalizadora

N-terminal é clivada; o sinal interno fica inserido pois é hidrofóbico
- Bipasso: duas sequências hidrofóbicas (start e stop) permanecendo na membrana
- Multipasso: três ou mais sequências hidrofóbicas permanecendo na membrana
[sequências start e stop alternadas]

e) Como se formam as proteínas transmembranas?

1. A síntese das proteínas transmembranas (inclusive as da MP.) ocorre na membrana

do RER.
2. No interior do peptídeo nascente existe uma sequência hidrofóbica ou de finalização,
que paralisa a injeção e a proteína se torna transmembrana.
3. As proteínas transmembranas podem ser unipasso, bipasso ou multipasso,
dependendo do número de sequências hidrofóbicas determinadas geneticamente.
4. O peptídeo sinal das sequências proteicas transmembranas pode não existir na
extremidade N-terminal, mas estar localizado no meio da seqüência ou na
extremidade C-terminal.

c. Quais as modificações que ocorrem no lúmen do RER? Simplifique o que acontece

e a importância disso.

- Glicosilação: As proteínas que possuem Asparagina no N-terminal recebem um

oligossacarídeo. Esse oligossacarídeo vem do Dolicol, que está presente na
membrana do RER. O carboidrato é transferido por meio da ação da oligossacaril
transferase.
- Importância - Retém a proteína no Retículo até que seu enovelamento esteja
completo, protege contra a degradação enzimática, média a ligação de
chaperonas.
 - Pontes de Dissulfeto (sulfetação): Formação de ligação entre dois grupos de
sulfidrila, formando um dímero (cistina) por meio da ação da dissulfeto isomerase
(uma chaperona).
- Importancia: Isso concede estabilidade para as proteínas. Além disso,
diminui a quantidade de água nessa zona, evitando a quebra de ligações da
proteína, e também mantém as proteínas juntas.

- Enovelamento correto:

d. Qual a função das chaperonas no enovelamento das proteínas?

- As chaperonas atuam proporcionando o enovelamento correto de proteínas.

Aminoácidos apolares precisam estar escondidos no centro de proteínas. Quando
alguma proteína apresenta AAs voltados para a parte externa, viram alvos das
chaperonas.
- Dois tipos de chaperonas: HSP 70 e HSP 60

e. Qual o destino de proteínas mal enoveladas? Explique

- Proteínas enoveladas inadequadamente são:

1. Retrotranslocadas ao citosol
2. Desglicosiladas
3. Marcadas com ubiquitina
4. Degradadas pelos PROTEASSOMOS

g. Qual a origem do sistema de endomembranas?

1. Uma arqueia anaeróbica ancestral perde a parede celular rígida, o que facilita a
transferência de genes.
2. A fagocitose é a digestão de outros procariotos ( bactérias e arqueias) aumentam
grandemente a transferência horizontal de genes, acelerando o processo evolutivo.
3. Membranas cercam cada vez mais o cromossomo de arqueias anaeróbicas para
protegê-lo.
4. Bactéria aeróbica incorporada intacta para viver simbioticamente como uma
promitocondria.
5. Desenvolvimento do envelope nuclear - o desenvolvimento de múltiplas mitocôndrias
fornecem energia para a evolução de sistemas de membranas adicionais e células
muito maiores.
6. Surgimento das primeiras células eucarióticas aeróbicas.

h. Qual a hipótese para a origem evolutiva do núcleo e do retículo endoplasmático?

- As membranas nucleares e o Retículo Endoplasmático podem ter evoluído pela

invaginação da membrana plasmática. É possível que em uma célula procariótica
muito antiga, a membrana plasmática, que está ligada ao DNA, tenha invaginado e,
em gerações subsequentes, formando um envelope de duas camadas circundando
 completamente o DNA. Presume-se que tal envelope por fim tenha se destacado
completamente da membrana plasmática, dando origem a um compartimento nuclear
transpassado por canais chamados de poros nucleares, que permitem a
comunicação com o citosol. Outras porções da membrana invaginada podem ter
formado o RE, o que poderia explicar por que o espaço entre as membranas
nucleares interna e externa é contínuo com o lúmen do RE.

i. O endereçamento das proteínas recém-sintetizadas depende ou não de um peptídeo

sinal?
- Cada proteína sintetizada é entregue em local ou compartimento celular específico
onde irá atuar. Proteínas com peptídeo sinal específico para o RER serão para lá
encaminhadas pela PRS (veremos adiante) e terminarão a síntese no RER.
Proteínas com peptídeos sinais específicos para mitocôndrias, peroxissomos,
cloroplastos e núcleo COMPLETAM sua síntese no citosol e são encaminhadas por
chaperonas ou importinas (núcleo).Proteínas sem peptídeo sinal são sintetizadas e
permanecem atuando no citosol.

j. Explique a síntese proteica no RER

1. RNAm codifica uma sequência= peptídeo sinal (hidrofóbico) que fica como uma alça
no poliribossomo ainda no citosol.
2. A PRS citosólica reconhece e liga-se ao peptídeo sinal e a síntese protéica é
interrompida.
3. O complexo(RNAm/ribossomo/PRS) migra para as membranas do RER e liga-se ao
receptor da PRS.
4. O translocador se aproxima e a subunidade maior do ribossomo liga-se nesse canal,
que fica contíguo com o canal ribossomal.
5. A PRS e o receptor desligam-se. A síntese protéica reinicia o peptídeo nascente
penetra no lúmen do RER.
6. O peptídeo sinal hidrofóbico fica aderido ao translocador ou à bicamada lipídica
antes de ser degradado pela peptidase sinal.

k. Qual a importância da Glicosilação N-Ligada de proteínas? E qual o propósito?

- Reter a proteína no RE até que o seu enovelamento esteja correto e protegê-la da

degradação enzimática.
- Promove o dobramento de proteínas:
- Intermediario mais solúvel, previne agregação
- Glico-código - marca a progressão do dobramento
- Medeia a ligação de proteínas as chaperonas

l. Qual a importância das pontes de dissulfeto?

- Nas células eucariontes são formadas apenas no lúmen do RER. Não se formam no
citosol
 - São encontradas na estrutura terciária das proteínas secretadas, das proteínas do
RE e do C. Golgi e nos domínios extracelulares das proteínas de membrana
- Mantêm porções da proteína juntas, tornando-a mais estável → termodinamicamente
mais estável
- Aumentam a concentração local de resíduos de aminoácidos e diminui a quantidade
de moléculas de água nessa zona→evitando a quebra das ligações e estabilizando a
estrutura secundária.

m. Por que regiões hidrofóbicas expostas das proteínas devem ficar escondidas?

- Aminoácidos apolares são responsáveis pelas regiões hidrofóbicas da proteína e

devem estar ‘escondidos’ no interior da estrutura tridimensional para que a mesma
seja corretamente enovelada.

f) Papel das chaperonas no controle da qualidade da proteína sintetizada no RER e no

citosol. Quais são as chaperonas, respectivamente.

- Hsp 70 age na fase inicial da síntese proteica, auxiliando o dobramento correto da

proteína ANTES que se desligue dos ribossomos
- Hsp 60 age tardiamente, APÓS a proteína já ter sido completamente sintetizada e
liberada do polirribossomo

l) O que existe em comum entre príons alterados, doença da vaca louca, doença de
Alzeimer e o conteúdo visto na aula sobre RER.

- Os príons alterados são proteínas dobradas incorretamente, formando grandes

agregados protéicos que precipitam na célula e causam as Encefalopatias
espongiformes (doença da vaca louca) ou pode acumular-se em placas b-amilóide
contribuindo para a Doença de Alzheimer.
- Contempla a aula sobre RER pois é nele que ocorre a síntese proteica.
8. Explique:

a) Como é feito o reconhecimento pelo Golgi das hidrolases lisossomais?

- As enzimas hidrolíticas são sintetizadas no RER e adicionadas de açúcares

marcadores nas cisternas do Complexo de Golgi.

b) Para qual região do Golgi são destinadas as glicoproteínas sintetizadas no RER e

como brotam as vesículas? Fale o papel das COPI, COPII, retrômeros e clatrinas.

c) Por qual estrutura é feito o tráfego entre o RE, membrana,

endossomo/lisossomo e o Golgi? Para cada tipo de tráfego, qual proteína de
revestimento está envolvida?

O trafego é feito a partir de vesículas, e a diferença está na proteína que

reveste esta vesícula:
COP II: Reveste vesículas que partem do RE e vão para a face cis do golgi.
Além disso, reveste as que vão da face cis – medial (entre cisternas)
COP I: Reveste vesículas que fazer processo de retroceder. Ex: proteinas que
foram endereçadas incorretamente e que precisam voltar para o RER.
CLATRINA: Reveste vesículas que partem da face trans do golgi em direção a
Membrana plasmática e/ou lisossomos/endossomos.
A face trans está encarregada de endereçar o destino das vesículas.

d) Que acabamentos são realizados nas diferentes cisternas Golgianas (cis, mediais e
trans) em proteínas? Como estas proteínas viajam de uma cisterna para outra, como
se formam as vesículas e como se fundem corretamente ao compartimento-alvo. No
que difere o brotamento das vesículas (pacote) finais na última cisterna golgiana
(região trans)?

e) Diferencie as rotas de permanência (lisossomo/endossomo/grânulos) e de secreção

(constitutiva e regulada), mediadas pelo Golgi, utilizando alguns exemplos: célula
acinosa do pâncreas, célula caliciforme do intestino, produção de lisossomos,
produção de memb. plasm./matriz extracelular.
 - SECREÇÃO CONSTITUTIVA: moléculas liberadas imediatamente após sua
síntese - Ex. colágeno pelos fibroblastos
- SECREÇÃO REGULADA: moléculas ficam estocadas em grânulos no citosol
- tipo de lisossomos especializados para serem secretadas mediante
estímulo externo - Ex.: mucina das células caliciformes, histamina pelos
basófilos/mastócitos; insulina pelas células beta…

f) O que são e o respectivo papel de Rabs e SNAREs na fusão de membranas?

Explique a sua relação com as vesículas sinápticas, o uso medicamentoso da toxina
botulínica e a ação da toxina tetânica.

- As Rabs fazem o ancoramento da vesícula a membrana-alvo e as SNAREs

aproximam, ocorre um entrelaçamento entre as v-SNARES e as t-SNARES
de tal forma que aproxime a membrana da vesícula-alvo

g) Onde se localizam as Rabs? E as SNAREs?

- Rab - são GTPases monoméricas que ciclam entre a membrana plasmática

ou endomembranas das organelas (marcadores de superfície; Rab-GTP) e o
citosol (livres; Rab-GDP);
- Rab ligadas ao GDP são INATIVAS e estão solúveis no citosol.
- Rab ligadas ao GTP são ATIVAS e estão inseridas na membrana
plasmática ou na membrana de uma vesícula ou de uma organela.
- SNAREs - São proteínas transmembranas de 2 tipos: v-SNARE (vesícula)
com as t-SNARE (compartimento-alvo).
9. Liste todas as funções do REL e explique sucintamente cada uma delas.

1. Síntese de lipídeos:
-
2. Elongação e dessaturação de ácidos graxos:
- Elongação: Adição de malonil COA no ácido palmítico. Começa no citosol e
termina no REL.
- Dessaturação: Adição de duplas ligações
3. Armazenamento e distribuição de Cálcio:
- Cálcio baixo no citosol, pois há sequestro desse cátion pelo REL por
transporte ativo. Atua na contração muscular.
4. Glicogenólise:
- Disponibiliza glicose ao sangue em períodos de jejum.
- Glut1- transporta a glicose-6-fosfato para o lúmen do REL, onde o fosfato
será retirado e a glicose por sair para o citosol. Do citosol, ela vai para fora da
célula por meio do Glut7 (células hepáticas)
5. Biotransformação de Substâncias Hidrofóbicas:
- Feita pelo citocromo p450 no REL.
- Detoxificação de substâncias hidrofóbicas. Estas enzimas usam a
transferência de elétrons para desintoxicar esteróides endógenos, compostos
carcinogênicos, drogas lipossolúveis e xenobióticos ambientais.Ocorre no
REL do fígado, rins, pulmão e pele.

CYP 450: hidroxilação/monoxigenação (via O2 ) dos compostos, tornando-os mais

hidrossolúveis e excretáveis via urina pelos rins

Oxidases (Cyp 450e citocromo c redutase) de função mista (produto pode ser
perigioso):
- Desmetilação do antitussígeno codeína se transforma em morfina no organismo
- Desmetilação do benzopireno (produto nas carnes assadas por combustão) em 5,6-
epóxido(poderoso cancerígeno

10. Explique como ocorre a síntese de um fosfolipídio, indicando quais moléculas são
necessárias.

A membrana do RE é o local de síntese de fosfolipídeos.

As enzimas que catalisam a reação estão na membrana do RE e seus sítios ativos estão
voltados para o citosol. A síntese ocorre SEMPRE na face citosólica. Os ácidos graxos são
ativados com 2 acetil-CoA. Ocorre a adição da cabeça hidrofílica que pode ser colina,
etanolamina ou serina.

Exemplo com a Fosfatidilcolina:

- É formada em 3 etapas a partir da colina + 2 ácidos graxos + 1 glicerol fosfato.
- Cada etapa é catalisada por enzimas da membrana do RE que tem seus sítios ativos
voltados para o citosol, onde são encontrados todos os metabólitos.
 - Depois do ácido graxo chegar a membrana e serem ativados pela CoA,
aciltransferases adicionam dois ácidos graxos sucessivamente ao glicerol fosfato
para produzir ácido fosfatídico.
- O ácido fosfatídico é suficientemente insolúvel em água para permanecer na
bicamada lipídica, e não pode ser extraído dela por proteínas de ligação a ácidos
graxos - Esse é o primeiro passo para que a bicamada lipídica seja aumentada.
- As etapas posteriores determinam o grupo da cabeça de uma molécula de lipídio
recém-formada e portanto, a natureza química da bicamada, porém não resultam em
crescimento líquido da membrana.
- Ao que tange o fosfolipídio do título, a colina é adicionada pela enzima
colina-fosfotransferase.

12. Por que se diz que o Complexo de Golgi e o REL trabalham em conjunto para
produzir glicolipídeos e glicoproteínas? Explique dando exemplos.

- Complexo de Golgi recebe vesículas do RE contendo proteínas e lipídeos que vão

maturar nas cisternas (cis, mediais e trans). Os glicolipídeos são produzidos em
colaboração com o C. Golgi (parte glicídica).

- REL Compartilha membranas com a face TRANS do complexo de Golgi na formação

da rede trans-Golgi (TNG) e conjuntamente com este cede membranas para a
formação de peroxissomos, lisossomos e vesículas para exportação de substâncias.
Mantêm-se próximos devido ao permanente intercâmbio de substâncias por meio de
vesículas de transferência. A face TRANS do Golgi e o retículo liso fundem-se na
formação da rede trans-Golgi (TGN).

13. Qual é a ação conjunta do REL e mitocôndrias na síntese de hormônios

esteróides?

- Gera colesterol que se converte em hormônios esteróides em colaboração com a

mitocôndria (gônadas e supra-renais).
- No REL E MITOCÔNDRIAS das células intersticiais dos testículos, do corpo lúteo
dos ovários e da glândula adrenal, o colesterol é convertido em progesterona,
testosterona, estradiol ou desoxicorticosterona.

14. Quais organelas participam da síntese do colesterol e para quais moléculas este
lipídeo serve de precursor?
- A primeira etapa ocorre no CITOSOL.
- A segunda etapa ocorre no REL.
- Já em conjunto com as mitocôndrias, o colesterol serve para virar hormônios
esteróides (sexuais, mineralcorticoides e glicocorticoides). Hormônios adrenocorticais
são produzidos no REL do córtex da supra-renal, cujo precursor também é o
colesterol.
15. Quais são as 3 maneiras dos fosfolipídeos produzidos no REL serem transferidos
para outros locais da célula? Explique cada caso.

- Transporte individual: Proteínas carreadoras solúveis (proteínas trocadoras de

fosfolipídeos) transferem um a um os fosfolipídeos para as membranas das
mitocôndrias e peroxissomos.
- Transporte intracelular: de colesterol e fosfolipídeos entre membranas.
- Pontos de contato: mitocôndrias, peroxissomos, endossomos, membrana
plasmática

16.O que é o retículo sarcoplasmático e qual seu papel na contração muscular?

Explique sucintamente.

- É o retículo endoplasmático das células musculares. É especializado no

armazenamento de íons cálcio, e quando libera esse cálcio para o citoplasma dá-se
a contração muscular (deslizamento da actina sobre a miosina). O retículo
sarcoplasmático encontra-se disposto em formato de redes a circundar um grupo de
miofilamentos. Nas células musculares esqueléticas ele funciona sequestrando íons
de cálcio do citosol, auxiliando o controle da contração muscular. O estímulo para a
contração é geralmente um impulso nervoso que se propaga pela membrana das
fibras musculares, atingindo o retículo sarcoplasmático (onde há cálcio armazenado),
que libera íons de cálcio no citoplasma. Ao entrar em contato com as miofibrilas, o
cálcio desbloqueia os sítios de ligação de actina, permitindo que se ligue à miosina,
iniciando a contração muscular. Assim que cessa o estímulo, o cálcio é bombeado
para o interior do retículo sarcoplasmático e cessa a contração muscular.

- [FIGURA DO SLIDE]
- 1. As vesículas calciformes dentro do axônio terminal liberam ACh que se
difunde através da fenda sináptica e se fixa aos receptores especializados de
ACh sobre o sarcolema.
- 2. O potencial de ação do músculo despolariza os túbulos transversos na
junção A-I do sarcômero.
- 3. A despolarização do sistema de túbulos T acarreta a liberação de Ca+
pelos sacos laterais do retículo sarcoplasmático.
- 4. Ca2+ fixa-se a troponina-tropomiosina nos filamentos de actina. Isso
elimina a inibição que impedia a combinação de actina com a miosina.
- 5. Durante a contração muscular, a actina combina-se com a miosina ATPase
para fracionar o ATP com liberação de energia. A tensão produzida pela
liberação de energia produz a movimentação das pontes cruzadas de
miosina.
- 6. O ATP une-se à ponte cruzada de miosina, rompendo a ligação
actina-miosina e permitindo que a ponte cruzada se dissocie da actina. Isso
dá origem ao deslizamento dos filamentos espessos e finos, que acarreta o
encurtamento do músculo.
 - 7. A ativação das pontes cruzadas prossegue quando a concentração de
Ca2+ continua alta (em virtude da despolarização) para inibir a ação do
complexo troponina-tropomiosina.
- 8. Quando a estimulação muscular cessa, a concentração de Ca2+ cai
rapidamente e o Ca2+ desloca-se de volta para os sacos laterais do retículo
sarcoplasmático graças ao transporte ativo que depende da hidrólise do ATP.
- 9. A remoção de Ca2+ restaura a ação inibitória de troponina-tropomiosina.
Na presença de ATP, actina e miosina continuam no estado dissociado e
relaxado.

17. Relacione a função das duas enzimas de membrana do REL respectivamente com a
glicogenólise e a detoxificação do organismo pela biotransformação de compostos
hidrofóbicos. Explique cada caso.

18. Explique porque a biotransformação de certos produtos no REL pode ser

perigosa. Exemplifique.

- A biotransformação pode ser perigosa pois pode transformar os produtos em outros

tóxicos para o organismo (nem toda biotransformação é uma detoxificação) como a
desmetilação do antitussígeno codeína, que se transforma em morfina no organismo
ou a desmetilação do benzopireno (produto nas carnes assadas por combustão) que
se transforma em 5,6-epóxido um cancerígeno.

19. Como os lipídeos produzidos no REL são transferidos para outras organelas?

1. Transporte por difusão entre as bicamadas: RE e envelope nuclear

2. Transporte vesicular: C. Golgi- endossomos, lisossomos e membrana plasmática .
3. Transporte individual: Proteínas carreadoras solúveis (proteínas trocadoras de
fosfolipídeos) → transferem um a um os fosfolipídeos para as membranas das
mitocôndrias e peroxissomos
4. Pontos de contato: mitocôndrias, peroxissomos, endossomos, membrana
plasmática.

20. Onde o REL é mais abundante?

- Hepatócitos
- Células musculares
- Células das gônadas
- Glândula supra-renal
21. Como funciona a detoxificação?

- É um processo pelo qual o REL remove substâncias hidrofóbicas convertendo as em

compostos hidrofílicos e é importante para a detoxificação de drogas e outras
substâncias químicas.

22. O que é o "abraço molecular"?

- É o processo de transferência de Cálcio e modificação de lipídios, que ocorre entre o

REL e a mitocôndria.

23. Explique a Detoxificação e a Biotransformação.

Detoxificação ocorre no REL do fígado, pulmões, rins e pele.

A biotransformação ocorre através de um grupo de proteínas pertencentes à família do
citocromo P450, estes estão na membrana do REL. O CYP450 é responsável pela
hidroxilação/monoxigenação (via O2) dos compostos, tornando-os mais hidrossolúveis e
excretáveis via urina pelos rins.

Biotransformação de moléculas tóxicas hidrofóbicas/ lipofílicas como: herbicidas,

desfolhantes (organoclorados/ fosforados), PAH (derivados de petróleo),alguns
conservantes, corantes, fármacos, dejetos industriais.

Indução do REL pelos xenobióticos: aumento de suas membranas e das

enzimas biotransformadoras – metabolização mais rápida e eficiente

24. Qual enzima é utilizada como biomarcador para poluição e o que tem haver com o
REL. O que a hiperplasia do REL significa?

- O Citocromo P450 – muito utilizado como biomarcador de poluição ambiental

(dosagem bioquímica) em vista de seu aumento em animais que vivem em
ambientes poluídos (por compostos lipofílicos principalmente). É uma proteína
abundante da membrana do REL. Estas enzimas usam a transferência de elétrons
para desintoxicar esteróides endógenos, compostos carcinogênicos, drogas
lipossolúveis e xenobióticos ambientais.
- A hiperplasia do retículo endoplasmático liso, tumefação de hepatócitos,
degranulação e vesiculação do retículo endoplasmático rugoso pode ser identificada
em animais intoxicado.
1748529. Em relação aos peroxissomos, explique:

c) Explique o duplo papel dos peroxissomos no metabolismo dos lipídeos.

d) a crucial importância da catalase na atividade antioxidante.
e) Qual o papel dos peroxissomos na degradação do etanol e metanol?
f) Quais organelas estão envolvidas no Ciclo do Glioxilato e a participação de cada uma
delas.
g) O que são plasmalogênios e sua relação com os peroxissomos?
h) Porque se diz que os peroxissomos cooperam com as mitocôndrias, cloroplasto e REL?

2789. Com relação à biogênese dos peroxissomos:

a) Quais são as duas possibilidades da biogênese dos peroxissomos? Explique

cada uma delas.
- Crescimento e divisão de peroxissomos pré-existentes por fissão binária
como observado em mitocôndrias.
- Síntese de novo: sua membrana é fornecida pelo RE e mitocôndrias; as
proteínas da membrana peroxissomal - as PMPs que são produzidas no
citosol e inseridas na membrana pelas PEX (Peroxinas que são são os
transportadores).
- Os PMPs são inseridos primeiro no retículo endoplasmático (RE) por
meio do translocon Sec61 ou do complexo GET (Getlp/Get2p/Get3p).
Posteriormente, os PMPs saem do RE para alcançar o peroxissomo.
- A maioria, dos PMPs são primeiro importados para o RE através do
translocon Sec61/SSH1 ou do complexo GET3, são classificados em
um compartimento pré-peroxissômico e brotam de maneira
dependente de Pex3/Pex19 para formam vesículas
pré-peroxissômicas. Essas vesículas podem formar peroxissomos
maduros após fusão, dependentes de Pex1/Pexó e importação de
proteínas da matriz (via de novo). A via de novo repovoa as células
com peroxissomos nos mutantes da biogênese (por exemplo,
pax34/pex194) sem a organela quando os genes correspondentes são
reintroduzidos.

b) De onde vêm as enzimas solúveis dos peroxissomos e seus componentes de

membrana?
- As enzimas estão dissolvidas dentro da matriz peroxissomal, soluveis (???)

c) O que são as peroxinas? Fale sobre duas PEX importantes que você aprendeu
na aula.
- Peroxinas (PEX): são os transportadores (solúveis citosol ou inseridos na
membrana peroxissomal) que levam as enzimas sintetizadas no citosol para
 dentro da matriz peroxissomal. No ser humano são reconhecidas em torno de
34 peroxinas que participam do processo de importação, com gasto ATP.
- Pex19: Chaperona citosólica que importa as PMPs para a membrana do RER
e peroxissomos.
- Pex5: proteína citosólica que se liga ao PTS1(peptídeo sinal com os aa (-
Ser-Lys-Leu- COO) e importa proteínas para a matriz peroxissomal.
- Síndrome de Zellweger (peroxissomos vazios) - Síndrome
cérebro-hepatorenal onde há depósitos de lipídeos no cerebelo e
também ocorre cirrose hepática. É uma doença genética autossômica
recessiva que está relacionada com a incapacidade no transporte
(mutação Pex5) de todas as enzimas para dentro do peroxissomo

d) Explique como a PEX5 pode auxiliar na importação de enzimas para os

peroxissomos? Explique o destino da PEX5 a partir da ubiquitinação após
importação de proteínas peroxissomais.

1. A Pex5 (que é uma proteína citosólica) se liga a PTS1(um dos peptídeo sinal
das enzimas peroxissomais que é responsável por sinalizar proteínas
sintetizadas no citosol para importação ao peroxissomo) e importa proteínas
para a matriz peroxissomal.
2. O complexo PEX e PTS acontece no importômetro que é um complexo de
proteínas de acoplamento localizado na membrana do peroxissomo.
3. A translocação do complexo carga-receptor através do importômero provoca
sua dissociação
4. PEX5 volta para a membrana e pode sofrer uma:
- Monoubiquitinação → vai receber 1 ubiquitina e será reciclada ao
citosol.
- Poliubiquitinação → quando o transportador ficar obsoleto, vai
receber 4 ubiquitinas para ser degradado no proteassomo.

d) Qual a relação da adrenoleucodistrofia (óleo de Lorenzo) e a importação de VLCFA

nos peroxissomos.

- A doença é caracterizada pelo acúmulo de ácidos graxos saturados de cadeia muito

longa em vários tecidos. O que ocasiona esse acúmulo desses ácidos graxos é um
problema de transporte (nas peroxinas) de VLCFA para o interior do peroxissomo (as
peroxinas são codificadas por genes PEX). É uma doença genética ligada ao
cromossomo (somente em meninos) onde ocorre a desmielinização no hemisfério
direito cerebral.

e) Qual a relação da síndrome de Zellweger e a biogênese dos peroxissomos?

 - A síndrome de Zellweger pertence a um grupo de doenças chamadas distúrbios da
biogênese do peroxissoma (DBP). As doenças são causadas por defeitos em
qualquer um dos genes PEX necessários para a formação e função normais dos
peroxissomos.
- PEX são os transportadores (solúveis citosol ou inseridos na membrana
peroxissomal) que levam as proteínas sintetizadas no citosol para o peroxissomo.
Proteínas que são essenciais para a montagem de peroxissomos. Reconhecem e
transportam proteínas citoplasmáticas que contiverem sinais de orientação para
peroxissomos (PTS). Mutações nos genes da peroxina estão associadas com vários
TRANSTORNOS PEROXISSÔMICOS.

- Resultam do metabolismo lipídico disfuncional, incluindo o acúmulo excessivo de

ácidos graxos de cadeia muito longa e ácido fitânico, e defeitos de ácidos biliares e
plasmalogênios.

f) Porque os peroxissomos estão associados ao metabolismo energético apesar de

não produzirem ATP?

- Possuem enzimas que atuam no metabolismo dos ácidos graxos, participam da

B-oxidação e como as mitocôndrias, os peroxissomos liberam acetil-CoA que vai
entrar no ciclo do Ácido Cítrico fazendo parte do metabolismo energético para
produzir ATP.

g) Porque se acreditava que eles eram organelas simbiontes?

1. PEX1 e PEX6 estão mais intimamente relacionados aos homólogos de CDC48 em

actinobactérias do que ao CDC48 localizado no RE;
2. As proteínas actinobacterianas apresentam maiores níveis de similaridade com as do
peroxissomo do que com as de outros procariotos.
3. Porém, descobriu-se que o sistema de importação de proteínas da matriz
peroxissomal compartilha semelhanças mecanísticas com o processo de degradação
do retículo endoplasmático/proteassoma, indicando uma história evolutiva comum

h) Quais as funções dos peroxissomos em células animais?

1. Catabolismo Lipídeos : ß-oxidação de ácidos graxos de cadeia muito longa (C22 a

C26) e α-oxidação de ácidos graxos de cadeias ramificadas
2. Detoxificação Celular: através da remoção de espécies reativas de Oxigênio (H2O2,
etc)
3. Síntese de plasmalogênios: catalisam a primeira reação destes fosfolipídeos da
bainha de mielina
4. Síntese de ácidos biliares
i) Explique as funções de Peroxissomos e Glioxissomos nas plantas.

- Peroxissomos participam da fotorrespiração onde, em presença de luz, vegetais

consomem o O2 e produzem CO2 (inverso da fotossíntese) – não está acoplado à
síntese de ATP.
- Glioxissomos realizam a β-oxidação dos ácidos graxos e produzem Acetil CoA.
Durante o processo forma-se H2O2 que é decomposto pela catalase.

j) Quais funções os peroxissomos compartilham com mitocôndrias e REL?

- Oxidação, organelas oxidativas (relação entre a mitocôndria e o peroxissomo)

- REL faz alongamento da cadeia de ácidos graxos (aumenta a cadeia), alguns deles
podem migrar para os peroxissomos onde inicia a B-oxidação. Ácidos graxos
menores eles vão para mitocôndria terminar a B-oxidação. - FALA DA PROF.

- Nas células animais, os ácidos graxos são oxidados tanto nos peroxissomos como
nas mitocôndrias. Os peroxissomos também estão envolvidos na biossíntese dos
lipídios. - LIVRO DO EAD

k) Quais enzimas estão presentes na matriz dos peroxissomos?

- Sua matriz contém enzimas oxidativas do tipo OXIDASES e CATALASES

- Oxidases utilizam o oxigênio molecular para remover átomos de H+ de vários
substratos, produzindo peróxido de Hidrogênio (H2O2) que é imediatamente
degradado por outra enzima proximal, a catalase.

l) Por que os peroxissomos diferem das mitocôndrias e cloroplastos?

- Diferem-se das mitocôndrias e cloroplastos por não possuírem ácidos nucléicos, nem
ribossomos. E possuem membrana única.

m) O que acontece com os VLCFA (ácidos graxos de cadeia longa) e onde os

produtos da ß-oxidação dos VLCFA são utilizados?

- A ß-oxidação de ácidos graxos de cadeias muito longas ou VLCFA (C22a C26) sofre
um encurtamento e depois a oxidação desses ácidos graxos é completada nas
mitocôndrias. São utilizados para a biossíntese do colesterol, ácidos biliares e outros
compostos.

n) Quais os substratos das oxidases?

- Ácido úrico, uratos, oxaloacetato, purinas, D-aminoácidos de bactérias, ácidos

graxos de cadeia muito longa (>22C), fenóis, etanol, metanol, formaldeído, ácido
fórmico.
o) Por que o peróxido de hidrogênio precisa ser degradado pela catalase?

- Ele é é tóxico e deve ser imediatamente peroxidado pela catalase (fígado e rins) pois
difunde rapidamente pela membrana do peroxissomo e pode provocar estresse
oxidativo com alto potencial de dano celular (lesão DNA e membranas celulares ricas
em lipídios) provocando uma peroxidação de membrana o que é letal para a célula.

p) Explique o processo de detoxificação do etanol.

- [No citosol das células hepáticas] - O primeiro passo no metabolismo do álcool é a

oxidação do acetaldeído pela enzima denominada álcool desidrogenase (ADH). Esta
enzima converte o álcool em acetaldeído que, mesmo em pequenas concentrações,
é tóxico para o organismo.
- [Nas mitocôndrias] - A enzima aldeído desidrogenase (ALDH), por sua vez,
converte o acetaldeído em acetato.
- 25% do etanol ingerido é detoxificado pelas catalases dos peroxissomos hepáticos e
renais.
- E parte desse etanol vai ser metabolizado pelo citocromo e transforma o álcool em
acetaldeído pela ação do citocromo P450 2E1 presentes na membrana do REL.