GNERO Candida Y Candida dubliniensis

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DIAGNSTICO DE LA INFECCION FNGICA POR LEVADURAS DEL

GNERO Candida: Candida dubliniensis
Carmen Castro Mndez y Estrella Martn Mazuelos
Servicio de Microbiologa y Parasitologa Clnica. Hospital Universitario de Valme,
Sevilla

Durante las ltimas dcadas, el aumento en la prevalencia de las infecciones

fngicas ha sido constante, relacionado fundamentalmente con el aumento de pacientes
inmunodeprimidos, uso generalizado de antimicrobianos, utilizacin de inmunosupresores,
maniobras diagnsticas invasivas, e implantacin de alimentacin parenteral. Estos nuevos
tratamientos y tcnicas diagnsticas presentan, como efectos colaterales, la infeccin
oportunista.
La gran mayora de las infecciones fngicas estn producidas por Candida albicans
(ms del 50%), aunque hay que destacar el aislamiento, con una frecuencia cada vez ms
elevada, de otras especies como Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis,
Candida krusei, Candida lusitaniae, Candida guilliermondii, Candida kefyr, Candida famata,
Candida zeylanoides y Candida dubliniensis. Las levaduras del gnero Candida pueden
causar un gran nmero de cuadros clnicos, con manifestaciones variadas que dependen del
lugar de la infeccin y del tipo de paciente. Diferenciar entre colonizacin e infeccin es un
punto clave a la hora de realizar el diagnstico microbiolgico a partir de las distintas
muestras clnicas.
En la actualidad, debido al diferente patrn y grado de sensibilidad de las distintas
especies de Candida, y al aumento que se ha registrado del ndice de resistencias a los
antifngicos, es aconsejable la identificacin de especie en las levaduras aisladas de
muestras clnicas. Por todo lo explicado, en la siguiente revisin evaluamos los distintos
mtodos de diagnstico microbiolgico que tenemos a nuestra disposicin.
GNERO Candida
El gnero Candida pertenece a la familia Cryptococcaceae dentro del orden
Deuteromycota (hongos imperfectos), compuesto por ms de 200 especies diferentes y con
hbitat natural ubicuo. Muchas de estas especies forman parte de nuestra flora normal de la
piel, tracto gastrointestinal, genitourinario y respiratorio; aproximadamenteun 10% de stas
se relaciona con enfermedades infecciosas. Debido a su amplia distribucin, puede originar
infecciones de distinta localizacin y gravedad, generalmente asociadas a factores
predisponentes del husped, por lo que se le considera como un microorganismo patgeno
oportunista. Hemos de destacar la importancia de la infeccin de origen endgeno frente a
la infeccin exgena, jugando un papel fundamental para su desarrollo la colonizacin
previa de distintas localizaciones en el paciente.
Las manifestaciones clnicas ms frecuentes son la candidiasis superficial,
estomatitis crnica, candidiasis mucocutnea, vulvovaginitis y, en ocasiones, cuadros ms
graves con manifestaciones invasoras en el paciente crtico o inmunodeprimido, incluyendo
entidades como la candidiasis diseminada, candidemia, endoftalmitis y peritonitis. El
diagnstico etiolgico de estas infecciones, desde el punto de vista clnico, es muy difcil,
debido fundamentalmente a la ausencia de sntomas caractersticos. Por ello hay que
recurrir al diagnstico microbiolgico.

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Resumiendo lo anterior, el papel del laboratorio de microbiologa es de gran

importancia, siendo la identificacin de especie algo fundamental para la eleccin de un
tratamiento adecuado. Los mtodos de diagnstico microbiolgico los podemos clasificar de
la siguiente manera: 1) observacin microscpica, 2) mtodos basados en el cultivo, y 3)
mtodos independientes del cultivo: a) deteccin de antgeno o anticuerpos, b) deteccin de
metabolitos, y c) deteccin de otros componentes estructurales.
OBSERVACIN MICROSCPICA
La observacin microscpica directa de toda muestra remitida para su estudio
micolgico es una tcnica sencilla y recomendable, ya que permite el diagnstico presuntivo
en muchas ocasiones. El mayor tamao de las clulas fngicas permite, a diferencia de las
bacterias, su observacin a bajos aumentos en las muestras sin fijar, realizndose as un
diagnstico presuntivo del agente etiolgico. Siempre que sea posible, realizaremos la
observacin en fresco ayudndonos de los siguientes reactivos:

Examen en fresco con KOH (10-30%): facilita la observacin ya que el KOH presenta
efector clarificador, disolviendo los distintos elementos celulares y permaneciendo intacta
la pared celular fngica.
Blanco de calcofluor: se une especficamente a la quitina de las clulas fngicas y emite
una fluorescencia que delimita a los elementos fngicos. Al microscopio de fluorescencia
C. albicans y dems especies muestran una fluorescencia verde brillante; C. glabrata
emite una fluorescencia ms dbil.

Por otra parte, aunque las levaduras se tien bien con la mayora de los colorantes
bacterianos (tincin de Gram), tambin disponemos de tinciones histolgicas especficas
como la de plata-metenamina y la del cido peridico de Schiff (PAS), que nos permiten su
visin bien diferenciada. La ventaja ms destacable de las tinciones es que se trata de
procedimientos rpidos, fiables y de bajo coste, siendo de gran utilidad, porque permite
diferenciar algunos hongos por su morfologa, as como evidenciar la reaccin tisular y la
invasin de tejidos propios de la infeccin, disminuyendo as el tiempo requerido para el
diagnstico. Como inconvenientes, cabe destacar la existencia de falsos positivos y
negativos, la sensibilidad variable, dependiendo del microscopista y del tipo de muestra, y el
hecho de tener que partir de muestras invasoras en muchas situaciones clnicas, lo que
puede estar contraindicado en el paciente inmunodeprimido.
MTODOS BASADOS EN EL CULTIVO
El cultivo es fundamental para establecer la etiologa y efectuar pruebas de
sensibilidad a los antifngicos, as como para realizar estudios de tipificacin molecular.
Identificacin mediante criterios morfolgicos
La mayora de los organismos levaduriformes crecen en el laboratorio con gran
facilidad en un gran nmero de medios de cultivo convencionales. El medio glucosado de
Sabouraud (SDA), con o sin antibitico aadido (Mycobiotic), es el ms indicado para
realizar el aislamiento y para una posterior identificacin. La incubacin se realiza a
temperatura ambiente cuando se trata de medios con inhibidores, y a 37C en el caso de
medios enriquecidos. Al cabo de las 24-48 h se pueden observar las colonias caractersticas
de color blanco o crema, de consistencia opaca, elevadas, lisas, brillantes o mates, y con un
dimetro de 1 a 3 mm. El aspecto de la colonia tiene gran inters, ya que es caracterstica
de cada especie en los distintos medios y a partir del color, olor y consistencia nos facilitar
su posterior identificacin.

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El estudio microscpico de los organismos a partir del cultivo se puede realizar

mediante examen en fresco o tinciones. La observacin microscpica evidencia la existencia
de blastoconidias, pseudohifas, clamidosporas, etc., con un tamao y forma caracterstica a
partir de cultivo en distintos medios. La presencia de hifas verdaderas y clamidosporas
obtenidas en distintos medios (medio de agar harina de maz, agar Wolin-Bevis, agar arroz o
agar patata-zanahoria) es caracterstica y de utilidad para la identificacin de C. albicans y
C. dubliniensis.
La produccin de tubo germinativo es una prueba muy rentable para identificar la
especie (C. albicans y C. dubliniensis), siendo adems una prueba sencilla y rpida, con el
inconveniente que pueden ser confundidos los tubos germinativos con hifas, necesitando
experiencia previa para su interpretacin. Antes de emitir un resultado negativo se debe
tener presente la existencia de, aproximadamente, un 5% de cepas de C. albicans que no
producen tubo germinal, y tambin la posibilidad de falsos positivos en el caso de C.
tropicalis. La produccin de clamidosporas en los medios antes sealados es ms rentable
para la confirmacin de C. albicans cuando la prueba del tubo germinativo es negativa.
Identificacin mediante criterios bioqumicos basados en sistemas enzimticos
a) Medios de cultivo cromognicos: se trata de medios diseados para aislar e identificar
simultneamente especies del gnero Candida, tras 24-48 h de incubacin a 35-37C. El
fundamento es la capacidad de hidrolizar sustratos cromognicos en presencia de un
indicador. Los distintos medios comercializados son:

CHROMagar Candida (CHROMagar): la siembra se realiza segn tcnicas

convencionales y se incuba a 30-37C durante 48 h para que las levaduras
desarrollen el color que las caracteriza (tabla 1).
Tabla 1. Diferenciacin de las colonias de Candida en CHROMagar.
Especie
C. albicans
C. dubliniensis
C. tropicalis
C. krusei
C. glabrata

Caracterstica de la colonia

Color

Lisa, crece a 45C

Lisa, no crece a 45C
Lisa
Rugosa
Brillante y cremosa

Verde esmeralda
Verde esmeralda
Azul oscuro con halo marrn
Rosa con halo blanco
Violeta

Candida ID (bioMrieux): permite identificar C. albicans y orienta en el caso de

otras especies. El tiempo y la temperatura de incubacin son similares a los descritos
anteriormente y la colonia de C. albicans aparece redonda, convexa y de color azul.
Albicans ID2 (bioMrieux): medio muy similar a Candida ID, aporta como avance
la identificacin de C. tropicalis que aparece de color rosa (tabla 2).
Tabla 2. Color de colonias en Albicans ID2.
Especie
C. tropicalis
C. lusitaneae
C. guilliermondii
C. kefyr
C. famata
C. humicola

Color de la colonia
Rosa

Rosa menos intenso

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Cromogen Albicans (Biomedics): es un medio selectivo y diferencial utilizado para

la identificacin de C. albicans. Las placas se incuban a 30-37C durante 24-48 h
obtenindose colonias redondeadas, lisas y de color azul-verdoso.
CandiSelect (BioRad): medio selectivo que permite la identificacin de C. albicans
(colonias lisas azules). Candida tropicalis y el gnero Trichosporon pueden
desarrollar un color similar a C. albicans, pero con una morfologa muy diferente.

b) Medios fluorognicos: facilitan la identificacin de C. albicans en los cultivos primarios:

Fluroplate Candida (Merck): identifica a C. albicans por la capacidad de hidrolizar

un sustrato mediante la enzima N-acetil-galactosaminidasa (NAGasa), generando un
metabolito fluorescente. El tiempo de incubacin es de 18-24 h a 30-37C.
Agar SDCA-MUAG (Biolife): medio y tcnica muy similares a los anteriores, pero en
este caso acta sobre otro sustrato, la 4-metilumberiferil-2-acetamida-2-desoxi--Dgalactosamina, produciendo tambin un metabolito fluorescente.

c) Sistemas enzimticos para la identificacin de C. albicans a partir de las colonias

aisladas en medios convencionales. Detectan dos enzimas que slo estn presentes en
C. albicans: -galactosaminidasa (MUGAL) y L-prolina aminopeptidasa (PRO). El
sistema se ayuda de sustratos fluorognicos o cromognicos. Para la lectura del
metabolito fluorescente necesitamos la utilizacin de la lmpara de luz UV de 365 nm .
Tabla 3. Identificacin presuntiva de C. albicans por deteccin enzimtica.
Enzimas MUGAL y PRO
Sustrato fluorognico
Sustrato cromognico
BactiCard Candida (Remel)
Albistrip (Lab M. Ltd)
RapID Albicans (Biolife)
Albicans-Sure (Clinical Standards)

Slo MUGAL
Fluorognico

Candida albicans Screen (Remel)

Candida albicans CA 50 (Murex)

MUAG Test (Biolife)

d) Sistemas inmunolgicos de aglutinacin con partculas de ltex de identificacin para

C. albicans: Bichro Ltex Albicans (Fumouze).
e) Otros sistemas que permiten la identificacin de otras especies distintas a C. albicans:

Glabrata RTT (Fumouze): se basa en la utilizacin de

caso positivo, conduce a la produccin de glucosa que
de oxidacin; identifica C. glabrata.
Bichrolate krusei (Fumouze): identifica C. krusei
partculas de ltex.
Bichro-dubli (Fumouze): detecta por medio de una
presencia de C. dubliniensis.

trehalosa y maltosa que, en

se detecta por una reaccin
mediante aglutinacin con
reaccin de aglutinacin la

Identificacin rpida de levaduras mediante pruebas bioqumicas y enzimticas

El auxonograma convencional aplica por separado diferentes nutrientes sobre un
medio sinttico para apreciar el crecimiento de la levadura en estudio. Observaremos la
utilizacin de los distintos nutrientes, ya sean hidratos de carbono (azcares y alcoholes) o
compuestos nitrogenados (peptona, asparragina, urea, sulfato amnico, nitrato de potasio),
y a partir del requerimiento nutricional realizaremos la identificacin. Se trata de un mtodo
poco utilizado en la actualidad, debido fundamentalmente a la laboriosidad que supone su

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realizacin en un laboratorio de Microbiologa Clnica, por lo que se han comercializado

mtodos basados en este fundamento que facilitan la identificacin de las levaduras.
a) Mtodos manuales

Auxacolor (BioRad): la identificacin se realiza basndose en el crecimiento que

presenta la levadura por asimilacin de distintos azcares. La lectura se basa en un
cambio de color (indicador de pH). Adems, la galera incorpora una prueba de
resistencia a la actidiona y otra para determinar la actividad de la fenol-oxidasa,
importante para la identificacin de C. neoformans. Permite la identificacin de 26
especies diferentes de levaduras.
Sistema Uni-Yeast-Tek (Remel): se basa en la asimilacin de siete hidratos de
carbono, a la vez que determinamos el crecimiento micelial y la produccin de
clamidosporas, asimilacin y reduccin de nitratos y produccin del tubo germinal
(Tween 80). El cambio de color de azul a amarillo determina la positividad para la
prueba de asimilacin de azcares y el cambio de azul a verde para la reduccin de
nitratos.
API 20C AUX (bioMrieux): se inoculan, con un medio semislido, 20 cpulas con
sustratos carbonados deshidratados. El crecimiento se produce si presenta
capacidad de utilizar dicho sustrato inoculando un medio mnimo semislido. La
lectura de la prueba genera un cdigo numrico que facilita la identificacin de 34
especies de levaduras distintas.
RapID Yeast Plus System (Remel): detecta la asimilacin de carbohidratos, cidos
orgnicos o aminocidos, urea y cidos grasos. Identifica un total de 43 especies de
levaduras.
Fungiscreen 4H (Bio-Rad): estudia el perfil enzimtico de algunas levaduras
observndose un cambio de color. Permite identificar cuatro especies distintas.

Adems de todos los mtodos manuales que hemos descrito anteriormente, en los
ltimos aos, los mtodos automticos y semiautomticos han adquirido un papel muy
importante en los laboratorios de Microbiologa Clnica.
b) Mtodos semiautomticos

Galera ID 32C (bioMrieux): la galera est constituida por 32 cpulas (sustratos

carbonados deshidratados, control negativo, sensibilidad a la esculina y la ltima
prueba colorimtrica para la esculina) y la lectura se realiza como la explicada para
el API 20C AUX. Presenta como novedad la posibilidad de realizar una lectura
automtica mediante los equipos ATB Expresin o Mini API, y aumentar hasta 63 el
nmero de especies identificables.
Sistema Vitek (bioMrieux): tarjeta que incluye 30 celdillas con un total de 26
pruebas convencionales (utilizacin de hidratos de carbono, nitrgeno y actividades
enzimticas) y los controles correspondientes. La lectura se realiza por medio de
densidad ptica, identificndose 16 especies distintas del gnero Candida.

c) Mtodos automticos

Sistema Vitek 2 (bioMrieux): incluye 63 pocillos con pruebas bioqumicas

(utilizacin de carbohidratos y de compuestos nitrogenados) que permiten la
identificacin de 51 especies del gnero Candida en 15 h, aproximadamente. La
lectura se realiza por emisin de fluorescencia.
Sistema Biolog YT Microplate (Biolog): se realiza un total de 94 pruebas
bioqumicas identificndose 286 especies de 53 gneros diferentes.

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Rapid Yeast Identification Panel MicroScan (Dade Behring): se inocula una placa
de microdilucin con 96 pocillos, presentndose 27 sustratos diferentes
deshidratados. Identifica 40 especies diferentes.

A pesar de ser el cultivo el patrn de referencia del diagnstico microbiolgico, ya

que permite la identificacin del agente etiolgico y la realizacin del estudio de sensibilidad,
presenta inconvenientes, entre los que podemos destacar la necesidad de obtener muestras
invasivas, las cuales no estn indicadas en muchos de los pacientes que estudiamos debido
a la inmunosupresin o enfermedad debilitante que presentan, la contaminacin de la
muestra, no diferenciar entre infeccin y colonizacin, presentar baja sensibilidad y tratarse
de un mtodo lento para realizar el diagnstico.
MTODOS INDEPENDIENTES DEL CULTIVO
En los ltimos aos se han desarrollado nuevas tcnicas diagnsticas,
independientes del cultivo, con la intencin de mejorar la sensibilidad y reducir el tiempo
necesario para obtener el diagnstico. Las principales tcnicas podemos clasificarlas de la
siguiente manera: a) deteccin en sangre de antgenos o anticuerpos, b) deteccin de
metabolitos y c) deteccin de otros componentes fngicos.
Deteccin de antgenos o anticuerpos
Debido a la existencia de una antigenemia intermitente en los pacientes que sufren
una candidemia, necesitamos una combinacin de tcnicas que detecten distintos
antgenos, junto a la determinacin de anticuerpos, para aumentar su sensibilidad. La
comercializacin de nuevas tcnicas para la deteccin de antgenos de Candida, en
principio, debera facilitar el diagnstico mediante pruebas serolgicas, aunque debemos
destacar la presencia de grandes inconvenientes y dificultades para su interpretacin. El
estudio de los niveles de anticuerpos anti-Candida se cuestiona en pacientes con
candidiasis invasora por dos causas fundamentales, la positividad que aparece en pacientes
que slo estn colonizados, y la baja o nula respuesta en pacientes inmunodeprimidos.
Basndonos en estas premisas, hemos de tener precaucin con la interpretacin de estos
resultados, y utilizar simultneamente distintas tcnicas para confirmar los positivos.

Platelia Candida Ag (BioRad): ELISA que detecta el antgeno manano en suero,

utilizando el anticuerpo monoclonal EBCA 1, que reconoce los residuos -1,5 del
manano. Las distintas especies que presentan reaccin positiva son: C. albicans, C.
dubliniensis, C. famata, C. gabrata, C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. tropicalis.
Presenta reaccin cruzada frente a gnero Aspergillus y gnero Cryptococcus . El
lmite de deteccin de la tcnica es de 0,25 ng/ml, presentando una sensibilidad y
especificidad del 40% y 53%, respectivamente.
Platelia Candida Ab/Ac/Ak (BioRad): tcnica de ELISA que detecta anticuerpos
frente al antgeno manano. Presenta una sensibilidad y una especificidad de un 50%
y 94% respectivamente. La utilizacin simultnea de esta tcnica diagnstica con
Platelia Candida (antgeno) aumenta la sensibilidad del diagnstico a un 80%,
mantenindose la especificidad (93%).
Anticuerpo antimicelio de C. albicans (Vircell): Prueba de inmunofluorescencia
indirecta que detecta la presencia de anticuerpos frente al antgeno del micelio de C.
albicans. Aunque la tcnica detecta anticuerpos contra antgenos expresados en C.
albicans, tambin es positiva en pacientes con candidiasis invasora por C. tropicalis,
C. parapsilosis, C. krusei, C. glabrata, C. guilliermondii y C. dubliniensis. Tiene gran
utilidad para el diagnstico y el seguimiento de la respuesta que desarrolla el
paciente frente al tratamiento administrado. Ttulos iguales o superiores a 1/160 son

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compatibles con la existencia de candidiasis invasiva. La fase levaduriforme no

presenta fluorescencia, la fluorescencia debe aparecer restringida a la fase micelial.
La especificidad y la sensibilidad son del 84% y del 94,7%, respectivamente.
Deteccin de metabolitos
La deteccin de metabolitos es una posibilidad diagnstica que aparece como
alternativa a las tcnicas convencionales para el diagnstico de la infeccin fngica.

D-arabinitol: es un metabolito liberado por la orina del paciente, producido por C.

albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis y C. kefyr. Su determinacin puede realizarse
por dos tcnicas diferentes: cromatografa gas-lquido o tcnicas enzimticas. Se
trata de una tcnica prometedora en casos de candidiasis en nios
inmunodeprimidos, presentando falsos positivos los pacientes con insuficiencia renal
o en tratamiento prolongado con esteroides. En la actualidad ha cado en desuso.

Deteccin de componentes fngicos

El (1-3) -D-glucano es un componente de la pared celular de la mayora de los

hongos, exceptuando C. neoformans y zigomicetos, que es capaz de activar la va de
la coagulacin de los amebocitos de Limulus activando el factor G, y generando
componentes coloreados usando reactivos diazo. Existen dos equipos comerciales:
FungitecC (FungitecG, Japn) y Glucatell (Associates of Cape Cod Ind. USA), con
una sensibilidad del 90% y especificidad del 100%. Aparecen falsos positivos en las
siguientes situaciones: hemodilisis con membranas de celulosa o albmina,
tratamiento con inmunoglobulinas, antitumorales y sulfamidas.
Deteccin de cidos nucleicos: el incremento de las infecciones fngicas y la lentitud
que presenta el cultivo y la identificacin de muchas especies ha motivado el inters
para desarrollar nuevas tcnicas diagnsticas ms precoces y especficas basadas
en la Biologa Molecular. Los mtodos de hibridacin y amplificacin son
fundamentales en este tipo de diagnstico. Otra tcnica desarrollada actualmente es
la PCR cuantitativa en tiempo real, que se est convirtiendo en el mtodo diagnstico
ms extendido mediante el sistema LightCycler (Roche Diagnostics). Las sondas que
se utilizan para amplificar las zonas dianas del ADN ribosmico y ADN mitocondrial
son del tipo Taqman o FRET (Fluorescente Resonante Energy Transfer), o bien
utilizando iniciadores especficos y fluorocromos genricos del tipo SYBRgreen. La
difusin de tcnicas moleculares de tipificacin ha demostrado que existe una gran
variabilidad genmica dentro de las especies, por lo que las reordenaciones
taxonmicas son continuas. La aparicin de estas tcnicas moleculares abre un
nuevo camino en el diagnstico de la infeccin fngica, pero no se debe olvidar los
inconvenientes que an encontramos, como el elevado coste de dichas tcnicas, la
necesidad de personal especializado y, sobre todo, la ausencia actual de estudios
que demuestren qu tipo de muestra y qu procedimiento es el ms indicado.

En resumen, aunque se ha avanzado mucho en el diagnstico de las infecciones

fngicas, no existe todava un mtodo ideal, estando indicada la utilizacin combinada de
varios mtodos diagnsticos.
Candida dubliniensis
Candida dubliniensis fue identificada como nueva especie en 1995 por J. Sullivan. El
aislamiento se realiz en Dubln (Irlanda), razn por la que se denomin dubliniensis, en un
paciente VIH con infeccin orofarngea. Desde los comienzos de la dcada de los 90 se

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estaba estudiando la aparicin de una nueva especie que presentaba tubo germinal y
clamidosporas pero en la que la hibridacin con la prueba de fingerprinting 27A de C.
albicans era negativa: despus de cinco aos en estudio se denomin C. dubliniensis.
Los estudios realizados posteriormente demostraron la menor patogenicidad de C.
dubliniensis comparada con la de C. albicans, siendo sus factores de virulencia ms
relevantes la produccin de hifas y la capacidad de tolerar un medio con elevada
temperatura y alta concentracin de NaCl y H2O2. Al contrario que ocurre con C. albicans, C.
dubliniensis no forma parte de la microflora normal del hombre, provocando infecciones en
menos de un 2% de los casos. Candida dubliniensis aparece normalmente asociada con
episodios recurrentes orales como gingivitis y, aisladamente, en muestras vaginales de
pacientes inmunodeprimidos. En alguna ocasin tambin se han descrito infecciones en
pacientes con tratamiento citotxico para el rabdomiosarcoma y en pacientes hematolgicos
con transplante alognico.
Para el diagnstico de la infeccin por esta levadura podemos recurrir al cultivo e
identificacin, para lo cual se han desarrollado nuevas tcnicas que permiten diferenciar C.
dubliniensis de otras especies, especialmente C. albicans. En primer lugar podemos utilizar
el medio cromognico CHROMAgar Candida para un diagnstico presuntivo; a partir de una
colonia verde intensa sospecharemos la posibilidad de C. albicans o C. dubliniensis (sta
ltima presenta mayor intensidad de color a las 48 h de incubacin). Para realizar un
diagnstico diferencial entre ambas especies observaremos la produccin de clamidosporas,
ms abundantes en el caso de C. dubliniensis en medio agar harina de maz, agar WolinBevis, agar arroz o agar patata-zanahoria y la produccin del tubo germinal. La capacidad
de crecer a 42C y 45C tambin es importante para realizar la discriminacin entre C.
dubliniensis y C. albicans.
Adems, existen sistemas comerciales que permiten la identificacin de C.
dubliniensis como el API ID 32C, API 20C AUX, RapID Yeast Plus, VITEK YBC y VITEK 2.
Adems de estos sistemas comercializados, existen medios de cultivos diferenciales que
permiten la identificacin, entre los que destacamos el medio Pals Agar (C. dubliniensis
produce hifas alrededor de la colonia) y Tobacco Agar en el cual adems de producir C.
dubliniensis hifas alrededor de la colonia, sta aparece de color amarillento-marrn, frente a
la ausencia de hifas y el tono blanco-crema de la colonia de C. albicans. Otro mtodo rpido
para identificar esta especie es mediante una tcnica de aglutinacin (Bichro-dubli).
Entre los mtodos no basados en el cultivo, la infeccin invasora producida por C.
dubliniensis puede ser diagnosticada por Platelia Candida Ag, Platelia Candida Ab/Ac/Ak
y por anticuerpos antimicelio de C. albicans. El diagnstico molecular es importante, ya
que la secuenciacin de la fraccin V3 de la regin variable de la subunidad 18S del ADNr
es fundamental para diferenciarla de C. albicans. Adems de esta tcnica, la realizacin de
fingerprintig y patrones de cariotipos son alternativas para realizar la identificacin. Otra
posibilidad de identificacin, actualmente, es mediante protocolos de PCR y restriccin con
endonucleasas.
Por ltimo, revisaremos el patrn de sensibilidad que presenta C. dubliniensis,
destacando su alta sensibilidad frente a los antifngicos utilizados en clnica, con la salvedad
del fluconazol. Es caracterstica la adquisicin de resistencia adquirida a fluconazol in vitro,
no observada frente al resto de azoles (itraconazol, ketoconazol, voriconazol, etc.),
destacando como mecanismo de resistencia ms frecuente la sobrexpresin de la protena
Mdr1p (codificada por el gen CdCDR1), mientras que en C. albicans la protena que se
sobrexpresa es Cdr1 (gen CDR1-CDR2).

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Como conclusin podemos destacar que C. dubliniensis debe ser considerado como
un patgeno emergente asociado con infeccin oral en los pacientes inmunodeprimidos,
sobre todo los infectados por el VIH. Para su identificacin presuntiva en muestras clnicas
se recomienda la utilizacin de CHROMAgar Candida y, una vez aislada, la colonia de color
sugestivo realizaremos pruebas complementarias para obtener la correcta identificacin
(figura 1).
Cultivo en agar Sabouraud Dextrosa

Cultivo en CHROMAgar Candida

Colonia verde

Colonia azul

Colonia violeta

Cultivo a 45C

C. tropicalis

C. glabrata

Colonia rosa rugosa

C. krusei

Otros colores

Identificacin
mediante estudios
de asimilacin

C. albicans C. dubliniensis

Confirmar la identificacin mediante

pruebas morfolgicas o bioqumicas

Figura1. Identificacin de especies de Candida en cultivo (adaptado de Linares et al).

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