Dhaka Univ. J. Biol. Sci.

 19(2): 157‐164, 2010 (July) 

ANTIDIABETIC EFFECT OF SYZYGIUM CUMINI L. SEED  
ON TYPE 2 DIABETIC RATS 
 

ZAIED AHMED BHUYAN, BEGUM ROKEYA, NURUZZAMAN MASUM1,  
SHAHDAT HOSSAIN2 AND ISHTIAQ MAHMUD1* 
 

Department of Immunology, Bangladesh Institute of Research and Rehabilitation in Diabetes, 
Endocrine and Metabolic Disorders (BIRDEM), 122 Kazi Nazrul Islam Avenue,  
Dhaka‐1000, Bangladesh 
 

Key words: Syzygium cumini, Diabetes, Cholesterol 
Abstract 
          The  present  study  evaluates  the  effects  of  powder  and  ethanol  extract  of 
Syzygium  cumini  seeds  (1.25/  kg  bw)  treatment  for  21  days  on  glucose 
homeostasis,  serum  insulin,  serum  lipids  and  liver  glycogen  content  in 
streptozotocin (STZ) induced type 2 diabetic rats. The administration of S. cumini 
seed powder and ethanol extract for 21 days to type 2 diabetic rats significantly 
reduced the fasting glucose level although it did not alter the blood glucose level 
after  glucose  challenge.  The  insulin  level  and  liver  glycogen  content  also  were 
not  changed  after  dietary  administration  of  Syzygium  cumin  powder  or  ethanol 
extract.  In  addition  to  hypoglycemic  effect,  the  Syzygium  cumini  significantly 
ameliorated  the  lipid  profile.  The  plasma  LDL‐cholesterol  level,  an  atherogenic 
lipid,  significantly  (p  <  0.01)  decreased  with  a  concurrent  increase  (p  <  0.01)  in 
the  plasma  HDL‐cholesterol  level,  thus  suggesting  dietary  Syzygium  cumini 
could be used as one of the alternatives in the treatment of diabetes. 
 

Introduction 
  Diabetes  mellitus  is  one  of  the  most  common  endocrine  and  metabolic  disorders 
affecting  mankind  all  over  the  world.  People  of  the  developing  countries  are  the  worst 
victims  of  such  life‐long  diseases. An increasing  world‐wide  prevalence  of  diabetes  has 
been acknowledged by several authorities and today the situation in several areas of the 
Third World is considered an epidemia.(1) Diabetes mellitus is ranked seventh among the 
leading causes of death and third when it’s fatal complications are taken into account.(2)  
  Traditional preparations of plant sources are widely used almost everywhere in 
the  world  to  treat  this  disease.(3‐5)  Recently,  there  is  an  increasing  trend  by  diabetic 
patients  to  use  the  natural  products  with  antidiabetic  activity,  due  to  the  side  effects 
associated  with  the  use  of  insulin  and  oral  hypoglycemic  agents.(6‐8)  Therefore,  plant 
materials are considered to be the alternative sources for finding out new leads for hypo‐ 
/antihyperglycemic  agents.   Following  a  standardized  procedure,(9)  antidiabetic   plant  
 
*Corresponding author. 1Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Dhaka,
 
Dhaka‐1000,  Bangladesh.  2Department  of  Biochemistry  and  Molecular  Biology,  University  of
 
Jahangirnagar, Savar, Dhaka, Bangladesh. 
158  BHUYAN et al. 

materials  are  being  screened  in  BIRDEM  for  their  hypoglycemic  properties.  As  a 
continuation of this screening process, S. cumini has been tested on type 2 diabetic rats. 
  The  seed  and  bark  of  S.  cumini  has  been  reported  to  have  hypoglycemic  effect  by 
many  investigators in  type  1  diabetic model  rats.  (10‐13)  However,  majority  of  the  human 
diabetic  population  are  of  type  2  in  nature.  So  the  present  study  was  undertaken  to 
evaluate  the  hypo‐  and  antihyperglycemic  effects  of  S.  cumini  seed  in  type  2  diabetic 
model rats and to find out their possible mode(s) of antidiabetic action. 
 

Method and Materials 
  Syzygium  cumini  L.  fruits  were  bought  from  the  market  in  the  month  of  May,  2007 
and the seeds were removed. The seeds were washed carefully and dried in sunlight. The 
dried  seeds  were  then  grinded  to  make  a  fine  powder.  Seeds  (950  g)  dried  in  sunlight 
yielded 800 g powder. Seven hundred g of dry seed powder were dissolved in 1500 ml 
ethanol  (80%  ethanol).  The  suspension  was  filtered  with  thin  and  clean  cloth  and  then 
filtered by filter paper. The suspension was dried by BUCHI Rota vapor R‐114, connected 
with BUCHI water bath B‐480 at 70ºC and 58 g dried ethanol extract was obtained. Both 
S.  cumini  powder  and  ethanol  extract  were  kept  in  the  refrigerator  and  utilized  for 
biological screening at BIRDEM. 
  Long‐Evans  rats  bred  in  BIRDEM  animal  house  were  used  in  the  study.  Type  II 
diabetes  was  induced  by  a  single  intraperitoneal  injection  of  streptozotocin    (STZ,  at  a 
dose of 90 mg/kg bw) in citrate buffer (10 ml) to the 48 hr old rat pups.(14) Experiments 
were  carried  out  3  months  later  after  performing  an  oral  glucose  tolerance  test.  The 
female rats were taken to carry out the experiment. 
  A total number of 32 rats were equally divided into four groups: (1) water control, (2) 
glibenclamide  treated,  (3)  S.  cumini  seed  powder  fed  group,  (4)  ethanol  extract  of  S. 
cumini seed powder fed group.  
  Acute study in terms of glucose overload was performed at the begining and on 21st 
day  of  the  experiment.  In  acute  study,  the  rats  were  fasted  for  overnight,  fed  seed 
powder  and/or  ethanol  extract  of  seed  powder  (1.25  g/kg  BW),  and  then  glucose  at  an 
acute  dose  of    2.5  g/kg  BW  dissolved  in  10  ml  water  were  intubated  by  gastric  tube. 
Afterwards,  blood  was  drawn  at  0,  30  and  75  min  of  glucose  overload  to  evaluate  the 
effect  of  Syzygium  cumini  against  controls  on  the  blood  sugar  level.  The  dietary 
administrations of Syzygium cumini  to all these rats were continued until the end of  the 
experiment  for  determination  of  chronic  effect  of  Syzygium  cumini    on  type  2  diabetic 
female rats. 
  In  chronic  studies,  the  rats  were  fed  with  a  single  dose  per  day  for  21  consecutive 
days with the seed powder and ethanol extract (1.25 g/kg bw dissolved in 10 ml water) 
and glibenclamide (5 mg/kg bw) for positive control rats. The rats were sacrificed on the 
22nd day by decapitation and blood was collected, centrifused and serum was separated 
ANTIDIABETIC EFFECT OF SYZYGIUM CUMINI SEED  159 

for biochemical analyses. Liver was removed and washed with ice‐cold saline, patted dry 
and taken for glycogen estimation. 
  Serum glucose levels were estimated by glucose oxidase (GOD‐POD) method using a 
commercial  kit  (Boehringer‐Mannheim  GmbH),  serum  insulin  level  by  Elisa,(16)  hepatic 
glycogen  content  estimation  from  rat  liver  by  anthrone  solution,(17)  serum  lipid  profile 
(serum  triglyceride,  total  cholesterol,  high  density  lipoprotein  and  low  density 
lipoprotein) by enzymatic‐colorimetric method. 
  Data from the experiments were presented as mean ± standard deviation. Statistical 
analysis was done by using the Statistical Package for Social Science (SPSS) software for 
windows  version  12  (SPSS  Inc.,  Chicago,  Illinois,  USA).  Analysis  of  variance  (ANOVA, 
Bonferroni  Post  Test)  was  done  to  see  any  difference  between  the  groups.  The  level  of 
significance was set at p ≤ 0.05. 
 

Results and Discussion 
  Injection  of  streptozotocin  to  48  hr  old  pups  (producing  type  2  diabetic  models) 
resulted  in  diabetes  characterized  by  hyperglycemia  (fasting  blood  glucose  level  was 
found to be 7.54 ‐ 8.74 mmol/l) after three months of injection.  
  Effect  of  seed  powder  and  ethanol  extract  on  fasting  serum  glucose  level  of  type  2 
rats is depicted in Table 1. It is seen from the Table 1 that fasting glucose level was almost 
similar on 1st day (Fasting glucose mmol/l, 8.71 ± 0.45, 8.01 ± 1.64, 7.54 ± 0.78 and 8.47 ± 
1.66  for  water  control,  glibenclamide,  seed  powder  and  extract  treated  group, 
respectively).  After  15  days  of  feeding,  fasting  glucose  level  decreased  significantly  in 
glibenclamide as well as  S. cumini  treated  groups (4.94 ± 1.29, 5.56 ± 1.30 and 5.36 ± 1.04,  
 
Table 1.  Chronic effect of S. cumini seed powder and ethanol extract on fasting glucose  
      level of type 2 diabetic rats. 
 

Group  Glu‐1st  day  Glu‐15th  day  Glu‐22nd  day 

(mmol/l)  (mmol/l)  (mmol/l) 
Water control (n = 8)  8.74 ± 0.45  8.21 ± 1.93  8.01 ± 0.72 
Glibenclamide  (n = 8)  8.01 ± 1.64  4.94 ± 1.29**  4.94 ± 1.65** 
 Seed powder  (n = 8)  7.54 ± 0.78  5.56 ± 1.30**  5.34 ± 1.03* 
Extract (n = 8)  8.47 ± 1.66  5.36 ± 1.04*  5.22 ± 0.94** 
 

Data are presented as mean ± Sd and compared using paired ‘t’ test. *p< 0.01, ** p < 0.001.   
Glu = Serum glucose level; n= Number of rats. 
 

respectively;  p  <  0.001,  p  <  0.001  and  p  <  0.01,  respectively).  However,  in  the  control 
group, no change was noticed in the fasting level on day 15. As the treatment continued 
for 21 days, the fasting glucose levels were found to be further decreased in other groups. 
On the 22nd day, fasting glucose was mean ± Sd; mmol/l: 4.94 ± 1.65, 5.34 ± 1.03 and 5.22 
160  BHUYAN et al. 

± 0.94 in glibenclamide, powder and ethanol extract groups, respectively; p < 0.001, p < 
0.01 and p < 0.01. As before, no significant change was found in control group. 
        Acute  effect  of  seed  powder  and  ethanol  extract  on  serum  glucose  level  has  been 
presented in Table 2. From Table 2, it is evident that serum glucose level sharply rises at 
30 min following glucose load but there was no tendency to fall glucose level at 75 min 
interval  by  powder  and  ethanol extract  of  S.  cumini seed. Again, when  the  oral  glucose 
tolerance  test  (OGTT)  was  performed  on  21st  day  of  experiment,  similar  results  were 
found. Therefore, it seems that S. cumini seed does not improve oral glucose tolerance. 
 

Table 2.  Effect of S. cumini seed powder and ethanol extract on blood glucose levels of type 2 
diabetic rats when fed simultaneously with glucose load on 1st day and 21st day. 
 

  Group  Glu‐0 min  Glu‐30 min  Glu‐75 min 

(mmol/l)  (mmol/l)  (mmol/l) 
Day‐1  Water control (n = 8)  8.74 ± 0.45  15.97 ± 1.48  15.37 ± 3.64 
Glibenclamide (n = 8)  8.01 ± 1.64  15.44 ± 1.91  11.45 ± 3.88 
Seed powder (n = 8)  7.54 ± 0.78  14.55 ± 2.16  12.25 ± 2.40 
Extract (n = 8)  8.47 ± 1.66  14.24 ± 2.77  14.10 ± 3.00 
Day‐21  Water control ( n = 8)  8.11 ± 0.93  14.82 ± 2.28  15.80 ± 2.74 
Glibenclamide (n = 8)  4.89 ± 1.18  16.11 ± 3.59  15.65 ± 3.69 
Seed powder (n = 8)  5.63 ± 0.74  13.20 ± 3.91  13.56 ± 3.29 
Extract (n = 8)  5.15 ±  0.96  11.90 ± 0.71  11.75 ± 2.84 
 

Results are mean ± SD. ANOVA (Bonferroni test) was performed as the test of significance.  
Glu = Serum glucose level; n = Number of rats, min = Minute. 
 

          Change in body weight of type 2 rats during the experimental period is presented 
in  Table  3.  As  it  is  seen  from  the  Table  3,  there  was  a  reduction  in  body  weight  of  all 
groups  of  rats.  The  reduction  was  not  statistically  significant  when  compared  with  the 
initial value (1st day value) with the exception of ethanol extract treated group. After 21 
days of chronic feeding, the ethanol extract group showed a significant weight reduction 
when compared with the baseline value (p < 0.01). The weight reduction might have been 
caused due to diabetes and general decrease in food intake associated with interventional 
stress. 
       The effect of seed powder and ethanol extract of S. cumini seeds on serum insulin and 
liver glycogen content is presented in Table 4. It is evident from the Table 4 that S. cumini 
seed powder and ethanol extract has no significant effect on the serum insulin levels and 
hepatic glycogen content (Table  4) of type 2 rats after 21 days of consecutive feeding. 
  The  effect  of  different  treatment  on  the  lipid  profile  is  shown  in  Fig.  1.  Chronic 
feeding  of  S.  cumini  powder  and  ethanol  extract  did  not  significantly  change  the  total 
cholesterol  and  triglyceride  levels  in  type  2  rats.  The  beneficial  HDL‐cholesterol  level 
increased  in  all  the  groups  after  21  days  of  chronic  experiment.  However  this  increase 
ANTIDIABETIC EFFECT OF SYZYGIUM CUMINI SEED  161 

was  more  significant  (p  <  0.01)  in  seed  powder  treated  group.  A  lowering  of  LDL‐
cholesterol level was observed in all the groups but the lowering was more significant (p 
< 0.001) in seed powder and extract fed groups. 
 
Table 3. Chronic effect of S. cumini seed powder and ethanol extract on body weight (BW) of 
type 2 diabetic model rats. 
 

Group  BW‐ 1st day    BW‐ 7th day   BW‐ 14th day  BW‐ 21st day 

(gm)          (gm)  (gm)  (gm) 
Water control ( n = 8)  207 ± 15  201 ± 19  209 ± 14  199 ± 16 
Glibenclamide (n = 8)  206 ± 24  207 ± 24  207 ± 22  199 ± 23 
Seed powder (n = 8)  203 ± 20  201± 16  196 ± 15  194 ± 20 
Extract (n = 8)  203 ± 23  201 ± 21  194 ± 25  185 ± 27** 
 

Results are mean ± Sd and compared using paired t test,  ** p < 0.01, n = Number of rats. 
 
Table 4. Chronic effect of S. cumini seed powder and ethanol extract on serum insulin level and 
liver glycogen content of type 2 diabetic rats. 
 

Group  Insulin_ 1st  day  Insulin _22nd  day   Glycogen_22nd day 

(ng/ml)   (ng/ml)           (mg/gm) 
Water control  ( n = 8)  0.42 ± 0.05  0.39 ± 0.04  16 ± 6 
Glibenclamide ( n = 8)  0.43 ± 0.19  0.46 ± 0.09  16 ± 7 
Seed powder (n = 8)  0.41 ± 0.50  0.39 ± 0.02  16 ± 5 
Extract (n = 8)  0.44 ± 0.05  0.39 ± 0.03  16 ± 7 
 

Results are mean ± Sd and compared using paired t test,  n = Number of rats. 
 

  Conventional  treatment  for  diabetes  involving  the  use  of  insulin,  sulphonylureas 
and  biguanides  carry  several  deficiencies  and  limitations.  In  the  search  for  new 
hypoglycemic compounds, it would be imprudent to ignore the traditional treatment of 
diabetes,  which  continues  to  provide  the  mainstay  of  therapy  in  region  of  the  world 
where  conventional  drugs  are  not  readily  available  or  cannot  be  afforded.  From  this 
point  of  view,  screening  of  plant  materials  for  hypoglycemic  properties  is  important 
because it might provide a new lead(s) as antidiabetic agent(s).  
  The  present  study  was  undertaken  to  assess  the  antidiabetic  effect  (acute  and 
chronic) and to investigate the underlying mechanism of action of S. cumini seed powder 
and ethanol extract in type 2 diabetic model rats. Glibenclamide was used as a standard 
drug for type 2 diabetic rats. Thus administration of glibenclamide to type 2 rats almost 
normalizes serum glucose level. 
  In acute study, as no significant antihyperglycemic activity was observed following 
glucose load which means that extracts may not have any effect in the intestinal glucose 
162  BHUYAN et al. 

absorption. But after 21 days of chronic feeding, both the plant materials have significant 
reduction in the fasting glucose levels compared with the control group.  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig  1. The effect of S. cumini powder and ethanol extract on the lipid profile. 
 

  Type 2 model rats which were made diabetic by the single intraperitoneal injection 
of streptozotocin (STZ). The STZ has been known to induce free radical production and 
cause tissue injury.(18) The pancreas is very much susceptible to the action of STZ induced 
free radical damage. The ethanol extract of S. cumini seed coat was evaluated recently for 
its  potent  antioxidant  potential  against  DPPH•,  OH•,  O2•−  and  lipid  peroxidation  and 
high  degree  of  phenolic  and  anthocyanins  content,(19)  it  significantly  decreased  free 
radical  damage  and  hepatic  lipid  peroxidation.  Therefore,  the  antidiabetic  effect  of  S. 
cumini  seed  powder  and  ethanol  extract  in  present  studies,  which  was  found  after  21 
days  of  consecutive  feeding,  may  be  due  to  increased  insulin  sensitivity.  Insulin 
sensitivity  can  be  increased  by  affecting  these  mechanisms.  The  extracts  may  also 
improve insulin sensitivity by reducing glucotoxicity which is one of the causes of insulin 
resistance in type 2 rats. 
  Apart from the blood sugar lowering effect, beneficial changes in lipid profile have 
also  been  observed.  Abnormalities  in  lipid  profile  are  one  of  the  most  common 
complications  in  diabetes  mellitus,  which  is  found  in  about  40%  of  diabetics.  Since 
dyslipidemia  plays  an  important  role  in  the  pathogenesis  of  macro‐  and  microvascular 
complications  of  diabetes,  hence,  improvement  in  the  lipid  abnormalities  must  play 
ANTIDIABETIC EFFECT OF SYZYGIUM CUMINI SEED  163 

beneficial  role  in  inhibiting  the  complications  of  diabetes.  In  the  present  study,  anti‐
hyperlipidemic efficacy of S. cumini seed powder and ethanol extract was evaluated and 
the efficacy was compared with glibenclamide. The results showed that seed powder and 
extract  after  21  days  of  chronic  feeding  significantly  increased  serum  HDL‐cholesterol 
and  decreased  LDL‐cholesterol.  Thus,  S.  cumini  seed  powder  and  ethanol  extract  have 
potential antihyperlipidemic effect in type 2 diabetic model rats.(20) 
  It  may  be  concluded  that,  Syzygium  cumini  seed  powder  and  its  ethanol  extract 
possesses  chronic  antidiabetic  effect  in  type  2  diabetic  rats.  In  addition  to  this,  they 
improved  lipidemic  status  which  is  characterized  by  improving  HDL‐cholesterol  and 
significantly  decreasing  atherogenic  lipid  as  LDL‐cholesterol.  Therefore,  seed  powder 
and  extract  may  be  useful  in  the  treatment  of  type  2  diabetes.  Further  studies  are 
required to identify the underlying mechanism of the antidiabetic properties of S. cumini 
seed. 
 

References 
1. Zimmet  P  and  P  Lefebre    1996.  The  global  NIDDM  epidemic.  Treating  the  disease  and 
ignoring the symptom. Diabetologia. 39: 1247‐1248. 
2. Trivedi NA, B Majumder, JD Bhatt and KG Hemavathi 2004. Effect of Shilajit on blood glucose 
and lipid profile in alloxan‐induced diabetic rats, Indian J. Pharmacol. 36: 373‐76. 
3. Bailey  CJ  and  C  Day  1988.  Traditional  Plant  medicines  as  treatments  for  Diabetes.  Diabetes 
Care. 12: 553‐564. 
4. Irene  MV  and  LAM  Rose  2006.    Comparative  anti‐hyperglycemic  potentials  of  medicinal 
plants. J. Ethnopharmacol.  104: 129‐131. 
5. Mahabir  D  and  MC  Gulliford  1997.  Use  of  medicinal  plants  for  diabetes  in  Trinidad  and 
Tobago. Rev. Panam Salud Publica. 3: 174‐179. 
6. Holman  RR  and  RC  Turner  1991.  Oral  agents  and  insulin  in  the  treatment  of  NIDDM.  In: 
Pickup J, Williams G (Eds.), Textbook of Diabetes, Blackwell, Oxford, pp. 467‐469. 
7. Kameswara  RB,  R  Giri,  MM  Kesavulu  and  CH  Apparao      1997.  Herbal  Medicine:  In  the 
management of diabetes mellitus. Manphar Vaidhya Patrika 1(4‐5): 33‐35. 
8. Prout  TE  1974.  In:  WJ  Malaisse  WJ,  J  Pirar,  (Eds),  Proceedings  8th  Congress  of  International 
Diabetes Federation, Excerpta Medica, Amsterdam, 162. 
9. Ali L, AKM Khan, MIR Mamun, M Mosihuzzaman, N Nahar, M Nur‐e‐Alam and B Rokeya 
1993. Studies on hypoglycemic effects of fruit pulp, seed and whole plants of Momordica 
charantia on normal and diabetic model rats. Planta Medica.  59: 408‐412. 
10. Ashok  P  and  MMH  Daradka  2001.  Hypoglycemic  response  of  Syzygium  cumini  seed  extract 
(50% ethanol) on diabetic mice. Pak. J. Nutr. 5(6): 573‐576. 
11.  Nahar N, B Rokeya, L Ali, Z Hassan, M Nur‐e‐Alam, NS Choudhury, AKA Khan      and M 
Mosihuzzaman  2000.  Effect  of  three  medicinal  plants  on  blood  glucose  levels  in 
nondiabetic and diabetic model rats. Diabetes Res. 35: 41‐49. 
12. Pandey  M  and  A  Khan    2002.  To  study  the  effect  of  fasting  blood  glucose  and  glucose 
tolerance in normal and alloxan diabetic rats by using the seeds of S. cumini. Indian J. 
Expt. Biol. 40: 1178‐1182. 
164  BHUYAN et al. 

13. Sridhar  SB,  UD  Sheetal,  MRSM  Pai  and  MS  Shastri  2005.  Preclinical  evaluation  of  the 
antidiabetic  effect  of  Eugenia  jambolana  (synonym  of  S.  cumini)  seed  powder  in 
streptozotocin‐diabetic rats.  Braz. J. Med. Bio. Res. 38(3):  463‐468. 
14. Bonner‐Weir  S,  DF  Trent,  RN  Honey  and  GC  Weir  1981.  Responses  of  neonatal  rat  islets  on 
streptozotocin‐limited beta cell regeneration and hyperglycemia. Diabetes  30: 64‐69.  
15. Mamun  MIR,  B  Rokeya,  NS  Choudhury,  M  Muniruzzaman,  N  Nahar,  MU  Ahmed,  M 
Mosihuzzaman,  L  Ali,  AKA  Khan  and  SH  Khan  2001.  Anti‐hyperglycemic  effect  of 
Pterospermum acerifolium Wild and Pterospermum semisagittatum Hum. Diabetes Res. 35: 
163‐70. 
16. Kratzsch  J,  W  Ackermann,  H  Leliacker,  W  Berch  and  E  Keller  1990.  A  sensitive  sandwich 
enzyme  immunoassay  of  insulin  on  microtitre  plates.  Expt.  Clin.  Endocrinol.    95:  229‐
236.   
17. Hassid  WZ  and  S  Abraham  1957.  Clinical  procedures  for  analysis  of  polysaccharides.  In: 
Methods in Enzymology, Academic press, 3, pp. 34‐36. 
18. Mamdouh MA and MA Abdel‐Raheim 2003. Comparative Biochemistry and Physiology‐Part 
A. Mole. Integr. Physiol. 135: 539‐547. 
19. Benherlal PS and C Arumughan 2007 . Chemical composition and in vitro antioxidant studies 
on Syzygium cumini fruit.  J. Sci. Food Agri. 87 (14): 2560‐2569. 
20. Ravi  K,  S  Rajasekaran  and  S  Subramanian.  2005.  Anti  hyperlipidemic  effect  of  Eugenia 
jambolana  Syzygium  cumini  seed  kernel  on  streptozotocin‐induced  diabetes  in  rats.  J. 
Food Che. Toxicol. 43: 1433‐1439. 
 
(Manuscript received on 25 October, 2009; revised on 6 March, 2010)