FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y

BIOQUIMICA

ANALISIS CUANTITATIVO DE
ENZIMAS
CURSO:
DOCENTE:

bioqumica
Dr. Herles MENDOZA CESPEDES

ALUMNA:
MARCELO BONILLA ANGELA

TURNO:

noche

AULA:

2X

LIMA PERU

2016

RECONOCIMIENTO ANALISIS CUANTITATIVO DE

ENZIMAS
I.

INTRODUCCION

La vida de diferentes seres unicelulares o pluricelulares dependen de una serie

compleja de reacciones qumicas perfectamente ordenadas. Este orden es
debido a que esas reacciones qumicas estn catalizadas por protenas
denominadas enzimas, cuyas propiedades permiten modular las velocidades
de
estas
reacciones.
Muchas de las enzimas se encuentran en el citoplasma de la clula. Otras
estn unidas a otras clulas como las enzimas respiratorias que catalizan el
metabolismo del cido lctico y tambin las sustancias derivadas al cidos
aminados y cidos grasos. Hay otras que intervienen en la sntesis de la
protena y son parte integrante de partculas citoplasmticas llamadas
ribosomas.
Las enzimas contienen los mismos aminocidos que el resto de las protenas.
Unas enzimas se presentan en forma soluble y otras forman parte de la
estructura de las diferentes membranas celulares o de las agrupaciones
proteicas
que
constituyen
las
fibras
o las
partculas.

En algunos, casos la enzima y el sustrato, sustancia que se convierte en

producto, constituyen el conjunto funcional mnimo que no requiere de ninguna
sustancia para ser activo. Sin embargo, para muchas enzimas su
actividad como catalizadores depende de la presencia de las molculas
orgnicas no proteicas y que se conocen con el nombre de coenzimas. Si
forman parte de la estructura de la enzima de modo estable se denominan
"grupos prostticos". Muchas enzimas requieren tambin de la presencia de
metales.
Determinadas enzimas existen en las clulas en una forma prcticamente
inactiva (proenzimas o zimgenos) y pasan mediante proteolisis limitada - en
que se rompen selectivamente determinados enlaces peptdicos - a la forma
activa.
Algunas enzimas existen en ms de una forma molecular, catalizando todas
ellas la misma reaccin. La pluralidad de las formas puede darse dentro de una
misma clula o en los diversos tejidos de un organismo. Estas diferentes
formas moleculares se denominan "isoenzimas".

II.

OBJETIVOS

Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o

vegetal mediante reacciones qumicas especficas.

Identificar la accin de la catalasa, peroxidasa y tirosidasa

III.

FUNDAMENTO TEORICO

Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la
primera es que durante la reaccin no se alteran, y la segunda es que no
desplazan la constante de equilibrio para que se obtenga ms producto, sino
que simplemente favorecen que la misma cantidad de producto se obtenga en
menos tiempo.
Las enzimas, a diferencia de los catalizadores no biolgicos, presentan una gra
nespecificidad, actan a temperatura ambiente y consiguen un aumento de
la velocidad de reaccin de un milln a un trilln de veces.
En toda reaccin qumica se produce una transformacin de unas sustancias
iniciales, denominadas reactivas o sustratos (S), en unas sustancias finales o
productos (P). Esta transformacin no se verifica directamente, ya que es
necesario un paso intermedio en el cual el reactivo se active, de forma que sus
enlaces se debiliten y se favorezca su ruptura.
Este paso intermedio recibe el nombre de complejo activado y requiere un
aporte de energa, generalmente en forma de calor, que se conoce como
energa de activacin.
Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o
sustratos en productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir el acceso
a otros sustratos.
Algunas enzimas no son activas hasta que sobre ellas actan otras enzimas o
iones. Estas enzimas se denominan zimgenos o pro enzimas. Por ejemplo, el
pepsingeno, que el HCl transforma en pepsina.
En la cadena polipeptdica de una enzima se pueden distinguir tres tipos de
aminocidos:

Aminocidos estructurales, sin funcin dinmica.

Aminocidos

con el sustrato. Constituyen el centro de fijacin de la enzima.

Aminocidos catalizadores, que se unen al sustrato mediante enlaces

de fijacin, encargados

de establecer enlaces

dbiles

covalentes, de forma que en dicho sustrato se debilita la estructura

molecular favoreciendo su ruptura. Constituyen el centro cataltico de la
enzima.
Las enzimas alostricas suelen estar constituidas por varias subunidades o
protmeros. Cada protmero posee dos centros: un centro regulador y otro
centro cataltico o activo. Al unirse a este centro una molcula, el activador,
modulador

ligando,

la

conformacin

delprotmero vara, haciendo funcional al centro cataltico. De esta forma, la en

zimaalostrica pasa de un estado inhibido (T) a un estado cataltico o activo
(R). La variacin en la conformacin de un protmero se transmite a los otros
protmeros

asociados

hacindolos

activos, efecto

que

se denomina

transmisin alostrica.

La Catalasa
Es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y
vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque
durante al metabolismo celular se forma una molcula toxica que es el perxido
de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada).
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el
agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como
muchas de las bacterias patgenas son anaerobias (no puede vivir con
oxgeno), mueren con el desprendimiento de oxigeno que se produce cuando la
catalasa de los tejidos acta sobre el agua oxigenada.
Es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la
descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. El
perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos

organismos

vivos

tiene

entre

otras una

funcin

protectora

contra

microorganismos patgenos, principalmente anaerobios. Esta funcin la

efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno.
Adems la catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido
de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes
de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno

La Peroxidasa
Es una enzima que cataliza la oxidacin de ciertos compuestos dadores de
hidrgeno, como fenoles (guayacol, pirogalol) y aminas aromticas (ofenilendiamina) por medio de perxidos. El sustrato oxidable ms usado es el
guayacol, que es oxidado a un complejo coloreado de tetra guayacol en
presencia de peroxidasa.
Las enzimas peroxidasas (POXs) estn ampliamente distribuidas en animales,
plantas y microorganismos. stas presentan mltiples formas isoenzimticas
que difieren tanto en la secuencia de sus aminocidos como en sus
propiedades qumicas. La POXs est involucrada en procesos fisiolgicos
relevantes de las plantas superiores tales como lignificacin, catabolismo de
auxinas, resistencia a patgenos, como as tambin en diversos mecanismos
de respuesta a situaciones de estrs.
La demostracin

citoqumica

de esta enzima

se basa en la accin

oxidante de laperoxidasa sobre el sustrato bencidina en presencia de perxido

de hidrgeno, formndose un color caf oscuro en el sitio de la actividad de la
enzima. La reaccin positiva se visualiza por la formacin de grnulos caf
oscuro en el citoplasma de los tejidos a analizar.

La Tirosinasa
La enzima responsable del pardeamiento enzimtico recibe el nombre depolife
noloxidasa, fenolasa o tirosinasa, en este ltimo caso especialmente cuando se
hace referencia a animales, ya que en ellos la tirosina es el principal sustrato.
Tambin se ha utilizado el trmino cresolasa, aplicado a la enzima de

vegetales. La polifenoloxidasa tiene dos actividades enzimticas, una

hidroxilando monofenoles (cresolasa) y otra oxidando difenoles a quinonas
(catecolasa). Dependiendo de la fuente, la actividad cresolasa es mayor o
menor, incluso inexistente en algunos casos. En cambio, todas las
enzimastienen actividad catecolasa. La caracterstica estructural ms importa
nte de estasenzimas es la presencia en su centro activo de dos tomos de
cobre, unidos cada uno de ellos a tres histidinas, que se han conservado a lo
largo de la evolucin en todas las enzimas de este tipo, desde las bacterias al
hombre. En su entorno se sitan una serie de aminocidos hidrofbicos, con
anillos

aromticos,

que

tambin

son

importantes

en

suactividad, para la unin de los sustratos. Los sustratos de la reaccin pueden

ser monofenoles o difenoles. La tirosina es el sustrato principal de la
polifenoloxidasa en los crustceos, y tambin se encuentra presente en
vegetales como la lechuga o en los championes. En los vegetales, el sustrato
ms extendido es probablemente el cido clorognico, en el que el grupo
fenlico se encuentra unido a un resto de azcar, que se encuentra, entre
otros,

en

manzanas,

peras,

melocotones,

ciruelas,

uvas,

paltas

papas.Las polifenoloxidasas son tambin en muchos casos capaces de oxidar

aminasaromticas para formar o-aminofenoles

IV.

MATERIALES Y REACTIVO

MUESTRA
Zanahoria
Tomate
Papa
Naranja
Pollo

MATERIAL DE VIDRIO
Tubos de ensayo
Gradilla
Bureta
Mechero
Cocina elctrica
Vaso precipitado de
250 ml
Mortero, pipetas

REACTIVOS
Perxido de
hidrogeno

V.

DESCRIPCION DE LA PRCTICA
4.1 RECONOCIMIENTO DE
CATALASA

TUBO 1

TUBO 2

TUBO 3

TUBO 4

TUBO 5

2ml de
tomate

2ml de
zanahoria

2ml de
pollo

2ml de
naranja

2ml de
papa

Aadir 5ml de agua

oxigenada al mismo
tiempo

Aadir 5ml de agua

oxigenada (al mismo tiempo)

Cronometrar el tiempo
de cada muestra

4.2.- DESNATURALIZACION
DE LA CATALASA

Llevamos todas las

muestras a bao mara por
5 minutos

DETERMINACION DE LA PEROXIDASA
Echar en un tubo de
ensayo 1ml de
extracto de rabano

Aadir 5 gotas de
solucin alcohlica
de bencidina

4.3.1.- PRUEBA
DE LA
BENCIDINA

Agitar
suavemente y
observar

4.3.2.- PRUEBA
DE PIROGALOL

En un mortero
rallar una papa
fresca

Observar la
aparicin de un
precipitado

Agregar 2 gotas de
perxido de hidrogeno
al 0.5 %

Tomar una pequea

cantidad de la papa sin
exprimir colocar en un
tubo de ensayo

Aadir unos ml de
pirogalo
l al 1% y 2
gotas de perxido de
hidrogeno al 2%

Rallar una papa

4.4.- DETERMINACION DE
LA TIROSINASA

Exprimir y filtrar el
extracto

Aadir 3 gotas de Colocar en un tubo de

tirosina
ensayo la muestra

Agitar el tubo y llevar a

bao maria

VI.

RESULTADOS

RESULTADOS DE ORDEN DE REACCION

Tomate

Papa

Zanahoria

Pollo

Naranja

xxxx

xxx

xxx

xx

Orden de reaccin

Tomate
Papa
Zanahoria
Pollo
Naranja

En caso de los vegetales la catalasa se inactiva en presencia de calor, por lo

tanto en los vegetales su reaccin es mucho ms rpida en calor.
En carnes la catalasa se activa en presencia de calor, por ende las carnes su
reaccin es ms lento en frio

VII.

CONCLUSIONES

Los agentes precipitantes inhiben la actividad enzimtica por desnaturalizacin

de la enzima.
La

velocidad

de

una

reaccin enzimtica

depende de

varios

factores. Entre stos est el pH. Cada enzima tiene un rango de pH en

el que su actividad enzimtica es ptima. Fuera de este rango la
enzima por ser una protena empieza a desnaturalizarse por la
protonacin o desprotonacin de sus aminocidos constituyentes.
La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimtica. Se
puede decir que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la
reaccin hasta que llega un punto en el que la velocidad disminuye con
el aumento en el calor.
Otro factor fundamental en la velocidad a la que se realiza una reaccin

es la concentracin de enzima y de sustrato. Esto se sabe tericamente

debido a que todas las reacciones cumplen con la reaccin de MichaelisMenten, donde si la concentracin de sustrato o de enzima es muy
baja, la

velocidad

concentracin

aumenta

proporcionalmente

al

aumento de