Analisis Instrumental Z

FAC U LTAD D E C I E N C I A S D E L A S A L U D 1
CARRERA BIOQUMICA Y FARMACIA
RED NACIONAL UNIVERSITARIA

UNIDAD ACADMICA DE SANTA CRUZ
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
BIOQUMICA Y FARMACIA
TERCER SEMESTRE
SYLLABUS DE LA ASIGNATURA DE
ANALISIS INSTRUMENTAL
Elaborado por: Lic. Marcos Quevedo Ribera
Gestin Acadmica I/2013
U N I V E R S I D A D D E A Q U I N O B O L I V I A
UDABOL
UNIVERSIDAD DE AQUINO-BOLIVIA
Acreditada como PLENA mediante R. M. 288/01
VISIN DE LA UNIVERSIDAD
Ser la universidad lder en calidad educativa.
MISIN DE LA UNIVERSIDAD
Desarrollar la educacin superior universitaria con calidad y

Competitividad al servicio de la sociedad.
Estimado(a) estudiante:
El Syllabus que ponemos en tus manos es el fruto del trabajo intelectual de tus docentes,
quienes han puesto sus mejores empeos en la planificacin de los procesos de enseanza
para brindarte una educacin de la ms alta calidad. Este documento te servir de gua para
que organices mejor tus procesos de aprendizaje y los hagas mucho ms productivos.
Esperamos que sepas apreciarlo y cuidarlo.
Aprobado por: Fecha: Diciembre 2012

SELLO Y FIRMA
JEFATURA DE CARRERA
SYLLABUS
Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL

Cdigo: BTG-332
Requisito: BTG 332, BTG-233
Carga Horaria: 100 Horas / Semestre
Horas tericas 60 horas
Horas Prcticas 40 horas
Crditos: 10
I. OBJETIVOS GENERALES DE LA ASIGNATURA.
Conocer las herramientas del anlisis qumico instrumental, para obtener

informacin cualitativa y cuantitativa.
Conocer los fundamentos, caractersticas y aplicaciones de los principales
mtodos instrumentales empleados en el anlisis qumico.
Conocer y comprender las fuentes de error y la metodologa de las tcnicas
pticas, electroqumicas y cromatogrficas.
Conocer y comprender las posibilidades analticas y limitaciones de las tcnicas
instrumentales bsicas de la Qumica Analtica.
Capacitar al estudiante para obtener y expresar adecuadamente un resultado
analtico a partir de un mtodo instrumental.
Fomentar y favorecer el desarrollo de valores y actitudes positivas como ser
humano.
Fomentar y favorecer el desarrollo de valores y actitudes que deben estar
presentes en la actividad cientfica.
Favorecer el desarrollo de las capacidades del alumno para trabajar en equipo.
II. PROGRAMA ANALTICO DE LA ASIGNATURA.
UNIDAD I
ESTUDIO DEL ANALISIS INSTRUMENTAL
TEMA 1: INTRODUCCION AL ANALISIS INSTRUMENTAL

1. Introduccin
2. Clasificacin de los mtodos analticos
2.1. Mtodos clsicos
2.2. Mtodos instrumentales
2.3. Ventajas e inconvenientes de los mtodos instrumentales
2.4. Importancia de las tcnicas instrumentales en el campo farmacutico
2.5. Clasificacin de las tcnicas instrumentales
3. Instrumentos para el anlisis
3.1. Componentes bsicos de los instrumentos
4. Concepto de seal/propiedad analtica.
5. Seal instrumental
6. El ruido
6.1. Caractersticas y tipos
6.2. Fuentes de ruido
6.3. Eliminacin del ruido
TEMA 2: METODOS DE CALIBRACION Y VALIDACION DE METODOS ANALITICOS

1. Parmetros caractersticos y seleccin de un mtodo analtico.
2. Calibracin de los mtodos instrumentales.
3. Patrones analticos.
4. Mtodos de calibracin:
4.1. Calibracin externa,
4.2. Mtodo de la adicin de estndar,
4.3. Mtodo del estndar interno.
5. Importancia de los blancos.
6. Calibracin de equipos.
7. Validacin de mtodos analticos
a) Exactitud
b) Precisin
c) El lmite de deteccin
d) El lmite de cuantificacin
e) La especificidad,
f) La linealidad,
g) La sensibilidad
h) La robustez
UNIDAD II
INTRODUCCION A LOS METODOS ESPECTROSCOPICOS DE ANALISIS
TEMA 3: METODOS BASADOS EN LA INTERACCION DE LA RADIACION CON LA

MATERIA
1. Radiacin electromagntica
1.1. Parmetros ondulatorios
1.2. Propiedades corpusculares de la radiacin electromagntica
1.3. Espectro electromagntico
1.3.1. Interaccin entre la materia y la energa radiante (ER)
1.3.2. Absorcin de la radiacin
1.3.3. Absorcin molecular
1.3.4. Espectro de absorcin
2. Componente de los instrumentos espectroscpicos
2.1 Fuentes de radiacin
2.2. Selectores de longitud de onda
2.2.1. Filtros
2.2.2. Monocromadores
2.2.2.1. Componentes del monocromador
2.3. Recipientes para la muestra
2.4. Detectores:
TEMA 4: POLARIMETRIA Y REFRACTOMETRIA

1. POLARIMETRIA:
1.1. Luz Natural y luz polarizada
1.2. Procedimiento de la polarizacin
1.3. Polarizacin por refraccin doble
1.4. Actividad ptica
1.5. Polarmetro
1.6. Aplicaciones
2. REFRACTOMETRIA
2.1. Definiciones generales
2.2. Fundamento e La tcnica
2.3. Refractometro de Abbe
2.4. Aplicaciones cualitativas
2.5. Aplicaciones cuantitativas
TEMA 5: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR ULTRAVIOLETA

VISIBLE
1. Introduccin
2. Grupos cromoforos y auxocromos
3. Anlisis cualitativo y cuantitativo por espectrofotometra ultravioleta visible
4. Tcnicas cualitativas
4.2.1. Anlisis cualitativo
5. Procedimiento en el anlisis cuantitativo
5.1. Errores en la determinacin de concentracin
6. Aplicaciones de la espectroscopia de absorcin molecular UV-VIS
6.1. .Anlisis de multicomponentes.
TEMA 6: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION INFRARROJA

1. Introduccin a la espectroscopia infrarroja
2. Instrumentacin en la espectroscopia de absorcin infrarroja
3. Manejo de muestras
4. Caractersticas de un espectro infrarrojo
5. Aplicaciones e la espectroscopia infrarroja
TEMA 7: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA

1. Fundamento de la espectroscopia de absorcin atmica
2. Instrumentacin analtica
3. Eleccin de la longitud de onda
4. Interferencias
5. Correccin del ruido de fondo
6. Procesamiento de muestras para el anlisis por EAA
7. Aplicaciones
8. Anlisis cuantitativo por espectrofotometra de absorcin atmica
UNIDAD III
INTRODUCCION A LOS METODOS ELECTROQUIMICOS
TEMA 8: POTENCIOMETRIA
1. Potenciales de electrodo
2. Tipos de electrodo
3. Potencimetros
4. Aplicacin de la potenciometria
4.1. Titulaciones potenciomtrica (Acido - base)
TEMA 9: CONDUCTIMETRIA
1. Conduccin electroltica
2. Conductancia
3. Medidas de conductividad
4. Aplicaciones farmacuticas de la conductimetria
4.1. Titulaciones conductimetricas (Acido - base)
UNIDAD IV
METODOS FISICOS DE SEPARACION
TEMA 10: CROMATOGRAFIA PLANA
1. Generalidades
2. Cromatografa en papel (PC)
3. Cromatografa en capa fina (CCF) o (TLC)
3.1. Preparacin de la cromatoplaca
3.2. Visualizacin de las manchas
3.3. Clculo del factor de retencin Rf
4. Cromatografa de alta eficacia en capa delgada (HPTLC)
TEMA 11: CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS

1. Cromatografa
2. Teora de la columna
3. Parmetros intrnsecos de la columna
4. Eficacia de la columna
5. Evaluacin de la calidad de la separacin cromatografca
6. Tcnica de la cromatografa clsica en columna
7. Cromatografa de lquidos de alta eficacia HPLC
7.1. Componentes del cromatografo de lquidos
7.2. Acoplamiento del cromatografo de lquidos a detectores
7.3. Cromatograma
7.4. Identificacin y cuantificacin por HPLC/UV-VIS
7.5. Aplicaciones de la cromatografa de lquidos en farmacia
8. Derivatizacion para la cromatografa de lquidos
9. Cromatografa de adsorcin
10. Cromatografa de particin
11. Cromatografa de par inico
12. Cromatografa de intercambio inico
13. Cromatografa inica
14. Cromatografa de exclusin
TEMA 12: CROMATOGRAFIA DE GASES

1. Caractersticas fundamentales de la cromatografa de gases
2. Cromatografo de gases
3. Acoplamiento del cromatografo de gases a detectores
4. Identificacin y cuantificacin por Cromatografa de gases/ FID
5. Aplicaciones de la cromatografa de gases
UNIDAD V
ESPECTROMETRIA DE MASAS
TEMA 13: ESPECTROMETRIA DE MASAS

1. Fundamento
2. Espectrmetro de masas
3. Fuentes de ionizacin en espectrometra de masas
4. Espectro de masas
5. Aplicaciones
PRCTICAS DE LABORATORIO
1. Normas de seguridad en el laboratorio de qumica
2. Uso correcto de la balanza analtica
3. Calibracin de material volumtrico
4. Titulaciones potenciometria
5. Potenciometria directa
6. Espectro de absorcin visible de dos colorantes
7. Determinacin de la longitud de Onda optima de dos especies qumicas,
Manganeso y cromo
8. Curva de calibracin del Manganeso
9. Anlisis cuantitativo de una mezcla de permanganato y dicromato potsicos por
espectrofotometra UV-Visible
10. Determinacin de la constante de disociacin de un indicador acido base por
espectrofotometra
11. Anlisis cualitativo y cuantitativo por Refractometria
12. Polarimetra
13. Separaciones analticas por cromatografa en capa fina
14. Cromatografa de lquidos HPLC
15. Cromatografa de gases
16. Espectrometra de masas
II. ACTIVIDADES A REALIZAR DIRECTAMENTE EN LA COMUNIDAD.
i. Tipo de asignatura
Asignatura de Apoyo
ii. Resumen de los resultados del diagnstico realizado para la deteccin

de los problemas a resolver en la comunidad.
En todo el pas se consumen medicamentos de diferentes laboratorios, nacionales
y extranjeros que varan en precio, presentacin, etc. A pesar que los
medicamentos legalmentes comercializadfos tienen cierta seguridad con respecto
al contenido de principio activo muchos medicamentos de contrabando no
garantizan la valoracin del componente activo
iii. Nombre del proyecto al que tributa la asignatura.

Anlisis cuantitativo de principios activos de diferentes medicamentos, mediante
tcnicas espectroscpicas y potenciomtricos.
iv. Contribucin de la asignatura al proyecto.

Las tcnicas analticas instrumentales estudiadas a lo largo de la materia sern la
base para la determinacin cualitativa y cuantitativa de los diferentes preparados
v. Actividades a realizar durante el semestre para la implementacin del

proyecto.
Trabajo a realizar por Localidad, Incidencia social Fecha.

los estudiantes aula o
laboratorio
Designacin a los Aula Organizacin y Primera
diferentes grupos la planificacin del semana de
muestra con la cual proyecto abril
desarrollara su
trabajo
Revisin bibliogrfica Aula Informacin adecuada Segunda,
para determinar la del tema basado en tercera y
metodologa analtica tcnicas actuales, que cuarta semana
adecuada para la se desarrollan en de abril
muestra problema nuestro medio.
Recoleccin de la Diferentes Concienciacin a la Primera,
muestra, farmacias poblacin y a los segunda,
privadas e mismos estudiantes tercera y
institucionales sobre la utilizacin y cuarta semana
riesgos sobre el de mayo
consumo de alimentos
expuestos a
plaguicidas.
seleccin del material Laboratorio Aplicacin de los Primer,
a utilizar y puesta a de Analisis conocimientos y las segunda,
punto de la instrumental practicas aprendidas en tercera y cuarta
metodologa que se la materia semana de
utilizara en el anlisis junio
Defensa y Aula Verificar que los Primera,
presentacin de resultados estn segunda
resultados y correctamente tercera semana
conclusiones al presentados de junio
docente
IV. EVALUACIN DE LA ASIGNATURA.
PROCESUAL O FORMATIVA.
Las actividades evaluativas, que comprenden la evaluacin procesual y de
resultados se realizara como sigue:
ACTIVIDAD PARMETROS PONDERACIN FECHA
EVALUATIVA
Preguntas orales y Conocimiento del tema. 25 puntos En todas las
escritas Originalidad 25 puntos clases tericas y
50 puntos prcticas.
Resolucin de casos Conocimiento del tema. 30 puntos Cuarta, quinta,
Originalidad 20 puntos octava y novena
TOTAL 50 puntos semana
Prcticas de Presentacin trabajos En todas las
laboratorio (Cuestionarios, informes) 10 Puntos clases prcticas.
Conocimientos 30 Puntos
Destreza en la prctica 10 Puntos
TOTAL 50 Puntos
El trabajo, la participacin y el seguimiento realizado a estos tres tipos de

actividades se tomarn como evaluacin procesual calificando cada una entre 0 y
50 puntos independientemente de la cantidad de actividades realizadas por cada
alumno.
La nota procesual o formativa equivale al 50% de la nota de la asignatura.
DE RESULTADOS DE LOS PROCESOS DE APRENDIZAJE O SUMATIVA

(examen parcial o final)
Se realizarn 2 evaluaciones parciales con contenido terico y prctico. El

examen final consistir en un examen escrito con un valor del 75% de la nota y la
presentacin de los informes y documentos del proyecto con el restante 25%.
V. BIBLIOGRAFA BSICA
Principios de Anlisis Instrumental, D.A. Skoog, F.J. Holler y T.A. Nieman, 5
Edicin, McGraw-Hill, Madrid, 2001.
Fundamentos de Qumica Analtica, D.A. Skoog, D.M. West, F.J. Holler y
S.R.Crouch, 8 Edicin, Thomson-Paraninfo, Madrid, 2005.
Estadstica y Quimiometra para Qumica Analtica, J.N. Miller y J.C. Miller,
Prentice Hall, Pearson Educacin, Madrid, 2002.
BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA
Qumica Analtica moderna. D. Harvey, McGraw-Hill, Madrid, 2002.

Anlisis Qumico Cuantitativo, D.C. Harris, 3 Edicin, Revert, Barcelona,
2007.
Introduccin al Anlisis Instrumental, L. Lucas Hernndez y C. Gonzlez-Prez,
Ariel. Ciencia, Barcelona, 2002.
Chang, R., Qumica. Edit. Mc-Graw Hill. Mxico, 1992.
VI. PLAN CALENDARIO
SEMANA ACTIVIDADES ACADMICAS OBSERVACIONES

1ra. Avance de materia UNIDAD I TEMA 1 Repaso escrito
2da. Avance de materia UNIDAD I TEMA 2 Exposicin, GIP
3ra. Avance de materia UNIDAD II TEMA 3 Repaso oral, resolucin Work paper 1, GIP
UNIDAD II TEMA 4
4ta. Avance de materia Resolucin Work paper 2, GIP, 1ra. Incursin
Actividades de Brigadas
UNIDAD II TEMA 5
6ta. Avance de materia Exposicin, GIP
7ma. Avance de materia UNIDAD II TEMA 6 Exposicin, GIP
8va. Avance de materia UNIDAD II TEMA 7 Primera Evaluacin
UNIDAD III TEMA 8
9na. Avance de materia Exposicin, 3ra. Incursin, GIP
10ma. Avance de materia Repaso oral, 4ta. Incursin , GIP
UNIDAD III TEMA 9
11ra. Avance de materia Exposicin, GIP
UNIDAD IV TEMA 10
12da. Avance de materia UNIDAD IV TEMA 11 Exposicin, GIP
13ra. Avance de materia UNIDAD IV TEMA 11 Segunda Evaluacin
UNIDAD V TEMA 12
14ta. Avance de materia resolucin de Work paper 4,GIP
Exposicin, repaso oral, GIP, resolucin
15ta. Avance de materia UNIDAD V TEMA 12
, Work paper 5
16ta. Avance de materia UNIDAD V TEMA 13 Repaso escrito
17ma. Avance de materia UNIDAD V TEMA 13 repaso oral, resolucin de Work paper 6
18va. Avance de materia Evaluacin final Presentacin proyecto final
19na. Avance de materia Evaluacin final Presentacin de notas
20va Segunda instancia Presentacin de notas
VII. WORK PAPERS
PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD

WORK PAPER # 1
UNIDAD: I Tema: 1
TTULO: Introduccin al anlisis instrumental
FECHA DE ENTREGA: 10ma semana
PERODO DE EVALUACIN: 11va semana
1. Introduccin
La qumica analtica se ocupa de los mtodos de la determinacin de la composicin
qumica de la materia, Un mtodo cualitativo informa sobre la identidad de las especies
atmicas o moleculares de la muestra o de los grupos funcionales que hay en ella por
otra parte un mtodo cuantitativo aporta informacin numrica de la cantidad relativa
que hay de uno o varios de estos componentes
2. Clasificacin de los mtodos analticos

Los mtodos analticos se suelen clasificar en clsicos e instrumentales. Esta
clasificacin es, en gran medida histrica, ya que los mtodos clsicos a veces
denominados mtodos de qumica hmeda, precedieron en un siglo o mas a los
mtodos instrumentales
3. Mtodos clsicos
En los primeros aos de la qumica la mayor parte de los anlisis se realizaban
separando los componentes de inters (analito) de una muestra mediante precipitacin,
extraccin o destilacin. Una vez separado el analito de inters, se proceda a su
identificacin, mediante la medicin de sus propiedades fsicas como el punto de fusin,
el punto de ebullicin, el ndice de refraccin, la rotacin ptica especfica, o mediante
la identificacin de los grupos funcionales mediante el empleo de reactivos especficos
que forman un color caracterstico con el analito buscado. En los anlisis cuantitativos
la cantidad de analito se determinaba por medidas gravimtricas o volumtricas en las
primeras se determinaba la masa del analito o la de algn compuesto producido en una
reaccin qumica a partir del mismo. En los procedimientos volumtricos se
determinaba el volumen o el peso de un reactivo estndar que reaccionase
completamente con el analito.
Precipitacin
ELL
Mtodos clsicos
U N I de
V separacin
E R S I D A D D E
ESL
A Q U I N O B O L I V I A
Destilacin
Constantes fsicas: Punto de fusin,

Mtodos clsicos en el punto de ebullicin, IR, rotacin
Anlisis Cualitativos especifica
Reactivos especficos
Mtodos clsicos en Volumetra

Anlisis Cuantitativo Gravimetra
Estos mtodos clsicos para la separacin y determinacin de analito todava se usan

en algunos laboratorios de anlisis qumico, los cuales hoy en da con el avance de la
ciencia y la tecnologa. Estn siendo reemplazados por los mtodos instrumentales.
4. Mtodos instrumentales
A principios del siglo XX los qumicos comenzaron a utilizar fenmenos distintos de los
utilizados en los mtodos clsicos para resolver los problemas analticos. As para el
anlisis cuantitativo de una gran variedad de analitos inorgnicos, orgnicos y
bioqumicos se empezaron a utilizar las medidas de sus propiedades fsicas tales como
la conductividad, el potencial de electrodo, la absorcin, fluorescencia, Adems, en la
separacin de mezclas complejas, tcnicas cromatograficas y electroforesis muy
eficaces empezaron a reemplazar a la destilacin, extraccin y precipitacin como
etapa previa a su determinacin cualitativa o cuantitativa.
A estos mtodos ms modernos para la separacin y determinacin de especies

qumicas se les conoce en conjunto como mtodos instrumentales de anlisis. Muchos
de los fenmenos en los que se fundamentan los mtodos instrumentales se conocen
desde hace ms de un siglo. Sin embargo, su aplicacin por la mayor parte de los
qumicos se retraso por falta de una instrumentacin sencilla y fiable. De hecho el
crecimiento de los mtodos instrumentales de anlisis modernos ha ido paralelo al
desarrollo de la industria electrnica e informtica
5. Definicin de anlisis instrumentales:

Son mtodos que basados en la medida de magnitudes de tipo fsico o fisicoqumico
requieren disposiciones de trabajo totalmente distinto de los habituales en el laboratorio
qumico y en cuya estructura y realizacin intervienen determinados instrumentos de
medida.
5.1. Ventajas e inconvenientes de los mtodos instrumentales
VENTAJAS DESVENTAJAS
Resultados ms objetivos, pues los Mayor costo
resultados estn reflejados en escalas Requieren de calibracin previa con un
numricas, grficos o nmeros. patrn de calidad que debe haberse
Tienen mayor precisin controlado anteriormente por un
Mayor sensibilidad, pueden medir procedimiento qumico o con otro
unidades de microgramo, nanogramos aparato controlado correctamente.
y picogramos Requiere tcnicos expertos para su
Menor duracin en el tiempo de manejo
anlisis
En muchos casos no se altera la
muestra
Selectividad
Permiten su adaptacin a aparatos de
registro grafico y a instrumentos de
clculo,
5.2. Importancia de las tcnicas instrumentales en el campo bioqumico y

farmacutico
Estos mtodos proporcionan informacin precisa y completa de las propiedades fsicas
de las sustancias medicinales as pueden mencionarse::
a) Determinacin cuantitativa de los metabolitos secundarios presentes en el

cuerpo humano
Glicemia, creatinina, concentracin de elementos inorgnicos como calcio, potasio,

fosforo.
b) Identificacin y determinacin de la estructura qumica del medicamento
Antiguamente la informacin estructural estaba condicionada a la degradacin de la

sustancia y estudios de los productos resultantes de la degradacin, hoy en da gracias
a las tcnicas instrumentales esa informacin se consigue a partir de la molcula
intacta
c) Determinacin de la homogeneidad y pureza de productos farmacuticos
Para este fin se utilizan las cromatografas en sus diferentes formas, tambin la
electroforesis y la espectrometra de masas, e incluso pueden realizarse combinaciones
de tcnicas convirtindose en armas poderosas para la dilucidacin de compuestos
qumicos
d) Valoracin cuantitativa de principios activos
Para este fin se utilizan numerosos mtodos, muchas veces combinaciones para
mejorar la sensibilidad
e) Determinacin de constantes fsicas y fisicoqumicas
Estas constantes caractersticas y propias de compuestos qumicos tales como el

punto de fusin, intervalo de destilacin, peso especfico, viscosidad, ndice de
refraccin, poder rotatorio especifico, conductividad, pH, ndice de humedad descenso
crioscopico
5.3. Clasificacin de las tcnicas instrumentales

Las tcnicas instrumentales pueden clasificarse atendiendo al fenmeno fsico o
fisicoqumico que se utiliza para efectuar la medicin, de esa forma puede dividirse en:
Espectroscpicos
Electroqumicos
De separacin
Radioqumicos
Trmicos
6. Instrumentos para el anlisis

Un instrumento para el anlisis qumico transforma la informacin relacionada con las
propiedades fsicas o qumicas del analito en informacin que pueda ser manipulada e
interpretada por un ser humano. Por tanto, un instrumento analtico puede considerarse
como un dispositivo de comunicacin entre el sistema objeto de estudio y el cientfico.
Para conseguir la informacin del analito deseado, es necesario proporcionar un
estimulo, generalmente en forma de energa electromagntica, elctrica, mecnica,
nuclear, este estimulo provoca un respuesta del sistema objeto de estudio en la cual la
naturaleza y la magnitud de la misma se rigen por las leyes fundamentales de la
qumica y la fsica, la informacin resultante radica en el fenmeno que surge de la
interaccin del estimulo con el analito.
6.1. Componentes bsicos de los instrumentos

En general los instrumentos analticos constan de las siguientes partes:
Fuente de energa (estimulo)

Recipiente para la muestra (no todos los instrumentos lo poseen)
Detector
Dispositivo de lectura
7. CUESTIONARIO
1. Mediante un cuadro indique la clasificacin de los mtodos analticos

instrumentales en funcin a las propiedades fisicoqumicas que el instrumento
detecta.
2. Mencione las principales tcnicas instrumentales utilizadas en la identificacin y
determinacin de estructuras qumicas de compuestos medicinales
3. Mencione las principales tcnicas instrumentales empleadas en estudios de
homogeneidad y pureza de productos farmacuticos.
4. Investigue los principales componentes de un instrumento analtico y defina cada
uno.
5. Investigue los componentes de una balanza electrnica, e indique el fundamento
de su funcionamiento.
8. Bibliografa
Skoog, Hooler. Nieman. Principios de anlisis instrumental Quinta edicin
Oriol Valls; Benito del castillo. Tcnicas Instrumentales en Farmacia y Ciencias
de la salud. Cuarta edicin. Barcelona Spain

WORK PAPER # 2
UNIDAD I Tema: 2
TTULO: Calibracin y validacin de mtodos analticos
FECHA DE ENTREGA: 11va Semana
PERODO DE EVALUACIN: 12va Semana
1. Calibracin de mtodos analticos
Todos los mtodos instrumentales, excepto dos (gravimtricos y culombimtrica),

requieren una calibracin, La calibracin es el proceso que relaciona la seal analtica
medida con la concentracin del analito.
Los tres mtodos ms frecuentemente utilizados para la calibracin son:
Curva de calibrado
Mtodo de adicin estndar
Mtodo del patrn interno
1.1. Curva de calibrado o calibracin externa
Para realizar el mtodo de la curva de calibrado se introducen en el instrumento varios

patrones que contienen concentraciones exactamente conocidas del analito y se
registra la seal instrumental. Normalmente esta seal se corrige con la
correspondiente seal obtenida con el blanco-. En condiciones ideales el blanco
contiene todos los componentes de la muestra original excepto el analito. Los datos
obtenidos se representan para obtener una grafica de la seal corregida del instrumento
frente a la concentracin de analito. Usualmente la representacin grafica de los datos
de concentracin versus la seal instrumental genera una lnea recta de la cual se
obtiene la ecuacin de la curva por el mtodo de mnimos cuadrados que permite
calcular directamente la concentracin de las muestras.
La lnea recta obtenida por el mtodo de mnimos cuadrados es aquella que minimiza
la suma de las residuales de todos los puntos por conveniencia se definen tres
cantidades Sxx, Syy y Sxy:

Pendiente de la
recta
Ordenada en el origen
Ecuacin lineal
El xito en la curva de calibrado depende en gran medida de la exactitud que tengan la

concentracin de los patrones y de lo que se parezca la matriz de los patrones al de la
muestra que se analiza. Lamentablemente reproducir la matriz suele ser difcil o
imposible y sus efectos dan lugar a errores por interferencias, por lo que es necesario
separar el analito.
1.2. Tcnica de adicin de estndar
La tcnica de adicin de estndar es especialmente til para analizar muestras cuya

matriz compleja hace altamente probable la presencia de interferencias no espectrales.
Este mtodo puede aplicarse de diferentes formas:

Una de las ms habituales implica la preparacin de diferentes soluciones, mediante la
adicin de diferentes volmenes de una disolucin patrn a una misma alcuota de
muestra. Todas las soluciones se llevan a un volumen final fijo. Este proceso se conoce
como adicin de muestra. Hay que tener en cuenta que cuando la cantidad de la
muestra es limitada, las adiciones de estndar se pueden llevar a cabo por adiciones
sucesivas de volmenes del patrn a un nico volumen de muestra. Las medidas, se
van haciendo en la muestra original y despus de cada adicin del patrn en la
muestra.
Como los patrones se preparan en alcuotas de la muestra y la dilucin de la muestra

es la misma en cada solucin, la matriz es idntica. Por esta razn, en cada solucin,
las seales sern afectadas de manera similar por las interferencias no espectrales
producto de la matriz de la muestra por lo que la curva obtenida permite, en principio,
realizar la determinacin cuantitativa de manera adecuada. Es importante destacar que
esta tcnica no elimina las interferencias sino que las compensa, ya que permite
obtener la seal de patrones y muestra bajo las mismas condiciones de matriz. Tambin
es importante tener en cuenta que la aplicacin de esta tcnica no garantiza la
obtencin de un resultado cuantitativo verdadero ya que la presencia de algunas
interferencias de tipo aditivo o multiplicativo podra afectar el resultado.
La determinacin de la concentracin de la muestra se realiza mediante la

extrapolacin de la curva ajustada (seal versus concentracin de patrn agregado a la
muestra) hasta un valor de seal igual a cero.
1.3. Tcnica del patrn interno
Esta tcnica se emplea en aquellos mtodos instrumentales que permiten la

determinacin multielemental. Un patrn interno es una sustancia que se aade a todas
las muestras, blancos y patrones de calibrado en una cantidad fija. Tambin puede ser
un componente mayoritario de las muestras que se agrega a los patrones en una
concentracin lo suficientemente elevada como para que se pueda considerar que es la
misma en todos los casos. En este caso, el calibrado es una representacin grfica
ajustada del cociente entre la seal del analito y la seal del patrn interno en funcin
de la concentracin de analito de los patrones.
En las muestras, este cociente se utiliza para determinar la concentracin del analito a
partir de una curva de calibrado.
Si se elige y se usa adecuadamente un patrn interno, se pueden compensar algunos

errores aleatorios o sistemticos, como derivas, ruido de parpadeo y algunas
interferencias no espectrales producto de la matriz., ya que el cociente de las seales
del analito y del patrn interno es independiente de dichas fluctuaciones y algunos
efectos de la matriz. Cuando el patrn interno es el componente mayoritario de las
muestras y de los patrones, tambin puede suceder que se compensen los errores
producidos en la preparacin de las muestra, disolucin y filtrado.
La mayor dificultad para aplicar el mtodo del patrn interno es encontrar la sustancia
adecuada que sirva para compensar estos efectos, as como para incorporarla a las
muestras y a los patrones de forma reproducible.
El patrn interno deber dar una seal similar a la del analito en la mayora de los
casos. De manera adicional, las interferencias no espectrales deben afectar al estndar
interno de igual manera que al analito a determinar. Por esta razn la seleccionar el
estndar interno es vital para que la aplicacin del mtodo de los resultados deseados.
2. Validacin de mtodos analticos
La validacin determina lo apropiado de un mtodo para proveer informacin deseada.

La validacin se puede aplicar a muestras, metodologas y datos con frecuencia es el
analista el que lleva a cabo la validacin, aun que tambin puede hacerla el personal
de supervisin.
La validacin de muestras tiene como fin aceptar las muestras como miembros de la
poblacin en estudio, admitir las muestras para las medidas, establecer la autenticidad
de las muestras y decidir si es necesario un nuevo muestreo. En el proceso de
validacin las muestras pueden ser rechazadas atendiendo a cuestiones sobre la
identidad de la muestra, manejo de la muestra o por tener conocimiento de que la forma
de toma de la muestra no fue la adecuada o hay incertidumbre. Por ejemplo la
contaminacin en la toma de muestra de sangre como prueba para un anlisis forense
seria una razn,
La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas documentadas y
demostrativas de que un mtodo de anlisis es lo suficiente fiable y reproducible para
producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos (Validacin de mtodos
analticos. Monografa. Seccin catalana de la AEFI. Comisin de normas de
buena fabricacin y control de calidad. Sept., 1989
Para la obtencin de resultados exactos y precisos con alto grado de seguridad es

indispensable realizar la validacin del mtodo analtico, que se utilizar en la
cuantificacin de compuestos qumicos, esto con el fin de asegurar la confiabilidad y
establecer una evidencia documentada del procedimiento
1. Exactitud La exactitud se expresa en trminos de errores absolutos y

relativos,
El error Ea de la media o promedio del anlisis de un pequeo conjunto de

replicados se expresa mediante la relacin:
Tambin puede expresarse como:
2. Precisin, La precisin describe la reproducibilidad de los resultados; es decir la

concordancia entre los valores numricos de dos o ms medidas replicadas o
medidas que se han realizado exactamente de la misma forma. En general la
precisin de un mtodo analtico se obtiene fcilmente mediante la simple
repeticin de la medida.
Habitualmente se utilizan tres trminos para describir la precisin de un conjunto

de replicados que incluyen la desviacin estndar, la varianza y el coeficiente de
variacin:
Desviacin estndar de la muestra S y varianza de la muestra S 2
Coeficiente de variacin o desviacin estndar relativa
Precisin intermedia que a diferencia de la anterior, expresa la variacin dentro

del laboratorio, en diferentes das, diferentes analistas o en diferentes equipos.
3. El lmite de deteccin, que permite encontrar la concentracin ms baja en una

muestra que puede ser detectada por una nica medicin con un nivel de
confianza determinado.
3= factor
D.S.= desviacin estndar del blanco
b= pendiente
4. El lmite de cuantificacin que permite medir la cantidad ms pequea en una

muestra que puede ser cuantitativamente determinada con aceptable
exactitud y precisin
10= factor
D.S.= desviacin estndar
b= pendiente
5. La especificidad: relacionada con la presencia de interferencias o errores

sistemticos
6. La linealidad, parmetro que permite expresar la capacidad del mtodo analtico

para dar resultados directamente proporcionales a la concentracin del analito en
la muestra y tiene como parmetros a r que es el coeficiente de correlacin y r 2el
coeficiente de determinacin considerndose el mtodo lineal, cuando r es mayor
a 0,999 y r2 mayor o igual a 0,997;
7. La sensibilidad a mayor pendiente mayor sensibilidad
8. La robustez, que permite expresar la capacidad del mtodo analtico para

permanecer inalterado por ligeras pero deliberadas variaciones que son
introducidas en los parmetros del mtodo.
3. Cuestionario:
1. Indique y desarrolle los tipos de errores en qumica analtica
2. Porque es importante validar un mtodo analtico
3. Que es quimiometria, qu importancia tiene
4. Investigue como se calibra: una balanza analtica
4. Bibliografa

James N. Miller, Janes C. Miller. Estadstica y Quimiometria para qumica
Analtica.- 4 Edicin

WORK PAPERs # 3
UNIDAD II Tema 3
TTULO: Mtodos basados en la interaccin de la radiacin
electromagntica con la materia
FECHA DE ENTREGA: 12 a Semana
PERODO DE EVALUACIN: 13a Semana
1. Radiacin electromagntica
La radiacin electromagntica es un tipo de energa que se transmite por el espacio a
enormes velocidades. Muchas de las propiedades de la R.E. se explican
convenientemente mediante la teora ondulatoria clsica con parmetros como
velocidad, frecuencia, longitud de onda y amplitud. En contraste con otros fenmenos
ondulatorios, como el sonido, la R.E. no requiere un medio de transporte para su
transmisin, por lo tanto se transmite fcilmente en el vaco.
La teora ondulatoria para la R.E. no explica completamente los fenmenos asociados

con la absorcin o la emisin de energa radiante, para estos procesos es necesario
considerar la energa radiante como un flujo de partculas discretas de energa
llamados fotones o cuantos. (Teora corpuscular)
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partcula) y se aplican
tanto al flujo de electrones como al de otras partculas elementales.
Haz de radiacin electromagntica
1.4. Parmetros ondulatorios
Perodo (p): Tiempo necesario para que dos mximos sucesivos de una onda
pasen por un punto.
Frecuencia (v): Nmero de oscilaciones del campo elctrico por segundo y es igual
1/p (1 ciclo por segundo = 1 Hertz, Hz). La frecuencia es una
magnitud invariable que est determinada por la fuente de radiacin.
Velocidad Velocidad a la que un frente de onda se desplaza a travs de un
de propagacin medio, depende tanto de la densidad del medio como de v. En el
(V1): vaco la velocidad de la R.E. es independiente de la frecuencia:
Cvaco =2.997 1010 cm/s 3.0 1010 cm/s
Longitud de Es la distancia lineal entre dos mximo o dos mnimos sucesivos de
onda (): una onda.
Nmero de onda: se define como el nmero de ondas por centmetro y es igual a 1/

(cm-1).
1.5. Propiedades corpusculares de la radiacin electromagntica

Ciertas interacciones de la radiacin con la materia requieren que la R.E. sea tratada
como paquetes de energa llamados fotones o cuantos, donde h es la constante de
Planck, h = 6.63. 10-27 erg.s
1.6. Espectro electromagntico

El espectro comprende una gran variedad de longitudes de onda o energas. El
siguiente esquema describe cualitativamente las principales regiones utilizadas con
fines analticos.
1.6.1. Interaccin entre la materia y la energa radiante (ER)

Cuando la radiacin pasa desde el vaco a la superficie de una porcin de materia, el
vector elctrico de la radiacin interacciona con los tomos y molculas del medio. La
naturaleza de esta interaccin depende de las propiedades de la materia y puede dar
lugar a la transmisin, la absorcin o la dispersin de la radiacin.
FENMENO EXPLOTACIN ANALTICA

Transmisin ndice de refraccin
Dispersin Reflexin. Efecto Tyndal. Nefelometra
Absorcin Molecular, atmica
1.6.2. Absorcin de la radiacin

Al pasar R.E. por una capa transparente de un slido, lquido o gas, pueden eliminarse
selectivamente ciertas frecuencias como consecuencia del proceso llamado absorcin.
En este caso la E.R. se transfiere a los tomos o molculas que constituyen la muestra,
como resultado de ello estas partculas pasan del estado de menor energa a estados
de mayor energa o estados excitados.
1.6.3. Absorcin molecular

La absorcin por molculas poliatmicas, es un proceso considerablemente ms
complejo que la absorcin atmica, ya que el nmero de estados de energa est muy
aumentado. Aqu la energa total de una molcula est dada por:
E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional

Para cada estado de energa electrnica de la molcula hay normalmente varios
estados vibratorios posibles y a su vez, para cada uno de stos existen numerosos
estados rotatorios. Como consecuencia el nmero de posibles niveles de energa de
una molcula es mucho mayor que el de una partcula atmica. Es por ello que los
espectros de absorcin aparecen como anchas bandas.
1.6.4. Espectro de absorcin

Tanto las molculas como los tomos tienen un nmero limitado de niveles o estados
energticos cuantizados. Para que se produzca absorcin de radiacin, la energa del
fotn excitante (incidente) debe igualar a la diferencia de energa entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente. Estas diferencias
de energa (E) son nicas, por lo tanto permiten caracterizar los constituyentes de una
muestra. Para este objeto se obtiene experimentalmente una representacin grfica de
la variacin de la absorbancia en funcin de la longitud de onda
2. Componente de los instrumentos espectroscpicos

Los instrumentos usados para estudiar la absorcin o la emisin de la radiacin
electromagntica en funcin de la son conocidos como espectrofotmetros y
constan de cinco elementos bsicos:
1. Fuente estable de energa radiante.
2. Dispositivo que asle una determinada regin del espectro.

3. Recipiente transparente a la radiacin para contener la muestra.
4. Detector de radiacin que convierte a la energa radiante en una seal de
medida.
5. Indicador de seal : sistema de procesamiento y lectura de la seal
2.1 Fuentes de radiacin

Su misin es la generacin de un haz de radiacin con suficiente potencia de
salida y estabilidad para que se detecte y se mida con facilidad.
Pueden ser continuas, que emiten radiacin que vara su intensidad en un
amplio y discontinuas o de lneas, que emiten un nmero limitado de
lneas o bandas de radiacin, cada una de las cuales abarca un limitado .
2.2. Selectores de longitud de onda
Para la mayora de los mtodos espectroscpicos se necesita una radiacin

constituida por un grupo limitado y continuo de estrechas denominado
banda. Para aislar una banda estrecha se utilizan dos tipos de selectores:
filtros y monocromadores
2.2.1. Filtros
Su objetivo consiste en absorber toda la radiacin procedente de la fuente
continua excepto una banda. Se caracterizan por su de transmisin mxima y
el ancho efectivo de banda, que es la anchura de la banda para que la
absorbencia se reduzca a la mitad. Pueden ser de dos tipos:
De Absorcin: Limitan la radiacin absorbiendo ciertas regiones del espectro, y que

producen anchos efectivos de banda entre 30 y 250 nm.
De Interferencia: Se basan en la interferencia ptica para producir bandas
relativamente estrechas. Se construyen con un dielctrico transparente, CaF 2 MgF2,
que ocupa el espacio entre dos pelculas metlicas semitransparentes muy
delgadas, generalmente de Ag. Todo ello colocado entre dos capas de vidrio
transparente.(Siguiente diapositiva)
2.2.2. Monocromadores
Dispersan la radiacin separando espacialmente las distintas de la luz
policromtica proporcionando bandas de anchura pequea. Varan de forma
continua y en un amplio y al mismo tiempo aslan una pequea banda de la luz
policromtica.
2.2.2.1. Componentes del monocromador
1. Rendija de entrada
2. Lente colimadora o espejo cncavo que produce un haz paralelo de radiacin
3. Elemento que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales: prisma
o red
4. Elemento de enfoque de salida
5. Rendija de salida
Prisma de dispersin Red de reflexin y dispersin
2.3. Recipientes para la muestra

Todos los mtodos espectroscpicos, excepto los atmicos emplean un recipiente que
contenga a la muestra., estas reciben el nombre de celda o cubeta y se fabrican de:
plstico o vidrio (para la regin Visible)
slice fundido (cuarzo) (para la regin Visible y UV por debajo de 350 nm e IR hasta
3000 nm )
vidrio de silicato para medidas entre 375 y 2000 nm (V e IR)
NaCl para la regin del IR
La longitud mas comn en la trayectoria de las cubetas para Visible y UV, suele ser de 1
cm, aunque las puede haber menores o mayores. Hay cubetas acopladas a los
sistemas de medidas continuas (FIA o HPLC), a travs de las cuales pasa el flujo de
muestra.
2.4. Detectores:
Un detector es un dispositivo que convierte una propiedad fsica en una seal de medida,
DETECTORES PARA ESPECTROSCOPA
TIPO (nm)
DE FOTONES Fototubos 150-1000
Tubos fotomultiplicadores 150-1000
Fotodiodos de Silicio 350-1100
Fotoconductores 750-3000
Clulas fotovoltaicas 370-780
TERMICOS Termopares 600-20000
Bolmetros 600-20000
Celdas neumticas 600-40000
Celdas piroelctricas 1000-20000
3. Cuestionario
1. Que es radiacin electromagntica

2. Indique los fenmenos que pueden ocurrir por la interaccin de la radiacin
electromagntica con la materia
3. Defina:
Espectroscopia de absorcin
Espectroscopia de emisin
Espectroscopia fotoacustica
Espectroscopia de fluorescencia
4. Diferencia entre nefelometra y turbidimetria
5. Que es un espectrofotmetro
6. Indique la importancia de la espectrofotometra ultravioleta visible en el rea de
las ciencias farmacuticas y bioqumicas
7. Diferencia entre un espectrofotmetro de haz sencillo y uno de haz doble
8. Indique las ventajas de un espectrofotmetro con detector de fotodiodos
9. Que es quimioluminiscencia, cual es su diferencia con la fotoluminiscencia
4. Bibliografa

WORK PAPER # 4.
UNIDAD III Tema: 4
TTULO: Polarimetra y Refractometria
PERODO DE EVALUACIN: 13 a Semana
1. Refractometria:
Cuando un rayo de luz pasa de un medio a otro de distinta naturaleza (por ejemplo
del aire al agua) sufre una desviacin. Tcnicamente, el ndice de refraccin, en un
determinado medio, se define como la relacin entre la velocidad de la luz en el vaco
y la velocidad de la luz en el medio: n = c / v, donde c, es la velocidad de la luz en el
vaco (3x108 m/s) y v, la velocidad de la luz en el medio, por ejemplo agua.
Al tratarse de una relacin, el ndice de refraccin no tiene unidades y el mnimo

valor que puede tomar es 1, porque la luz no se puede mover en ningn medio ms
rpido que en el vaco. La medida del ndice de refraccin permite determinar la
concentracin de disoluciones acuosas. Este procedimiento analtico se utiliza,
adems de en anlisis clnicos, en procesos de control de calidad de alimentos y
medicamentos.
2. Luz polarizada
La luz polarizada est formada por fotones individuales cuyos vectores de campo
elctrico estn todos alineados en la misma direccin. Cuando la luz atraviesa un
filtro polarizador, el campo elctrico interacta ms intensamente con las molculas
orientadas en una determinada direccin. Esto hace que el haz incidente se divida en
dos haces con vectores elctricos perpendiculares entre s. Un filtro horizontal
absorbe los fotones con vector elctrico vertical (arriba). Un segundo filtro girado 90
respecto al primero absorbe el resto de los fotones; si el ngulo es diferente slo se
absorbe una parte de la luz.
Polarizacin de la luz
2.1. Polarimetra
Si se hace pasar un haz de luz polarizada en un plano a travs de un medio
pticamente activo se produce un desplazamiento angular del plano de polarizacin
de la luz. Los componentes principales de un polarmetro son:
Fuente luminosa
Prisma de Nicol para polarizar la luz
Compartimientos para el tubo que contiene la muestra
Prisma de Nicol para analizar
Lentes de observacin
Escala en la cual se indique la rotacin ptica de la muestra
2.2. Aplicaciones de la polarimetra

En el campo de el control de calidad y control de procesos la polarimetra se usa las
ms diferentes ramas, como farmacutica (aminocidos, analgsicos, cocana,
dextrosa, codena, antibiticos,), alimentacin (carbohidratos, glucosa, maltosa,
monosacridos naturales), qumica (biopolmeros, polmeros sintticos, polmeros
naturales
3. Cuestionario
1. Que es un refractmetro, cual es su aplicacin en farmacia

2. Qu tipo de anlisis puede llevarse a cabo con un refractmetro
3. Que requisito debe cumplir una molcula para desviar el plano de luz polarizada
4. Dibuje una molcula orgnica quiral
5. Cul es la importancia de conocer la actividad ptica de un principio activo
4. Bibliografia
Oriol Valls; Benito del castillo. Tcnicas Instrumentales en Farmacia y Ciencias de la
salud. Cuarta edicin. Barcelona Spain

WORK PAPERs # 5
UNIDAD II Tema 5
TTULO: Espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta visible
1. Introduccin
La espectrofotometra de absorcin molecular ultravioleta visible, comnmente llamada
espectrofotometra UV-VIS, se basada en la medicin de absorcin de radiacin U.V. o
visible por determinadas molculas. La radiacin correspondiente a estas regiones del
espectro electromagntico provocan transiciones electrnicas a longitudes de ondas
caractersticas de la estructura molecular de un compuesto.
Caractersticas de transiciones electrnicas entre orbitales , y

Transicin (nm) (L mol cm ) Ejemplo 4 -1
* <200 - Hidrocarburos saturados

4
* 200500 10 Alquenos, alquinos aromticos
* 160260 102 103 H2O, CH3OH, CH3CL
3
* 250600 10 10 Carbonilos, nitro, nitrato, carbonilo.
2. Anlisis cualitativo y cuantitativo por espectrofotometra ultravioleta visible
2.1. Tcnicas cualitativas

Las aplicaciones cualitativas no ofrecen una herramienta muy til, ya que con estos
espectros existe un nmero relativamente escaso de mximos y mnimos. Sin embargo
el anlisis cualitativo es una excelente herramienta cuando va precedido de algn
mtodo de separacin.
2.2.1. Anlisis cualitativo
a) Aplicacin:
Compuestos orgnicos: Identificacin de aldehdos, cetonas, compuestos
aromticos, drogas, vitaminas, etc.
Compuestos inorgnicos: (especies absorbentes)
Compuestos no absorbentes: Se deben derivatizar de manera que el producto
absorba radiacin UV - VIS.
b) Principales caractersticas:
Alta sensibilidad:
Absortividades molares 105
Intervalos de concentracin 10-4 a 10-6M.
Selectividad: seleccin de la longitud de onda en la que el nico componente
absorbente de una muestra sea la sustancia que se determina.
Precisin y exactitud: dependiendo del nivel de concentracin es posible lograr
valores menores que 1% de error relativo.
2.2. Procedimiento en el anlisis cuantitativo
a) Recopilacin de antecedentes:
Referencias bibliogrficas.
Mtodos normalizados.
b) Preparacin y/o tratamiento de la muestra:

Separacin del compuesto de inters (precipitacin, extraccin por solvente,
cromatografa, etc.).
Derivatizacin si es necesaria.
c) Seleccin de la longitud de onda de trabajo ( mx.):
Obtencin del espectro de absorcin:
En el espectro de mono haz, se va alternando la medida de la absorbancia entre

el disolvente (blanco) y la solucin que contiene la muestra en la medida que se
va variando gradualmente la longitud de onda.
En el espectro de doble haz, la operacin descrita anteriormente es posible
hacerla automtica y simultneamente.
Espectrofotmetros de Arreglo de Diodos ya que dada su configuracin es
posible obtener el espectro de absorcin en un amplio rango de longitudes de
onda (200800 nm) en fraccin de segundos.
Una vez establecida la longitud de mx. (Mxima sensibilidad) se prepara la curva de

calibracin.
2.2.1. Curva de calibracin

Serie de soluciones de concentraciones crecientes del analito, en un rango tal que se
cumple la Ley de Beer. Una vez obtenidos los distintos puntos (o niveles de calibracin)
se debe determinar la ecuacin de la recta mediante anlisis de regresin lineal (o
ajuste de la curva por mnimos cuadrados). La ecuacin que relaciona la absorbancia
con la concentracin ms comn es del tipo:
Y = mx + b
m = pendiente ()
b = intercepto
r es un parmetro estadstico que da cuenta de la calidad de la curva de calibracin y

se denomina coeficiente de regresin. En anlisis cuantitativo se considera buena una
curva cuando su valor de r es mayor que 0.99.
3. Otras aplicaciones
3.1. Anlisis de mezclas

En una mezcla de sustancias absorbentes, a una misma longitud de onda las
absorbancias son aditivas. Considerando esto, es posible determinar componentes en
una mezcla determinando las respectivas absorbancias a diferentes longitudes de onda.
As tendremos:
1 A1 = Cxx + Cyy a
2 A2 = Cxx + Cyy a
A partir de estndares puros de las especies X e Y se obtienen, por separado los

respectivos valores de las absortividades molares de X e Y. Luego quedan como
incgnitas las concentraciones de X e Y a ambas longitudes de onda y se resuelve el
sistema de ecuaciones.
4. Cuestionario
1. Qu importancia tiene la espectroscopia de absorcin visible en el anlisis de los

diferentes metabolitos secundarios propios del cuerpo humano
2. Que es un grupo cromoforo
3. Que es un grupo auxocrmo
4. Que es deriatizacion, cual es su finalidad.
5. Qu diferencia hay entre un espectrofotmetro y un colormetro
6. Convertir los siguientes datos de transmitancia en absorbancia
a) 25.5%
b) 0.567%
c) 32.8%
d) 3.58%
e) 0.085
f) 53.82%
7. Se valora un lote de comprimidos de paracetamol con un contenido

declarado de 100mg de paracetamol por comprimido, se disuelve un
comprimido en 20 ml de etanol, completando el volumen con agua hasta 150
ml y a continuacin se determina la absorbancia en el espectrofotmetro y
en cubeta de 1 cm., siendo de 0.200. un patrn de 100 mg/dl de paracetamol
obtiene una absorbancia de 0.258 Cul es la concentracin real del
paracetamol en los comprimidos analizados?
8. Se valora un lote de inyectable de sulfametazina, para lo cual se toma 1 ml

de inyectable y se diluye con cantidad suficiente de diluyente para 500 ml, a
continuacin se determina la absorbancia de la solucin al espectrofotmetro
y en cubeta de 1 cm. Siendo de 0.025. Paralelamente un patrn de
sulfametazina con concentracin de 0.1% en cubeta de un cm. y en el
mismo espectrofotmetro, obtuvo una absorbancia de 0.312 Cul es la
concentracin del inyectable?
5. Bibliogrfia
Hewlett Packard. 1988. The Diode-Array Advantage in UV-VIS Spectroscopy.
Publication No12 - 55948912.
Inge, J.A. Jr. and Crouch, S.R. 1988. Spectrochemical Analysis. Prentice Hall
International, Inc.
Skoog, D.A. y West, D.M. 1984. Anlisis Instrumental. 2a edicin. Ed.
Interamericano.
WORK PAPER # 6.
UNIDAD II Tema: 6
TTULO: Espectroscopia de absorcin molecular infrarroja

1. Introduccin a la espectroscopia infrarroja

La espectroscopia infrarroja es una tcnica analtica instrumental que permite
conocer los principales grupos funcionales de la estructura molecular de un
compuesto. Esta informacin se obtiene a partir de la radiacin infrarroja en el
espectrofotmetro. La regin del espectro IR normal queda comprendida entre 2.5 u
a 15u medido en unidades de longitud de onda que corresponde a 4000 cm-1 y 666
cm-1 respectivamente.
2. El espectrofotmetro IR.
Un espectrofotmetro clsico y ampliamente difundido, son los de doble as. Ellos
estn configurados con los siguientes componentes:
Una fuente de radiacin.

Un portamuestra y blanco.
Una rejilla o monocromador.
Un detector.
Un CPU con pantalla, impresora y teclado lo que permite fcilmente ampliar o
reducir zonas especficas del espectro.
El diagrama de un instrumento IR clsico puede verse ms abajo.

Blanco Detector
Divisor de as Ampli
ficador
O
CPU Pantalla
Fuente de radiacin Teclado

Muestra Impresora
infrarroja: laser, Regilla o
Globar o Nernst Monocromador
La fuente de radiacin IR puede contener un lser (He-Ne) en los equipos

modernos, o una cermica contaminada con xidos de Zirconio, Torio y Cesio,
conocida como filamento de Nernst. Esta cermica es calentada elctricamente
hasta 1000-1800 C. Otra fuente de radiacin es el Globar, que es una pequea
esfera de carburo de silicio, que al ser calentada al igual que la anterior, emite una
radiacin de amplio espectro que va desde los 5500 cm -1 hasta los 600 cm-1. El
Nernst en cambio, muestra un espectro de energa o frecuencia que va desde 7100
cm-1 hasta los 550 cm-1. Estos rangos de frecuencia son ms que suficiente para los
espectroscopistas orgnicos. Ellos necesitan el rango que va desde los 4000 cm -1
hasta los 650 cm-1 aproximadamente.
El porta-muestra, puede ser segn el propsito, para aceptar gases, lquidos y

slidos.
En gases, las celdas disponibles tienen entre 10 y 40 cm de longitud y los espectros

en estos casos son el resultado del paso, a travs de la celda con mltiples
reflexiones, de manera que, en realidad la luz ha recorrido muchas veces la longitud
de la celda antes de llegar al detector.
De los lquidos pueden ser obtenidos los espectros en ya sea compuestos puros o
en soluciones diluidas de aquellos. Los lquidos puros se colocan entre dos placas
de bromuro de sodio (se pueden lograr espesores de hasta 0,01 mm o menores)
Las soluciones diluidas son colocadas entre dos ventanas de cloruro de sodio o
bromuro de sodio, rodeadas de anillos espaciadores que delimitan las celdas
espectroscpicas a algunas fracciones de milmetro de espesor. En estos casos
deben ser muy bien seleccionados los solventes a utilizar. El CCl 4 y el CS2 son
complementarios en estas tareas. Ambos solventes son invisibles en regiones sobre
los 1333 cm-1 para el CCl4 y bajo los 1333 cm-1 para el CS2. Pueden hacerse muchas
combinaciones de solventes que cubran diferentes ventanas entre los 4000 cm -1 y
los 600 cm-1. (Ventana es aquella porcin del espectro IR, en el cual el solvente tiene
una muy baja absorcin de radiacin, es decir, es trasparente a la radiacin
infrarroja).
SOLVENTE Regin no til cm -1 Regin no til cm-1

CHCl3 600-820 1175-1250
C2Cl4 750-950
C6H6 benceno 600-750 3000-3100
CH2Cl2 600-820 1200-1300
ACETONA 1100-1850 2800-3000
DMSO 900-1100
TOLUENO 600-750 2800-3200
En todos los casos las paredes del contenedor de la muestra deben ser
transparentes a todo el rango de la radiacin (4000-600 cm -1). Esto se consigue con
ventanas hechas de cristales de Bromuro o Cloruro de sodio.
La rejilla o monocromador es un espejo reticulado que equivale a un prisma capaz

de descomponer el espectro de la radiacin en sus diferentes longitudes de onda.
Este dispositivo junto a otros dispositivos conocidos como eslits (ventanas de
abertura variable) permiten seleccionar y examinar la energa radiante de diferentes
longitudes de onda que ha pasado por la muestra.
El detector. Es otro componente importante en la configuracin de un

espectrofotmetro IR. Mide la energa radiante residual que emerge de la muestra y
la compara con aquella que proviene de la celda llamada blanco (que no contiene
sustancia problema, solo contiene el solvente en el caso de una muestra en
solucin, o bien, bromuro o cloruro de sodio como blanco para las muestras de
lquidos puros o slidas) Esta diferencia de energa se mide con una termocupla que
tiene la propiedad de traducir las diferencias de intensidad de la radiacin que sale
de la muestra en impulsos elctricos.
El graficador o impresora traduce a un grfico las diferencias encontradas por el

detector, colocando en la abscisa el rango de longitudes de onda barrido por el
instrumento y en la ordenada la intensidad de la absorcin del as emergente de la
muestra problema.
3. Caractersticas de un espectro infrarrojo

El espectro infrarrojo de un compuesto es una representacin grafica de los valores
de onda () o de frecuencia (cm-1) ante los valores de % de transmitancia (%T).La
absorcin de radiacin IR por un compuesto a una longitud de onda dada, origina un
descenso en el %T, lo que se pone de manifiesto en el espectro en forma de un pico
o banda de absorcin, el cual representa a un grupo funcional.
El inters de la espectroscopia infrarroja radica fundamentalmente en sus

aplicaciones de tipo cualitativo aunque tambin puede usarse en anlisis
cuantitativos.
En el espectro infrarrojo la frecuencia de cada banda (longitud de onda) del
espectro vibracin rotacin molecular depende de la constante de fuerza de
cada enlace interatmico, de ah que el espectro de absorcin infrarrojo
depende del conjunto de enlaces que constituyen la estructura molecular y
sea distinto y caracterstico de cada molcula.
4. Cuestionario
1. Indique la importancia de la espectroscopia de absorcin infrarroja en el
control de calidad de materia prima y principios activos de uso farmacutico.
2. Que informacin brinda el espectro infrarrojo en el anlisis de compuestos
qumicos orgnicos?, que tipo de muestras pueden estudiarse por este
mtodo?
3. Investigue las frecuencias de los mximos de absorcin en el infrarrojo de los
principales grupos funcionales orgnicos.
4. A que se denomina zona de la huella dactilar de una molcula en
espectroscopia infrarroja.
5. Bibliografa
Hewlett Packard. 1988. The Diode-Array Advantage in UV-VIS Spectroscopy.
Publication No12 - 55948912.
Inge, J.A. Jr. and Crouch, S.R. 1988. Spectrochemical Analysis. Prentice Hall
International, Inc.
Skoog, D.A. y West, D.M. 1984. Anlisis Instrumental. 2a edicin. Ed.
Interamericano.

WORK PAPER # 7.
UNIDAD II Tema: 7
TTULO: Espectroscopia de absorcin atmica
1. Introduccin
La configuracin electrnica ms estable de un tomo corresponde a la de menor
contenido energtico conocido como estado fundamental. Si un tomo que se
encuentra en un estado fundamental absorbe una determinada energa, ste
experimenta una transicin hacia un estado particular de mayor energa. Como este
estado es inestable, el tomo regresa a su configuracin inicial, emitiendo una
radiacin de una determinada frecuencia.
La frecuencia de la energa radiante emitida corresponde a la diferencia de energa

entre el estado excitado (E1) y el estado fundamental (E o) como se encuentra
descrito en la ecuacin de Planck:
H = constante de Planck
= frecuencia
C = velocidad de luz
longitud de onda
=
Segn la teora atmica, el tomo puede alcanzar diferentes estados (E 1, E2, E3, )
y de cada uno de ellos emitir una radiacin ( 1, 2, 3, ) caracterstica,
obtenindose as un espectro atmico, caracterizado por presentar un gran nmero
de lneas discretas. En absorcin atmica es relevante solamente aquella longitud
de onda correspondiente a una transicin entre el estado fundamental de un tomo y
el primer estado excitado y se conoce como longitud de onda de resonancia.
De la ecuacin de Planck, se tiene que un tomo podr absorber solamente

radiacin de una longitud de onda (frecuencia) especfica. En absorcin atmica
interesa medir la absorcin de esta radiacin de resonancia al hacerla pasar a travs
de una poblacin de tomos libres en estado fundamental. Estos absorbern parte
de la radiacin en forma proporcional a su concentracin atmica.
La relacin entre absorcin y concentracin se encuentra definida en la Ley de

Lambert-Beer.
Como la trayectoria de la radiacin permanece constante y el coeficiente de
absorcin es caracterstico para cada elemento, la absorbancia es directamente
proporcional a la concentracin de las especies absorbentes.
2. Instrumentacin
Los componentes bsicos de un equipo de absorcin atmica son:
La fuente radiante ms comn para las mediciones de absorcin atmica es la

lmpara de ctodo hueco, que consiste en un cilindro relleno con un gas inerte
dentro del cual se encuentra un ctodo (construido del metal a analizar) y un nodo.
Al aplicar un cierto potencial a travs de los electrodos esta fuente emite el espectro
atmico del metal del cual est construido el ctodo.
En la EAA se utilizan atomizadores con y sin llama para producir tomos libres del
metal en el haz de la radiacin.
El atomizador con llama est compuesto de un nebulizador y un quemador. La

solucin de la muestra es convertida primero a un fino aerosol, y luego llevada a la
llama que entrega la energa suficiente para evaporar el solvente y descomponer los
compuestos qumicos resultantes en tomos libres en su estado fundamental.
Las mezclas de gases ms usados para producir la llama adecuada son:

aire/propano, aire/acetileno y xido nitroso/acetileno. Generalmente, la eleccin
depender de la temperatura requerida para la disociacin de los compuestos y de
las caractersticas qumicas del elemento a determinar.
En los atomizadores sin llama-atomizacin electrotrmica con horno de grafito el

vapor atmico se genera en un tubo de grafito calentado elctricamente, en cuyo
interior se ubica la muestra. Estos atomizadores presentan diversas ventajas, como
una alta eficiencia en generar vapor atmico, permite el empleo de pequeos
volmenes de muestra y anlisis directo de muestras slidas.
Los espectrofotmetros de absorcin atmica poseen generalmente

monocromadores que permiten aislar una lnea de resonancia del espectro emitido
por la lmpara de ctodo hueco.
Como detector, se emplea un fotomultiplicador que produce una corriente elctrica,

la cual es proporcional a la intensidad de la lnea aislada por el monocromador. Un
amplificador selectivo amplifica la seal pasando luego a un dispositivo de lectura
que puede ser un voltmetro digital o un registrador u otros.
3. Aplicaciones
La EAA constituye una de las tcnicas ms empleadas para la determinacin de ms
de 60 elementos, principalmente en el rango de g/ml-ng/ml en una gran variedad
de muestras. Entre algunas de sus mltiples aplicaciones tenemos el anlisis de:
aguas, muestras geolgicas, muestras orgnicas, metales y aleaciones, petrleo y
sus subproductos; y de amplia gama de muestras de industrias qumicas y
farmacuticas. La espectroscopia de absorcin atmica con llama es el mtodo ms
empleado para la determinacin de metales en una amplia variedad de matrices.
4. Anlisis cuantitativo por espectrofotometra de absorcin atmica

Cuando la absorbancia de soluciones estndar de concentracin conocida del
elemento a determinar se grafica vs. la concentracin, se obtiene una curva de
calibracin. La curva as obtenida es generalmente lineal a bajas concentraciones y
la concentracin de la muestra puede ser determinada por interpolacin de su
absorbancia en la curva de calibracin.
Para emplear este mtodo de anlisis cuantitativo la composicin de las soluciones
estndar deben ser preparadas lo ms semejante posible a la composicin de la
solucin-muestra para compensar o eliminar interferencias. siendo conveniente el
empleo del mtodo de adicin estndar, el cual permite trabajar en presencia de una
interferencia sin eliminarla y obtener una determinacin con buena exactitud del
elemento en la solucin-muestra.
5. Cuestionario:
1. Indique que tipo de fuente (lmpara de ctodo hueco), utilizara Ud., si desea
determinar plomo en agua
2. Qu importancia merece la espectroscopia de absorcin atmica en las ciencias
bioqumicas y farmacuticas
3. Si usted desea determinar residuos de plomo en sistemas biolgicos (muestras
vegetales) que tratamiento aplicara a su muestra, para identificar y cuantificar al
metal por EAA con atomizador de llama
4. Que es el efecto fotoelctrico.
6. Bibliografia
Oriol Valls; Benito del castillo. Tcnicas Instrumentales en Farmacia y
Ciencias de la salud. Cuarta edicin. Barcelona Spain

WORK PAPER # 8.
UNIDAD III Tema: 8
TTULO: Potenciometria y conductimetria
1. Introduccin:
Los mtodos potenciomtricos se basan en la medida del potencial elctrico
(respecto a una referencia) de un electrodo sumergido en la disolucin problema,
a partir de la cual es posible establecer la concentracin de la misma directa o
indirectamente.
La potenciometria puede usarse desde dos puntos de vista:
Potenciometria directa, consistente en la determinacin de la actividad de una

especie de forma directa, a travs de la medida de un potencial elctrico.
Valoracin potenciomtrica, para localizar el punto de equivalencia de una

valoracin analtica (volumtrica o culombimtrica).
2. Medida del pH con el electrodo de vidrio

Para medir el pH con el electrodo de vidrio la primera operacin a realizar es
proceder a su estandarizacin, para lo cual se utilizan dos disoluciones
reguladoras de pH conocido, elegidas de forma que el pH del problema se site
dentro del intervalo de pH comprendido entre los de las dos disoluciones
mencionadas, en general, las operaciones a realizar son:
Enjuagar los electrodos (vidrio y referencia) con agua destilada y secarlos

suavemente con un trozo de papel absorbente.
Introducir los electrodos en una de las disoluciones reguladoras,
asegurndose de que el contacto del electrodo de referencia est sumergido
en la disolucin.
Colocar, en el mando correspondiente del pH-metro, la temperatura de la
disolucin.
Despus de que se alcance el equilibrio, al menos durante un minuto, ajustar
la lectura del medidor para que sea igual al pH del tampn.
Enjuagar los electrodos, secarlos, e introducirlos en la segunda disolucin,
observando si la lectura es la que corresponde a ese tampn. Si el electrodo
de vidrio responde de forma lineal, el potencial vara 59 mV por cada unidad

de pH a 25 C
Finalmente, sumergir los electrodos en la disolucin problema y obtener el
valor de pH. Con frecuencia, estos dos electrodos se presentan reunidos en
uno solo (electrodo combinado).
El electrodo de vidrio, una vez usado, debe guardarse en una disolucin
acuosa para que la superficie del vidrio no se seque.
Si esto ha sucedido, el electrodo debe reactivarse antes de su utilizacin,
sumergindolo en agua durante varias horas.
Para obtenerse mejores resultados es recomendable agitar ligeramente todas

las disoluciones a medir, tanto para el calibrado como para la medida.
3. Valoraciones potenciomtrica
Una valoracin potenciomtrica consiste en utilizar la potenciometria para seguir
la concentracin de una especie a lo largo de una valoracin, indicando el punto
final. As, por ejemplo, el punto final de una valoracin cido-base puede
detectarse con un electrodo de vidrio sensible al pH, en lugar de hacerlo con
fenolftalena. Durante las valoraciones, se mide el cambio en el potencial del
correspondiente electrodo indicador (respecto a una referencia) en funcin del
volumen de reactivo aadido, obtenindose de esta forma una curva de titulacin
potenciomtrica, con la cual empleando mtodos matemticos, puede
encontrarse el volumen en el punto de equivalencia de la reaccin.
4. Titulaciones conductimtricas
Las valoraciones conductimtricas se basan en la medida del cambio de la
conductancia de una disolucin a medida que se agrega el reactivo valorante. La
conductancia de una disolucin vara, entre otros factores, con el nmero, tamao y
carga de los iones, por lo que iones diferentes contribuirn en forma diferente a la
conductancia de una disolucin. De esta manera, durante una valoracin, la
sustitucin de algunas especies inicas por otras producir un cambio en la
conductancia, el cual puede ser ventajosamente aprovechado para determinar el
punto final de una valoracin.
En las valoraciones conductimtricas, la conductancia de la disolucin a valorar se

mide luego de la adicin de cantidades determinadas de reactivo valorante. Si se
grafican los valores de conductancia en funcin del volumen de valorante agregado,
se obtendrn dos rectas de pendientes diferentes, de cuya interseccin se podr
obtener el punto final de una valoracin.
Curva de titulacin conductimtrica de un cido fuerte con una base fuerte
En la grafica se muestra los valores de conductancia vs. Volumen de NaOH

agregado durante la valoracin conductimtrica de una disolucin de HCl con NaOH.
A medida que se agrega el reactivo valorante (NaOH), los H + del HCl van siendo
consumidos por los OH- para formar agua. Estos H + son progresivamente sustituidos
por iones Na+, los cuales poseen una menor conductancia inica que los H +, y por lo
tanto la conductancia de la disolucin disminuye. Luego del punto equivalente, el
exceso de iones Na+ y OH- provoca el aumento de la conductancia de la disolucin
verificndose la segunda recta que se muestra en la figura. La pendiente de la recta
correspondiente a la fase final de la valoracin (ms all del punto equivalente) es
menor que la pendiente inicial debido a que la suma de las conductividades inicas
del Na+ y el OH- es menor que la correspondiente suma para los iones H + y Cl-.
5. Bibliografia

WORK PAPER # 9.
UNIDAD III Tema: 9
TTULO: Cromatografa plana
1. Cromatografa en capa fina (CCF)

En la cromatografa en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una capa
delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de slice, almina o celulosa)
depositada sobre un soporte plano como una placa de vidrio, o una lmina de
aluminio o de plstico. La CCF es una tcnica analtica y tiene como objetivo el
anlisis de una mezcla de compuestos qumicos.
1.1. Preparacin de la cromatoplaca

Se deposita una pequea cantidad de la muestra problema en disolucin en un
punto en la parte inferior de la placa. Entonces la placa se introduce en una cmara
cromatografca, de forma que slo la parte inferior de la placa queda sumergida en
el lquido. Este lquido o eluyente es la fase mvil y asciende por la placa de CCF
por capilaridad.
A medida que el eluyente pasa por el lugar donde est la mancha de la mezcla
problema se establece un equilibrio entre las molculas de cada uno de los
componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en
disolucin. En principio, los componentes se diferenciarn en solubilidad y en la
fuerza de su adsorcin, de forma que unos componentes se desplazarn ms que
otros. Cuando el eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la
cmara cromatografca, se seca, y los componentes separados de la mezcla se
visualizan.
1.2. Visualizacin de las manchas

Cuando la muestra a separar no posee color y no puede evidenciarse la presencia
de las manchas (analitos separados), deben emplearse mtodos fsicos y qumicos
Puede utilizarse luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se

adiciona un colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea
fluorescente en todas partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un
compuesto orgnico.
Tambin puede utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo
no inespecfico. Reactivos especficos para desarrollar coloracin en las manchas.
Esto se puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolucin que los
contenga o en forma de spray.
1.3. Clculo del factor de retencin Rf

Cuando las manchas son visibles, se puede determinar para cada una de ellas el
valor de Rf (factor de retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza en
la placa. Cada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende del disolvente
empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente del recorrido
del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una
mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente cuando
se hacen eluir en la misma placa de CCF).
2. Cuestionario
1. Que es cromatografa
2. Indique la clasificacin de cromatografa
3. Indique las principales aplicaciones de la cromatografa en las ciencias
bioqumicas y farmacuticas
4. Que es extraccin en fase solida
5. Que es Clean up
6. Que es cromatografa de fase normal y de fase reversa
3. Bibliografia

WORK PAPER # 10.
UNIDAD III Tema: 10
TTULO: Cromatografa de lquidos
1. Cromatografa en columna
Es una tcnica utilizada con fines preparativos, de purificacin y aislamiento, puesto

que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla, no es utilizada para
identificar La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se
llena con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel
de slice (SiO2) y almina (Al2O3)). La muestra que se quiere separar se deposita
en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente
(disolvente que constituye la fase mvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover
la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el soluto
adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la columna.
Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a
diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar a otros
tipos de cromatografa, las diferencias en las velocidades de desplazamiento a
travs del medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de elucin
por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la muestra
original, que se recogern en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares
compiten ms eficientemente con las molculas polares de una mezcla por los
lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar las
molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la columna. Si el
disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca
separacin de los componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es muy
apolar, no eluirn los compuestos de la columna. Por lo tanto, la eleccin del
eluyente es crucial para el xito de la cromatografa en columna. A menudo se utiliza
un gradiente creciente de polaridad para la elucin. La CCF se utiliza para
determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separacin.
1.1. Anlisis de los eluatos de la columna

Si los compuestos separados en una cromatografa en columna son coloreados, el
progreso de la separacin se puede monitorizar visualmente. No obstante, a
menudo los compuestos que deben ser aislados suelen ser incoloros. En este caso,
se recogen secuencialmente pequeas fracciones de eluatos en tubos rotulados y la
composicin de cada fraccin se analiza por cromatografa en capa fina. Una vez
identificadas las diferentes fracciones que contienen el mismo producto, se renen,
se elimina el disolvente y se analiza la identidad de los componentes por mtodos
espectroscpicos.
2. Cromatografa liquida de alta eficiencia (HPLC)
2.1. Introduccin
La cromatografa de lquidos es un mtodo de separacin fsico basado en la
distribucin de los componentes de una mezcla entre una fase estacionaria y una
fase mvil que en este caso es un lquido.
2.2. Instrumental
Un equipo para cromatografa liquida de alta resolucin puede representarse por el
siguiente esquema:
La fase mvil puede ser un solvente puro o una mezcla de solventes. Cuando se
trata de una mezcla, puede programarse la bomba para que tome solventes de
diferentes botellas en una proporcin determinada y realice la mezcla en una
cmara de mezclado. Cuando durante toda la separacin se utiliza siempre el mismo
solvente, se denomina isocratica, sin embargo es normal realizar gradientes de
composicin de solvente para aumentar el rango de polaridades de sustancias a
separar acortando el tiempo total de anlisis.
Estos gradientes de solvente tambin son realizados en forma automtica por las
bombas. La bomba enva al solvente hacia la vlvula inyectora a travs de tuberas
de dimetro pequeo, de acero inoxidable o de plsticos especiales. Luego de que
se produce la separacin en la columna, los componentes de la mezcla pasan por el
detector que genera una seal elctrica ante el pasaje de los anualitos proporcional
a la cantidad de sustancia. Esa seal es enviada al registrador o a la PC en donde
queda registrado el cromatograma. En el caso ideal los picos cromatograficos son
gaussianos y cada pico corresponde a un componente de la muestra original. El
integrador puede calcular adems el rea correspondiente a cada pico, la cual es
proporcional a la cantidad de sustancia.
Dado que los detectores de HPLC son no destructivos, es posible recuperar los
productos que salen de l. De esta manera, dependiendo del tamao del loop de
inyeccin y de la columna, y del tipo de bomba, es posible realizar adems de
separaciones analticas, cromatografas preparativas.
3. Parmetros Relevantes
En HPLC, se cambia la composicin de la fase mvil a lo largo de la separacin
utilizando mezclas de entre dos y cuatro solventes.
4. Etapas del Anlisis de una Muestra

En lo que respecta a la optimizacin de las condiciones experimentales, en este
caso es posible realizar ensayos preliminares orientativos utilizando cromatografa
en capa delgada con la misma fase estacionaria que contiene la columna. Por otra
parte es necesario tener en cuenta que dado que se utilizan altas presiones, es
imprescindible evitar la presencia de partculas que puedan obstruir las tuberas y la
formacin de burbujas que puedan deteriorar el relleno de las columnas y producir
inestabilidad en la seal del detector.
Para evitar las obstrucciones, los solventes y las muestras a inyectar se filtran con
membranas de 0,45 a 0,22 m. Para evitar la formacin de burbujas, los equipos de
HPLC cuentan con descalificadores de solvente por vaco o por burbujeo con He y,
en el caso de no contar con los mismos, se deben desgasificar los solventes por
medio de ultrasonido o agitacin bajo vaco antes de utilizarlos como fase mvil
5. Cuestionario
1. Para llevar a cabo una corrida por Cromatografia liquida de alta resolucin,
que tipo de solventes debe utilizarse, indique su grado qumico.
2. Indique mediante un esquema los principales componentes del HPLC,
desarrolle cada una de ellas.
3. En cromatografa liquida de alta resolucin HPLC, donde se produce la
separacin.
4. Que es elucin, a que se llama elucin en gradiente y elucin isocratica, cual
es la diferencia
5. A que se llama tiempo de retencin
6. Que es un cromatograma.
7. Indique los diferentes tipos de detectores que pueden acoplarse al
cromatografo lquido de alta resolucin.
8. Como se realiza la identificacin y la cuantificacin en cromatografa liquida
de alta resolucin, esquematice para hacer ms objetiva su respuesta.
6. Bibliografia

WORK PAPER # 11.
UNIDAD III Tema: 11
TTULO: Cromatografa de gases
1. Introduccin
La cromatografa de gases se basa en la volatilizacin de la muestra y su posterior
inyeccin en la cabeza de una columna cromatogrfica. Para la elucin de la
muestra se usa un gas inerte como fase mvil, de esta manera la fase mvil no
interacciona con las molculas del analito, simplemente transporta el analito a travs
de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC):
Cromatografa gas-slido (GSC): La fase estacionaria es slida y la retencin

de los analitos se produce mediante adsorcin.
Cromatografa gas-lquido (GLC): la fase estacionaria son molculas de lquido
inmovilizadas sobre la superficie de un gas inerte. Tiene mayor aplicacin.
Un cromatografo de gases, bsicamente est compuesto por:

Una fuente de gas inerte de elevada pureza que puede ser nitrgeno, helio,
hidrogeno, el gas seleccionado est en funcin al detector que se utilizara
Un regulador de flujo
El inyector que debe estar termostatizado
La columna cromatogrfica, donde se produce la separacin, esta se encuentra
dentro de un horno cuya funcin es volatilizar a la muestra durante todo el
proceso cromatografico.
El detector, que se encuentra a la salida de la columna, este se encarga de
generar la seal analtica, la cual es proporcional a la concentracin del analito
2. Cuestionario
1. Que requisitos debe de cumplir un compuesto qumico para ser

separado por cromatografa de gases
2. Indique los diferentes componentes que tiene un cromatografo de gases
indicando la funcin que cumple cada una de ellos
3. Que es resolucin en cromatografa, de que depende la resolucin en
cromatografa de gases
4. Indique los diferentes tipos de detectores que pueden acoplarse a un
cromatografo de gases, sealando en cada caso el fundamento del
detector y los tipos de compuestos qumicos que detecta.
5. Indique el significado de: GC/MS, GC/FID, GC/NPD, GC/ECD
6. Cul es la finalidad de emplear rampas de temperatura en cromatografa
de gases
7. Como se realiza la identificacin en cromatografa de gases.
8. Que es un cromatograma.
3. Bibliografia

WORK PAPER # 12.
UNIDAD III Tema: 12
TTULO: Espectrometra de masas
1. Generalidades
La espectrometra de masas es una tcnica analtica instrumental de alta
sensibilidad capaz de identificar cuali y cuantitativamente, y de forma inequvoca,
cualquier tipo de mezclas de sustancias asimismo esta tcnica permite tambin
determinar la masa molecular de un compuesto as como de los diversos fragmentos
que resultan de la rotura controlada del mismo dando estos una informacin muy
valiosa sobre la estructura de la molcula.
Un espectrmetro de masas siempre contiene las siguientes partes:
Un sistema de introduccin del compuesto o mezclas de compuestos que se

van a analizar,
Una fuente para ionizar estos compuestos,
Uno o varios analizadores de masas para separar los iones producidos
Un detector o contador de iones y finalmente
Un sistema de procesamiento de datos que reproduce el espectro de masas.
En la EM la muestra es ionizada (y por tanto destruida) usando diversos

procedimientos de todos ellos el ms utilizado es la tcnica denominada de Impacto
Electrnico (EM-IE) consistente en el bombardeo de la muestra (previamente
vaporizada mediante el uso de alto vaco y una fuente de calor) con una corriente de
electrones a alta velocidad. Ello produce que la sustancia pierda a su vez algunos
electrones y se fragmente dando diferentes iones, radicales y molculas neutras.
Los iones (molculas o fragmentos cargados), y solo ellos, son entonces conducidos
mediante un acelerador de iones a un tubo analizador curvado sobre el que existe
un fuerte campo magntico y conducidos a un colector/analizador sobre el que se
recogen los impactos de dichos iones en funcin de la relacin carga/masa de los
mismos, tal y como se indica en el siguiente esquema:
Posteriormente dichos impactos son transformados en un espectro de masas

como el que se muestra a continuacin:
Espectro de impacto de electrones del n-heptanal. Los picos marcados por

C6,C5.C1, corresponden a las perdidas sucesivas de un grupo CH2
En l que la intensidad de los picos nos indica la cantidad relativa de iones que
poseen dicha relacin carga/masa.
Aplicaciones de la espectrometra de masas molecular
2. Cuestionario
1. Indique los tipos de sistemas de ionizacin de muestras que poseen los

espectrmetros de masas
2. Que es un espectrmetro de masas de alta resolucin

GUA DE INVESTIGACIN PRCTICA - GIPs # 1
UNIDAD III Tema 1
TTULO: Normas de seguridad en el laboratorio de qumica
FECHA DE ENTREGA: 5a Semana
PERODO DE EVALUACIN: 6 semana
1. Objetivos:
Conocer las normas que rigen el trabajo seguro dentro del laboratorio de
qumica a fin de prevenir daos en la integridad fsica del personal y de las
instalaciones.
Conocer la importancia del manual de seguridad en un laboratorio.
2. Fundamento:
La implantacin de un Programa de Seguridad en el Laboratorio de qumica es de
vital importancia, ya que antes de iniciar cualquier trabajo es aconsejable analizar
cules riesgos pudieran presentarse, desde la manipulacin inicial de las muestras
objeto de anlisis, hasta el desecho final de los productos. La proteccin de la
integridad de los laboratorios trae aparejado la proteccin de los equipos, las
muestras, el medio ambiente, la informacin, la documentacin y la salud de los
trabajadores que laboran en ellos. Para lograr este objetivo es necesario desarrollar
e implantar un Programa de Seguridad que cubra todos los aspectos relacionados
con toda la actividad que se realiza dentro del laboratorio.
Con el fin de llevar a cabo exitosamente la seguridad en el laboratorios se debe

establecer medidas generales de obligatorio cumplimiento, no slo para el personal
que labora en ellos, sino tambin para aqul que requiere de los servicios y/o
recursos del laboratorio. Asimismo hay que establecer medidas relacionadas con la
manipulacin y el uso de las sustancias qumicas, la manipulacin y preparacin de
las muestras que pudieran ser txicas, inflamables, explosivas o dainas,
implementar un plan para el tratamiento y la disposicin de los residuos, medidas
para evitar riesgos con el uso de los equipos, as como para la proteccin de la
informacin y toda la documentacin.
3. Procedimiento:
I. Aspectos generales de las normas de seguridad en el laboratorio:
Trabaje con orden, limpieza y sin prisa.
Mantenga los mesones de trabajo limpios y sin productos, libros, cajas o
accesorios innecesarios para el trabajo que se est realizando.
Utilice las campanas extractoras de gases siempre que sea posible.
No utilice nunca un equipo de trabajo sin conocer su funcionamiento.
Antes de iniciar un trabajo asegrate de que el montaje est en perfectas
condiciones.
Si el trabajo lo requiere, usa los equipos de proteccin individual
determinados (guantes, gafas).
Utilice siempre gradillas y soportes.
No trabaje separado de las mesas.
Al circular por el laboratorio debes ir con precaucin, sin interrumpir a los que
estn trabajando.
No efecte pipeteos con la boca: emplea siempre un pipeteador.
No utilice vidrio agrietado, el material de vidrio en mal estado aumenta el
riesgo de accidente.
Tome los tubos de ensayo con pinzas o con los dedos (nunca con las manos).
El vidrio caliente no se diferencia del fro.
Compruebe cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan
estado sometidos a calor, antes de cogerlos directamente con las manos.
No fuerce directamente con las manos cierres de botellas, frascos, llaves de
paso, etc. que se hayan obturado. Para intentar abrirlos emplea las
protecciones individuales o colectivas adecuadas: guantes, gafas, campanas.
Desconecte los equipos, agua y gas al terminar el trabajo.
Deje siempre el material limpio y ordenado. Recoge los reactivos, equipos,
etc. al terminar el trabajo.
Emplee y almacene sustancias inflamables en las cantidades imprescindibles.
Las campanas de gases son un medio de proteccin colectiva y no deben
utilizarse para almacenar productos.
Normas de conducta
Como norma higinica bsica, el personal debe lavarse las manos al entrar y
salir del laboratorio y siempre que haya habido contacto con algn producto
qumico.
Debe llevar en todo momento la ropa de trabajo abrochada y los cabellos
recogidos, evitando colgantes o mangas anchas que pudieran engancharse
en los montajes y material del laboratorio. No se debe trabajar separado de la
mesa o la poyata, en la que nunca han de depositarse objetos personales.
El personal de nueva incorporacin debe ser inmediatamente informado sobre
las normas de trabajo, plan de seguridad y emergencia del laboratorio, y
caractersticas especficas de peligrosidad de los productos, instalaciones y
operaciones de uso habitual en el laboratorio.
No debe estar autorizado el trabajo en solitario en el laboratorio,

especialmente cuando se efecte fuera de horas habituales, por la noche, o si
se trata de operaciones con riesgo. Cuando se realicen stas, las personas
que no intervengan en las mismas, pero puedan verse afectadas, deben estar
informadas de las mismas.
Est prohibido fumar, llevar maquillaje, beber e ingerir alimentos en el
laboratorio. Para beber es preferible la utilizacin de fuentes de agua a
emplear vasos y botellas., nunca se emplearn recipientes de laboratorio para
contener bebidas o alimentos ni se colocarn productos qumicos en
recipientes de productos alimenticios.
Evite llevar lentes de contacto, si se detecta una constante irritacin de los
ojos y sobre todo si no se emplean gafas de seguridad de manera obligatoria.
Es preferible el uso de gafas de seguridad, graduadas o que permitan llevar
las gafas graduadas debajo de ellas.
Hbitos de trabajo
Antes de comenzar
Comprobar la ubicacin del material de seguridad como extintores, duchas de
seguridad, lavaojos, botiqun, etc.
Seguir el protocolo de trabajo marcado por el responsable de las prcticas
Queda prohibido iniciar cualquier trabajo dentro del laboratorio, si el
representante de lnea y el responsable del laboratorio no estn presentes.
No hacer actividades no autorizadas o no supervisadas
Manipulacin de reactivos qumicos

Leer la etiqueta o consultar la ficha de datos de seguridad de los productos
antes de su utilizacin, cuando sea necesario
Datos que debe de contener la etiqueta
Nombre de la sustancia o del preparado.
Nombre, direccin y telfono del fabricante o importador.
Smbolos e indicaciones de peligro para destacar los riesgos
principales
Frases R que permiten complementar e identificar determinados
riesgos mediante su descripcin
Frases S que a travs de consejos de prudencia establecen medidas
preventivas para la manipulacin y utilizacin
No utilizar ningn reactivo que no tenga etiqueta
Se debe etiquetar los frascos y recipientes que contengan mezclas,
identificando su contenido
No oler las sustancias sin tomar precauciones
No tocar ni probar los productos
Utilizar vitrinas de gases para todas las operaciones en las que se manipulen
sustancias txicas o voltiles
No colocar objetos en el borde de los mesones
Calentar los tubos de ensayo de lado, utilizando pinzas. No mirar al interior
del tubo ni dirigir la boca del tubo hacia otro compaero ni hacia uno mismo
En la dilucin de cidos, aadir siempre el cido sobre el agua y no al revs,

podra provocar una proyeccin sumamente peligrosa.
No pipetear nunca con la boca cidos concentrados o solventes orgnicos,
utilice una propipeta o una pera de goma.
Asegurarse de que los materiales estn fros antes de cogerlos
Recoger materiales, reactivos o equipos para evitar acumulaciones
innecesarias
Los recipientes de productos qumicos deben cerrarse siempre despus de su
uso
Al acabar el trabajo asegurarse de la desconexin de aparatos, agua, gases,
etc.
Desechar el material de vidrio que presente defectos y guardar las piezas
defectuosas o piezas rotas en los bidones especficos
No forzar la separacin de vasos o recipientes que estn obturados unos
dentro de otros. Se deben dar al responsable del laboratorio
Uso de equipos de proteccin personal

Utilizar bata de manga larga. Mantener las batas abrochadas
Debe evitarse el uso de lentes de contacto
Llevar el pelo recogido
No se deben llevar pulseras, colgantes, o prendas sueltas
No llevar sandalias o calzado que deje el pie al descubierto
Las heridas se deben llevar cubiertas, aunque se utilicen guantes para
trabajar
Utilice los guantes que correspondan al solvente utilizado.
Si realiza pruebas o ensayos en equipos de alta sensibilidad, utilice guantes,
barbijo, bata y gorro
Uso de equipos de proteccin colectiva

Siempre trabaje bajo campana cuando utilice solventes que desprenden
vapores txicos
Infrmese sobre el manejo de las cabinas, extractores, que se encuentran
dentro del laboratorio.
Infrmese y conozca la ubicacin de los extintores de incendio y el manejo del
mismo.
Uso de los equipos de anlisis:
Si no conoce el uso de un equipo, no lo utilice

Los equipos de anlisis qumico solo podrn ser utilizados por personal
autorizado y capacitado
Cada equipo posee un instructivo para su operacin, el mismo podr ser
utilizado solo por personal autorizado.
Cuestionario
1. Indique la forma de actuacin en caso de:
a) Derrames
b) Salpicaduras en los ojos y sobre la piel:
c) Quemaduras trmicas:
d) Intoxicacin digestiva:
e) Incendios
2. Indique la clasificacin de los extintores en funcin al tipo de fuego
3. Indique los principales pictogramas y smbolos de riesgo en la manipulacin
de reactivos qumicos
BIBLIOGRAFIA


UNIDAD I Tema 2
TTULO: Uso adecuado de la balanza analtica
4. Objetivos:
Conocer el uso correcto de la balanza analtica
Describir el procedimiento de calibracin de la balanza analtica.
Desarrollar en forma practica el uso de la balanza analtica en las diferentes
tcnicas de analisis
Nota: Instalar la balanza en un lugar libre de vibraciones, flujo de aire y lejos de

la radiacin solar, siguiendo las instrucciones de instalacin del manual del
proveedor.
5. Procedimiento:
El estudiante deber desarrollar un instructivo de operacin de la balanza
analtica, indicando de forma detallada cada uno de los pasos a seguir desde
la forma de encender, el procedimiento de pesada, el mantenimiento
Limpieza y ajuste:
1. Limpiar la balanza despus de terminar los pesajes, con un pincel apropiado y
un pao suave.
2. Ajustar la balanza cada da que se vaya a utilizar y luego de un cambio de
lugar.
3. Registre la Hora y fecha de Limpieza, calibre y ajuste de la balanza, para
mantener la trazabilidad del proceso.
Precauciones y recomendaciones:
1. No coloque agua ni metales corrosivos directamente sobre el platillo de la
balanza.
2. No exponga la balanza a objetos magnetizados.
3. Evite conectar equipos que produzcan mucho ruido muy cerca de a la balanza
4. La balanza debe estar nivelada y colocada en un sitio donde se prevengan

las vibraciones, grandes fluctuaciones de temperatura, rayos directos de sol y
corrientes de aire.
Controles de mando
A. Teclas de control
B. Pantalla alfanumrica
Leyenda:
1. Burbuja de nivel
2. Tecla de encendido/apagado ON/OFF
3. Tecla MODE
4. Puerta lateral de la balanza
5. Brazo controlador de abertura de la puerta
6. Plato de pesaje
7. Tecla RE-ZERO
Cuestionario
1. Cules son los pasos para realizar una pesada analtica
2. Como determina la sensibilidad de una balanza
3. Cules son las precauciones a ser tomadas en cuenta para realizar una
pesada analtica
4. Como influye la temperatura durante la operacin de pesada
5. Cules son los pasos para iniciar el encendido de la balanza
6. Como se realiza la operacin de tarado y calibrado de la balanza

1. UNIDAD I Tema 2 OB
JE
TTULO: Calibracin de material volumtrico
TIV
FECHA DE ENTREGA: 5a Semana O:
Calibrar el material volumtrico de uso comn en el anlisis qumico

cuantitativo
2. FUNDAMENTO TERICO:
El material volumtrico de vidrio se calibra midiendo la masa de un liquido (por lo
general agua destilada), de densidad y temperatura conocida, que esta contenido
(o transferido) en el material volumtrico que se quiere calibrar.
Todo el material volumtrico debe estar libre de fugas antes de calibrarse, las
buretas y las pipetas no necesitan secarse, los matraces aforados deben escurrirse
bien y secarse a temperatura ambiente. El agua utilizada para la calibracin debe
estar en equilibrio trmico con los alrededores. Esta condicin se alcanza
recogiendo el agua para la calibracin con anterioridad, anotando su temperatura a
intervalos frecuentes y esperando hasta que ya no existan cambios en ella
Aunque la calibracin parezca un proceso directo se debe evaluar numerosas

variables importantes de estas la principal es la temperatura que influye en la
calibracin de dos formas: la primera y mas importante es que el volumen ocupado
por una determinada masa de liquido varia con la temperatura; la segunda estriba en
que el volumen del material es variable a la tendencia del vidrio a contraerse o
dilatarse con los cambios de temperatura.
Todo el material volumtrico esta calibrado a un temperatura especificada de 20C y

para utilizarse de una forma determinada debido a la modificacin del volumen de
los lquidos y del vidrio con los cambios de temperatura, se deben volver a calibrar
los materiales volumtricos cuando vaya a utilizarse a temperaturas diferentes de
aquella para la que fueron calibrados
Finalmente debe considerarse el liquido elegido para la calibracin, para la mayora

de los trabajos suele escogerse el agua El material volumtrico para laboratorio se
clasifica en clase A y clase B de acuerdo al error mximo permitido en general el
error mximo permitido para la clase B es el doble del permitido para la clase A
3. MATERIALES Y REACTIVOS
Agua destilada 1 L
Matraz erlenmeyer de 250 mL 1
Pesafiltro 1
Pipeta aforada de 10 ml 1
Bureta de 25 mL 1
Matraz aforado de 50 ml 1
Balanza analtica 1
4. PROCEDIMIENTOS:
Calibracin de una pipeta aforada:
1. Enjuagar la pipeta aforada con abundante agua destilada
2. Lavar un pesafiltro grande o un erlenmeyer con tapn de goma, secarlo y
pesar con exactitud de miligramos y registrar el P1
3. Cargar la pipeta con agua destilada atemperada a 20C, y dejar caer sobre el
pesafiltro, registrar el P2
4. Calcular la masa de agua transferida por diferencia de pesadas P2-P1
5. Calcular el volumen transferido (volumen real), con ayuda de la tabla 1
6. Repetir 20 veces el procedimiento y calcular el volumen medio
7. Calcular la tolerancia e indicar si la pipeta es de precisin (Clase A) o
econmico (Clase B )
8. Calcular su desviacin estndar
Calibracin de una bureta

1. Enjuagar la bureta con abundante agua destilada
2. Lavar un erlenmeyer con tapn, secarlo y pesar con exactitud de miligramos y
registrar el P1
7. Calcular la tolerancia e indicar si la pipeta es de precisin (Clase A) o
econmico (Clase B )
Calibracin de un matraz volumtrico

1. Enjuagar la bureta con abundante agua destilada
2. Lavar un pesafiltro grande o un erlenmeyer, secarlo y pesar con exactitud de
miligramos y registrar el P1
7. Calcular la tolerancia e indicar si la pipeta es de precisin (Clase A) o econmico
(Clase B )
Tabla de volmenes equivalentes
A 1g. a diferentes temperaturas
Tolerancia matraces Tolerancia matraces
volumtricos clase A volumtricos clase B
Volumen Tolerancia Tolerancia mL

mL mL
5 +/-0.02 +/-0.05
10 +/-0.02 +/-0.05
Tolerancia buretas Tolerancia
25clase A +/-0.03 +/-0.08clase B
buretas
50 +/-0.05 +/-0.12
Volumen Tolerancia Tolerancia mL
100 mL +/-0.08
mL +/-0.2
5 +/-0.01 +/-0.02
250 +/-0.12 +/-0.30
10 +/-0.02 +/-0.05
500 +/-0.20 +/-0.50
5. CLCULOS: 25 +/-0.03 +/-0.05
1000 +/-0.30 +/-0.80
50 +/-0.05 +/-0.1
2000 +/-0.50 +/-1.2
Masa del agua = P2-P1
100 +/-0.20 +/-0.1
Volumen real= (masa del agua X volumen
ocupado/ 1g de agua)
Tolerancia = Volumen terico volumen real
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN
8. EVALUACION:
Cuestionario
1. Investigue otros mtodos empleados para la calibracin de material

volumtrico.
2. Que es una micropipeta, como se calibra.
3. Investigue todo lo referente al Instituto Boliviano de Metrologa IBMETRO
4. Investigue todo lo referente a la ISO 17025
9. BIBLIOGRAFIA

1. OB
UNIDAD II Tema 5 JE
TTULO: Espectro de absorcin visible de dos colorantes TIV
OS
:
Conocer los principales componentes del espectrofotmetro
Conocer las bases fundamentales de la espectrofotometra ultravioleta visible
Encontrar el espectro de absorcin visible de dos colorante
2. FUNDAMENTO:
Todas las molculas son capaces de absorber radiacin electromagntica de una
frecuencia o de un intervalo de frecuencias caractersticas de cada molcula.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; el color de

las sustancias se debe a que estas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes
de onda no absorbida, aun el vidrio que parece ser completamente transparente
absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe
fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta,
visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica
para cada sustancia qumica.
La utilidad de la absorcin de la radiacin electromagntica en qumica analtica se

basa en la capacidad y en la relacin que existe entre el nmero de molculas
capaces de absorber y a cantidad de energa absorbida por ellas dando lugar a lo
que se conoce como curva de absorcin. En la curva de absorcin se establece una
relacin entre A o %T y la longitud de onda, tal tipo de curva es til tanto para
seleccionar la longitud de onda ms adecuada para una medida cuantitativa de un
absorbente, tomando en cuenta este punto de mxima absorcin se puede construir
una curva de concentracin, manteniendo fija la longitud de onda de mxima
absorbancia. Muchos compuestos tienen espectros caractersticos de absorcin en
la regin visible y ultravioleta y esto hace posible la identificacin de dichos
materiales en una mezcla.
Cuando las molculas reciben energa, se pueden producir transiciones electrnicas.

El estado energtico de una molcula est definido principalmente por su estado
energtico electrnico. Si la energa de la radiacin electromagntica es igual a la
diferencia entre dos determinados niveles energticos de la molcula sobre la que
incide, entonces esta absorbe radiacin; es decir incorpora la energa radiante a su
propia energa si es diferente se emite Este proceso se representa de la siguiente
forma:
A + h A* A + energa luminosa
En la cual A es el absorbente en su estado de energa bajo, A* es el absorbente en

su estado de excitacin energtica, y h (h es la constante de Planck; n es la
frecuencia) es la energa del foton incidente el cual posee una longitud de onda (n
= c, donde c es la velocidad de la luz). A* es ordinariamente inestable y rpidamente
revierte a su estado energtico ms bajo perdiendo as la energa correspondiente.
Solo se absorben determinadas frecuencias luminosas, y la seleccin de las mismas
depende de la estructura qumica de la molcula.
3. MATERIALES Y REACTIVOS:
Matraz aforado de 500 mL. 2
Vaso de precipitado de 100 mL. 2
Varilla de vidrio 2
Microespatula metlica 2
Tubos de lectura para espectro 10
Pizeta con H2O destilada 1L.
Pipetas de 1 mL. 2
Pipeta de 2 mL 2
Colorante rojo 10 g.
Colorante amarillo 10 g.
4. PROCEDIMIENTOS:
1. Preparar 500 mL. de solucin con 1000 ppm de colorante rojo. Y amarillo.
2. A partir de la solucin anterior preparar 50 ml de disolucin de 10 ppm de
cada colorante
3. Mezclar 10 mL de la solucin a 10 ppm con 10 ml de agua destilada
4. Proceder a calibrar el espectrofotmetro en la longitud de onda de partida, la
calibracin se realizara segn indique el manual del equipo
5. Realice la lectura de las transmitancias de cada solucin en el rango de
longitudes de onda sealado en la tabla adjunta.
5. CLCULOS:
6. RESULTADOS
6.1. Colorante rojo
LONGITUD % TRANSMITANCIA ABSORVANCIA LONGITUD DE % ABSORVANCIA

DE ONDA ONDA TRANSMITANCIA
nm nm
350 350
360 360
370 370
380 380
390 390
400 400
500 500
510 510
520 520
530 530
540 540
550 550
560 560
570 570
580 580
590 590
600 600
610 610
620 620
630 630
640 640
650 650
660 660
670 670
680 680
690 690
700 700
710 710
720 720
730 730
740 740
750 750
760 760
6.2. Colorante amarillo
LONGITUD % TRANSMITANCIA ABSORVANCIA LONGITUD DE % ABSORVANCIA

DE ONDA ONDA TRANSMITANCIA
nm nm
350 350
360 360
370 370
380 380
390 390
400 400
500 500
510 510
520 520
530 530
540 540
550 550
560 560
570 570
580 580
590 590
600 600
610 610
620 620
630 630
640 640
650 650
660 660
670 670
680 680
690 690
700 700
710 710
720 720
730 730
740 740
750 750
760 760
6.3. Grafico
7. CONCLUSIONES
8. EVALUACION
Cuestionario
1. Qu es el espectro de absorcin, como lo determina en el laboratorio, y para

que lo determina?
2. Observe los espectros de los colorantes a diferentes concentraciones, son
idnticos?, en que se diferencian,
3. Qu es el blanco, cul es su importancia en las medidas
espectrofotomtricas?
4. Qu tipo de celdas deben utilizarse en la regin espectral ultravioleta y
visible, en cada caso indique porque?
9. BIBLIOGRAFIA
1. GUA DE INVESTIGACIN PRCTICA - GIPs # 5 OB

UNIDAD II TEMA 5 JE
TITULO: Determinacion de la longitud de Onda optima de dos TIV
especies qumicas, Manganeso y cromo OS
PERODO DE EVALUACIN: 11a semana
Determinar la longitud de onda optima del manganeso y cromo
Describir la importancia de la determinacin de la longitud de onda optima en
el anlisis cualitativo y cuantitativo de especies qumicas
2. FUNDAMENTO:
El espectro de absorcin de una especie qumica, es una constante fsica que
puede emplearse para la caracterizacin de compuestos qumicos que absorben
radiacin ultravioleta visible. Una vez encontrado el espectro de absorcin de la
especie qumica analizada, se procede a la determinacin de la longitud de onda
ptima, longitud en la cual la absorbancia presenta su mayor valor, o menor en el

caso de transmitancias.
La importancia de conocer la longitud onda ptima de las especies qumicas, es
debido a que en ese valor de longitud de onda se realizara el anlisis
cuantitativo, es decir la determinacin de concentraciones
Vaso de precipitado de 100 mL. 2
Varilla de vidrio 2
Pizeta con H2O destilada 1L.
Pipetas de 1 mL. 2
Pipeta de 2 mL 2
Permanganato de potasio 5 g.
Dicromato de potasio 5 g.
4. PROCEDIMIENTOS:
1. Preparar 500 mL. de solucin con 1000 ppm de Mn+7 a partir del
permanganato de potasio
2. A partir de la solucin anterior preparar 50 ml de disolucin de 10 ppm y 20
ppm de Mn+7
3. Preparar 500 mL. de solucin con 1000 ppm de Cr+6 a partir del dicromato
de potasio
4. A partir de la solucin anterior preparar 50 mL. de disolucin con 10 ppm y
20 ppm
5. Proceder a calibrar el espectrofotmetro en la longitud de onda de partida, la
calibracin se realizara segn indique el manual del equipo
6. Realice la lectura de las transmitancias de cada solucin en el rango de
longitudes de onda sealado en la tabla adjunta.
5. CLCULOS:
6. RESULTADO
6.1. Permanganato de potasio
6.2. Dicromato de potasio
10 PPm 20PPm
LONGITUD % ABSORVANCIA LONGITUD DE % ABSORVANCIA
DE ONDA TRANSMITANCIA ONDA TRANSMITANCIA
nm Nm
350 350
360 360
370 370
380 380
390 390
400 400
500 500
510 510
520 520
530 530
540 540
550 550
560 560
570 570
580 580
590 590
600 600
610 610
620 620
630 630
640 640
650 650
660 660
670 670
680 680
690 690
700 700
710 710
720 720
730 730
740 740
750 750
760 760
6.1.
Grficos
7. CONCLUSIONES
8. EVALUACION
Cuestionario:
1. Qu es la longitud de onda optima, como se lo determina, y para que se lo
determina?
2. Investigue los factores que pueden producir un desplazamiento de la longitud
de onda optima de las especies qumicas que absorben radiacin ultravioleta
visible
3. Cul es la longitud de onda ptima del manganeso y cromo determinada en
el laboratorio?
9. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD II Tema 5
TTULO: Curva de calibracin del Manganeso
1. OBJETIVOS
Conocer los aspectos fundamentales de la espectrofotometra en el anlisis
cuantitativo
Determinar la concentracin de muestras de permanganato, empleando la
curva de calibracin
2. FUNDAMENTO
En general una curva de calibracin es el conjunto de concentraciones que
describen el intervalo de trabajo, en el cual se cuantificara el compuesto a analizar.
Desde el punto de vista de la espectrofotometra la curva de calibracin es aquella
en la que se establece una relacin entre absorbancia o % de transmitancia con las
concentraciones, su empleo es necesario en los trabajos cuantitativos en los que
hay que calcular la concentracin del absorbente. Siempre que sea posible es
aconsejable la construccin de una curva de calibracin que cubra la zona de
concentraciones que se van a encontrar en la prctica. La construccin de tal curva
debe ser la fase primera de montar y estandarizar de cualquier procedimiento
fotomtrico. Las concentraciones pueden representarse en cualquier tipo de
unidades de medida (mg/dl, molaridad, etc.) sin embargo, la forma ms conveniente
es emplear para las curvas las mismas unidades que se usaran para expresar el
resultado final. Para la construccin de las curvas de calibracin se necesitan
mnimo tres puntos. El primero es el cero, el segundo una concentracin intermedia
que se encontrara en la prctica y el ultimo una concentracin alta. Cada punto
experimental debe prepararse de manera independiente (a partir de una solucin
estndar se preparan diferentes concentraciones y cada una se procesa de acuerdo
a la tcnica elegida). Es aconsejable hacer varios duplicados para cada punto y
tener mayores precauciones en la tcnica para trazar la curva que habitualmente se
emplean para las determinaciones de rutina. Una vez que se han colocado los
puntos experimentales conocidos sobre grafica se traza con una regla trasparente
una lnea, que sea la que mejor los represente. Si el compuesto sigue la ley de
Lambert-Beer se obtiene una lnea recta. Las concentraciones de los problemas se
pueden leer entonces directamente a partir de la curva, la cual se comprobara cada
vez mediante la determinacin de uno o ms patrones.
Segn la ley de Lambert-Beer, la absorbancia est en funcin de la concentracin; a

mayor absorcin mayor concentracin de una solucin. Por lo tanto, se pueden
representar los valores de absorbancia de distintos calibradores en funcin de su
concentracin, que es conocida (debido a que cada calibrador corresponde a una
dilucin especfica de la solucin estndar, conocindose la concentracin del
estndar se calcula la concentracin de los calibradores). La grafica resultante es la
curva de calibracin. Una vez medida la absorbancia de la muestra analizada, la
curva permite hallar su concentracin por simple interpolacin.
Matraz aforado de 25 ml 6
Vaso de precipitado de 100 mL . 2
Varilla de vidrio 1
Pizeta con H2O 1L.
Pipeta de 1 mL. 1
Pipeta de 2 mL. 1
Balanza analtica 1
Espectrofotmetro UV/VIS 14
4. PROCEDIMIENTOS:
1. Preparar 500 mL. de solucin de permanganato de potasio con 1000 ppm de
concentracin en Mn+7
2. A partir de la anterior solucin prepare diluciones con concentracin de 5, 15,
25 y 40 ppm de Mn+7
3. Lea las transmitancias de cada dilucin y realice la conversin a las
absorbancias respectivas
4. Grafique la curva de calibracin, tomando en cuenta que la concentracin
debe ir en el eje x y las absorbancias en el eje y
5. Utilice mnimos cuadrados, o en el mejor de los casos una hoja Excel, para
encontrar la ecuacin de la lnea recta
6. Calcule la concentracin de la muestra por interpolacin y empleando la curva
de calibracin.
5. CLCULOS
6. RESULTADOS:
Concentracin Absorbancias
Ppm.
5
15
25
40
Muestra 1
Muestra 2
6.1. Grafico
7. CONCLUSIN
8. EVALUACION
Cuestionario
1. Cul es la importancia de la curva de calibracin en qumica analtica, en qu

tipo de anlisis se emplea.
2. Indique y desarrolle los tipos de calibracin que pueden emplearse en la
cuantificacin de especies qumicas,
3. Indique la importancia de ajustar la concentracin de una solucin hasta una
absorbancia entre 0.2 a 0.8 o transmitancia de 20 a 60%
9. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD II Tema 5
TTULO: Anlisis cuantitativo de una mezcla de permanganato y
dicromato potsicos por espectrofotometra UV-Visible.
1. OBJETIVO
Adquirir destreza en la realizacin de medidas experimentales de absorbancia
y su aplicacin a la determinacin de la concentracin de una mezcla de
permanganato y dicromato potsicos.
2. FUNDAMENTO
Cuando en una disolucin hay varias sustancias que absorben radiacin, es posible
en muchos casos llevar a cabo su determinacin sin necesidad de separar
previamente los distintos componentes. Cuando se trata de dos componentes M y N,
cuyos espectros de absorcin estn superpuestos a todas las longitudes de onda la
forma de proceder es mediar las absorvancias A1 y A2 a las longitudes de onda 1
y 2 respectivamente, y planteando las ecuaciones siguientes.
A1 = M1 b CM + N1 b CN (a 1)
A2 = M2 b CM + N2 b CN (a 2)
A M+N
N
M
1 2
.
Esto es posible porque la ley de Beer establece que la absorbancia es una
propiedad aditiva, de forma que la absorbancia total de una disolucin a una
FAC U LTAD D E C I E N C I A S D E L A S A L U D
longitud de onda determinada es igual a la suma de las absorbancias de

los componentes individuales presentes.
En las ecuaciones anteriores, b representa el camino ptico y M1, M2, N1 y N2
las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda 1 y 2, que deben
ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrn, o mejor, a partir de
las pendientes de sus representaciones de la ley de Beer.
KMnO4
K2Cr2O7
H2SO4
Matraces aforados de 50 mL
Pipetas de varios volmenes
Espectrofotmetro provisto de cubetas de 1 cm de paso ptico.
4. PROCEDIMIENTOS:
Preparar una solucin de KMnO4 con 100 ppm de en Mn+7
Preparar una solucin de K2Cr2O7 con 100 ppm de Cr+6
A partir de las anteriores soluciones, efectu diluciones en 10, 15, 25 y 30 ppm de
cada una de las soluciones preparadas en el punto 1 y 2
A la longitud de onda optima del Mn+7 (525 y 350 nm) y el Cr+6 (350 nm), mida las
absorbancias de las diluciones
Construya una curva de calibracin para el Mn+7 y Cr+6
Leer las absorbancias de la mezcla a 525 nm y 350 nm
4.1. Calculo de las concentraciones de Mn y Cr en la mezcla,

Con la absorbancia de la mezcla a 525, calcule la concentracin de Mn+7 en la mezcla
por interpolacin.
Con la concentracin del Mn+7, interpolar en la curva del Mn+7 a 350 nm, y encontrar
el valor de absorbancia que le corresponde al Mn+7 a esa longitud de onda.
Considerando que a 350 nm, en la mezcla ambos componentes absorben radiacin,
reste la absorbancia de la mezcla a 350 m, con la absorbancia del Mn+7 a 350 nm, de
esa forma encontrara la absorbancia que le corresponde al Cr+6 a 350 nm.
Con la absorbancia del Cr+6 a 350 nm, encuentre su concentracin por interpolacin
en la curva del Cr+6 a 350 nm
5. CLCULOS:
49
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN
8. BIBLIOGRAFIA
Principios de Anlisis Instrumental, D.A. Skoog, F.J. Holler y T.A. Nieman, 5 Edicin,
McGraw-Hill, Madrid, 2001.
Fundamentos de Qumica Analtica, D.A. Skoog, D.M. West, F.J. Holler y S.R.Crouch,
8 Edicin, Thomson-Paraninfo, Madrid, 2005.
50

UNIDAD II Tema 5
TTULO: Determinacion de la constante de disociacin de un
indicador acido base por espectrofotometra
1. OBJETIVO
Adquirir destreza en la realizacin de medidas experimentales de absorbancia y su
aplicacin a la determinacin de la concentracin de una mezcla de permanganato y
dicromato potsicos.
2. FUNDAMENTO:
La constante de disociacin es un parmetro fisicoqumico, caracterstico de las
especies qumicas que en disolucin acuosa son capaces de disociarse, su
importancia en las ramas de las ciencias farmacuticas, y bioqumicas, radica en que
el mismo determina el Ph de una especie qumica (Frmaco), pudiendo predecir de
esa manera el lugar de absorcin del frmaco. Los frmacos de naturaleza Ph cido
dbil se absorben mejor en un medio acido, donde no sufren el fenmeno de
ionizacin, por ende la molcula al no presentar carga atraviesa de forma ms
eficiente las membranas lipdicas.
Para la determinacin de la constante de disociacin de una especie qumica por
espectrofotometra, es necesario, tener la forma acida y bsica de la especie
analizada, esto se consigue, preparando disoluciones de ph cido y bsico donde
tericamente, se encontrara disociado la especie qumica en su forma acida y bsica,
paralelamente, se prepara una tercera solucin con un Ph igual al PKa, o lo ms
prximo a este valor, en esta solucin se encontraran disociados ambas formas de la
especie qumica (la forma acida y bsica), constituyndose en una mezcla de la
solucin acida y bsica, posteriormente se debe encontrar el espectro de absorcin
de la especie acida y bsica, con el fin de encontrar la longitud de onda donde ambas
especies absorben la mayor cantidad de radiacin. En esta longitud de onda optima
se determina las concentraciones de la forma acida y bsica de la especie qumica,
las cuales se utilizaran para determinar la constante de disociacin empleando la
ecuacin de Henderson Haselbach
PH= Pka+log IA- I/IAHI
51
Matraz aforado de 100mL.

Matraz aforado de 25 mL.
Pipeta de 10 mL
Pipeta de 1 mL
Vaso de precipitado de 100 mL
Varilla de vidrio
Micro esptula metlica
Etanol 96%
Rojo de metilo
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Preparacin de las disoluciones tampn PH=9, PH=1 y PH=5:
La preparacin se realizara segn indicaciones del docente.
4.2. Preparacin de disoluciones del indicador en medio cido y bsico.
Prepara 100 mL de disolucin del indicador rojo de metilo con una concentracin
2.5*10-4 , aforar con etanol al 96%
A partir de la solucin anterior, preparar 25 mL. de disolucin del indicador rojo de
metilo con concentracin de 5*10 -4 aforar la disolucin con tampn PH=9, PH=1 y
PH=5
Encontrar el espectro de absorcin de las tres soluciones preparadas en el punto
anterior
Encontrar las longitudes de onda optima de la especie acida, bsica y mezcla del
indicador,
Tabular las absorbancias de ambas especies qumica
52
Solucin bsica Solucin acida Solucin mezcla

LONG.ONDA %T Abs LONG.ONDA %T Abs LONG.ONDA %T Abs
nm nm nm
5. C
380 380 380
400 400 400
420 420 420 L
440 440 440 C
460 460 460 U
480 480 480 L
500 500 500 O
520 520 520
S
540 540 540
560 560 560 E
580 580 580 n
600 600 600 c
620 620 620 o
640 640 640 n
660 660 660
t
680 680 680
700 700 700 r
720 720 720 a
740 740 740 r
el espectro de absorcin de la forma acida y bsica del indicador
Calcular las absortividades molares de la forma acida y bsica del
indicador}
Mediante el sistema de ecuaciones calcular las concentraciones molares de
la forma acida y bsica en la solucin mezcla
Utilizando la ecuacin de Henderson Haselbach, calcule el Pka del indicador
Utilizando el valor del Pka, calcule la constante de disociacin del indicador
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN
8. EVALUACION
Cuestionario
1. Cul es la importancia de conocer la Ka de un medicamento

2. Por que se dice que la solucin del indicador con pH=5 contiene una mezcla
de la forma acida y bsica del indicador utilizado en la prctica.
9. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD II Tema 4
TTULO: Refractometria anlisis cualitativo
1. OBJETIVO
Conocer las aplicaciones del refractmetro en el anlisis cualitativo y
cuantitativo
Determinar la composicin porcentual de una mezcla de etanol y agua por
refractometria.
2. FUNDAMENTO
El ndice de refraccin de una sustancia se determina ordinariamente midiendo el

cambio en direccin (refraccin) de una radiacin a cuando pasa a travs de medios
de diferente densidad.
n2 v1 sen 1
------ = ------ = ---------
n1 v2 sen 2
Es mucho ms cmodo medir el ndice de refraccin respecto a algn medio distinto
del vaco; con este objeto se emplea a menudo el aire como referencia, la mayora
de las recopilaciones de valores de n para lquidos y slidos, que aparecen en la
literatura son con referencia al aire, a temperaturas y presiones de laboratorio. Por
fortuna el cambio en el lquido de refraccin del aire con la temperatura y la presin
es bastante pequeo, por lo que una correccin de las condiciones ambientales del
laboratorio a condiciones estndar solo se necesita para el trabajo de mxima
precisin.
La temperatura, la longitud de onda y la presin son las variables ms comunes que

afectan a la medicin de un ndice de refraccin.
a).-Temperatura.- La temperatura influye en el ndice de refraccin de un medio

principal por el cambio concomitante en la densidad.
b).- Longitud de onda de la radiacin.- El ndice de refraccin de un medio de

transporte disminuye gradualmente al aumentar la longitud de onda.
c).- Presin.- El ndice de refraccin de una sustancia aumenta con la presin,

debido al concomitante aumento de la densidad.
3. Materiales y reactivos
Termmetro de -10 a 100C
Pipeta de Pasteur
Clinet
Picnmetro de 25 mL.
Balanza analtica
Refractmetro
4. PROCEDIMIENTO
Anlisis cualitativo
1. Atemperar la muestra a una temperatura de 20C
2. Limpiar el refractmetro con una toalla absorbente suave
3. Cargar la muestra y ajustar las lentes
4. Leer el ndice de refraccin de la muestra
5. Comparar el valor con el reportado en la bibliografa.
Anlisis cuantitativo
1. Medir la densidad del lquido A y B a 20 C por picnometria
2. Preparar una mezcla de los lquidos A y B, medir su densidad a 20C
3. Leer el ndice de refraccin del lquido A y B y registrar
4. Medir el ndice de refraccin de la mezcla

5. Calcular la composicin porcentual del componente A y B en la mezcla
5. CLCULOS:
rD= n2-1 * 1
n2+2 d
nD1 rD1 + nD2 rD2 = m rDm
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN:
8. CUESTIONARIO
1. Indique los pasos para la utilizacin del refractmetro

2. Aplicaciones del ndice de refraccin en el control de calidad de materia
prima de uso farmacutico
3. Aplicacin de la refractometria en el anlisis de alimentos
9. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD II Tema 4
TTULO: Polarimetra Anlisis cualitativo y cuantitativo
1. OBJETIVO
Conocer las aplicaciones del polarmetro en el anlisis cualitativo y
cuantitativo
Determinar la composicin porcentual de sacarosa en un azcar comercial
2. FUNDAMENTO
El trmino de polarimetra se define como la medicin del cambio de la direccin
de vibracin de la luz polarizada cuando interacta con materiales pticamente
activos. Un rayo de luz ordinaria consiste en ondas que oscilan al azar. Cada una
de las ondas vibracionales se pueden distribuir en dos componentes
perpendiculares entre si y el vector suma de dicho componente es la direccin
vibracional efectiva. La actividad ptica es una medida de la capacidad de ciertas
substancias da hacer girar la luz polarizada en un plano.
Termmetro de -10 a 100C
Matraz aforado de 50 mL.
Pipeta de Pasteur
Clinet
Balanza analtica
Polarmetro
4. PROCEDIMIENTO
1. Preparar una solucin de alfa lactosa al 5% en peso
2. Filtrar la solucin
3. Cargar el tubo polarimetrico con la solucin de lactosa previo ajuste del
campo con agua
4. Leer el ngulo de rotacin ptica
5. Calcular la pureza de la lactosa
5. CLCULOS:
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN:
8. CUESTIONARIO
9. BIBLIOGRAFIA

GUA DE INVESTIGACIN PRCTICA - GIPs #11
1. OB
UNIDAD III Tema 8 JE
TTULO: Potenciometria y titulaciones potenciometrica TIV
OS
Adquirir destreza en el manejo del pH-metro
Construir la curva de titulacin potenciometrica acido fuerte - base fuerte, y
acido dbil base fuerte
Conocer las principales aplicaciones del pH metro en el anlisis qumico
cuantitativo
2. FUNDAMENTO
El mtodo de titulacin potenciometrica consiste en medir el potencial (voltaje) en
una solucin por medio de un electrodo como funcin de volumen de agente
titulante.
El potencial que se mide se puede transformar a unidades de concentracin de una
especie en solucin. La ventaja de medir potencial es que ste se mide por medio
de un electrodo que es selectivo a la especie o analito que se quiere determinar. Por
lo tanto, el voltaje que se mide en la solucin es representativo de la concentracin
de la especie en solucin. Este alto grado de selectividad (seal analtica que puede
mostrar un pequeo grupo de analitos en una solucin que contiene mltiples
especies qumicas) se debe a la propiedad fsica del electrodo con que se mide el
voltaje.
En este experimento el voltaje es selectivo a la concentracin del in hidronio en
solucin. Existen electrodos selectivos a otros iones tales como cloruro, el in
ferroso, etc. Otra ventaja del uso de Potenciometria es que la determinacin del
punto final es mucho ms preciso que el determinado con indicadores visuales.
3. MATERIAL Y REACTIVO
HCl 0.1 N 100 mL Etanol 96% 10 mL 1

NaOH 0.1 N (Solucin estandarizada) Ph metro 1
100 mL Agitador magntico 1
CH3COOH 0.1 N 50 mL Pinza para bureta 1
Aspirina (comprimidos de 500 mg) 1 Soporte universal 1
Mortero con piln 1 Pipeta graduada de 10 mL 2

Vaso de precipitado de 25 mL1 Matraz volumtrico de 100 mL
Matraz erlenmeyer de 250 mL boca
ancha 1
Bureta de 50 Ml 1
Esptula metlica 1
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Calibracin del pH metro
1. Encender el Ph metro y esperar 15 min para que alcance su estabilidad trmica

2. Lavar el electrodo con agua destilada y secar cuidadosamente con una toalla
suave y limpia
3. Proceder a calibrar, utilizando las soluciones reguladoras de Ph = 4 Ph=7 y
Ph=10. se debe seguir el orden de las soluciones, segn el manual de
instrucciones propio del equipo
4.2. Titulacin potenciometrica, acido fuerte - base fuerte
1. En un erlenmeyer medir 50 mL de HCi 0.1 N y mezclar con 50 mL de agua

destilada, agitar
2. Cargar la bureta con la solucin estandarizada de NaOH 0.1 N
3. Montar el equipo de titulacion potenciometrica
4. Medir el pH inicial de la solucin acida y registrar
5. Agregar 0.5 mL de la solucin estandarizada de NaOH agitar y medir el pH
6. Agregar 0.5 mL de NaOH 0.1 N hasta obtener una curva de titulacion
potenciometrica
7. Construir la curva de titulacion potenciometrica y determinar el volumen en el
punto de equivalencia
8. (El volumen en el punto de equivalencia para una reaccin entre un acido fuerte
y una base fuerte, se encuentra en el valor de pH = 7)
4.3. Titulacin potenciometrica Acido dbil base fuerte
1. En un erlenmeyer medir 50 mL de CH3COOH 0.1 N y mezclar con 50 mL de

agua destilada, agitar
6. Agregar 0.5 mL de NaOH 0.1 N hasta obtener una curva de titulacion
potenciometrica
7. Construir la curva de titulacion potenciometrica y determinar el volumen en el
punto de equivalencia
8. (El volumen en el punto de equivalencia para una reaccin entre un acido fuerte
y una base fuerte, se encuentra entre valores de pH= 8 8.1)
4.4. Titulacin potenciometrica del Acido acetil saliclico
1. En un mortero triturar 1 comprimido de aspirina y pesar el equivalente a 300 mg de AAS

en un vaso de precipitado de 25 mL
2. disolver con 10 mL de etanol al 96% y aforar a 50 mL con agua destilada en un matraz
volumtrico
3. Transferir la solucin de AAS en un erlenmeyer y mezclar con 50 mL de agua destilada,
agitar
8. Agregar 0.5 mL de NaOH 0.1 N hasta obtener una curva de titulacion potenciometrica
9. Construir la curva de titulacion potenciometrica y determinar el volumen en el punto de
equivalencia
10. (El volumen en el punto de equivalencia para una reaccin entre un acido fuerte y una
base fuerte, se encuentra en el valor de pH = 7)
5. CLCULOS
Para efectuar la determinacin del volumen en el punto de equivalencia del acido actico y el
acido acetil saliclico, utilice el mtodo de la primera y segunda derivada (seguir indicaciones
del docente)
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN
8. EVALUACION
Cuestionario
1. Realice un INT, para la calibracin del pH metro

2. Que es un buffer, que sales se emplean para preparar el buffer de pH= 4, 7,10
3. Que es punto de equivalencia en una reaccin acido base,
4. Cul es la finalidad de emplear la primera y segunda derivada en una titulacin
potenciomtrica
9. BIBLIOGRAFIA
1. UNIDAD III Tema 8

TTULO: Potenciometrica directa
OBJETIVOS
Determinar el porcentaje de acides de diferentes bebidas por potenciometria directa
2. FUNDAMENTO
Cuando una muestra presenta turbidez o posee una coloracin intensa, su porcentaje de
acidez, no puede determinarse por mtodos volumtricos sencillos que utilizan indicadores
visuales que cambian de color segn el medio acido o bsico, puesto que no podra
evidenciarse el punto final de la reaccin. Para ello puede emplearse el mtodo
potenciometrico el cual se fundamenta en la adicin del lcali hasta el valor de pH en el
punto de equivalencia del acido mayoritario que se desea cuantificar, con el volumen
gastado en el punto de equivalencia se procede a calcular la concentracin del cido
mayoritario en la muestra.
3. MATERIAL Y REACTIVOS
Matraz erlenmeyer de 250 mL 2

Esptula metlica 1
pH-metro 1
Bureta de 25 mL 1
Soporte universal 1
Pinza para bureta 1
Agitador magntico 1
Pizeta con agua destilada 1
Embudo simple 1
4. PROCEDIMIENTO
1. Pesar 5 gramos de una muestra (la muestra puede ser un alimento, una bebida que
posea color) y registrar el peso
2. Agregar 50 mL de agua destilada y agitar para mezclar
3. Medir el Ph inicial de la solucin, previa calibracin del Ph metro
4. Agregar la solucin estandarizada de NaOH, hasta obtener un valor de Ph entre 8 y
8.1
5. Calcular el porcentaje de acidez expresada en el acido mayoritario de la muestra
analizada
%ac expresado en el cido Vol. gast. N. ft.100

mayoritario = CM
Donde:
Vol. gast= volumen de la solucin tiutulante
N= Normalidad real de la solucin titulante
Ft= factor de transformacin
CM= cantidad de muestra
5. CLCULOS
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIN
8. EVALUACION
Cuestionario
1. Como se determina el factor de transformacin

2. Cuando se emplea este procedimiento de titulacin potenciomtrica
9. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD III Tema 10
TTULO: Cromatografa en capa fina
1. OBJETIVOS:
Conocer los aspectos fundamentales del proceso cromatografico en la separacin e
identificacin de compuestos qumicos
2. FUNDAMENTO:
La cromatografa de capa fina o (TLC) es una tcnica que emplea como fase estacionaria
una capa delgada de gel de slica o almina adherida a un soporte de vidrio o aluminio.
Para llevar a cabo esta tcnica se disuelve una pequea cantidad de la mezcla a separar
y, con la ayuda de un capilar, se deposita sobre la parte inferior de la placa. La
cromatoplaca se introduce en un recipiente cerrado que contiene unos mililitros de
disolvente (fase mvil) dejando que el disolvente ascienda por capilaridad, de modo que
los componentes de la mezcla experimentan un proceso de adsorcin desorcin, lo que
provoca que unos avancen ms rpidamente que otros.
Cromatoplaca de silicagel o almina
Cmara cromatografica
Capilar de hematocrito
Mechero de alcohol
Papel filtro
Pipeta de 10 ml
Lpiz negro
Regla
Tijera
Metanol p.a.
Agua destilada.
4. PROCEDIMIENTO
1. Cortar las cromatoplacas con una tijera limpia con 15 cm de longitud y 5 cm de
ancho.
2. Trazar una lnea base con la ayuda de un lpiz negro de grafito
3. Preparar el capilar para la siembra con un mechero de alcohol
4. Cargar la muestra y realizar la siembra sobre la lnea base y dejar secar.

5. Preparar la cmara cromatografa con una mezcla de disolventes (metanol : agua
1:1)
6. Dejar saturar la atmosfera con el disolvente dentro de la cmara cromatografica
7. Colocar la cromatoplaca dentro de la cmara cromatografica y dejar correr el
disolvente hasta una altura de 1cm antes de llegar al extremo superior.
8. Si las manchas de los analitos no son separados, utilice yodo como agente
revelador, (el yodo sublima a temperatura ambiente), puede tambin carbonizar la
muestra con acido sulfrico y calor para revelar las manchas
9. Calcule el Rf para cada analito separado
10. Las muestras deben correr junto a un estndar para llevar a cabo la identificacin
por comparacin del Rf
5. RESULTADOS
6. CONCLUSIN
7. EVALUACION
8. BIBLIOGRAFIA
Estadstica y Quimiometra para Qumica Analtica, J.N. Miller y J.C. Miller, Prentice.

UNIDAD III Tema 11
TTULO: Cromatografa de lquidos HPLC
1. OBJETIVOS:
Describir los principales componentes del cromatografo de lquido de alta resolucin
(HPLC)
Describir las principales consideraciones a tomar en cuenta en el desarrollo de
corridas cromatograficas por HPLC
Conocer las principales aplicaciones del HPLC en el anlisis qumico cualitativo y
cuantitativo de compuestos qumicos
Conocer los principales detectores que pueden acoplarse al cromatografo de lquidos
2. FUNDAMENTO:
El cromatografo de liquido HPLC consta de una bomba de alta presin y una fuente
para proporcionar la fase mvil o liquido de arrastre, una columna empacada con una
fase estacionaria de alta eficiencia y un detector al final de la lnea que interpreta la
seal de los diferentes componentes en la salida, la fuente de solvente contiene la
fase mvil que arrastra la muestra, puede ser una mezcla de solventes orgnicos, una
solucin reguladora, o una mezcla acuosa orgnica, que se inyecta a la columna
mediante la bomba que trabaja a alta presin hasta de 200 atm..
La muestra se inyecta a la columna en la unidad de inyeccin y de all es arrastrada

por el liquido que va a alta presin.
La columna se fabrica de acero inoxidable o en vidrio con un dimetro de 1 a 6 cm. Y

unos 25 cm. De longitud, se le empaca una fase estacionaria que contiene partculas
que pueden ser silicas de 3 a 10 micrones de dimetro.
El detector se encarga de registrar la fase mvil emergente de la columna y emite

una seal elctrica en milivoltios que es proporcional a laguna propiedad de la fase
mvil con sus solutos como por ejemplo la concentracin.
La separacin de los componentes la determina la diferencia en la capacidad de

adsorcin de cada uno de ellos por la fase estacionaria. Mediante este mtodo puede
separarse mezclas de sustancias orgnicas, de sustancias inicas y de unas y otras al
mismo tiempo.
Esquema de un Cromatografo de liquido HPLC
3. PROCEDIMIENTO
La prctica se llevara a cabo de forma verbal, de manera que el estudiante pueda
interactuar con el docente en lo referente a todo lo aprendido en la clase terica de
cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC)
4. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD III Tema 12
TTULO: Cromatografa de gases
1. OBJETIVOS:
Describir los principales componentes del cromatografo de gases
Describir las principales consideraciones a tomar en cuenta en el desarrollo de
corridas cromatograficas por cromatografa de gases
Conocer las principales aplicaciones del cromatografo de gases en el anlisis qumico
cualitativo y cuantitativo de compuestos qumicos
Conocer los principales detectores que pueden acoplarse al cromatografo de gases
2. FUNDAMENTO:
Un cromatgrafo de gases es un aparato sencillo. El mismo consiste en un cilindro de
gas, que normalmente es Helio (He). La salida del gas requiere de una serie de
reguladores, suficientes para que la presin no supere las 4 o 5 atm al llegar a la siguiente
pieza, el inyector. ste es el encargado de introducir la muestra en la columna. Hay que
resaltar que el volumen muerto del inyector debe ser el menor posible, con el fin de
compactar lo ms posible la muestra gaseosa y hacer que entre en la columna lo mas
junta posible, para as lograr una separacin mucho mejor.
La columna puede ser de vidrio, pero se confecciona habitualmente de otros materiales

(cobre, aluminio, acero inoxidable), la columna se encuentra dentro de una cavidad
denominada horno, cuya funcin consiste en mantener la temperatura deseada, que
dependiendo del mtodo nos puede interesar que permanezca constante, o bien que
vare de una forma u otra con el tiempo.
A la salida de la columna se encuentra el detector, el cual es el encargado de mostrarnos

la salida de los componentes, normalmente en grficas en forma de picos llamados
cromatograma.
Esquema de un cromatgrafo de gases
3. PROCEDIMIENTO
La prctica se llevara a cabo de forma participativa, de manera que el estudiante pueda
interactuar con el docente en lo referente a todo lo aprendido en la clase terica de
cromatografa de gases.
4. BIBLIOGRAFIA

UNIDAD III Tema 13
TTULO: Espectrometra de masas
1. OBJETIVOS:
Describir las principales aplicaciones del espectrmetro de masas en el anlisis
qumico cualitativo y cuantitativo
2. FUNDAMENTO:
Cuando una molcula se somete a ionizacin por impacto electrnico en un
espectrmetro de masas el proceso primario consiste en la abstraccin de un electrn
para dar un catin - radical. Este catin radical se trata del ion molecular y tendr mayor
o menor tendencia a fragmentar en funcin de su estabilidad. Los iones moleculares muy
estables tendrn poca tendencia a fragmentar y sern muy abundantes.
Al ion abundante del espectro se le denomina pico base. Los fragmentos ms abundantes
de un espectro de masas nos dan una informacin valiossima sobre la estructura de la
molcula.
M Bombardeo electrnico M+ Fragmentos

(Molculas) (Ion Molecular)
La interpretacin de un espectro de masas se realiza aplicando la siguiente regla Una

molcula se fragmentara en un espectrmetro de masas de manera tal que se formaran
los iones ms estables
3. PROCEDIMIENTO
La prctica se llevara a cabo de forma participativa, de manera que el estudiante
pueda interactuar con el docente en lo referente a todo lo aprendido en la clase terica
de cromatografa de gases.
4. BIBLIOGRAFIA

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FAC U LTAD D E C I E N C I A S D E L A S A L U D 1

CARRERA BIOQUMICA Y FARMACIA

RED NACIONAL UNIVERSITARIA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Elaborado por: Lic. Marcos Quevedo Ribera

Gestin Acadmica I/2013

Ser la universidad lder en calidad educativa.

Desarrollar la educacin superior universitaria con calidad y

Aprobado por: Fecha: Diciembre 2012

Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL

I. OBJETIVOS GENERALES DE LA ASIGNATURA.

Conocer las herramientas del anlisis qumico instrumental, para obtener

II. PROGRAMA ANALTICO DE LA ASIGNATURA.

ESTUDIO DEL ANALISIS INSTRUMENTAL

TEMA 1: INTRODUCCION AL ANALISIS INSTRUMENTAL

TEMA 2: METODOS DE CALIBRACION Y VALIDACION DE METODOS ANALITICOS

TEMA 3: METODOS BASADOS EN LA INTERACCION DE LA RADIACION CON LA

TEMA 4: POLARIMETRIA Y REFRACTOMETRIA

TEMA 5: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR ULTRAVIOLETA

TEMA 6: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION INFRARROJA

TEMA 7: ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA

INTRODUCCION A LOS METODOS ELECTROQUIMICOS

TEMA 11: CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS

TEMA 12: CROMATOGRAFIA DE GASES

TEMA 13: ESPECTROMETRIA DE MASAS

II. ACTIVIDADES A REALIZAR DIRECTAMENTE EN LA COMUNIDAD.

ii. Resumen de los resultados del diagnstico realizado para la deteccin

iii. Nombre del proyecto al que tributa la asignatura.

iv. Contribucin de la asignatura al proyecto.

v. Actividades a realizar durante el semestre para la implementacin del

Trabajo a realizar por Localidad, Incidencia social Fecha.

IV. EVALUACIN DE LA ASIGNATURA.

El trabajo, la participacin y el seguimiento realizado a estos tres tipos de

DE RESULTADOS DE LOS PROCESOS DE APRENDIZAJE O SUMATIVA

Se realizarn 2 evaluaciones parciales con contenido terico y prctico. El

Qumica Analtica moderna. D. Harvey, McGraw-Hill, Madrid, 2002.

VI. PLAN CALENDARIO

SEMANA ACTIVIDADES ACADMICAS OBSERVACIONES

VII. WORK PAPERS

PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD

2. Clasificacin de los mtodos analticos

Constantes fsicas: Punto de fusin,

Mtodos clsicos en Volumetra

Estos mtodos clsicos para la separacin y determinacin de analito todava se usan

A estos mtodos ms modernos para la separacin y determinacin de especies

5. Definicin de anlisis instrumentales:

5.1. Ventajas e inconvenientes de los mtodos instrumentales

5.2. Importancia de las tcnicas instrumentales en el campo bioqumico y

a) Determinacin cuantitativa de los metabolitos secundarios presentes en el

Glicemia, creatinina, concentracin de elementos inorgnicos como calcio, potasio,

b) Identificacin y determinacin de la estructura qumica del medicamento

Antiguamente la informacin estructural estaba condicionada a la degradacin de la

c) Determinacin de la homogeneidad y pureza de productos farmacuticos

d) Valoracin cuantitativa de principios activos

e) Determinacin de constantes fsicas y fisicoqumicas

Estas constantes caractersticas y propias de compuestos qumicos tales como el

5.3. Clasificacin de las tcnicas instrumentales

6. Instrumentos para el anlisis