XVII CONCURSO UNIVERSITARIO FERIA DE LAS CIENCIAS

CARTULA DE TRABAJO

Biologa
rea
Externa
Categora
Investigacin Experimental
Modalidad




Caracterizacin del perfil de ADN humano
como herramienta de identificacin
forense
Ttulo del trabajo




EcoR1
Pseudnimo de integrantes



1

NDICE
2

NDICE

Abreviaturas ---------------------------------------------------------------------- 4
Resumen -------------------------------------------------------------------------- 6
Marco Terico ---------------------------------------------------------------------8
Introduccin ----------------------------------------------------------------- 8
Gentica -------------------------------------------------------------------- 9
Medicina Forense ----------------------------------------------------------- 10
Enzimas de restriccin ------------------------------------------------------ 15
Electroforesis en gel de agarosa -------------------------------------------- 17
Planteamiento del problema---------------------------------------------------- 20
Objetivo General----------------------------------------------------------------- 22
Objetivos especficos ------------------------------------------------------------ 22
Hiptesis-------------------------------------------------------------------------- 22
Material y Mtodos---------------------------------------------------------------24
Digestin de ADN con enzimas de restriccin-------------------------------24
Electroforesis de las muestras de ADN--------------------------------------24
Metodologa --------------------------------------------------------------------- 25
Obtencin de muestras de ADN-------------------------------------------- 25
Digestin con enzimas de restriccin de las muestras de ADN------------- 25
Rehidratacin de las muestras-------------------------------------- 25
Electroforesis en gel de agarosa
Preparacin del tampn de electroforesis---------------------------- 26
Preparacin de la agarosa------------------------------------------- 26
Preparacin de los geles de agarosa--------------------------------- 26
Electroforesis y tincin de las muestras de ADN--------------------- 27
Tincin de los geles de ADN----------------------------------------- 27
Resultados ----------------------------------------------------------------------29
Anlisis de Resultados --------------------------------------------------------- 33
Conclusiones ------------------------------------------------------------------- 35
Referencias --------------------------------------------------------------------- 37
Apndices
Apndice A Glosario de trminos------------------------------------------------ 40
Apndice B Escenarios alternativos de la tcnica de identificacin de ADN----- 47
Apndice C Fotografas----------------------------------------------------------52
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ABREVIATURAS
4

ABREVIATURAS

ADN.- acido desoxirribonucleico
DTT.- dithiothreitol
EcoRI.- E. coli restriction enzyme (por sus siglas en ingls)
EDTA.- cido etilendiaminotetraactico
HindIII.- marcadores con pares de bases que migran a distancias conocidas
MgCl2.- Cloruro de Magnesio
NaCl.- Cloruro de sodio
PCR.- reaccin en cadena de polimerasa
SEMEFO.- Servicio de Mdico Forense
TAE.- Tris-Acetate-EDTA
TC.- Tampn de carga
TSJDF.- Tribunal Superior de Justicia del Distrito Federal

RESUMEN
6

Caracterizacin del perfil de ADN humano como herramienta de

identificacin forense.
RESUMEN

Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestras vidas,
ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestra
predisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender con
mayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,
desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en el
desarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en el
sistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones las
pruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casos
criminales.
La tcnica de tipificacin de ADN se utiliza en la medicina forense, en la
antropologa y la biologa de conservacin no slo para determinar la identidad de
los individuos sino tambin para determinar su relacin. Este proceso ha sido
utilizado para liberar a sospechosos inocentes, reunir a nios con sus familiares,
identificar animales robados y demostrar que la carne de ballena ha sido sustituida
por el pescado en el sushi.
Esta tcnica consiste bsicamente en llevar a cabo una digestin enzimtica del
ADN en cuestin. De este modo se obtienen fragmentos de ADN de secuencias
conocidas y por lo tanto pueden ser comparables con ADN proveniente de otras
muestras. El ADN digerido enzimticamente se somete a un ensayo de
electroforesis, el cual se basa en la separacin de dichos fragmentos por sus
cargas elctricas y tamao molecular. De este modo es posible comparar los
patrones obtenidos de cada muestra y establecer relaciones de parentesco, de
identidad, o de contenido segn sea el caso.
En esta investigacin se simula un caso criminal y se propone identificar dentro
del escenario propuesto al sujeto responsable de un crimen basndose en la
tipificacin del ADN de cada muestra comparndola con la muestra recogida en la
escena de un crimen.
El conocimiento de las tcnicas actuales de biologa molecular resulta un
elemento bsico e indispensable en la educacin media superior. Reconociendo
esta necesidad quisimos profundizar pero sobre todo llevar a la prctica los
conocimientos adquiridos y poder transmitirlos a travs de la difusin en el XVII
Concurso Universitario Feria de las Ciencias.

Palabras clave:
Gentica, ADN, Medicina Forense, PCR, Electroforesis, enzimas de restriccin,
Gel de agarosa, huella gentica, secuencia de reconocimiento.
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MARCO TERICO
8

MARCO TERICO
Introduccin
Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestras
vidas, ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestra
predisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender con
mayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,
desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en el
desarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en el
sistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones las
pruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casos
criminalsticos. Sin duda alguna, adems de constituir una ciencia per se, la
gentica posee mltiples aplicaciones, siendo un invaluable auxiliar en una
variedad de campos de estudio.
La gentica ha tenido un importante desarrollo durante las ltimas dcadas;
sin embargo, desde pocas tan antiguas como la cultura griega tenan ya ciertos
conocimientos. Mientras que Aristteles propuso que exista la herencia entre
abuelos y bisabuelos, los indios observaron que haba enfermedades que se
repetan en las diversas generaciones de sus familias. Despus de la poca
medieval, tambin hubo algunos avances al realizar estudios sobre el aparato
reproductor llegando a la conclusin de que la herencia exista por unin.
En el siglo XIX, un monje austriaco llamado Gregor Mendel, observ las
caractersticas que se iban transmitiendo y las que se rezagaban de una
generacin de plantas a otra. En base a sus experimentos lleg a varias
propuestas, entre ellas el hecho de que la informacin gentica proviene 50% del
padre y el otro 50% de la madre. Asimismo, acu los conceptos de alelo,
dominancia y recesividad. Gracias a sus avances y al ser el primero en estudiar
formalmente ste campo, se le conoce como el Padre de la Gentica.
Despus de Mendel, otros cientficos han continuado la labor, descubriendo
elementos fundamentales de esta ciencia como lo son los cromosomas, el factor
hereditario, la estructura del ADN y su formacin, la sntesis de protenas, y ms
recientemente el estudio del genoma humano, entre otros. Estos descubrimientos
han dado paso al desarrollo de nuevas tcnicas que son de gran utilidad en otras
reas.
La gentica juega un rol esencial en la medicina forense pues el ADN que
se encuentra presente en los fluidos y las estructuras de nuestro cuerpo permite
reconocer cadveres, conocer la identidad del emisor de algn fluido como saliva
o semen, saber si un determinado sujeto estuvo presente en un lugar, etc.
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Consecuentemente, la gentica y el ADN amplan en gran medida el horizonte de

los sistemas judiciales, posibilitando la imparticin de justicia con un margen de
error relativamente nulo.
Gentica
La gentica se define como el estudio de la herencia y de los genes.
Aunque los primeros antecedentes de esta ciencia se remontan a varios siglos
atrs, no surgi formalmente sino hasta el siglo XIX con las investigaciones de
Mendel. En la actualidad la gentica se ha enfocado principalmente en el estudio
de los factores hereditarios y el anlisis del cido Desoxirribonucleico (ADN).
Igualmente, la gentica ha sido aplicada en diferentes reas de nuestras vidas.
En la medicina, la gentica se utiliza principalmente para el diagnstico y
tratamiento de enfermedades o desrdenes hereditarios tales como sndromes y
genes que predisponen el desarrollo de cncer. Estas pruebas pueden realizarse
desde las etapas ms tempranas del desarrollo de una persona, incluso antes del
parto. Se espera que en un futuro cercano, la ingeniera gentica pueda reparar
genes con fines mdicos o modificarlos cuando definan alguna predisposicin
patolgica (Solari, 1999)
Asimismo en la agricultura, la gentica se usa extensamente con el propsito de
mejorar las distintas especies de plantas y animales para poder obtener un mejor
aprovechamiento de sus recursos. Los campesinos aplican la gentica para la
creacin de lo que comnmente se conoce como plantas transgnicas, las cuales
son ms resistentes a los fenmenos naturales y las plagas, aunque todava son
debatidos los efectos que puedan tener para la salud en el largo plazo.
La industria farmacutica recurre a la gentica para crear y/o mejorar diversas
bacterias y otros microorganismos antibiticos. As, los medicamentos adquieren
una mayor eficacia para tratar los padecimientos.
El ADN es definido como un compuesto bioqumico encontrado en todas las
clulas procariotas y eucariotas, as como en varios virus. Los genes, el objeto de
estudio de la gentica, son parte de la estructura del ADN y almacenan el cdigo
gentico. El ADN est formado de nucletidos, los cuales son compuestos por
una molcula de azcar desoxiribosa, un grupo fosfato y una de cuatro bases
nitrogenadas: Adenina, Guanina, Timina o Citosina. La estructura del ADN es de
una doble hlice formada por hebras de ADN que forman una espiral (Britannica
online, 2009)
Todas las personas tienen un cdigo gentico diferente, siendo posible
identificarlas teniendo como base una muestra gentica de la persona. De este
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modo, a partir de una muestra de alguna clula se puede extraer ADN y encontrar
la huella gentica de la persona, pudiendo compararla con otra muestra (Frankel,
1989). Debido a ello, la gentica es una de las reas ms tiles entre las que se
integran y aplican a la medicina forense.
Medicina Forense
La medicina forense se define como un conjunto de conocimientos relacionados
con la medicina cuyo objetivo es hacer una valoracin acertada sobre las causas
del fallecimiento de una persona (TSJDF, 2009). Es una especialidad mdica
cuyos conocimientos cientficos sirven para determinar los agentes que causaron
la muerte de un individuo, ya sea natural o provocada. Su principal funcin es
suministrar conocimiento al aparato legal para precisar la aplicacin de justicia
(Trujillo, 2002)
En Mxico, la institucin que se dedica a la medicina forense es el Servicio
Mdico Forense en Mxico. sta institucin tiene como objetivo proporcionar
apoyo pericial a distintas instituciones jurdicas; est regulado por el Tribunal
Superior de Justicia del Distrito Federal. El apoyo pericial que proporciona esta
institucin es el de determinar las causas y la fecha de un deceso, as como dar
sustento en incidentes referentes a balstica u otro tipo de lesiones en los que no
necesariamente se registra algn fallecimiento. Esta institucin se conforma de
especialistas en medicina forense, qumica, balstica, psicologa, deontologa y
dactilologa, entre otros.
El Servicio Mdico Forense cuenta con los servicios de identificacin de cuerpos,
toxicologa y patologa. El primero permite conocer la identidad de una persona
fallecida comparando huellas digitales o radiografas dentales. La toxicologa
ayuda a determinar si alguna sustancia (drogas) se involucr en la muerte de una
persona. Finalmente, el departamento patolgico analiza rganos del cuerpo para
determinar las posibles causas de muerte (Corporativo de servicios periciales,
2009)
Un mdico forense realiza actividades mdicas relacionadas con la identificacin
de personas, certificacin de lesiones, sanidad y consecuencias de las mismas,
as como valoraciones psiquitricas y psicolgicas, todas stas por orden de la
autoridad judicial. El Servicio Mdico Forense presta apoyo a instituciones de
salud y procuracin de justicia para la elaboracin de opiniones tcnicas de tipo
mdico o para la determinacin de intoxicaciones por consumo de drogas de
abuso, intoxicaciones por otras sustancias y estudios de histopatologa.
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La medicina forense depende de la gentica ya que esta es la rama de la

Biologa que trata de la herencia y de su variacin. La herencia se refiere a que la
descendencia tiende a asemejarse a sus padres, basndose en el hecho de que
el aspecto y funcin biolgica, es decir, el fenotipo, est determinado en gran
medida por la constitucin gentica, es decir, el genotipo.
En el plano tcnico, los mdicos legistas del Distrito Federal estn agrupados
principalmente en tres instituciones:
Servicio Mdico Forense, que en la capital depende del Tribunal Superior
de Justicia del Distrito Federal, y se encarga de la prctica de autopsias
medicolegales.
Direccin General de Servicios Periciales de la Procuradura General de
Justicia del Distrito Federal. Sus mdicos asisten al escenario de la muerte,
atienden casos de lesiones as como de delitos contra la libertad sexual.
Procuradura General de la Justicia de la Repblica, cuyos mdicos
atienden a los casos de farmacodependencia y otros delitos federales.
En cada estado existe un servicio mdico forense que depende de la Direccin
General de Servicios Periciales de la Procuradura General de la Justicia Estatal.
(Negrete, 2009)
Los servicios con los que cuenta el Servicio Mdico Forense (SEMEFO) son:
Archivo.- El archivo del SEMEFO se encarga de atender los trmites en
relacin a la solicitud de copias certificadas de dictmenes de necropsia, y
ampliacin de la misma, resultados de estudios toxicolgicos e histopatolgicos,
llenado de formatos de seguro de vida, as como oficios de fe de erratas.
Identificacin.- El departamento de Identificacin del SEMEFO cuenta con
personal especializado en antropologa, dactiloscopa, odontologa y fotografa
forense. El objetivo principal es el estudio de los cadveres que ingresan en
calidad de desconocidos, para su probable identificacin.
La antropologa forense se encarga de realizar la cdula somatolgica de todo
cadver de identidad desconocida que es ingresado a esta Institucin, con la
finalidad de obtener y registrar todos los hallazgos presentes en el cuerpo, ya
sean congnitos (malformaciones, manchas y lunares) adquiridos (tatuajes,
cicatrices, amputaciones, deformaciones, modificaciones estticas). Permitiendo
la elaboracin de un archivo que se utiliza para ser confrontado con la informacin
de la persona extraviada o ausente, que es proporcionada por los familiares.
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Otra actividad que realiza esta rea es la valoracin de la edad biolgica en

personas involucradas en procesos legales, as como el anlisis
morfocomparativo de la regin facial.
La odontologa forense realiza el estudio odontolgico completo de todos los
cadveres que ingresan en calidad de desconocidos, la ficha que se elabora
menciona las caractersticas naturales de los dientes como son resistencia,
tamao, posicin, color, ausencia congnitas y caractersticas adquiridas como
son las restauraciones dentales, amalgamas, resinas, prtesis fijas, removibles,
totales tratamientos de ortodoncia ausencias por extracciones, etc. Con todas las
caractersticas mencionadas se obtiene una base de datos, la cual se utiliza para
compararla con la informacin proporcionada por los familiares y determinar la
identidad de un cuerpo.
La dactiloscopa se encarga de realizar el estudio de las yemas de los dedos
de ambas manos. Su participacin en el departamento de identificacin es
importante ya que elabora una ficha conocida como decadactilar a todos los
cadveres que ingresan como desconocidos al SEMEFO, en el caso de recin
nacidos se toma la huella de ambas manos y de la planta de los pies. Con estas
fichas se realizan confrontas con los documentos proporcionados por los
familiares para la bsqueda de las personas ausentes o extraviadas.
La fotografa como disciplina forense forma parte importante del
departamento de identificacin, tiene como objetivo fundamental, reforzar de
manera grfica a las diferentes reas que la integran, elaborando una ficha
fotogrfica de identificacin de individuos desconocidos, ampliacin fotogrfica de
huellas dactilares, fotografa de cavidad oral, fotografa de seas particulares,
seguimiento fotogrfico de exhumaciones y seguimiento de estudios postmortem.
Patologa.- El laboratorio de patologa es un auxiliar para el mdico forense
debido a que diagnostica o ratifica los diagnsticos macroscpicos. Su actividad
es la de llevar a cabo los estudios microscpicos de las muestras de los rganos
que son enviadas del rea de necropsias del Servicio. En ocasiones los estudios
histopatolgicos son determinantes para establecer la causa de muerte, sin el
apoyo de dichos estudios algunas necropsias pueden resultar incompletas.
Toxicologa.- Realiza estudios qumico toxicolgicos del mbito forense en
cadveres, a peticin expresa del mdico forense en muestras biolgicas
retiradas del cadver.
En el caso concreto del laboratorio qumico su misin es auxiliar de manera
directa al mdico forense, llevando al cabo anlisis qumicos toxicolgicos para
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esclarecer la probable causa de muerte o en su caso establecer si la persona al

momento del fallecimiento se encontraba bajo el influjo de alguna droga.
Los anlisis qumicos son llevados al cabo con tecnologa de punta iniciando
stos con un screening por tcnicas presuntivas, de igual forma se corroboran
estos resultados mediante tcnicas confirmativas para lo cual se utilizan anlisis
inmunoenzimtico, cromatgrafo de gases con head space, cromatgrafo de
gases acoplado a espectrometra de masas y espectrometra de absorcin
atmica.
Los txicos y sustancias ms comnmente solicitadas para su bsqueda
son alcoholes, sustancias voltiles, drogas de abuso, frmacos en general,
plaguicidas, monxido de carbono, metales y fosfatasa cida.
En cuanto a muestras biolgicas las ms comunes tomadas del cadver
corresponden en orden descendente y son la sangre, orina, contenido gstrico,
rganos especficos y exudados.
Enseanza.- Esta rea se encarga de coordinar y programar grupos de
alumnos de escuelas de medicina, sin embargo, debido al inters de algunas
escuelas para observar estudios de necropsia se llega a autorizar su asistencia,
para ello se requiere presentar solicitud escrita con anticipacin, una hoja
membretada de la escuela, con sello y firma del Director, que la carrera o
licenciatura sea afn a la medicina forense, indicar por la Institucin solicitante el
grado acadmico y nmero de alumnos y la finalidad y metas de la visita.
Reclasificacin de Lesiones.- Es una accin necesaria para el Juez que lo
solicita debido a que requiere que un especialista determine si la clasificacin
mdico legal inicial permanece igual o esta cambia, adems le interesa establecer
si el lesionado se encuentra sano de las lesiones que sufri y si existen
consecuencias debido a ellas; esta actividad es indispensable para que el Juez
tenga la posibilidad de resolver una situacin jurdica. (Tribunal Superior de
Justicia del Distrito federal)
El ADN fue descubierto por los cientficos Watson y Crick en la dcada de
los 50 y dicha hazaa cientfica revolucion el campo de la medicina
especficamente la especialidad gentica, a partir de ah se comenzaron mltiples
intentos de modificar enfermedades que hasta entonces solo tena tratamiento
paliativo y no se podan prever, es importante sealar que precisamente la parte
de la molcula de ADN que se utiliza con fines clnicos es la no variable ya que es
la que consta con aminocidos que codifican a cada gen en cada tejido, sin
embargo no fue hasta 1985 que Dr. Alec Jeffreys para la resolucin de un caso de
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inmigracin de un joven procedente de Ghana lo aplica con fines forenses por

primera vez y en segunda ocasin dos aos ms tarde, en la investigacin
criminal, posibilitando identificar a Robert Melias, un pen de Bristol de 32 aos de
edad, como autor de una agresin sexual a una mujer enferma de polio, y a Nigel
Davis como autor del denominado "caso del condado de Leicestershire", en el que
se produjo la violacin y muerte de dos mujeres del condado, la primera en 1983 y
la segunda en 1985 y donde los mtodos serolgicos clsicos no pudieron lograr
una individualizacin suficiente con los indicios biolgicos, su teora se basaba en
el descubrimiento de regiones hipervariable que se extendan entre las
codificantes, que no se repiten entre los individuos y que cada ciertos segmentos
vuelven de forma exacta a la misma secuencia de aminocidos que present al
principio lo que hacen identificar de forma absoluta a ese individuo.
La variabilidad de estas zonas radica en diferencias exhibidas por el
material gentico, en la secuencia nucleotdica misma a travs de sustituciones
de nucletidos, o en la distinta longitud generada por una misma secuencia que se
repite un nmero diferente de veces. Cuando fue posible conocer su localizacin y
desarrollar una metodologa adecuada para ponerlas de manifiesto comenzaron a
ser estudiadas mediante sistemas de anlisis cada vez ms precisos y sencillos.
El descubrimiento de regiones hipervariables del genoma con localizacin
especfica permiti el desarrollo de las sondas de locus nico que resolveran el
problema, posibilitando el estudio de una zona conocida del genoma que se
visualizaba como dos nicas bandas para la condicin heterocigota,
correspondientes cada una a un alelo, heredado de cada progenitor.
Estas zonas estn constituidas por secuencias repetidas, que
aparentemente carecen de funcin como codificantes de protenas. La menor
variabilidad exhibida por estos sistemas de anlisis se solucionaba empleando un
conjunto de cuatro o ms sondas unilocus que evaluaban otras tantas regiones
del genoma.
La identificacin mdico-legal a travs del anlisis del ADN se realiza sobre
regiones no codificantes del genoma que son aquellas que no contienen
informacin alguna sobre las caractersticas fenotpicas de las personas. Es decir,
que por medio del anlisis forense del ADN no se puede saber sin un individuo es
rubio, alto, gordo, ni conocer si va a sufrir alguna enfermedad o si tiene tendencia
a padecer determinados tipos de patologas, ya que el ADN no codificante no
contiene esa informacin. Si disponemos un archivo con material biolgico
(sangre o saliva) la muestra podra destinarse a otro tipo de anlisis, diferente a la
identificacin mdico-legal, pero tambin es cierto que las muestras archivadas en
esas bases de datos, al margen de las garantas que el sistema de cada pas
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disponga para evitar el mal uso, no podrn ser utilizadas en otros estudios clnicos
por la cantidad de material (que es mnima, suficiente para el estudio forense, pero
difcilmente para un anlisis clnico) y por las condiciones y caractersticas del
mismo, ya que este se guardan en forma de manchas secas, con lo cual la
calidad del ADN se ver afectada.
Las caractersticas generales del ADN no codificante lo hacen
especialmente til para su aplicacin a la identificacin en Medicina Forense.
Como se puede deducir de su trascendente funcin, el ADN esencial est
formado por secuencias altamente conservadas con muy pocas variaciones
interindividuales e intergeneracionales, ya que de lo contrario se podran ver
afectadas funciones bsicas para la vida de las personas. Los mnimos cambios
que tienen lugar, cuando son viables, aumentan el polimorfismo de protenas y
enzimas, aunque tambin pueden tener efectos negativos.
Por el contrario, el ADN no codificante presenta una gran variabilidad de
unos individuos a otros, ya que estas secuencias no son conservadoras al no
afectar sus cambios a la fisiologa del individuo. Las variaciones debidas a
cambios de bases sencillos, procesos de insercin-deteccin o de intercambio de
ADN (recombinacin) durante la formacin de las clulas germinales (meiosis),
hacen que se modifiquen el nmero de repeticiones o el orden de las bases de un
determinado fragmento repetitivo, pudiendo producirse en un locus sencillo o e
mltiples loci, siendo este el origen de la variacin que hace que no haya dos
personas, a excepcin de los gemelos univitelinos, que tengan la misma
secuencia del ADN.
La repercusin prctica de lo anterior es la existencia de diferentes alelos,
es decir la posibilidad de que encontremos entre la poblacin varias formas de
presentarse un determinado carcter o fragmento de ADN no codificante.
Para lograr identificar los diferentes alelos se usan las enzimas de
restriccin que son las que cortan el ADN haciendo dos roturas, una con cada uno
de las espinas dorsales del fosfato de la hlice doble. La enzima hace esto sin
daar las bases del ADN. Aunque la enzima rompe el ADN, los vnculos qumicos
se pueden reformar por otras enzimas conocidas como ligases del ADN. Por lo
tanto, los fragmentos de la restriccin del ADN de los diversos cromosomas o
genes se pueden ligar, proporcionando a sus extremos secuencias
complementarias.
Enzimas de restriccin

Las enzimas de restriccin se sitan en la molcula de ADN y se desplazan
por la hlice hasta que reconocen unas secuencias especficas de pares de bases
que indican a la enzima que deje de desplazarse. Las enzimas entonces digieren
o separan qumicamente la molcula de ADN en ese punto, llamado diana de
restriccin, actuando como tijeras moleculares, cortando el ADN por secuencias
especficas de pares de bases. Si existe ms de una diana de restriccin en una
molcula de ADN, la enzima de restriccin cortar en cada uno de esos sitios,
obtenindose mltiples fragmentos. As, si un fragmento lineal de ADN se corta
con una enzima de restriccin cuya diana de restriccin se encuentra en dos
puntos diferentes de la molcula de ADN, se obtendrn tres fragmentos de
diferentes longitudes. La longitud de cada fragmento depender de la localizacin
de las dianas de restriccin en la molcula de ADN. Cuando las enzimas de
restriccin se usan para cortar cadenas de ADN plasmdico circular, se obtienen
fragmentos de ADN de varios tamaos. El ADN cortado con enzimas de
restriccin puede ser separado y observado utilizando una tcnica denominada
electroforesis en gel de agarosa. El trmino electroforesis significa mover con
electricidad.
Dado que cortan el ADN, las enzimas de restriccin son las tijeras qumicas de
los bilogos moleculares. Cuando una determinada enzima de restriccin
reconoce una secuencia de reconocimiento (de 4 o 6 pares de bases) en un
fragmento de ADN, corta la molcula en ese punto. Las secuencias de
reconocimiento de dos enzimas usadas habitualmente, EcoRI y PstI, aparecen a
continuacin. El lugar exacto en que se corta la cadena de ADN se seala con
unas tijeras como smbolo:

Para la enzima: Eco RI
Para la enzima: Pst I


Como todas las enzimas, las enzimas de restriccin funcionan mejor en un
tampn (buffer) y a una temperatura especfica. El tampn apropiado para las
enzimas de restriccin se incluye con la muestra de ADN, de manera que cuando
el ADN rehidratado y las enzimas se mezclan, se crean las condiciones ideales
para el ptimo funcionamiento de las enzimas. El buffer contiene Tris 50 mM,
NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, DDT 1 mM, pH 8.0, que son las condiciones ideales
para el funcionamiento correcto de las enzimas EcoRI y PstI.

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Electroforesis en gel de agarosa

La tcnica de electroforesis se basa en la migracin de las molculas con
carga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo elctrico, hacia el
polo opuesto de su carga. El mtodo no es tan sencillo: primero hay que saber con
qu tipo de molculas se est trabajando y de acuerdo a esto se elige el
procedimiento y los materiales necesarios.
Hay dos fuerzas que determinan la velocidad con que una molcula
migrar: la fuerza elctrica y la de rozamiento. La primera es la responsable de
que la molcula en cuestin, que en nuestro caso es el ADN, sea atrada hacia
uno de los electrodos. Por esto es que cuanto mayor sea el cociente carga/masa
de la molcula mayor ser la aceleracin con que se mueva. La fuerza de
rozamiento tiene una accin opuesta: a mayor rozamiento, menor velocidad de
migracin. Esta fuerza tiene que ver con el tamao y forma de la molcula que
migra, y con las caractersticas del medio en que se mueve.
Para realizar la electroforesis se utiliza un medio de migracin adecuado,
de modo que la separacin sea eficiente, ya que se necesita que exista una
suficiente fuerza de rozamiento para que las molculas de distinto tamao se
separen. Para ello se utiliza usualmente un gel que consiste en una red
compuesta por un polmero orgnico llamado agarosa que es un derivado de un
polisacrido de un alga el cual aumenta considerablemente la friccin, impidiendo
a la vez la difusin de las molculas a travs del medio acuoso en todas las
direcciones. Al colocar las muestras de DNA a travs de este gel y someterlo a un
campo elctrico durante cierto tiempo, podemos verlas separadas segn su
tamao. La rapidez con que migren las molculas puede ser regulada por la
concentracin de agarosa disuelta en la solucin amortiguadora que usemos: a
mayor concentracin, mayor compactacin de la red y por tanto menor velocidad
de migracin (Garrido, 2009).
El ADN es incoloro lo que provoca que los fragmentos de ADN no se
puedan ver en el gel durante la electroforesis. Se utiliza entonces un tampn de
carga, que contiene dos colorantes azules, y que se aade a la solucin de ADN.
Los colorantes no tien el ADN, pero facilitan la carga de los geles y permiten ver
el avance de la electroforesis. Los colorantes migran hacia el polo positivo situado
al final del gel, al igual que los fragmentos de ADN. El colorante rpido migra con
los fragmentos de ADN de aproximadamente 500 pb, mientras que el colorante
lento migra con los fragmentos de ADN de tamao aproximado de 5 kpb.
La tincin del ADN muestra su localizacin en el gel. Cuando el gel se
sumerge en una solucin diluida de colorante, las molculas de ste se unen a las
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molculas de ADN atrapadas en el gel de agarosa. Para aumentar el contraste y

visualizar con facilidad las bandas de ADN, el exceso de colorante se puede
eliminar del gel destindolo con agua. Cuando las bandas sean visibles, se
podrn comparar los patrones de restriccin de diferentes muestras de ADN.
Los dos principales factores que afectan a la fiabilidad de la tecnologa del ADN
en la medicina forense son la gentica de las poblaciones y la estadstica
gentica. En los humanos hay miles de loci RFLP (Poimorfismos de longitud de
fragmentos de restriccin) o de segmentos de ADN que se pueden seleccionar y
usar para analizar la huella gentica. En funcin de factores demogrficos como
el origen tnico o el aislamiento geogrfico, algunos segmentos mostrarn ms
variabilidad que otros.
Algunas poblaciones muestran mucha menos variabilidad en segmentos
particulares de ADN que otras. El grado de variabilidad afectar a la probabilidad
de que exista ms de un individuo con la misma secuencia. Si el 90% de una
poblacin presenta el mismo patrn para un determinado segmento de ADN, poca
informacin se podr obtener. Pero si la frecuencia de aparicin de un patrn de
ADN para un determinado segmento en una poblacin, es extremadamente baja,
entonces este segmento puede ser una herramienta muy til para discriminar
entre los individuos de esa poblacin. Cada poblacin muestra diferentes patrones
en sus genotipos debido a las distintas aportaciones realizadas a sus genes
individuales a lo largo del tiempo.
Por eso, para determinar hasta qu punto incrimina una prueba de ADN, se
necesita hacer la siguiente pregunta: Estadsticamente, cuntas personas en
una poblacin presentarn un patrn idntico al observado en la muestra recogida
en la escena del crimen? 1 de cada 10.000? o 1 de cada 10?
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PLANTEAMIENTO DEL PROBELMA
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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestras vidas,
ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestra
predisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender con
mayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,
desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en el
desarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en el
sistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones las
pruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casos
criminales.

En este sentido consideramos esencial el conocimiento de las tcnicas de
biologa molecular de las que hoy disponemos y que muy probablemente
utilizaremos por lo menos alguna vez durante nuestras vidas. Este conocimiento
nos permitir entender mejor el entorno en que vivimos y las diferentes situaciones
a las que nos enfrentaremos.

Esta investigacin se propone abarcar los aspectos tericos y metodolgicos
similares a los que se emplean en la resolucin se casos criminales con el
objetivo de esclarecer la identidad de una persona involucrada en un caso de
homicidio comparando los patrones de ADN de diferentes sujetos con el hallado
en la simulacin de una escena del crimen.
















21

OBJETIVOS
22

OBJETIVO GENERAL

Realizar una comparacin de patrones de ADN entre diferentes sujetos
empleando una tcnica de separacin de fragmentos de ADN para encontrar
similitudes y diferencias entre las muestras comparadas.




OBJETIVOS ESPECFICOS

1. Llevar a cabo una digestin enzimtica de las muestras de ADN proporcionadas

2. Realizar una tcnica de separacin de fragmentos de ADN (electroforesis en
gel de agarosa) para visualizar los fragmentos obtenidos de la digestin
enzimtica

3. Comparar los patrones de separacin de las muestras corridas en gel mediante
mediciones de las distancias recorridas, extrapolando dichos datos en la curva
estndar de fragmentos con pares de bases conocidas.

4. Establecer si algn patrn encontrado en una o ms muestras coinciden con la
muestra que se identific como ADN de una escena del crimen.




HIPTESIS

Si las enzimas de restriccin empleadas separan fragmentos de ADN en
secuencias conocidas entonces ser posible la comparacin de dichos
fragmentos en todas las muestras de ADN estudiadas.

Si existe alguna muestra idntica a la identificada como ADN escena del crimen
entonces el patrn de fragmentos de ADN ser idntico en ambas muestras.



23

MATERIAL Y MTODOS
24

MATERIAL

Digestin del ADN con enzimas de restriccin

Enzimas EcoRI/PstI: (80 l por muestra de ADN)
15 Puntas para pipeta
1 Micropipeta P-10 o P-20
Microtubos de colores: verde, azul, naranja, violeta, rojo, amarillo
1 Rotulador de tinta indeleble
1 Contenedor para residuos
1 Gradilla
1 Cubeta con hielo
6 viales de ADN recuperado de una escena del crimen (simulacin) y 5 ADNs de
sospechosos, rehidratado con tampn
1 Bao de agua a 37 C
Agarosa lquida (previamente disuelta)
1 Molde para preparar geles (cristales)
1 Cinta adhesiva
Electroforesis de las muestras de ADN
1 Gel de agarosa con 8 pocillos (preparado con anterioridad)
6 Muestras con ADN digerido
1 Colorante para ADN (Tampn carga)
2 Rotuladores
1 caja de Puntas para pipeta
1 Micropipeta P-10 o P-20
1 Contenedor para residuos
1 Gradilla
1 Cmara para electroforesis y fuente de alimentacin
1 Cubeta para tincin del gel
Solucin tampn electroforesis (TAE 1x)
500 ml de Colorante para tincin del gel
Marcadores HindIII (marcadores con pares de bases que migran a distancias
conocidas)




25

METODOLOGIA
Obtencin de muestras de ADN
El desarrollo experimental de esta investigacin se llev a cabo en el Laboratorio
de Inmunoqumica del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias el cual
cuenta con un banco de ADN de donde se obtuvieron las muestras con las que
realizamos nuestros experimentos. Se nos proporcionaron 6 muestras de ADN y
se identific una como la muestra recogida en la escena de un crimen as como 5
muestras ms de distintas personas presuntamente vinculadas con la escena del
crimen. El ADN de las personas involucradas se obtuvo por una tcnica estndar
previamente descrita (Ried, 2002).
Digestin con enzimas de restriccin de las muestras de ADN
Rehidratacin de las muestras

Todos los viales de ADN y de enzimas contenan un residuo blanco (se
encontraban liofilizados previamente) y aparecer como un polvo suelto en los
viales de ADN. La mezcla liofilizada de las enzimas EcoRI/PstI se conserv en un
vial de color mbar.

A. Para rehidratar las muestras de ADN, aadimos 200 l de agua estril en
cada vial de ADN liofilizado y lo agitamos para resuspenderlo. Despus, dejamos
que las muestras se rehidrataran a temperatura ambiente, durante 5 minutos,
hasta que se disolvieron.
Las muestras rehidratadas de ADN estuvieron en una solucin tampn a una
concentracin de 0.3g/l en Tris 100 mM, NaCl 200 mM, MgCl2 20 mM, DTT
2mM, pH 8.0. Al aadir las enzimas de restriccin la concentracin final del
tampn fue de Tris 50 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, DTT 1mM, pH 8.0
.
B. Para rehidratar la mezcla de enzimas EcoRI/PstI, aadimos 750 l de agua
estril y agitamos para resuspender las enzimas. Despus, dejamos que las
enzimas se rehidrataran en hielo durante 5 minutos.

C. Preparacin de las alcuotas de la mezcla de enzimas. Transferimos 80 l de
la mezcla enzimtica rehidratada a cada uno de los 8 microtubos de 1.5 ml
marcados como ENZ.

26

D. Digestin con enzimas de restriccin. Dejamos que se digirieran las

muestras introduciendo los tubos en una gradilla de plstico situada en un litro de
agua a 37C y lo dejamos en incubacin toda la noche.
Electroforesis en gel de agarosa

Preparacin del tampn de electroforesis

El tampn de electroforesis TAE (Tris, acetato, EDTA) se encontraba en una
solucin concentrada 50x. Usamos el tampn TAE 1x, necesitando un volumen
total de unos 275 ml para cada cubeta de electroforesis. Fueron necesarios 3
litros de tampn TAE-1x para las cubetas de electroforesis y la preparacin de los
geles de agarosa en las diversas repeticiones del experimento.

Preparacin de la agarosa

A. La concentracin que utilizamos para la preparacin del gel fue de agarosa
al 1%. Para preparar agarosa al 1%, aadimos 1 g de agarosa a 100 ml de
tampn TAE-1x.

B. Aadimos la agarosa en polvo a un matraz Erlenmeyer de 500 ml, para
preparar 200 ml. Aadimos TAE-1x y agitamos para resuspender la agarosa en el
tampn. Situamos otro matraz Erlenmeyer de 25 ml en la boca del primero y en
posicin invertida, para que actuara como una cmara de reflujo, permitiendo una
ebullicin prolongada o vigorosa sin que se produjeran muchas prdidas por
evaporacin. Posteriormente fundimos la agarosa
Dejamos el matraz 3 minutos a media intensidad en el horno de microondas.
Paramos el horno cada 30 segundos y agitamos el matraz para disolver la
agarosa, continuamos con este proceso hasta que se disolvieron todas las
partculas de agarosa. Lo dejamos enfriar hasta los 60C antes de utilizarlo.

Preparacin de los geles de agarosa.

Paso 1 Se sellaron los bordes del molde o soporte donde se prepar el gel con
cinta adhesiva de laboratorio. Se apret la cinta firmemente a los bordes para
formar un precinto hermtico.
Paso 2 Se nivel el molde sobre una mesa usando el nivelador.
Paso 3 Se prepar la cantidad de agarosa adecuada en tampn TAE.
Paso 4 Se dej enfriar la agarosa hasta al menos los 60 C, y verterla sobre el
soporte.
27

Paso 5 Mientras se enfriaba la agarosa, se coloc el peine en el molde a unos 2

cm del extremo del soporte.
Paso 6 Se dej que el gel solidificara a temperatura ambiente durante 10-20
minutos.
Paso 7 Se retir el peine del gel con precaucin.
Paso 8 Se retirar la cinta de los bordes del soporte.
Paso 9 Se coloc el molde o soporte en la cubeta de electroforesis, situando los
pocillos en el ctodo (negro). Las muestras de ADN migraron hacia el nodo (rojo)
durante la electroforesis.


Electroforesis y tincin de las muestras de ADN

1. En este paso del experimento empezamos por alicuotar el tampn de carga:

A. Rotulamos un microtubo como TC (Tampn de carga), y alicuotamos 35 l
del tampn de carga en el tubo.
B. Aadimos 20 l del tampn de carga al tubo que contena los marcadores
HindIII y calentamos los marcadores 5 minutos a 65 C, y luego los dejamos
enfriar en hielo para que las bandas de los marcadores se separaran. Despus
Rotulamos un microtubo con una M y aadimos 15 l de los marcadores con el
tampn de carga al tubo M.

2. Para preparar la solucin para la tincin de ADN diluimos 1 ml de la solucin
500x en 499 ml de agua destilada en un recipiente adecuado, el cual cubrimos y
almacenamos a temperatura ambiente hasta que lo volvimos a utilizar.

3. Para llevar a cabo la electroforesis de las muestras eficazmente, dejamos
correr el proceso durante 40 minutos. Se conectaron los cables a la cmara de
electroforesis y sta a una fuente de poder y se hizo pasar una corriente elctrica
de 100V.
.
Tincin de los geles de ADN

Una vez que termin el tiempo de corrida, se desconecto la cmara y se retiraron
los geles de su contenedor. Lo situamos en un recipiente y lo cubrimos
completamente con la solucin colorante y lo dejamos ah durante toda la noche.
Al da siguiente, aclaramos los geles teidos con agua y luego los dejamos
desteir en agua durante toda una noche.

28

RESULTADOS


RESULTADOS

Con el fin de hacer ms precisa la comparacin entre el ADN de la escena del
crimen y el ADN del sospechoso, algo que sea ms que una impresin visual, se
necesita crear una medida cuantitativa del tamao de los fragmentos. Se realiz
de la siguiente manera:

1. Usando la regla, se midi la distancia a la que migr cada banda. Se midi la
distancia en milmetros desde el fondo del pocillo hasta el centro de cada banda
de ADN (figura 1), y se recolectaron los datos en la tabla 1. Los datos de la tabla
se usaron para construir una curva patrn y para estimar el tamao de los
fragmentos de la escena del crimen y de los sospechosos.

2. Para hacer una estimacin exacta del tamao de los fragmentos tanto de la
escena del crimen como de los sospechosos, se construy una curva patrn
usando las distancias (eje X) y el tamao de los fragmentos (eje Y) de los
marcadores de tamao Lambda/HindIII.

4. Para estimar el tamao de un fragmento de la escena del crimen o de un
sospechoso, se midio la distancia a la que migr ese fragmento. Se localiz esa
distancia en el eje X de la curva patrn, y desde esa posicin en el eje X, se sube
hasta la curva patrn, y luego se sigue la lnea milimetrada del papel hasta el eje
Y. El punto en el que la lnea se encuentra con el eje Y, indica el tamao
aproximado del fragmento de ADN.

5. Se compararon los tamaos de los fragmentos de los sospechosos y de la
escena del crimen (Grfica 1).


29

1 2 3 4 5 6 7
Carril Muestra
1 Marcadores Lambda/HindIII
2 ADN escena del crimen
3 sospechoso 1
4 sospechoso 2
5 sospechoso 3
6 sospechoso 4
7 sospechoso 5
Figura 1. Electroforesis en gel de agarosa de las muestras
identificadas como sospechosos y escena del crimen.
Representa un experimento representativo de 3. Las flechas
sealan la identificacin de los patrones iguales.
1. Migracin de las bandas correspondientes a los fragmentos de ADN de las diferentes muestras




Marcadores de peso
molecular
Lambda/Hind III
DNA RECUPERADO
DE LA ESCENA DEL
CRIMEN
SOSPECHOSO 1 SOSPECHOSO 2 SOSPECHOSO 3 SOSPECHOSO 4 SOSPECHOSO 5
BANDA
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
1

DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
DISTANCIA
(mm)
Tamao
(pb)
1
11.0 23,130 19.0 4.010 21.0 2,985 21.0 2,985 19.0 4,010 21.0 3,110 21.0 2,985
2
13.0 9,416 20.5 3,334 23.5 2,134 25.0 1,879 20.5 3,334 29.5 1,356 24.0 2,027
3
15.0 6,557 32.0 1,698 30.5 1,789 28.5 1,646 32.0 1,698 30.5 1,235 29.5 1,478
4
18.0 4,361 31.5 1,534 31.7 1,123 35 1,345
5
23.0 2,322 35.5 1,325
6
24.0 2,027

Tabla 1. Patrn de pares de bases obtenido en el ensayo de electroforesis en gel de agarosa al 1.0%
1
pares de bases
30

0
5,000
10,000
15,000
20,000
25,000
0 5 10 15 20 25 30 35 40
P
a
r
e
s

d
e

b
a
s
e
s
Distancia, mm
Lambda/Hind III
Sospechoso1
Sospechoso2
Sospechoso3
Sospechoso4
Sospechoso5
ADNescenadelcrimen
Fragmentos deADNdelaescena
delcrimenydelsospechoso3


Grfica 1. Migracin de los fragmentos (distancia en mm) de ADN encontrados en
las 6 muestras estudiadas y su relacin con su tamao (pares de bases). Los
fragmentos del ADN recuperado de la escena del crimen coinciden con la muestra
recuperada del sospechoso 3. Es importante hacer notar que los fragmentos
coinciden exactamente, no pueden existir variaciones en el patrn de migracin y
por lo tanto tampoco en su tamao, si vara en un solo fragmento el ADN no
correspondera al recuperado en la escena del crimen.

31

32

ANLISIS DE RESULTADOS
33

ANLISIS DE RESULTADOS
Se ha dicho que la huella gentica puede llegar a substituir a la huella dactilar.
Esta idea es errnea. Cada una tiene sus aplicaciones especficas. Y si bien el
estudio de la huella gentica ha sido un avance revolucionario en determinados
casos como es el estudio del semen o la sangre para identificar a la persona a
quien pertenece, no tiene nada que ver con el hallazgo de huellas dactilares sobre
la superficie de un arma u otro objeto donde el criminal haya puesto sus manos.
Con esta idea llevamos a cabo una serie de experimentos que nos permitieran
estandarizar una tcnica de separacin de fragmentos de ADN por electroforesis
en gel de agarosa.
Se llevaron a cabo una serie de 5 experimentos donde se probaron diferentes
condiciones de concentracin de agarosa, tiempo de corrida y voltaje empleado,
Los resultados de estos experimentos nos permitieron concluir que las
condiciones ptimas de experimentacin fue utilizar un gel de agarosa al 1% y
hacer la corrida del gel durante 45 minutos a 100V.
Con estas condiciones establecidas se repiti tres veces el experimento que dio
origen a los datos que aqu se presentaron. Fue posible observar despus de la
electroforesis y gracias a la tincin del gel la separacin de las bandas
correspondientes a los fragmentos de los diferentes ADN de los sujetos
estudiados.
Al comparar los fragmentos visualmente se pudo comprobar que la muestra del
ADN identificado como sospechoso 3 coincida en nmero y posicin de bandas
con el ADN identificado como escena del crimen.
Las enzimas de restriccin empleadas cortan fragmentos en secuencias idnticas
lo que permite comparar los fragmentos de las diferentes muestras.
Si hay dos cortes en dos muestras de ADN en el mismo punto, significa que las
secuencias coinciden y que por lo tanto pertenecen al mismo individuo.




34

CONCLUSIONES
35

CONCLUSIONES

1. Las enzimas de restriccin EcoR1/Pst1 cortan secuencias especficas
(GAATTC) que permiten comparar las distintas muestras de ADN.
2. La electroforesis en gel de agarosa permite separar los fragmentos de
restriccin en base su tamao (pares de bases) haciendo visibles los patrones de
migracin de dichos fragmentos pudiendo compararlos entre s.
3. La muestra identificada como sospechoso 3 y ADN escena del crimen
muestran un patrn idntico de migracin y nmero de bandas por lo que es
posible concluir que se trata del mismo sujeto.
Lo anterior es posible sustentarlo cientficamente comparando las distancias a las
cuales migraron ambas muestras y al tamao idntico de ambas muestras.
4. El desarrollo de las tcnicas de biologa molecular especficamente la
tipificacin de ADN es una herramienta fundamental hoy en da en diversos
campos de la vida humana, desde el campo mdico hasta el criminalstico
pasando por la antropologa o la agricultura.
5. El conocimiento y desarrollo de dichas tcnicas permitir su comprensin y
aplicacin adecuadas.


36

REFERENCIAS
37

REFERENCIAS

Corporativo de servicios Periciales S.C. 10 de Marzo de 2009. http://www.servicios-
periciales.com/servicios/medicinalegal.php

Estacin Molecular. Digestin de la enzima de restriccin. 2006. Molecular Station. 28
de febrero de 2009. <http://www.molecularstation.com/es/dna/restriction-enzyme-
digestion/>

Flores Negrete, Abril. Medicina Legal en Mxico. 8 de Agosto del 2008. Criminologa y
Criminalstica. 28 febrero del 2009.
<http://criminologiaycriminalistica.wordpress.com/2008/08/18/historia-medicina-
legal/>

Frankel, Edward. DNA, el proceso de la vida. Mxico D.F.: Siglo XXI, 1989

Garrido, Agustn. Electroforesis en geles de agarosa. Monografas. 28 febrero 2009.
http://www.monografias.com/trabajos916/electroforesis-geles/electroforesis-
geles.shtml>

Genetics." Encyclopdia Britannica. 2009. Encyclopdia Britannica Online. 11 Mar.
2009 <http://0-search.eb.com.millenium.itesm.mx:80/eb/article-9110582>.

Meja, Rafael. MEDICINA FORENSE, MS QUE AUTOPSIAS. 2007. Salud y
Medicinas. 11 de marzo de 2009.
<http://www.saludymedicinas.com.mx/nota.asp?id=1128>

Neufled, Peter and Nevelle Coleman. 1990 When Science Takes the Witness Stand,
Scientific American, Vol. 262: 5

Ried Thomas. 2002. Extract DNA from whole blood (EDTA, heparin, citrate) using
phenol/chloroform method. 10 febrero 2009.
<http://www.riedlab.nci.nih.gov/publications/2438.2...>

Rodrguez Jorge, Ricardo y Jos Alberto Borges Lpez. La huella gentica en Medicina
Legal. ADN con fines forenses. Revista Electrnica de PortalesMdicos.com.
2007. <http://www.portalesmedicos.com/publicaciones/articles/643/1/La-huella-
genetica-en-Medicina-Legal-ADN-con-fines-forenses.html>

38

Servicio Mdico Forense. 2005. Tribunal Superior de Justicia del Distrito federal. 11 de
marzo de 2009. <http://www.tsjdf.gob.mx/semefo/index.html>

Solari, Alberto J uan. Gentica humana : fundamentos y aplicaciones en medicina Buenos
Aires: Editorial Madrid, 1999.
Thompson, William C. and Simon Ford 1990. Is ADN Fingerprinting ready for the courts?
New Scientist.


Trujillo, Gil. Medicina Forense. Mxico: Manual Moderno, 2002.


Tribunal Superior de J usticia del Distrito Federal. Tribunal Superior de J usticia del Distrito
Federal. 23 J anuary 2009. 11 March 2009
<http://ww.tsjdf.gob.mx/semeforo/index.html>.
Universidad de Alicante. Conceptos bsicos en gentica. Universidad de Alicante. 28
febrero de 2009.
http://www.ua.es/fgm/divgen/genetica/consuelo/conceptos_basicos.htm#



















39

APNDICES
40

APNDICE A
GLOSARIO DE TRMINOS
Acidos nuclicos: biomolculas formadas por
macropolmeros de nucletidos, o polinucletidos.
Est presente en todas las clulas y constituye la
base material de la herencia que se transmite de una
a otra generacin. Existen dos tipos, el cido
desoxirribonucleico (ADN) y el cido ribonuclico
(ARN).
ADN. Acido Desoxirribonucleico: cido nucleico
formado por nucletidos en los que el azcar es
desoxirribosa, y las bases nitrogenadas son adenina,
timina, citosina y guanina. Excepto en los retrovirus
que tienen ARN, el ADN codifica la informacin para
la reproduccin y funcionamiento de las clulas y
para la replicacin de la propia molcula de ADN.
Representa la copia de seguridad o depsito de la
informacin gentica primaria, que en las clulas
eucariticas est confinada en la caja fuerte del
ncleo.
ADN desnudo: ADN desprovisto de cubierta
protenica o lipdica. Para la transferencia de genes,
suele estar constituida por un plsmido bacteriano
que contiene el gen a transferir. Se inyecta
directamente en el tejido objetivo donde se expresa
generalmente sin integrarse en el genoma de las
clulas husped.
ADNr. ADN recombinante: molcula de ADN formado
por recombinacin de fragmentos de ADN de
orgenes diferentes. La (o las) protena que codifica
es una protena recombinante. Se construye
mediante la unin de un fragmento de ADN de origen
diverso a un vector, como, por ejemplo, un plsmido
circular bacteriano. El vector se abre por un sitio
especfico, se le inserta entonces el fragmento de
ADN de origen diverso y se cierra de nuevo. El ADN
recombinante se multiplica en una clula husped en
la que puede replicarse el vector.
ARN. Acido Ribonuclico: cido nucleico formado por
nucletidos en los que el azcar es ribosa, y las
bases nitrogenadas son adenina, uracilo, citosina y
guanina. Acta como intermediario y complemento de
las instrucciones genticas codificadas en el ADN.
Existen varios tipos diferentes de ARN, relacionados
con la sntesis de protenas. As, existe ARN
mensajero (ARNm), ARN ribosmico (ARNr), ARN de
transferencia (ARNt) y un ARN heterogneo nuclear
(ARN Hn). El ARN es normalmente el producto de la
transcripcin de un molde de ADN, aunque en los
retrovirus el ARN acta de plantilla y el ADN de copia.
ARNm ARN mensajero: molcula de ARN que
representa una copia en negativo de las secuencias
de aminocidos de un gen. Las secuencias no
codificantes (intrones) han sido ya extradas. Con
pocas excepciones el ARNm posee una secuencia de
cerca de 200 adeninas (cola de poli A), unida a su
extremo 3' que no es codificada por el ADN.
Alelos cada uno de los dos genes presentes en el
mismo lugar (locus) del par de cromosomas
homlogos. En general, uno de los diferentes estados
alternativos del mismo gen.
Aminocido. molcula orgnica que contiene los
grupos amino y carboxilo. Son los monmeros de las
protenas. De su diversidad como del enorme nmero
de combinaciones y longitudes resulta la enorme
variedad de protenas existentes.
Biologa. ciencia que trata del estudio de los seres
vivos y de los fenmenos vitales en todos sus
aspectos.
Biologa Molecular: parte de la biologa que trata de
los fenmenos biolgicos a nivel molecular. En
sentido restringido comprende la interpretacin de
dichos fenmenos sobre la base de la participacin
de las protenas y cidos nucleicos.
Biomolculas. elementos arquitectnicos bsicos de
los seres vivos, antiguamente llamados principios
inmediatos. Las biomolculas inorgnicos son
sobretodo agua, sales minerales y gases como
oxgeno y dixido de carbono. Los grupos de
compuestos orgnicos exclusivos de los seres vivos
son cuatro: glcidos, lpidos, protenas y cidos
nucleicos.
41

Biotecnologa: toda aplicacin tecnolgica que
utilice sistemas biolgicos y organismos vivos o sus
derivados para la creacin o modificacin de
productos o procesos en usos especficos.
Carcter: rasgo distintivo como expresin de un gen.
Catalizador: sustancia que altera la velocidad de una
reaccin qumica, acelerndola o retrasndola,
pudiendo recuperarse sin cambios esenciales en su
forma o composicin al final de la reaccin.
Clula: unidad de estructura y funcional de plantas y
animales que consta tpicamente de una masa de
citoplasma que encierra un ncleo (excepto en
procariontes) y limitada por una membrana
diferencialmente permeable. Es la unidad viva ms
simple que se reproduce por divisin. Normalmente
cada clula contiene material gentico en forma de
ADN incorporado a un ncleo celular, que se escinde
al dividirse la clula. Los organismos superiores
contienen grandes cantidades de clulas
interdependientes. Sin embargo, stas ltimas
pueden tratarse independientemente como clulas
libres en medios de cultivos apropiados.
Clulas sexuales: clulas que al unirse forman el
huevo fertilizado. En la especie humana los gametos
o clulas sexuales son el espermatozoide (masculino)
y el vulo (femenino).
Cepa: en microbiologa, conjunto de virus, bacterias u
hongos que tienen el mismo patrimonio gentico.
Clones: grupo de clulas o de organismos de idntica
constitucin gentica entre s y con el antepasado
comn del que proceden por divisin binaria o por
reproduccin asexual.
Clonacin celular: proceso de multiplicacin de
clulas genticamente idnticas, a partir de una sola
clula.
Clonacin de genes: tcnica que consiste en
multiplicar un fragmento de ADN recombinante en
una clula-husped (generalmente una bacteria o una
levadura) y aislar luego las copias de ADN as
obtenidas.
Clonacin molecular: insercin de un segmento de
ADN ajeno, de una determinada longitud, dentro de
un vector que se replica en un husped especfico.
Cdigo del triplete: sucesin de tres bases de tres
nucletidos en la molcula de ADN que cifra un
aminocido.
Cdigo Gentico: cdigo cifrado por la disposicin
de nucletidos en la cadena polinucletida de un
cromosoma que rige la expresin de la informacin
gentica en protenas, es decir, la sucesin de
aminocidos en la cadena polipeptdica. La
informacin sobre todas las caractersticas
determinadas genticamente en los seres vivos
gentica est almacenada en el ADN y cifrada
mediante las 4 bases nitrogenadas. Cada sucesin
adyacente de tres bases (codn) rige la insercin de
un aminocido especfico. En el ARN la timina es
sustituida por uracilo. La informacin se transmite de
una generacin a otra mediante la produccin de
rplicas exactas del cdigo.
Codn: secuencia de tres nucletidos consecutivos
en un gen o molcula de ARNm determinada por sus
bases nitrogenadas, que especificar la posicin de
un aminocido en una protena.
Congnito: Cuya naturaleza depende de eventos
ocurridos durante el embarazo y desarrollo
embrionario y fetal de un individuo.
Conjugacin: uno de los procesos naturales de
transferencia de material gentico de una bacteria a
otra, junto con la transduccin y la trasformacin,
realizado por contacto entre ellas.
Cromosoma: corpsculo intracelular alargado que
consta de ADN, asociado con protenas, y constituido
por una serie lineal de unidades funcionales
conocidas como genes. La especie humana tiene 46
cromosomas (23 pares). Su nmero vara desde el
mnimo de un cromosoma en las obreras de la
hormiga Myrmecia pilosula hasta los 1.260
cromosomas (630 pares) del helecho Ophioglussum
recitulatum.
Diagnstico gnico: tcnica de localizacin e
identificacin de la secuencia de un determinado gen
para establecer su normalidad o malformacin.
42

Permite predecir en ausencia de sntomas, en

algunos casos la existencia de enfermedades
congnitas, y, en otros, los factores ambientales de
riesgo que las provocarn.

Dominante: referido a un gen, el que slo necesita
una copia para expresarse por lo que enmascara la
presencia de su alelo recesivo. La mayora de los
alelos dominantes representan el estado
evolucionado y completamente funcional del gen.
Enzima: catalizador biolgico, normalmente una
protena, que mediatiza y promueve un proceso
qumico sin ser ella misma alterada o destruida. Son
catalizadores extremadamente eficientes y muy
especficamente vinculados a reacciones
particulares.
Enzimas de restriccin: enzimas bacterianas
sintetizadas como reaccin defensiva frente a la
invasin de ADN extrao, como, por ejemplo,
bacterifagos ADN, a los que degrada mientras que
el propio est protegido por metilaciones especficas.
Cada una de estas enzimas escinden el ADN siempre
en el mismo sitio, en loci especficos o secuencias
objetivo. Son las tijeras de la ingeniera gentica que
abrieron las puertas a la manipulacin gentica.
Especie: clasificacin taxonmica formada por el
conjunto de poblaciones naturales que pueden
cruzarse entre s real o potencialmente. Es decir, que
se determina de forma emprica: dos individuos
pertenecen a la misma especie si pueden generar
descendencia reproducible; en caso contrario son de
especies diferentes.
Evolucin biolgica: cambios primero molecular,
despus celular, y por ltimo de organismos, a lo
largo de la historia como resultado de mutaciones en
el ADN, de su reproduccin y de procesos de
seleccin. Los caracteres adquiridos en vida no se
heredan. La especie humana comparte el 98'4% del
ADN con el de dos especies de chimpanc, el comn
y el pigmeo. La evolucin depende sobre todo de
mutaciones en los genes reguladores de los genes
estructurales, que hacen que se activen o desactiven,
ms que de mutaciones en los mismos genes
estructurales.
Exones: secuencias de ADN especficas de genes,
que codifican secuencias de aminocidos en las
protenas.


Expresin del gen: producto proteico resultado del
conjunto de mecanismos que efectan la
decodificacin de la informacin contenida en un gen,
procesada mediante transcripcin y traduccin.
Fenotipo: conjunto de todas los caracteres aparentes
expresados por un organismo, sean o no hereditarias.
Gen: unidad fsica y funcional del material hereditario
que determina un carcter del individuo y que se
transmite de generacin en generacin. Su base
material la constituye una porcin de cromosoma
(locus) que codifica la informacin mediante
secuencias de ADN.
Gen estructural: el que regula la formacin de un
enzima o de una protena estructural.
Gen hbrido: el formado por recombinacin in vitro de
dos o ms fragmentos de ADN.
Gen operador: el que pone en funcionamiento el gen
estructural.
Gen regulador: el que modifica la accin del
operador.
Gen recesivo: el que necesita doble "dosis" para
expresarse.
Gen represor: el que reprime el operador.
Gentica: ciencia que trata de la reproduccin,
herencia, variacin y el conjunto de fenmenos y
problemas relativos a la descendencia.
Genoma: conjunto de todos los genes de un
organismo, de todo el patrimonio gentico
almacenado en el conjunto de su ADN o de sus
cromosomas.
Genotipo: constitucin gentica, de uno o ms
genes, de un organismo en relacin a un rasgo
hereditario especfico o a un conjunto de ellos.
43

Hereditario: que se transmite de generacin en

generacin.
Hibridacin: proceso de generacin de una
molcula, clula u organismo combinado con material
gentico procedente de organismos diferentes. En las
tcnicas tradicionales, los hbridos se producan
mediante el cruzamiento de variedades distintas de
animales y plantas por alineacin o apareamiento de
bases de dos molculas de ADN de cadena sencilla
que son homlogas o complementarias. La tecnologa
de fusin celular y la manipulacin transgnica son
las nuevas modalidades de hibridacin introducidas
por la manipulacin gentica.
Hidratos de Carbono: biomolculas orgnicas
formadas por polialcoholes con un grupo aldehdo o
cetona. Debe su nombre, y el de carbohidratos, a que
su frmula emprica es Cn(H2O)m aunque algunos
compuestos pueden tener frmulas ligeramente
diferentes de esta proporcin general. Tambin se les
llama glcidos (dulces), glcidos, glicoles y azcares.
Realizan funciones energticas, plsticas o
estructurales formando parte de las estructuras
celulares, y almacenan informacin como seales de
la identidad celular.
Huella gnica: representacin grfica de
determinadas secuencias del genoma que funcionan
como un cdigo de barras de la identidad de un
individuo.
Ingeniera gentica: conjunto de tcnicas utilizadas
para introducir un gen extrao (heterlogo) en un
organismo con el fin de modificar su material gentico
y los productos de expresin.
Intrones: secuencias de ADN que no codifican genes
y cuya funcin es desconocida. El 90% del genoma
humano no es codificante.
In situ: referido a conservacin de recursos
genticos, la que se realiza en su medio natural, y
que para las especies domesticadas se verifica en el
medio donde desarrollaron sus propiedades
distintivas
In vitro: literalmente en el vidrio, en el tubo de
ensayos del laboratorio, investigado y manipulado
fuera del organismo vivo.
Kilobase (Kb): unidad empleada para medir la
longitud de los fragmentos de ADN constituidos por
una serie de bases. 1 Kb = 1.000 bases.
Lpidos: grupo de biomolculas orgnicas
qumicamente muy diverso con las caractersticas
comunes de la insolubilidad en agua, la solubilidad en
disolventes orgnicos polares y de poco densidad.
Sinnimo del trmino comn "grasas".
Loci: en latn, plural de locus.
Locus: en gentica, punto de un cromosoma
ocupado por un gen.
Manipulacin gentica: formacin de nuevas
combinaciones de material hereditario por insercin
de molculas de cido nucleico, obtenidas fuera de la
clula, en el interior de cualquier virus, plsmido
bacteriano u otro sistema vector fuera de la clula. De
esta forma se permite su incorporacin a un
organismo husped en el que no aparecen de forma
natural pero en el que dichas molculas son capaces
de reproducirse de forma continuada. Al referirse al
proceso en s, puede hablarse de manipulacin
gentica, ingeniera gentica o tecnologa de ADN
recombinante. Tambin admite la denominacin de
clonacin molecular o clonacin de genes, dado que
la formacin de material heredable puede propagarse
o crecer mediante el cultivo de una lnea de
organismos genticamente idnticos.
Mapa gentico: diagrama descriptivo de los genes en
cada cromosoma
Material gentico: todo material de origen vegetal,
animal, microbiano o de otro tipo que contenga
unidades funcionales de la herencia.
Microinyeccin: tcnica que permite introducir en
una clula un gen en solucin, gracias a una
micropipeta y bajo microscopio.
Microorganismo: organismos microscpicos
pertenecientes por regla general a virus, bacterias,
algas, hongos o protozoos.
Monmero: compuesto de bajo peso molecular
cuyas molculas son capaces de reaccionar entre s
o con otras para dar lugar a un polmero
44

Mutacin: cambio del material gentico. Puede

afectar a cambios en un par de bases del ADN, en un
gen especfico o en la estructura cromosmica. La
mutacin en la lnea germinal o relativa a las clulas
sexuales, puede conducir a patologas genticas o a
cambios substanciales de la evolucin biolgica. En
relacin a las clulas somticas la mutacin
constituye el origen de algunos cnceres y de ciertos
aspectos del envejecimiento.
Nucletido: monmero de los cidos nucleicos,
integrado por la combinacin de una base
nitrogenada (purina o pirimidina), un azcar (ribosa o
desoxirribosa) y un grupo fosfato. Se obtiene como
producto de la hidrlisis de cidos nucleicos por
accin de nucleasas.
Operador: segmento especial del DNA adyacente al
promotor que forma parte de la regin controladora
de la transcripcin de un opern. El operador
interacciona con la protena represora regulando de
esta manera el proceso de la transcripcin
sincronizada del opern correspondiente.
Opern: conjunto del gen operador con los genes
estructurales que controla.
Organismo: entidad biolgica capaz de reproducirse
o de transferir material gentico, incluyndose dentro
de este concepto a las entidades microbiolgicas,
sean o no celulares. Casi todo organismo est
formado por clulas, que pueden agruparse en
rganos, y stos a su vez en sistemas, cada uno de
los cuales realizan funciones especficas.
Palndromos: fragmento de dos cadenas de ADN en
que las bases complementarias de la doble hlice
estn ordenadas segn una simetra rotacional.
Constituyen el sustrato de las endonucleasas de
restriccin que rompen la molcula en el entorno del
eje de simetra y en ambas cadenas. Son segmentos
capicas que resultan iguales vistos en uno u otro
sentido. Como el capica alfabtico anilina, anitina.
Pptido: polmero o cadena de aminocidos.
Plsmido: forma no celular de vida, fragmento
circular de ADN bicatenario que contienen unos
cuantos genes y se encuentran en el interior de
ciertas bacterias. Actan y se replican de forma
independiente al ADN bacteriano y pueden pasar de
unas bacterias a otras. Igual que los provirus no
producen enfermedades pero inducen pequeas
mutaciones en las clulas. Se utilizan como vectores
en manipulacin gentica.
Polmero: compuesto qumico formado por la
combinacin de unidades estructurales repetidas
(monmero) o cadenas lineales de la misma
molcula.
PRINCIPIO CENTRAL DE LA BIOLOGA
MOLECULAR: formulado por Crick, postula que la
informacin gentica contenida en los cromosomas
determina la sntesis de las protenas mediante la
traduccin de un molde intermediario de ARN,
formado anteriormente por la transcripcin del ADN.
Tambin satisface la hiptesis formulada
anteriormente por Beadle, Tatum y Horowitz de un
gen = un enzima. Tiene dos casos que escapan a la
regla: la transcripcin inversa como reaccin
complementaria de doble sentido y, aparentemente,
los priones.
Protena: biomolculas formadas por
macropolmeros de aminocidos, o
macropolipptidos. Actan como enzimas, hormonas
y estructuras contrctiles que atribuyen a los
organismos sus propias caractersticas de tamao,
potencial metablico, color y capacidades fsicas.
Proyecto Genoma Humano: Programa de
Investigacin consistente en determinar la secuencia
completa de nucletidos de los cromosomas de la
especie humana y de organismos modelo utilizados
en experimentacin de laboratorio (la bacteria
Escherichia coli, la levadura Bacillus subtilis, el
nematodo Caenorhabditis elegans o la mosca del
vinagre Drosofila melanogaster), para conocer todos
y cada uno de los genes humanos, su localizacin y
funcin. Liderado por James D. Watson y
dependiente del Departamento de Energa y de los
Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidos,
cuenta con un presupuesto anual de 200 millones de
dlares, desde 1990 hasta 2005. Entre 1981 y 1995
se han concedido en todo el mundo 1.175 patentes
sobre material gentico humano.
45

PCR Reaccin en cadena de polimerasa: tcnica de

anlisis del genoma mediante la amplificacin
ilimitada de porciones especficas del ADN, aunque
sean minsculas. Es un mtodo revolucionario de
amplificacin exponencial del ADN por la intervencin
de una enzima termoestable, la Taq polimerasa,
inventado por el americano Kary Mullis en 1985 por lo
que se le concedi en 1993 el premio Nobel. Es el
proceso fundamental para la secuenciacin del
Proyecto Genoma Humano.
Recombinacin gentica: redisposicin gentica. In
vitro entre fragmentos de ADN de orgenes diferentes
o no contiguos. In vivo entre copias homlogas de un
mismo gen (manipulacin cromosmica), o como
resultado de la integracin en el genoma de un
elemento gentico (trasposn, profago o transgn).
Replicacin: proceso por el que una molcula de
ADN o ARN origina otra idntica a la preexistente. En
general, duplicacin del cido nucleico.
Replicn: estructura de cido nucleico con
capacidad de autoduplicacin. Son replicones los
cromosomas de las clulas eucariotas, el ADN
nuclear de los procariotas, los plsmidos y los cidos
nucleicos de los virus.
Ribosomas: pequeas partculas donde se realiza la
sntesis de protenas en todos los organismos vivos.
Secuencia de ADN: orden de encadenamiento de las
bases nitrogenadas de los nucletidos que
constituyen el ADN y que cifra toda la informacin
gentica. Cuando es codificante (exn), define el
orden de los aminocidos que forman la protena
correspondiente.
Sonda de ADN: fragmento de ADN conocido que se
utiliza para averiguar si los cromosomas investigados
contienen la secuencia complementaria. La FDA
americana ha autorizado 60 productos diagnsticos
basados en sondas de ADN que determinan la
predisposicin a padecer enfermedades.
Tcnica de recombinacin del ADN: conjunto de
tcnicas de manipulacin gentica que emplea la
recombinacin in vitro asociada a la insercin, rplica
y expresin del AADN recombinado dentro de clulas
vivas.
Terapia gnica: conjunto de los procesos destinados
a la introduccin in vitro o in vivo de un gen normal en
clulas, germinales o somticas, en las que el mismo
gen, anormal, provoca una deficiencia funcional,
origen de una enfermedad, o la de un gen codificador
de una protena, por ejemplo, con una accin
antitumoral en las clulas cancerosas, o antivrica en
clulas infectadas por un virus patgeno.
Traduccin gentica: cambio de la informacin
contenida en la secuencia de los cuatro nucletidos
del ARNm por la debida al ordenamiento de los 20
aminocidos en la estructura de las cadenas
polipeptdicas. Cada aminocido se une a una
pequea molcula especfica de ARN que sirve para
su identificacin, denominado ARN de transferencia.
Esta molcula transfiere los aminocidos libres de la
solucin al punto de formacin de las cadenas
polipeptdicas cuando est indicado por las
instrucciones contenidas en la molcula de ARN
mensajero. El proceso tiene lugar en la interaccin de
los codones del ARNm con la regin del anticodon de
los aminoacil-ARNt. Se distinguen en ella las etapas
de iniciacin, elongacin y terminacin en la que
participan diferentes factores proteicos.
Transcripcin gentica: biosntesis de una molcula
de ARN por polimerizacin de nucletidos
complementarios a un ADN patrn. Esta molcula de
ARN es un precursor de ARNm y representa una
copia fiel de la secuencia complementaria de ADN de
la que ha sido transcrita. Una secuencia especfica
situada por delante del gen (promotor) acta
identificando el sitio de inicio de la transcripcin. En el
ARN, el uracilo (U) ocupa las posiciones que la
timidina (T) tiene en el ADN. Es la copia de trabajo de
determinados segmentos de ADN.
Transcripcin inversa: proceso de sntesis de ADN
complementario a partir del ARN genmico de los
retrovirus efectuado por la enzima transcriptasa
inversa.
Transduccin: proceso natural de transferencia de
material gentico, originalmente entre bacterias,
como la conjugacin y la transformacin, que se
efecta por medio de un bacterifago que transporta
un fragmento cromosmico del husped a otra
bacteria.
46

Transfeccin de ADN: introduccin en una clula en

cultivo convertida en permeable al ADN, de
molculas de molculas de ADN extraas
(heterlogas) insertadas en un vector. Rene
caractersticas comunes a la transformacin y a la
infeccin por bacterifagos. La transformacin
requiere la integracin del ADN exgeno en el
cromosoma bacteriano mientras que la transfeccin
usualmente no la requiere. El ADN extrao se asocia
con el del cromosoma del husped y se expresa
como un fenotipo identificable.
Transformacin bacteriana: uno de los procesos
naturales de transferencia de material gentico de
una bacteria a otra, junto con la conjugacin y la
transduccin, que es una integracin directa del ADN.
Experimentalmente consiste en hacer penetrar un
fragmento de ADN en una bacteria para provocar en
ella una recombinacin gentica. Por extensin
(abusiva) se habla a veces de transformacin para
designar un proceso idntico que afecta a las clulas
eucariticas (levaduras, clulas animales y
vegetales).
Transformacin celular: en una clula, adquisicin
de ciertas propiedades de una clula tumoral bajo la
accin de virus o de genes causantes de tumores
(oncgenos).
Vector: portador, que transfiere un agente de un
husped a otro. Sistema que permite la transferencia,
la expresin y la replicacin de un ADN extrao en
clulas husped para una posterior clonacin o
transgnesis. Se trata de una molcula de ADN
(plsmido bacteriano, microsoma artificial de levadura
o de bacteria) o de un virus defectuoso. Por
extensin, un vector designa todo sistema de
transferencia del gen, por ejemplo, un sistema
sinttico como el de los liposomas.
Virus: entidad acelular infecciosa que, aunque puede
sobrevivir extracelularmente, es un parsito absoluto
porque solamente es capaz de replicarse en el seno
de clulas vivas especficas, pero sin generar energa
ni ninguna actividad metablica. Los componentes
permanentes de los virus son cido nucleico (ADN o
ARN, de una o de dos cadenas) envuelto por una
cubierta proteica llamada cpside.













47

APNCIDE B
Escenarios alternativos de la tcnica de identificacin de ADN

Tipificacin de ADN, perfil de ADN, e impresin de huella gentica son nombres
para el mismo proceso, un proceso que utiliza el ADN para demostrar la relacin o
identidad de cada uno de los seres humanos, plantas, o animales. La tipificacin
de ADN se ha convertido en tema inters por su uso del anlisis forense en los
casos penales importantes, como el de OJ Simpson. Las aplicaciones de la
tipificacin de ADN sin embargo, son mucho ms amplios que solamente la
ciencia forense y estn teniendo un profundo impacto en nuestra sociedad.
Esta tcnica se utiliza en la medicina forense, en la antropologa y la biologa de
conservacin no slo para determinar la identidad de los individuos sino tambin
para determinar su relacin. Este proceso ha sido utilizado para liberar a
sospechosos inocentes, reunir a nios con sus familiares, identificar animales
robados y demostrar que la carne de ballena ha sido sustituida por el pescado en
el sushi. Se usa en tiempos de guerra para ayudar identificar los restos de
soldados muertos en combate. Tambin se est utilizando para encontrar los
vnculos genticos de enfermedades hereditarias. Adems, los cientficos estn
aprendiendo mucho acerca de nuestra historia evolutiva gracias a los anlisis de
ADN.
Cada uno de los siguientes prrafos describe un escenario en el que el ADN ha
sido utilizado para mostrar cmo las personas estn relacionadas entre s o para
demostrar que una persona es (o no) el autor de un delito. Estos escenarios
proporcionan un contexto para el uso de la tipificacin de ADN, para su uso en la
enseanza de biologa molecular, biologa de conservacin, y la biotecnologa.
Consideramos importante difundir los usos mltiples de la tcnica que hemos
desarrollado como parte de nuestra investigacin por lo que describiremos a
continuacin algunas posibilidades de aplicacin en diversos mbitos cientficos y
de salud.
1. Identificacin de alimentos (identificacin de especies en peligro de
extincin).

La pureza (o impureza) de la carne molida ha sido demostrada utilizando la
identificacin del ADN. La hamburguesa ha demostrado ser una mezcla de carne
48

de cerdo y otras carnes que no sean de origen vacuno. Usando equipos de

prueba porttiles las autoridades han utilizado este mtodo para determinar si el
pescado servido en el sushi era realmente carne de ballenas y delfines. Estos son
especies en peligro que estn protegidas por ley internacional.
2. Delincuentes acusados y condenados dejados en libertad a causa de la
identificacin de su ADN

Un hombre encarcelado durante 10 aos fue puesto en libertad cuando las
pruebas de ADN, las cuales no estaban disponibles en el momento de su
encarcelamiento, fueron usadas para demostrar que l no poda haber sido el
violador. Estadsticas demuestran que aproximadamente 1/3 de todos los
sospechosos de asalto sexual son liberados como resultado de las pruebas de
ADN.
3. La identificacin de restos humanos.

Los cientficos han utilizado la tipificacin del ADN para confirmar que el cuerpo
en una tumba fue (o no) de la persona que se supona que deba estar all. Se
cree que huesos encontrados en Rusia son de los Romanov, la ltima familia
imperial de Rusia. El Zar Nicholas II y su familia fueron ejecutados por los
bolcheviques en 1918. Expertos de todo el mundo han estado estudiando los
huesos para ver que coincidan con los crneos, dientes, y otras caractersticas
con fotografas. El ADN de los huesos se compar con el de los descendientes
conocidos y se determin que los huesos pertenecan al zar y su familia
("Identificacin de los restos de la Familia Romanov por los anlisis de ADN
"Nature Genetics vol 6, 130, 1994.)
4. Determinando la relacin de los seres humanos.

LA tipificacin de ADN ha demostrado que el hombre de hielo de 5000 aos de
antigedad encontrado en un glaciar derretido est estrechamente relacionado
con los europeos modernos. ("Hombre de Hielo se vuelve real." Ciencia, vol.
264:1669. 17 de junio de 1994.) Las pruebas de ADN tambin "eliminan todas las
sospechas de que el cuerpo era un fraude y que haba sido colocado en el hielo ",
dice Svante Paabo de la Universidad de Munich. (Science, vol. 264:1775. 17 de
junio de 1994).
5. Estudiando la relacin entre los pueblos antiguos.

49

ADN encontrado en sitios arqueolgicos al oeste de Montana se est utilizando

para ayudar determinar cuntos grupos de personas (familias) relacionadas haba
en ese sitio particular. (Morell, Virginia. "Jalando pelo de la tierra." Science, vol.
265:741-745 de agosto de 1994.)

6. Pruebas de ADN de familias.

Las pruebas de ADN de familias se han utilizado en la Argentina y El Salvador
para identificar los nios de al menos 9.000 ciudadanos de estos pases que
desaparecieron entre 1975 y 1983, secuestrados por las unidades especiales de
la milicia y la polica. Muchos de los nios nacidos de los desaparecidos adultos
fueron secuestrados y adoptados por "padres" militares que afirman ser sus
padres biolgicos. Despus de las pruebas genticas de una familia ampliada se
revel la verdadera identidad de un nio, el nio fue colocado en la casa de sus
familiares biolgicos. Se tema que el traslado de un nio de sus "padres" militares
quienes eran secuestradores, pero que haban criado al nio durante aos, fuera
agonizante. En la prctica, los nios transferidos se logran integrar en sus familias
biolgicas con el mnimo trauma.
7. Identificando organismos que causan enfermedades.

Eva Harris, cientfico de la UCSF, ha ayudado a los cientficos en Nicaragua y
Ecuador, para aprender a utilizar tecnologa de ADN para detectar la tuberculosis,
e identificar el virus del dengue y diversas cepas de Leishmania. Otras pruebas
disponibles causan la espera de varias semanas, mientras los organismos que
provocan la enfermedad son cultivados y enviados a laboratorios extranjeros para
ser identificados. (Marcia Barinaga, "Una Tecnologa Personal del Esfuerzo de
Transferencia en diagnsticos de ADN. "Ciencia, vol. 266:1317-1318. Nov. 25,
1994.)
8. Identificando a los padres biolgicos (pruebas de paternidad)

Nias en Florida fueron descubiertas despus de haber sido cambiadas al nacer
cuando una nia muri de una enfermedad hereditaria. La enfermedad no era de
su familia, pero se saba que esa enfermedad estaba en la familia de otra nia,
nacida en el mismo hospital y aproximadamente a la misma hora que naci.
9. Demostrar la paternidad

50

Una mujer violada por su jefe el 7 de enero de 1943, a sus 18 aos, qued
embarazada. El nio saba quin era su padre, pero mientras l vivi, se neg a
admitir que fuera su padre. Despus de que el hombre muri, las pruebas de ADN
demostraron que era su hija y ella fue concedida la mitad de su patrimonio. (Un
nio de Violacin Gana Premio de Estado de Su Padre. "New York Times, 10 de
julio de 1994.)
10. Determinar la eficacia de los trasplantes de mdula sea

"Huellas dactilares de ADN pueden ayudar a los mdicos a supervisar los
trasplantes de mdula sea. La leucemia es un cncer de la mdula sea y la
medula enferma debe ser eliminada. La medula sea crea nuevas clulas
sanguneas, por lo que la persona que sufre de leucemia morir sin un trasplante
de una mdula sea sana. Los mdicos pueden saber rpidamente si el trasplante
ha tenido xito tipificando el ADN del paciente y del donante. Si el trasplante ha
funcionado, una huella dactilar de la sangre del paciente muestra las bandas del
donante. Pero si el cncer de mdula sea no ha sido destruido entonces las
clulas cancergenas se multiplican rpidamente y las bandas del propio paciente
predominan. ("Nuestra mejor tarjeta de identidad en salud y en la enfermedad "
en" Dentro de la ciencia ", New Scientist, 16 de noviembre, 1991.)
11. Demostrando la relacin de los inmigrantes.

Las huellas dactilares de ADN se han utilizado como prueba de paternidad para
fines de inmigracin. En 1986, la Oficina de Gran Bretaa recibi 12.000
solicitudes de inmigracin de las esposas y los nios de hombres de Bangladesh y
de Pakistn que residen en el Reino Unido. La carga de la prueba recae sobre el
solicitante, pero estableciendo la identidad de la familia puede ser difcil debido a
las pruebas documentales incompletas. Las pruebas de sangre tambin pueden
ser inconclusas, pero los resultados de la toma de huellas de ADN son aceptados
como prueba de la paternidad por la Oficina de Gran Bretaa. (Huellas de ADN,
fuente desconocida: Basado en Jeffreys AJ et al., "identificacin positiva de una
prueba-caso de inmigracin usando huellas de ADN" Nature, vol. 317:818-819,
1985.)
12. Confirmando la relacin entre los animales.

Los cientficos que extrajeron ADN a travs de los cabellos de chimpancs en
toda frica ahora tienen pruebas de que podra haber una tercera especie de
chimpanc. Al mismo tiempo han aprendido cosas sobre el comportamiento del
51

chimpanc y patrones de parentesco que podran haber tomado aos para

teorizar. Descubrieron un grupo de chimpancs viviendo en el oeste de frica,
que son genticamente distintos de los chimpancs que viven en otras partes de
frica, lo que sugiere que el grupo puede ser una especie en peligro de extincin.
Los cientficos han descubierto que los chimpancs machos que viven en una
zona determinada son a menudo tan estrechamente relacionados como medio-
hermanos, y muchos de los as llamados sub-especies pueden ser parte de una
sola especie. El parentesco de los chimpancs machos puede explicar por qu, a
diferencia de otros primates, los machos son muy amigables el uno al otro.

13. Las pruebas de ADN de material vegetal ubica al asesino en la escena del
crimen.

Dos vainas de semillas pequeas atrapadas en la cama de su camioneta pick-up
ubica a un asesino acusado en la escena del crimen. Las pruebas genticas
demostraron que el ADN en la vaina de semillas corresponde exactamente al ADN
de una planta encontrada en la escena del crimen. El acusado haba admitido que
le haba dado a la vctima un paseo, pero neg haber estado cerca de la escena
del crimen.












APENDICE C
FOTOGRAFAS

e)
d) c)
b) a)

Serie 1. Condiciones de experimentacin y digestin de ADN

a) La estacin de trabajo cuenta con una cmara horizontal de electroforesis para geles de ADN,
micropipetas, puntas y los reactivos empleados b) En la estacin de trabajo se observa la fuente
de poder con la que se hace pasar una corriente elctrica a la cmara de electroforesis c) La
digestin enzimtica se logra aadiendo las enzimas de restriccin EcoR1/Pst1 a las diferentes
muestras de ADN e d) incubando durante 45 minutos a 37C.

52

d) c)
b) a)

Serie2. Electroforesis en gel de agarosa

a) Los geles de cargan en la cmara de electroforesis con cada muestra de ADN. En cada pocillo
deben depositarse 20 l de muestra b) Se identifica cada carril y una vez cargado todo el gel se
procede a c) conectarlo a la fuente de poder durante 45 min a 100 V d) Imagen del gel durante la
corrida. Se observa que los colorantes que se aadieron a las muestras corren a lo largo del gel
mientras se aplica una corriente elctrica.

53

f) e)
d) c)
b) a)


Serie 3. Tincin y desteido de geles
a) Una vez terminado el tiempo de corrida, se retira con cuidado de la cmara de electroforesis y
se observa de color blanco excepto en los sitios sonde quedan los colorantes. b) Se procede a su
tincin depositando el gel en una cubeta con solucin de teido 100x (200 ml aprox.) durante 2
minutos c) Despus de transcurridos los dos minutos, se transfieren los geles a una cubeta con
agua a 45C durante 10 segundos d) se realizan dos lavados ms y e) y f) se muestra los geles
con las tinciones en las distintas fracciones de las muestras de ADN.

54