UNIVERSIDAD AUTNOMA DE AGUASCALIENTES

CENTRO DE CIENCIAS BSICAS

DEPARTAMENTO DE QUMICA

PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRCTICA 3: FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS

MEDICINA

CMM

09 DE SEPTIEMBRE DE 2015

OBJETIVOS

El alumno efectuar e interpretar la prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos frente

a soluciones salinas hipotnicas.

INTRODUCCIN
El presente trabajo realizado para el Laboratorio de Bioqumica se presenta a modo de pre-reporte
y antecedente a la prctica nmero 3 titulada Fragilidad osmtica de los eritrocitos, que se llevar
a cabo a la hora del laboratorio.
Esta prctica tiene como cometido que conozcamos el trmino de fragilidad osmtica y que
realicemos dicha prueba en los eritrocitos de varias muestras sanguneas, para as analizar e
interpretar el cmo reaccionan dichos elementos del plasma sanguneo frente a soluciones salinas
hipotnicas.
El tejido sanguneo o sangre, es una variedad especializada de tejido conectivo de consistencia
lquida que forma parte del sistema cardiovascular. Es un lquido ligeramente alcalino que
constituye cerca del 8% del peso corporal. [] Durante toda la vida est en circulacin a travs de
los vasos sanguneos por la accin de bombeo del corazn. De esta manera, acta como un medio
de transporte que lleva a los tejidos las sustancias esenciales para sus procesos vitales y que
recoge de estos los desechos del metabolismo celular. El 55% de la sangre est formado por un
lquido, la matriz extracelular, que recibe el nombre de plasma en el que estn en suspensin los
elementos formes: eritrocitos (43%), leucocitos y plaquetas 2% (2).
Los eritrocitos, que adems son conocidos como glbulos rojos, son clulas anucleadas que
conservan en su interior a las enzimas de la gliclisis y contienen a la hemoglobina (protena del
torrente sanguneo para transporte de oxgeno), llevando el oxgeno a las clulas y tejidos del
cuerpo dada adems su capacidad de atravesar los capilares ya que cuentan con una membrana
flexible.
Los eritrocitos varan entre s en su tamao (micro, normo y macrocitos), forma (esferocitos,
bicncavos, en diana), etc., motivo por el cual presentan distinta resistencia a cambios en la
presin osmtica del medio que los rodea (5).
Es as que al colocar a los eritrocitos en una solucin hipertnica (aquella que tiene mayor
concentracin de soluto en medio externo, haciendo que la clula pierda agua) y ser llevados los
mismos a la deshidratacin, ocurre una hemlisis (o destruccin de los eritrocitos con liberacin de
hemoglobina), siendo esto conocido como la fragilidad osmtica.
A una destruccin rpida de eritrocitos (o una rpida hemlisis), que sea incluso ms rpida que la
produccin de nuevos eritrocitos, se le llama crisis hemoltica. Estas crisis pueden acarrear como
consecuencia un dao renal. Otra de las consecuencias de esto es una anemia hemoltica,
dndose principalmente por la incapacidad de la mdula sea de reponer los eritrocitos.

PLANTEAMIENTO

MATERIAL:

Tubos de ensayo de 5 mL
Gradilla
Pipetas graduadas de 1
mL y 5 mL
Torunda de algodn con
alcohol
Ligadura
Jeringa y aguja (No. 20
21) estriles
Tapones de hule
Guantes desechables

REACTIVOS:

Solucin de heparina
sdica
Solucin de cloruro de
sodio al 0.5% (p/v)
Agua destilada
Sangre venosa

CUESTIONARIO
CONCEPTO
OSMOLARIDAD
SMOSIS

SOLUCIN
ISOTNICA

SOLUCIN
HIPERTNICA

SOLUCIN
HIPOTNICA
FRAGILIDAD
OSMTICA

ANEMIA

ANEMIA
HEMOLTICA

DEFINICIN
Presin osmtica de una solucin expresada en osmoles o miliosmoles por
kilogramo de la solucin (1).
Movimiento de un solvente puro, como el agua, a travs de una membrana
semipermeable desde una solucin que tiene una menor concentracin de
solutos a una con una mayor concentracin de solutos. El movimiento a
travs de la membrana continua hasta que las concentraciones de las
soluciones se igualan (1).
Las disoluciones isotnicas son aquellas donde la concentracin del soluto
es la misma ambos lados de la membrana de la clula, por lo tanto, la
presin osmtica en la misma disolucin isotnica es la misma que en los
lquidos del cuerpo y no altera el volumen de las clulas (3).
Una solucin hipertnica es aquella que tiene mayor concentracin
de soluto en el medio externo, por lo que una clula en dicha solucin pierde
agua (H2O) debido a la diferencia de presin, es decir, a
la presin osmtica , llegando incluso a morir por deshidratacin. La salida
del agua de la clula contina hasta que la presin osmtica del medio
externo y de la clula sean iguales (3).
Una solucin hipotnica es aquella que tiene menor concentracin de
soluto en el medio externo en relacin al medio citoplasmtico de
la clula (3).
Susceptibilidad de los eritrocitos a la hemlisis cuando se exponen
crecientemente a una solucin salina hipotnica. El agua penetra en el
interior del eritrocito que se hincha, hasta que la capacidad de la membrana
celular se sobrepasa y estalla. Esta prueba se utiliza en el diagnstico de
anemia hemoltica (4).
Trastorno caracterizado por un descenso de la hemoglobina sangunea
hasta unos niveles por debajo del rango normal, disminucin de la
produccin de hemates, aumento de la destruccin de los mismos o
prdida de sangre. La anemia viene descrita por un sistema de clasificacin
especfico, en funcin del contenido de hemoglobina de los eritrocitos
(normocrmica o hipocrmica) y en funcin de las diferencias de tamao de
stos (macroctica, normoctica o microctica) (1)
Enfermedad caracterizada por la destruccin prematura de los hemates. La
anemia puede ser mnima o estar ausente, reflejando la capacidad de la
mdula sea para aumentar la produccin de hemates (1).

RESULTADOS
En esta prctica se realiz una prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos cuando se mezclan
con una solucin salina hipotnica; para distinguir con que concentracin salina inicia la hemlisis
(destruccin de los eritrocitos con liberacin de hemoglobina) se realizaron distintas soluciones con
concentraciones diversas.
TABLA 1.- COMPARACIN TUBOS
TUBOS ANTES DE REPOSAR Fig. 1

TUBOS DESPUS DE REPOSAR Fig. 2

En la tabla anterior (fig. 2) se distingue el inicio de la hemlisis en el tubo nmero 5 (cuntese de

izquierda a derecha), el cual tena una solucin de 2.1 ml. de NaCl 0.5% y 0.4 ml. de agua
destilada; lo cual denota una concentracin de 0.42 % (vase tabla 2) siendo ubicada como un
inicio de hemlisis en rangos normales (vase tabla 3).
Por otro lado, la hemlisis total se da a nivel del onceavo tubo (cuntese de izquierda a derecha),
el cual tena una solucin de 1.5 ml. de NaCl 0.5% y 1.0 ml. de agua destilada; lo cual denota una
concentracin de 0.30 % (vase tabla 2) siendo ubicada como una hemlisis total en rangos
normales (vase tabla 3).

TUBO
1
2
3

NaCl
0.5%
(mL)
2.5
2.4
2.3

Agua
destilada
(mL)
0.0
0.1
0.2

TABLA 2
Sangre
completa
Conc (%)
(mL)
0.05
0.50
0.05
0.48
0.05
0.46

Mol

mOsm

0.0086
0.0082
0.0079

0.086
0.082
0.079

170
164
158

4
5
6
7
8
9
10
11
12

2.2
2.1
2.0
1.9
1.8
1.7
1.6
1.5
1.4

0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1

0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05

0.44
0.42
0.40
0.38
0.36
0.34
0.32
0.30
0.28

0.0075
0.0072
0.0068
0.0065
0.0062
0.0058
0.0055
0.0051
0.0048

0.075
0.072
0.068
0.065
0.062
0.058
0.055
0.051
0.048

TABLA 3 INTERPRETACIN NORMAL DE HEMLISIS

Inicio de hemlisis
0.44 a 0.38%
Hemlisis total
0.34 a 0.30%

150
144
136
130
124
116
110
102
96

DISCUSIN
Los eritrocitos son los principales componente celulares de la sangre circulante; son discos rojizos
bicncavos, de unas 7 micras de dimetro, que contienen a la hemoglobina rodeada por una
membrana lipdica. Los eritrocitos se originan en la mdula de los huesos largos. La maduracin se
produce a partir de una clula pluripotencial (promegaloblasto), que pasa a la fase de
pronormoblasto, la ltima antes de que se desarrolle la clula madura. Algunos tipos de eritrocitos
son glbulo espinoso, clula espinosa, discocito, esferocito y macrocito (1).
Es en estos que se encuentra (como ya se mencion) la hemoglobina, la cual es un compuesto de
protena y hierro de la sangre que trasporta oxgeno a las clulas desde los pulmones y dixido de
carbono desde las clulas a los pulmones. Cada eritrocito contiene de 200 a 300 molculas de
hemoglobina, cada molcula de hemoglobina contiene varias molculas hemo, y cada molcula
hemo puede llevar una molcula de oxgeno. Una cadena de hemoglobina contiene cuatro cadenas
polipeptdicas de globina, denominadas en los adultos cadenas alfa (), beta (), gamma () y delta
() (1).
Fig. 3 ESTRUCTURA ERITROCITO

Una prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos se lleva a cabo para detectar si hay mayor
probabilidad de que estos se descompongan, una vez que se tiene la muestra sangunea se
mezcla en el laboratorio con una solucin que hace hinchar a los eritrocitos, con el fin de
determinar qu tan frgiles son.
Esta prueba se realiza, entre sus mltiples usos, para detectar la esferocitosis hereditaria y la
talasemia. La esferocitosis hereditaria hace que los glbulos rojos sean ms frgiles de lo normal.
Con la talasemia, los glbulos rojos son ms frgiles de lo normal, pero un gran nmero de ellos es
menos frgil de lo habitual (6).
Otra tcnica que puede usarse para cumplir fines de diferenciacin de hemoglobinas es la
identificacin espectrofotomtrica; ya que las distintas hemoglobinas tienen espectro de absorcin
caractersticas que se determina en un espectrofotmetro. La identificaciones de las diferentes
formas de la hemoglobina con la determinacin de sus espectro de absorcin puede hacerse de
una manera muy sencilla: se coloca en un tubo de ensayo aproximadamente la mitad de una gota
de sangre y se diluye en 20 ml. de agua bidestilada. Se examina la muestra en un espectrmetro
empleando agua como blanco y se lee la absorcin a intervalos de 5 nm (7).

Fig. 4 - ESPECTROFOTMETRO

La realizacin de esta prctica fue bastante exitosa dando nuestros resultados dentro de los rangos
normales del inicio de la hemlisis y la hemlisis total; sin embargo, nos topamos con un par de
inconvenientes durante su realizacin:
En primer lugar, al tener los tubos de ensayo grosores distintos, cremos que las mediciones que
llevamos a cabo del agua destilada y de la solucin de NaCl al 0.5% haban sido errneas,
vindonos en la necesidad de repetirlas hasta que el profesor nos explic este hecho sobre los
tubos de ensayo. Cabe destacar que la segunda vez que llevamos a cabo las mediciones se vean
prcticamente tan irregulares como la primera vez pero debido al hecho ya explicado.
Por ltimo, en los pasos del procedimiento, se dice que ha de dejarse reposar durante 6 a 8 horas
los tubos ya preparados, aunque por motivos de horarios de los alumnos y del mismo laboratorio,
las preparaciones se dejaron reposar por aproximadamente unas 20 horas cuando se tom la foto
del despus donde se observan las hemlisis.

CONCLUSIN
Durante el desarrollo de esta prctica se cumpli el objetivo planteado al inicio de la misma, el cual
fue que los alumnos efectuaran e interpretaran la prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos
frente a soluciones salinas hipotnicas; el experimento se llev a cabo con xito y fue entendible al
momento de recopilar y expresar los resultados.
Se reforzaron as mismo los conocimientos aplicados durante la prctica nmero uno, en la cual
vimos los materiales de laboratorio y actividades como el pipetear, actividad de ms utilizada al
realizar la presente prctica en especial.

BIBLIOGRAFA FINAL
1. Mosby. (---) Diccionario Mosby Pocket de medicina y ciencias de la salud. Editorial Mosby y
Editorial Harcourt. Espaa. Pgina 56, 57, 357, 467, 468, 673.
2. MANUAL DEL CURSO PARA PREMIEMBROS. (Visitado por ltima vez: 07 de septiembre
de 2015)
http://www.uaa.mx/centros/ccs/bsu/documentos/Manual%20para%20Premiembros.pdf
3. Que es una isotnica, hipotnica, hipertnica y dilisis. (Visitado por ltima vez: 07 de
septiembre de 2015) http://monicaquimica.blogspot.mx/2011/09/que-es-una-isotonicahipotonica.html
4. Fragilidad osmtica. (Visitado por ltima vez: 07 de septiembre de 2015)
http://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/fragilidad-osmotica
5. Osmosis y permeabilidad de los eritrocitos. (Visitado por ltima vez: 07 de septiembre de
2015) http://163.178.103.176/Laboratorios/Cap1General/Osmosispermeabilidad.html
6. Examen de la fragilidad osmtica. (Visitado por ltima vez: 07 de septiembre de 2015)
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003641.htm
7. Alors Correderas, Rosario. (2008) DETERMINACIN DE LA HEMOGLOBINA EN EL
LABORATORIO. Revista digital Innovacin y experiencias educativas. Volumen 3. Pgina
5 de 9.