AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE

GRAU

FACULTAD DE: INGENIERA AMBIENTAL Y MEDICINA HUMANA.

CURSO: LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA

PROFESOR: FRANCISCO JAVIER MARIA RAMIREZ CRUZ

INFORME DE PRCTICAS

PRACTICA N: 5

TTULO: CROMATOLOGA

INTEGRANTES: ESTRADA DEL CAMPO, ALEJANDRA

GUTIRREZ HUAMANYALLI, KAREN

HORARIO DE PRCTICAS
DIA: MIRCOLES
HORA:

04:00 - 06:00 PM

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: MIERCOLES 04 DE MAYO

DEL 2016
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: MIRCOLES 10 DE MAYO DEL
2016

LIMA PER

CAPTULO

5
CROMATOGRAFA

INTRODUCCIN
La cromatografa comprende un conjunto de tcnicas que tienen como finalidad la separacin de mezclas basndose en la
diferente capacidad de interaccin de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase mvil
(una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el disolvente) a travs de una fase
estacionaria fija slida. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra, de forma que los componentes
la atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo. Cada uno de los componentes de la mezcla presenta un
tiempo caracterstico de paso por el sistema, denominado tiempo de retencin. Cuando el tiempo de retencin del compuesto
deseado difiere del de los otros componentes de la mezcla, ste se puede separar mediante la separacin cromatogrfica.

Tipos de Cromatografa
Segn el fenmeno fsico predominante y el estado fsico involucrado existes 3 tipos de cromatologa, de absorcin, de
particin y de intercambio ionico.
Por ello, es ms comn clasificarla en: Cromatografa sobre papel, en capa fina (c.c.f.), en columna (c.c.), en fase
gaseosa (c.g.), Cromatografa de alta performancia (HPLC) segn la tcnica empleada y la naturaleza de las fases.

CROMATOGRAFIA DE ADSORCIN
Es aquel sistema cromatogrfico en que la fase fija es un slido y la separacin o desplazamiento depende del equilibrio
adsorcin-desorcin entre el compuesto y las fases fija y mvil. La adsorcin es un fenmeno fsico de superficie que consiste
en que las molculas de una sustancia (adsorbato) se adhieren o concentran en la superficie de un slido finamente dividido
(adsorbente). El proceso inverso, o sea la separacin de las molculas adsorbidas se denomina desorcin

CROMATOGRAFA DE REPARTO O PARTICIN

En este mtodo la fase fija es un lquido (generalmente agua) colocado sobre un soporte inerte slido. La fase mvil
es otro lquido o un gas. Existirn 2 tipos de separacin: lquido-lquido y gas-lquido. El nico factor que influye en el
desplazamiento de un compuesto, es la solubilidad relativa de ste en las fases. Las sustancias que son solubles
slo en la fase mvil o solvente, se desplazarn a la misma velocidad que ste, mientras que aquellas solubles
nicamente en la fase fija no se desplazarn de donde fueron depositadas.
*Si las sustancias son coloreadas, no hay ninguna dificultad pues se visualizan directamente; pero, la mayora de
compuestos son incoloros o blancos, por lo que no son visibles directamente y necesitaremos de un "revelador" para
su localizacin.
Los mtodos fsicos tienen la ventaja de no modificar la sustancia, pudiendo recuperarse para usarla en otro anlisis.
Los ms comnmente usados son la fluorescencia (emisin de radiacin visible al absorber rayos ultravioleta) y la
radiactividad (cuando se trabaja con compuestos marcados por istopos radiactivos). Son pocas las
sustancias que pueden revelarse con estos mtodos.
Los mtodos qumicos utilizan un reactivo qumico (revelador) que se aplican o pulverizan sobre el cromatograma y
al reaccionar con la sustancia dan productos coloreados o fluorescentes (visibles a la luz ordinaria o UV).

RELACION DE FRENTE o Rf. Es una constante usada especialmente en el caso de la cromatografa sobre papel y
en capa fina. Estos mtodos pueden servir para intentar

la

identificacin

de

un

compuesto

ya

que

el

desplazamiento de una sustancia respecto al desplazamiento del disolvente es constante y caracterstico de ella
(siempre que todas las condiciones permanezcan constantes), conocindose como Rf. Se obtiene al dividir la
distancia recorrida por la sustancia entre la distancia recorrida por el solvente:
RF= Distancia recorrida por la sustancia
Distancia recorrida por el disolvente

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA (c.c.)

Es til en la separacin de una cantidad apreciable

de mezclas de sustancias y puede hacerse por adsorcin,

reparto o intercambio inico.

Se rellena cuidadosamente la columna cromatogrfica (tubo de vidrio con una llave en el extremo inferior) con la fase
fija. Si el mtodo es de adsorcin el adsorbente debe estar pulverizado y seco. Si es de particin, las partculas
slidas deben estar cubiertas de una capa lquida.
Se deposita o siembra la muestra a separar (en solucin) por la parte superior de la columna y luego se va
adicionando la fase mvil (elucin).
El eluyente tratar de arrastrar las sustancias hacia abajo, mientras que la fase fija tratar de retenerlas. Segn el
equilibrio adsorcin desorcin o segn el coeficiente de solubilidad de cada compuesto, algunos sern desalojados
(eluidos) ms rpidamente que otros, y los recibiremos primero.
El mtodo consta de 3 etapas: llenado de la columna, aplicacin de la muestra y elucin.
El llenado tiene por objeto preparar una columna uniformemente compacta, sin rajaduras ni burbujas de aire. Puede
hacerse de 2 maneras:
a)

Suspender el adsorbente agitndolo con un solvente adecuado y verter poco a poco esta suspensin. El

adsorbente va sedimentando y formando una columna uniforme.

b)

Aadir el adsorbente seco, en pequeas porciones y dando golpes a la columna para que el adsorbente se

deposite en forma uniforme.

La cantidad de adsorbente y tamao de la columna depende de la cantidad de muestra a separar. Generalmente se
requiere unos 20 a 30g de adsorbente por cada gramo de muestra, aunque en algunos casos puede necesitarse
relaciones mucho mayores (1:100).
Tambin es importante la relacin entre dimetro de la columna y su altura. Si la columna es demasiado corta, la
distancia recorrida por la muestra no es suficiente para permitir una separacin adecuada. La relacin dimetroaltura suele ser de 18 y 1 10.

PARTE EXPERIMENTAL

CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL

Sobre una cinta de papel Whatman N 1 de 3 x 10 cm se realizan las siguientes operaciones:

a) A 1,5 cm de un extremo de la tira de papel de filtro, marque una tenue lnea recta con lpiz (lnea de partida). No
use tinta.

b)

Doble la tira longitudinalmente, quedando dividida en 2 mitades. En cada mitad, y sobre la lnea de partida,

seale el punto medio o lugar de siembra.

c) En uno de estos puntos y con la ayuda de un capilar, deposite unas gotitas (2 3) de la mezcla a analizar (azul
de metileno y anaranjado de metilo). En el otro punto sembrar, uno de los colorantes (cualquiera) en solucin. Espere
que cada gota seque antes de sembrar la siguiente.
d)

Deje unos minutos para que se evapore el solvente de siembra (puede ayudarse con corriente de aire) y luego

introduzca la tira en un tubo de ensayo de 2 x 15 cm en cuyo interior se ha colocado el solvente de desarrollo (1propanol - butanona - Agua 4:1:1) (La zona de siembra no debe quedar sumergida en el solvente). No mueva hasta
que haya terminado el desarrollo.
e)

Cuando la fase mvil haya ascendido unos 8-10 cm, retire el papel, marque el frente del solvente (con lpiz) y

djelo secar.
f) Observe y compare las 2 muestras sembradas y calcule el Rf de cada sustancia.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

a) Las placas se preparan introduciendo 2 lminas portaobjeto (juntas) en una suspensin preparada al agitar 35g
de Silicagel G. ( 60 g de almina) en 100 mL de una mezcla cloroformo-metanol (2:1). Esta suspensin puede
conservarse en recipientes bien cerrados.
b) Se separan los portaobjetos, se dejan secar y se sealan 2 puntos (equidistantes de los bordes y del centro) que
se encuentren en una imaginaria "lnea de partida" a 1 cm del borde inferior (Use nicamente lpiz).
c)

En uno de los puntos se siembra (en solucin y con un capilar) unas 2 3 gotas de la mezcla anaranjado de

metilo-azul de metileno y en el otro uno de ellos. Dejar secar el solvente.

d) Introducir la placa en una cmara de desarrollo que contiene la fase mvil (1-Propanol-butanona-Agua 4:1:1).
e)

Cuando el solvente est por llegar al borde superior de la plaquita, retire sta, marque el frente del solvente,

dejar secar y calcule el Rf.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.
Aplicaremos esta tcnica para separar la misma mezcla (Azul de metileno-Anaranjado de metilo) que utilizamos
para la Cromatografa sobre papel y en capa fina.
a) Preparacin de la Columna.- Introducir un trozo de algodn hasta el fondo de la columna. Adicionarle unos 10
cc de etanol y luego agregar una suspensin formada al agitar 10 g de Silicagel (o almina) en unos 20 mL de etanol.
Abrir la llave de la columna hasta que la altura del solvente sea de 1 mm por encima de la superficie del adsorbente.
b)

Siembra: Depositar 1 2 mL de la mezcla de colorantes a separar (en solucin alcohlica), abrir la llave

hasta que todo el colorante sea adsorbido por la fase fija.

c) Elucin: Adicionar ms etanol (eluyente) y observar que uno de los colorantes se desplaza ms que el otro. Ir
agregando etanol hasta que se eluya este colorante. Cambie de recipiente y eluya el segundo colorante. Si fuera
necesario, cambie el etanol por agua acidulada para eluir este segundo colorante. d) Anlisis de los eluatos
por Cromatografa en capa fina al portaobjetos. Para este anlisis se aplicar la tcnica de la c.c.f. al
portaobjeto, sembrando los eluatos.

El sistema

de

desarrollo

cromatografa sobre papel.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

ser

el mismo

que

se emple en c.c.f. o

 CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL

Comp.A

Comp. B

Mezcla
Comp A

Mezcla
Comp b

Distancias
( Muestra,
cm)
Distancia
(solvente, c
RF

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Comp.A

Comp. B

Mezcla
Comp A

Mezcla
Comp b

Distancias
( Muestra,
cm)
Distancia
(solvente, c
RF

EVALUACIN
Cules son las partes de un cromatograma desarrollado?
-

Fase mvil( disolvente) y fase fija

Las fases fijas o estacionaria son iguales para la cromatografa en papel y capa
fina ?
-

no, en papel las fase es mas rpida y se desliza mejor los colorantes, en
cambio en capa fina se demora mas y no se deslizan los compuestos

Cul de los dos compuestos tiene mayor afinidad por la fase fija o estacionaria?
-

El azul de metileno, en las dos muestras no avanzo tanto como el naranja

Pudo identificar el nmero de compuesto en la mezcla?

-Si, porque salan los 2 colores juntos pero se diferenciaban

Si un compuesto X tiene mayor Rf que Y, es indicativo que tiene mayor

afinidad por la fase mvil?
Hubo diferencia en cuanto a la cantidad de muestra sembrada?
-No hubo diferencias
Cul de los compuestos eluy primero y por qu?
-El naranja eluy primero por la pared de este compuesto

Cmo comprobara usted que los compuestos eluidos estn puros?

-Por el color puro que tiene, y el peso de cada uno
Es importante la longitud y dimetro de la columna en la separacin de mezcla?

Complete los diagramas (dibuje) y haga el clculo respectivo de los Rf

CUESTIONARIO
1. Haga un esquema de un cromatograma desarrollado e indique cada una de
las partes.
2. Cules son las diferencias entre la c.c.f. y la de papel?
En ccf la sustancia se desplaza lento y se demora ms en cambio en papel el
proceso es ms fcil y desplaza mejor
3.
Cmo ubicaras las posiciones de las sustancias incoloras en un
cromatograma?
4. Cmo encuentras el solvente ideal de separacin cromatogrfica para una
muestra desconocida?.
5. Cite algunas aplicaciones de la cromatografa en su especialidad.
6. Interprete los valores de Rf 0,05; 0,5 y 0,98
7. Si al realizar el desarrollo de un cromatograma y encuentra el Rf de 0,1, lo
escogera como un buen solvente de desarrollo. Por qu?.
8. Explique algn mtodo para localizar las bandas de adsorcin cuando se
trabaja con sustancias incoloras en una columna.
9. D algunas aplicaciones prcticas de la cromatografa en columna?.
10. Haga un breve resumen del la Cromatografa lquida de alta performance.

FUNDAMENTO TERICO
La separacin de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en un lquido o gas
es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos a medida que se desplazan alrededor o
sobre una sustancia lquida o slida (la fase estacionaria). Las diversas tcnicas para la separacin

de mezclas complejas se fundamentan en la diversidad de afinidades de las substancias por un

medio mvil gas o lquido y un medio absorbente estacionario (papel, gelatina, almina o slice) a
travs del cual circulan.

MATERIAL, MTODOS Y REACTIVOS

Materiales:
Tubo de ensayo
Goteros
Erlenmeyers de 25, 50, 100 mL
Papel whatman
Porta objetos
Silicagel
Algodn

Reactivos:

Azul de metileno
Anaranjado de metileno
Etanol
propanol
butano
agua

DISCUSIN DE RESULTADOS
Este proceso consisti en hacer hervir una mezcla, normalmente una disolucin, y
condensar despus, por enfriamiento, los vapores que han producido. Si se parte
de una mezcla de dos sustancias en la que slo una de ellas es voltil, se pueden
separar ambas mediante una destilacin. El componente ms voltil se recoger
por condensacin del vapor y el compuesto no voltil quedar en el matraz de
destilacin. Si ambos componentes de una mezcla son voltiles la extraccin
simple no lograr su completa extraccin. La mezcla comenzar a hervir a una
temperatura intermedia entre los puntos de ebullicin de los dos componentes,
produciendo un vapor que es ms rico en el componente ms voltil (de menor
punto de ebullicin). Si condensamos este vapor obtendremos un lquido
enriquecido notablemente en este componente, mientras que el lquido que queda

en el matraz estar enriquecido en el componente menos voltil (mayor punto de

ebullicin).

CONCLUSIN
RECOMENDACIONES

FUENTES DE INFORMACIN

Bibliografa

P. Cueva, J. Len, A. Fukusaki. Manual de laboratorio de qumica orgnica.

Segunda Edicion.Juan guterberg,2010.Pp 25-30

Salomn, T. W. Qumica orgnica. Ed. Limusa,Mxico.2000

MORRISON, Robert_BOY, Robert (1988)_ Qumica orgnica. Editorial Addison

Wesley Longan. Quinta edicin .Mxico

Linkografa
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm