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    Dilucion Seriada

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    Maryin Paulina Bailon Arcentales
    Este documento describe los métodos de dilución seriada y recuento de viables en placa para cuantificar bacterias. La dilución seriada implica sucesivas diluciones geométricas de una solución concentrada usando un factor de dilución constante. El recuento de viables en placa involucra sembrar volúmenes conocidos de cada dilución en placas de Petri y contar las colonias después de la incubación.

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    Dilucion Seriada

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    Maryin Paulina Bailon Arcentales
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    Este documento describe los métodos de dilución seriada y recuento de viables en placa para cuantificar bacterias. La dilución seriada implica sucesivas diluciones geométricas de una solución concentrada usando un factor de dilución constante. El recuento de viables en placa involucra sembrar volúmenes conocidos de cada dilución en placas de Petri y contar las colonias después de la incubación.

    Descripción original:

    Dilucion

    Título original

    DILUCION SERIADA

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    Este documento describe los métodos de dilución seriada y recuento de viables en placa para cuantificar bacterias. La dilución seriada implica sucesivas diluciones geométricas de una solución concentrada usando un factor de dilución constante. El recuento de viables en placa involucra sembrar volúmenes conocidos de cada dilución en placas de Petri y contar las colonias después de la incubación.

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    Este documento describe los métodos de dilución seriada y recuento de viables en placa para cuantificar bacterias. La dilución seriada implica sucesivas diluciones geométricas de una solución concentrada usando un factor de dilución constante. El recuento de viables en placa involucra sembrar volúmenes conocidos de cada dilución en placas de Petri y contar las colonias después de la incubación.

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    DILUCION SERIADA

    Que son:

    • Solución: Mezcla homogénea de dos o mas


    sustancias
    Componentes:
    Soluto: Sustancia que se disuelve
    Solvente: Matriz en la que se disuelve
    el soluto
    • Dilución: Es el acto de volver mas débil una
    solución, a partir de una solución concentrada
    para que quede a una menor concentración
    •¿Como se expresan?

    Una parte de una solución original con respecto a


    las partes totales del volumen final
    1:10 (una parte del soluto + 9 partes del solvente)

    5% (v/v) [5 ml del soluto + 95 ml del solvente]

    5% (w/v) [5 gr del soluto + 95 ml del solvente]


    Tipos de diluciones
    • Seriadas
    • No seriadas
    • Independientes
    • Químicas

    • Diluciones seriadas: Sucesión de diluciones con


    incrementos progresivos y regulares, en los cuales el
    factor de dilución siempre es igual.
    1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128….
    1:10 1:100 1:1000 1:10000……..
    10-1 10-2 10-3 10-4………
    2.2.Métodos indirectos • Recuento de viables en placa

    Método de extensión. La
    muestra se siembra sobre la
    superficie del medio sólido

    Método de vertido El medio


    sólido en sobrefusión se
    añade a la muestra

    Diluir y anotar la dilución


    Sembrar sobre la placa (0.1ml)
    Muestra:
    Incubar
    1 célula = 1 colonia ~ 106 células Placa Petri medio sólido
     Útil para la técnica de

    vertido en placa o extensión

    en placa.

     Se siembran volúmenes

    conocidos de cada dilución

     Luego se incuba a 35 – 37 0C

    durante 24 – 48 horas.
    Muestra
    (E. coli)

    Para el recuento hay que tener


    en cuenta la dilución y le
    volumen de muestra sembrado
    Recuento de viables en placa

    Cuentacolonias tradicional

    Cuentacolonias automático
     Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento.

     Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan

    entre 30 y 300 colonias.

     Este número de colonias es estadísticamente representativo.

     Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como

    “INCONTABLES”.
     Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.
     Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.

     Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con

    carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.

     Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.

     Finalmente el promedio se multiplica por 65

    No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65


     CA = 32
     CM = 19
     CB = 10
     Sumatoria
    Σ = 61
     Promedio
    61/3 = 20.33
     Factor
    = 20.33*65
    = 1322
     Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la
    siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.

    UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución *


    ml de la muestra sembrada

    *Factor de dilución: inversa de la dilución.


     EJEMPLO 1  EJEMPLO 2

    No. de colonias: 280 No. de colonias: 56

    Dilución: 10 -3 Dilución: 10 -4

    Volumen de siembra: 1 ml Volumen de siembra: 0.2 ml

    UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2

    UFC/ ml= 280.000 UFC/ ml= 2 800.000


     Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros

    se garantiza los resultados obtenidos.

     Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las

    pruebas.

     Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula:

    UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B

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