Respuestas Cuestionarios

1.
Qu mtodo utilizara para reconocer un cultivo para reconocer un cultivo puro, joven,
injuriado y envejecido.
CULTIVOS PUROS: MEDIOS DE OBTENCIN
Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterognea o mixta. Cuando

queremos estudiar un microorganismo dado, debemos aislarlo.
Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener
estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola clula (son
clones). Hay diferentes mtodos para obtenerlas:
MTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRA
Necesitamos:
Placa petri con medio de cultivo
Muestra (slida o lquida)
Asa de siembra de platino
Con el asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar
el asa de siembra y extendemos parte de la extensin anterior en otra direccin. Volvemos a
esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensin en otra
direccin. Esterilizamos y repetimos la operacin.
Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la

segunda, parte de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an.
Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.
MTODO DE LAS DILUCIONES SUCESIVAS
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en un
medio de cultivo, generen colonias aisladas. Metodologa:
Ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri con medio de cultivo.
Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la placa, e incubams a 37 C durante 24
horas.
En la primera dilucin habr un amasijo de colonias. En la siguiente habr diez veces menos
nmero de colonias, y as sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas.
Este mtodo nos permite calcular el nmero de microorganismos viables que existen en la
muestra que estamos analizando:
N=C 1/D 1/i donde:
N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra
C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias)
D es la dilucin
I es el inculo
Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo (puede tratarse de una
contaminacin) y, si hay ms, no estn aisladas.
TCNICA DEL CULTIVO POR ENRIQUECIMIENTO
Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el microorganismo que nos
interesa aislar. Ejemplo: Nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas. Tomamos un matraz con
agua y sales y lo incubamos a la luz, de manera que crezcan las bacterias fotoauttrofas.
Ejemplo 2: Queremos aislar bacterias quimiolittrofas del azufre; ponemos azufre, CO2 como
fuente de carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar fotoauttrofos.
Para incubar enterobactrias como enterobacter hay que incubar a 37, mientras que para
incubar otra enterobacteria, E. Coli, hay que incubar a 45.
Una de las caractersticas principales de las bacterias es su apariencia seguida del crecimiento en
diferentes medios de cultivo. Estas caractersticas generales como el color, abundancia de
crecimiento y aun el olor del cultivo nos pueden servir de guas para la identificacin. Para
determinar las caractersticas de desarrollo de un cultivo puro es costumbre observar lo
siguiente:
Tipo de colonias en agar.

Desarrollo en agar inclinado.
Desarrollo en caldo.
Desarrollo en gelatina por picadura.
Despus de la siembra del medio de cultivo y despus de la incubacin se pueden determinar
las caractersticas de cultivo del microorganismo. Los aspectos ms peculiares de desarrollo son:
- COLONIAS EN PLACAS CON AGAR:
Tamao: los tamaos de las colonias son desde fracciones de milmetro de dimetro hasta 5 o
10mm de dimetro.
Margen o borde: pueden formar un crculo perfecto o mostrar gran variedad de irregularidades
como salientes redondos, hendiduras irregulares, proyecciones filiformes, o proyecciones en
forma de raz.
Elevacin: pueden ser muy finas (aplanadas) o gruesas (elevadas).
Cromognesis o pigmentacin: las colonias pueden estar coloreadas o sin color.
Caractersticas pticas: hay opacas, trasnparentes u opalescentes.
- DESARROLLO EN AGAR (INCLINADO) POR ESTRAS:
Cantidad: escaso, moderado o abundante.

Margen o borde de desarrollo: uniforme o presentando varias irregularidades.
Consistencia de la masa desarrollada: mantecosa o de mantequilla, fcilmente removibles con
una aguja de siembras.
Cromognesis o pigmentacin: colonias pueden estar coloreadas o sin color.
- DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO:
Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante.
Distribucin del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo

confinado (nata o pelusa) o desarrollo que se acumula como sedimento.
Olor: ptrido, a frutas o aromtico, o imperceptible.
- DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:

Desarrollo (sin licuefaccin) a lo largo de la lnea de inoculacin. El desarrollo puede estar
limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido.
Licuefaccin de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos

varidos de embudos al licuar la gelatina.
Para detectar Coliformes injuriados (CI) en el agua considerada apta para el consumo humano
segn la normatividad peruana,se tomaron y procesaron 100 muestras de agua de edicios del
distrito de Lima-Cercado. Se determin el cloro libre residual(CLR) mediante la tcnica DPD y el
pH usando varillas indicadoras Merck. Para el recuento de bacterias heterotrcas (BH)se emple
la tcnica de spread plate; para cuanticar Coliformes totales (CT) y Coliformes fecales (CF) se
emple la tcnicade tubos mltiples y deltracin por membrana. Para recuperar y enumerar CT y
CF injuriados se utiliz el medio m-T7. Parala especi

cacin bacteriana las pruebas estndar y el sistema API 20E. Para la deteccin de CI se
utilizaron las muestras queresultaron negativas para CT y CF y/o tenan un recuento de
BH igual o inferior a 500 UFC/mL. Empleando los mtodos con-vencionales se demostr
que el 15% de las muestras de agua eran inaptas para el consumo humano. De las 85
consideradasaptas, el 29.41% (25) contena CI. En las muestras inaptas empleando los
mtodos convencionales, el 60% (9) tena entre 0,1y 0,5 ppm de CLR y en las muestras
consideradas inaptas por tener CI, el 88% (22) tena entre 0,1 y 1,0 ppm. No se
demostrrelacin entre el pH y las muestras inaptas. Entre los CI se identi

caron:
Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, E. cloacae,Enterobacter sp, Citrobacter freundii,
Citrobacter spp
y
Klebsiella sp.
El agua para consumo humano considerada apta por lanormatividad peruana puede estar
contaminada con microorganismos intestinales y constituir un riesgo para la salud; el
CLRentre 0,1 y 1,0 ppm no garantiza la eliminacin de las bacterias intestinales
2. Por qu algunos microorganismos de importancia industrial desarrollan en caldo una
caracterstica de forma de pelcula.
3. Cmo se visualiza el polisacrido extracelular y a qu bacteria puede corresponder?
4. Qu es la prueba de catalasa, cmo se realiza y qu utilidad tiene?
La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias. Descompone el
perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del
oxgeno indica que la prueba es positiva.
Materiales y reactivos
Para el correcto desarrollo de la prctica sern necesarios los siguientes materiales:
Portaobjetos.
H2O2 de 10 volmenes Cultivos en fase exponencial de bacterias.
Asas e hilos de siembra.
Pipetas Pasteur.
Mtodo
1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur.
2. Suspender la bacteria.
3. Detectar la formacin de burbujas.

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayora de las
bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es
Streptococcus.
Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros:
Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

Bacillus (+) de Clostridium (-).
Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C.pyogenes y
C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-)
Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos
tcnicas:
Mtodo del portaobjetos (recomendado):

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un
portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin
mezclarlo con el cultivo.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden
producirse falsos positivos.
Mtodo del tubo de ensayo:
Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente
inoculado.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener
la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del
medio contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.
5. Cmo se interpretan los resultados de una prueba de fermentacin de hidratos de carbono?

Capitulo 9
1. Por qu se calibra el espectrofotmetro a 100% de transmitancia con medio de cultivo

estril?
Porque con este medio sin inoculo la muestra no presenta turbidez y es transparente lo
que determina un estado inicial donde la luz emitida no es absorbida por la muestra, sino
nicamente por el medio
Cuando el medio no contiene aun al microorganismo se considera un estado cero, por
tanto al calibrar el espectrofotometrocon el medio nicamente, los valores de
absorbancia registrados solo considerar a los microorganismos
2. Por qu motivo puede ser de alguna forma til conocer la curva de multiplicacin de
una bacteria?
Para conocer los tiempos en que duran cada una de las etapas del crecimiento de un
microorganismo, reconocer los periodos de Acostumbramiento, de crecimiento,
estacionario y el periodo de muerte; para nuestro caso solo se puede identificar las fases
de acostumbramiento y de crecimiento
Estos datos se pueden utilizar en el control de un anlisis de este mismo
microorganismo, ya sea de control de crecimiento para aprovechar su velocidad de
multiplicacin, o tambin para conocer la velocidad de infeccin que puede producir
3. Identificar en la grafica las fases del desarrollo microbiano.

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Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterognea o mixta. Cuando

MTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRA

Placa petri con medio de cultivo

Muestra (slida o lquida)

Asa de siembra de platino

Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la

MTODO DE LAS DILUCIONES SUCESIVAS

N=C 1/D 1/i donde:

N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra

C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias)

TCNICA DEL CULTIVO POR ENRIQUECIMIENTO

Tipo de colonias en agar.

- COLONIAS EN PLACAS CON AGAR:

Cantidad: escaso, moderado o abundante.

Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante.

Distribucin del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo

Olor: ptrido, a frutas o aromtico, o imperceptible.

- DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:

Licuefaccin de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos

3. Detectar la formacin de burbujas.

Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

Mtodo del portaobjetos (recomendado):

5. Cmo se interpretan los resultados de una prueba de fermentacin de hidratos de carbono?

1. Por qu se calibra el espectrofotmetro a 100% de transmitancia con medio de cultivo

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