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    Fermentacion Alcohólica

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    El documento describe experimentos para demostrar la liberación de dióxido de carbono (CO2) por procesos de respiración y fermentación en levaduras. Los objetivos son mostrar la producción de CO2, describir la estructura celular de la levadura, y estudiar la tasa de fermentación midiendo la producción de CO2. Se realizan procedimientos para medir la liberación de CO2 durante la fermentación de azúcares como la glucosa y sacarosa, y para observar células de levadura al microscopio.

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    El documento describe experimentos para demostrar la liberación de dióxido de carbono (CO2) por procesos de respiración y fermentación en levaduras. Los objetivos son mostrar la producción de CO2, describir la estructura celular de la levadura, y estudiar la tasa de fermentación midiendo la producción de CO2. Se realizan procedimientos para medir la liberación de CO2 durante la fermentación de azúcares como la glucosa y sacarosa, y para observar células de levadura al microscopio.

    Descripción original:

    Alcohol

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    Fermentacion alcohólica

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    El documento describe experimentos para demostrar la liberación de dióxido de carbono (CO2) por procesos de respiración y fermentación en levaduras. Los objetivos son mostrar la producción de CO2, describir la estructura celular de la levadura, y estudiar la tasa de fermentación midiendo la producción de CO2. Se realizan procedimientos para medir la liberación de CO2 durante la fermentación de azúcares como la glucosa y sacarosa, y para observar células de levadura al microscopio.

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    I.

    - OBJETIVOS

    Demostrar la liberacin de CO2 por los procesos de respiracin y fermentacin en


    levaduras.
    Describir la estructura de una clula de levadura indicando la localizacin de las
    reacciones metablicas involucradas en la gliclisis y fermentacin.
    Estudiar la tasa de fermentacin en clulas de levadura midiendo la produccin de
    CO2 .

    II.- MARCO TEORICO

    La fermentacin alcohlica es un proceso biolgico de fermentacin en plena ausencia


    de aire(oxgeno - O2), originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan
    los hidratos de carbono (por regla general azcares: como por ejemplo la glucosa,
    la fructosa, la sacarosa, sirve con cualquier sustancia que tenga la forma emprica de la
    glucosa, es decir, que sea una Hexosa.) para obtener como productos finales: un alcohol en
    forma de etanol (cuya frmula qumica es: CH3-CH2-OH), dixido de carbono (CO2) en
    forma de gas y unas molculas de ATP que consumen los propios microorganismos en
    su metabolismo celular energtico anaerbico. El etanol resultante se emplea en la
    elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la cerveza, la sidra, el cava,
    etc. Aunque en la actualidad se empieza a sintetizar tambin etanol mediante la
    fermentacin a nivel industrial a gran escala para ser empleado como biocombustible.

    La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa anaerbica


    a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno a partir de la
    glucosa. En el proceso las levaduras obtienen energa disociando las molculas de glucosa y
    generan como desechos alcohol y dixido de carbono CO2. Las levaduras y bacterias
    causantes de este fenmeno son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y
    contribuyen en gran medida al sabor de los productos fermentados (vase Evolucin
    sensorial).Una de las principales caractersticas de estos microorganismos es que viven en
    ambientes completamente carentes de oxgeno (O2), mxime durante la reaccin qumica,
    por esta razn se dice que la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico.

    LEVADURA

    Se denomina levadura o fermento a cualquiera de los diversos organismos eucariotas,


    clasificados como hongos microscpicos unicelulares, que son importantes por su
    capacidad para realizar la descomposicin mediante fermentacin de diversos cuerpos
    orgnicos, principalmente los azcares o hidratos de carbono, produciendo distintas
    sustancias.

    Aunque en algunos textos de botnica se considera que las levaduras verdaderas


    pertenecen solo a la clase Ascomycota, desde una perspectiva microbiolgica se ha
    denominado levadura a todos los hongos con predominio de una fase unicelular en su ciclo
    de vida, incluyendo a los hongos basidiomicetes.

    A veces suelen estar unidos entre s formando cadenas. Producen enzimas capaces de
    descomponer diversos sustratos, principalmente los azcares.
    Una de las levaduras ms conocidas es la especie Saccharomyces cerevisiae. Esta levadura
    tiene la facultad de crecer en forma anaerobia realizando fermentacin alcohlica. Por esta
    razn se emplea en muchos procesos de fermentacin industrial, de forma similar a
    la levadura qumica, por ejemplo en la produccin de cerveza, vino,
    hidromiel, pan, antibiticos, etc.

    Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o brotacin y sexualmente


    mediante ascosporas o basidio esporas. Durante la reproduccin asexual, una nueva yema
    surge de la levadura madre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual la yema
    se separa de la madre al alcanzar un tamao adulto. En condiciones de escasez de
    nutrientes las levaduras que son capaces de reproducirse sexualmente formarn
    ascosporas. Las levaduras que no son capaces de recorrer el ciclo sexual completo se
    clasifican dentro del gnero Candida.

    La levadura es la primera clula eucariota en la que se ha intentado expresar protenas


    recombinantes, debido a que es de fcil uso industrial: es barata, cultivarla es sencillo y se
    duplica cada 90 minutos en condiciones nutritivas favorables. Adems, es un organismo
    fcil de modificar genticamente, lo que permite realizar experimentos en varios das o
    semanas. Sin embargo, las levaduras poseen un mecanismo de glicosilacin diferente al que
    se encuentra en clulas humanas, por lo que los productos son inmunognicos.

    BIOQUIMIA DE LA REACCION
    La gluclisis es la primera etapa de la fermentacin, lo mismo que en la respiracin celular,
    y al igual que sta necesita de enzimas para su completo funcionamiento. A pesar de la
    complejidad de los procesos bioqumicos una forma esquemtica de la reaccin qumica de
    la fermentacin alcohlica puede describirse como una gliclisis de tal forma que puede
    verse como participa inicialmente una molcula de hexosa.

    C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP 2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 25.5 kcal

    Se puede ver que la fermentacin alcohlica es desde el punto de vista energtico una
    reaccin exotrmica, se libera una cierta cantidad de energa. La fermentacin alcohlica
    produce gran cantidad de CO2. Este CO2 pesa ms que el aire, y puede llegar a crear bolsas
    que desplazan el oxgeno de los recipientes donde se produce la fermentacin.

    BALANCE ENERGTICO
    La fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico exergnico (libera energa) y
    molculas de ATP necesarias para el funcionamiento metablico de las levaduras. Debido a
    las condiciones de ausencia de oxgeno durante el bioproceso, la respiracin celular de
    la cadena del ADP en ATP queda completamente bloqueada, siendo la nica fuente de
    energa para las levaduras la gliclisis de la glucosa con la formacin de molculas de ATP
    mediante la fosforilacin a nivel de sustrato. El balance a nivel molecular del proceso se
    puede decir que genera 2 molculas de ATP por cada molcula de glucosa. Si se compara
    este balance con el de la respiracin celular se ver que se generan 38 molculas de ATP. A
    pesar de ello parece ser suficiente energa para los organismos anaerbicos. La energa libre
    de Gibbs, de la reaccin de fermentacin etlica muestra un valor de G de -234.6 kJ mol-
    este valor negativo de la energa libre de Gibbs indica que: desde el punto de vista
    termodinmico la fermentacin etlica es un proceso qumico espontneo.

    III.- PROCEDIMIENTO

    A. PRODUCION DE CO2 POR FERMENTACION


    Con la ayuda de una pipeta sacar 10 ml de glucosa o sacarosa al 2% hacia un tubo 1
    (biorreactor) de ensayo; luego agregar 10 ml de levadura.
    En otro tubo 2 colocar 10 ml de H2O junto a 3 gotas de azul bromotimol.
    Armar el siguiente sistema.

    Tubo 1 Tubo 2

    Este sistema llevar a bao Mara a 37C por 15 minutos aproximadamente.


    Anotar los resultados

    B. FERMENTACION DE LEVADURA
    Con la ayuda de una pipeta colocar 25 ml de glucosa o sacarosa al 2% y 25 ml de
    levadura concentrada en un matraz.
    Colocar y asegurar la bureta a un soporte universal.
    Sacar 10 ml de solucin del matraz y esperar 30 minutos y anotar los resultados.
    Armar el siguiente esquema.
    C. EXAMINANDO CELULAS DE LEVADURA
    Con la ayuda de una pipeta Pasteur transferir unas gotas del cultivo de levadura hacia
    un porta objetos.
    Agregar una gota de indicador (rojo neutro) en el porta objetos y colocar el
    cubreobjetos
    Llevar al microscopio a una medida de 40X para observar la levadura activas e inactivas

    Microscopio

    IV.- RESULTADOS

    A. FERMENTACION DE LEVADURA (ALCOHOLICA)

    MATRAZ TIEMPO EN LIBERACION DE CO2 OBSERVACIONES


    MINUTOS
    SACAROSA 30 minutos Si Desplazamiento de
    las burbujas
    GLUCOSA 30 minutos Si Desplazamiento de
    las burbujas

    Al trascurrir el tiempo tanto


    en la glucosa como en la
    sacarosa, fue desplazando una
    distancia repleta de burbujas
    con lo cual se identifica la
    liberacin de CO2
    B. PRODUCCION DE CO2 POR FERMENTACION

    TUBOS TIEMPO EN LIBERACION DE CO2 OBSERVACIONES


    MINUTOS
    SACAROSA 1h Si Cambio de color de
    verde - amarillo
    GLUCOSA 1h Si Cambio de color de
    verde - amarillo

    El cambio de color En las


    muestras de verde a amarillo
    mostro que si se liber el CO2
    deseado.

    C. EXAMINANDO CELULAS DE LEVADURA

    Se logr percibir las levaduras, con


    ayuda del microscopio.

    Se observ la actividad de las


    levaduras de acuerdo al color:

    -blancas: Activas

    -rojos: Inactivas

    V.- DISCUSIONES

    Como bien se estableca, la fermentacin es un proceso anaerbico, muestra de ello fue


    nuestro experimento A, anulando la entrada de oxgeno.

    H.J. Vzquez en su publicacin del 2006 redact: que la fermentacin alcohlica tiene
    como finalidad biolgica proporcionar energa anaerbica a los microorganismos
    unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno a partir de la glucosa. En el proceso las
    levaduras obtienen energa disociando las molculas de glucosa y generan como desechos
    alcohol y dixido de carbono CO2. Las levaduras y bacterias causantes de este fenmeno
    son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y contribuyen en gran medida
    al sabor de los productos fermentados (Evaluacin sensorial). Una de las principales
    caractersticas de estos microorganismos es que viven en ambientes completamente
    carentes de oxgeno (O2), mximo durante la reaccin qumica, por esta razn se dice que
    la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico.

    Raisman,J, fermentaciones 2003. La fermentacin alcohlica es un proceso biolgico de


    fermentacin en ausencia de oxgeno (O2), originado por la actividad de algunos
    microorganismos como la levadura y bacterias, que procesan los azcares (carbohidratos)
    como: glucosa, sacarosa( ambos usados en nuestra practica) , fructosa, entre otros. Los
    productos finales que se obtienen de este proceso son: etanol, dixido de carbono, NAD+ y
    2 ATP.

    La fermentacin alcohlica produce muy poca energa neta: 2 ATP por cada piruvato
    obtenido de la gliclisis. Como resultado se obtiene tambin etanol (principal producto
    utilizado en las empresas productoras de vinos, cervezas y vinagre) y dixido de carbono
    (CO2).

    VI.- CONCLUSIONES

    En esta prctica se usaron dos soluciones: la sacarosa y la glucosa con la cual se


    armaron los sistemas pero sobre todo observamos que la que mayor expulsin de CO2
    brind fue la sacarosa.
    Mientras mayores sean las condiciones anaerobias. Mayor ser la calidad de la
    fermentacin.
    Bajo condiciones anaerbicas, las levaduras degradan azcares, desprendiendo gas. La
    evidencia de que est ocurriendo la fermentacin en un cultivo de levaduras puede ser
    lograda haciendo burbujear el gas en una solucin indicadora. Esto se demostr con
    nuestro experimento B, cuando los tubos de ensayo cambiaron de ph tornndose de
    color amarillo v.
    La fermentacin es poco rentables si se compara con la respiracin aerobia, ya que a
    partir de una molcula de glucosa solo se obtienen 2molculas de ATP, mientras que
    en la respiracin se producen 36.
    Las levaduras empiezan a fermentar porque utilizan el azcar para producir energa y
    como otros productos se forman el dixido de carbono que aparecen como burbujas.

    VII.- BIBLIOGRAFA

    H.J. Vzquez y O. Dacosta. Fermentacin alcohlica.2006.


    Disponible en: www.ejournal.unam.mx/ict/vol0804/ICT000800404.pdf
    Teresa Audesirk, Gerald Audersirk,Bruce E. Byers. Biologa: la vida en el Tierra.
    2008.
    Disponibleen:cadiciencias.wikispaces.com/file/view/Biologia_La_Vida_en_la_Tierra_Te
    rcera_Parte.jb.decrypted.pdf
    Raisman,J. El rol del NAD, fermentaciones 2003.
    Disponible en: www.biblioteca.org.ar/libros/hipertextos%20de%20biologia/met4.htm

    VIII.- CUESTIONARIO

    1. El tipo de carbohidrato fermentado afecta la tasa formacin de gas?


    S, porque la fermentacin alcohlica, comienza despus de que la glucosa entra en la
    celda. La glucosa se degrada en un cido pirvico. Este cido pirvico se convierte luego en
    CO2 y etanol.
    2. Qu tipo de carbohidrato sustent la tasa ms rpida de fermentacin?

    En el contenido celular encontramos azcares solubles y la pectina que est asociada a la


    membrana celular. Estos carbohidratos son de fcil digestin porque son de fcil acceso para
    los m.o. y su estructura es relativamente sencilla. El carbohidrato de almacenamiento, o
    azcar de reserva de las plantas, es el almidn. Este tambin es considerado de fcil digestin
    una vez
    Abierto el grano. La celulosa y la hemicelulosa son los carbohidratos estructurales de la
    planta. Constituyen las paredes celulares y corresponden a la fraccin fibrosa del alimento.
    A estos compuestos se asocia la lignina (que no es un carbohidrato) y que dificulta la digestin
    de la fibra. Por este motivo y por la forma que toman las molculas de celulosa y
    hemicelulosa, estos carbohidratos son considerados de difcil digestin.

    3. Qu molcula es desdoblada en la reaccin que produce el CO2?

    La Glucosa en presencia de O2 mediante la Respiracin celular Aerobia es desdoblada en


    CO2, H2O y energa qumica en forma de ATP.
    Glucosa + 6 O2----> 38 ATP + 6 CO2 + 6 H2O.

    4. Por qu es ventajoso para un organismo realizar fermentacin?

    Porque no necesita oxgeno para ella como aceptor final de electrones, sino que un
    compuesto orgnico y NADH+, por lo tanto, puede vivir en ambientes anaerobios.
    La desventaja ser que la fermentacin produce mucho menos energa que la respiracin
    aerobia, la primera produce solo 2 molculas de ATP por molcula de glucosa, mientras que
    la respiracin produce 36.

    5. Se sabe que cuando el carbohidrato es fermentado por la levadura, slo un tercio de


    los carbonos son liberados en forma de CO2. El resto del carbono es liberado como
    molculas de: (Explique)

    Por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono (por regla
    general azcares: como por ejemplo la glucosa, la fructosa, la sacarosa, sirve con cualquier
    sustancia que tenga la forma emprica de la glucosa, es decir, que sea una Hexosa.) para
    obtener como productos finales: Un alcohol en forma de etanol, dixido de carbono (CO2) en
    forma de gas y unas molculas de ATP que consumen los propios microorganismos en
    su metabolismo celular energtico anaerbico.

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