Informe Nº4

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA

QUIMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
INDUSTRIAL
PRACTICA Nº 4:
“EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO;

ACONDICIONAMIENTO Y ESTERILIZACIÓN”
ESTUDIANTE:
Calixto Carcausto Dicson
DOCENTE:
Ing. Marcia Quequezana
TURNO:
Lunes 5:40-7:20
Arequipa, PERÚ 2018
PRACTICA nº4
EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO;
ACONDICIONAMIENTO Y ESTERILIZACIÓN
I. OBJETIVOS
1) Dar a conocer al estudiante las técnicas para el acondicionamiento y esterilización de materiales
y equipos más empleados en un laboratorio de microbiología industrial.
2) Ejecutar con habilidad y destreza el acondicionamiento de materiales para el análisis

microbiológico.
3) Justificar la importancia de los métodos de esterilización para el control microbiológico de los

alimentos.
II. MARCO TEÓRICO

El acondicionamiento de los materiales así como la esterilización de los mismos es el primer paso
en el control microbiológico de los alimentos, pues de él dependerá el éxito del análisis.
2.1.- METODOS DE ESTERILIZACION POR CALOR
El calor actúa desnaturalizando y coagulando las proteínas.
2.1.1.- ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO
Se requiere temperaturas elevadas y un periodo más prolongado de calentamiento que la

esterilización con vapor. Su uso está limitado primariamente a la esterilización de material de
vidrio y aquellas sustancias que sean impermeables al vapor.
El mecanismo por el cual los organismos son destruidos se basa en los efectos letales del calor
seco debido a la desecación en general, lesión por oxidación y efectos tóxicos de los niveles de
electrólitos.
En ausencia de agua, disminuye el número de grupos polares de la cadena peptídica y se

requiere más energía para abrir las moléculas, de allí la aparente mayor estabilidad del
organismo.
Se emplea el horno o estufa de esterilización, en la que se aplica una temperatura de 160-

170ºC durante 1 hora.
a) Flameo o Llama Directa. Consiste en exponer los materiales a esterilizar (asas y agujas
de kolhe, espátulas, pinzas, tijeras, etc.) al contacto de la llama de un mechero para
eliminar rápidamente los microorganismos del entorno; Ejemplo: mechero de Bunsen.
b) Aire Caliente. Para ello se utiliza un horno bacteriológico u horno Pasteur, donde se
esteriliza el material a temperaturas de 170º-180ºC por 2 horas. Es generalmente
empleado para esterilizar material de vidrio.
2.1.2 ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO

Se usa el vapor, tanto porque las bacterias se mueren más rápidamente cuando se encuentran
húmedas como porque el vapor proporciona un medio de distribuir el calor uniformemente
en todas partes del recipiente de esterilización, el vapor debe conservarse a una presión de
1000g/cm3 sobre la presión atmosférica para obtener una temperatura de 121ºC. Se produce
también rupturas de cadena única en el ADN, y la pérdida de la viabilidad de las células
expuestas a calor leve puede correlacionarse con la introducción de estas rupturas. La lesión
de ADN parece ser enzimática, como resultado de activación o liberación de una nucleasa.
El calor produce también una pérdida de la integridad funcional de la membrana y filtración

de pequeñas moléculas y material absorbente de 260 nm. Este material es de origen
ribosómico y aparentemente es resultado de la degradación de los ribosomas por
ribonucleasas activadas por el tratamiento con calor. Existe también degradación del ARN
ribosómico y la pérdida de viabilidad de las células expuestas a temperaturas elevadas.
a) Por Ebullición. Se coloca el material a esterilizar en agua hirviendo (100ºC) por 15-35
minutos.
b) Vapor de agua sin Presión. Se coloca el material a esterilizar a la acción del vapor de
agua y a temperatura no mayor de 100ºC; para ello puede hacer uso del autoclave con la
espita abierta. Se utiliza para materiales termolábiles como es el caso de algunos medios
de cultivo.
c) Vapor de agua con Presión. Se realiza en un autoclave a 15 libras de presión y 121ºC

por 15-20 minutos. Se emplea para esterilizar medios de cultivo y todos aquellos
materiales que no pueden esterilizarse por calor seco. Se puede usar; autoclave,
pasteurización o tindalización.
c.1) Autoclave: es un equipo construido en acero inoxidable, de forma cilíndrica, paredes

resistentes, puede ser horizontal o vertical; consta de:
♠ Caldera de material resistente, fondo cóncavo cubierta de una camisa metálica

cilíndrica.
♠ Dispositivos para la instalación de la fuente calorífica (gas, electricidad o vapor de
agua).
♠ Orificios superiores para purga de gases de combustión.
♠ Tapa con válvula de seguridad, espita, manómetro.
♠ Canastilla para colocar el material a esterilizar.
2.2 ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN
Consiste en hacer pasar las sustancias líquidas o gaseosas a esterilizar a través de membranas
porosas que retienen a los microorganismos; sirve para la esterilización de sustancias
termolábiles. El material filtrante puede ser de porcelana, tierras de infusorios, acetato de
celulosa, etc.
2.3 ESTERILIZACIÓN POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA
Poseen efectos letales y mutagénicos en las bacterias presentando su mayor efectividad como
agente bactericida en la región espectral de alrededor de los 260 nm. de longitud de onda, éste
método presenta muchas dificultades técnicas.
III. MATERIALES Y EQUIPO

- Material de vidrio: pipetas, palcas Petri
- Erlenmeyer, tubos de ensayo
- Papel craff, algodón, gasa, tijeras
- Mechero de Bunsen
- Horno Pasteur de aire caliente
- Autoclave
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1 PREPARACIÓN DE MATERIAL A ESTERILIZAR
a) Preparación de tubos matraces
- Los tubos, matraces y frascos antes de su esterilización deben llevar sus tapones de
algodón respectivamente, los cuales deben cerrar suavemente no muy flojos ni
apretados, ni largos ni cortos, preparados según el método siguiente:
- De acuerdo al tapón a confeccionar se toma el pedazo convenientemente de
algodón de fibra, extendida, rectangular
- Practicar un dobles de 1/3 a lo largo de la fibra.
- Enrollar de un extremo, presionando sobre si mismo hasta completar toda la
longitud.
- Rotar con los dedos el trozo confeccionado aplastando para dársele la forma de
cono truncado, con el diámetro a la medida del recipiente a taponar, el tapón debe
entrar en el recipiente hasta la mitad, y el otro medio quedar fuera. Se pueden
preparar los tapones envueltos en gasa para evitar el hilachamiento.
Tubos de Ensayo
- Formar un paquete de tubos de ensayo taponados, empaquetarlos con papel kraft y
amarrarlos, en su defecto se le envuelve con papel sólo la zona de las bocas.
Frascos y Matraces
- Los frascos y matraces se taponan con algodón, se cubre con papel kraft y se amarra
con hilo pabilo.
- Colocar el nombre del medio de cultivo
- Rotular la fecha de preparación.
b) Preparación para proteger las pipetas

- En el extremo de succión de cada pipeta introducir una porción de algodón con
auxilio de una aguja o puntero delgado, evitando que quede muy ajustado.
- Cortar tiras largas de papel kraft de unos 3 cm. de ancho, y colocar uno de sus
extremos, en una de las puntas del papel envolver la punta de la pipeta en forma
oblicua y envolver toda la longitud de la pipeta girándose en espiral en forma
ajustada y en la parte terminal de la boquilla se remata con una torsión para
protegerla y se rompe el resto de papel sobrante.
- Anotar con un lápiz la medida de la pipeta y la fecha de su esterilización.
c) Preparación de las placas Petri

- Cortar papel kraft tamaño adecuado para cubrir íntegramente las placas petri
completas.
- Con la parte brillante del papel hacia fuera se envuelve la placa poniéndose esta en el
centro, se envuelve la placa tomándose dos extremos opuestos del papel, dándose
una vuelta alrededor de ella, los otros dos extremos del papel se doblan en
triángulos, rematándose con un fuerte dobles hacia el dorso de la placa, dándosele
una apariencia de paquete de regalo.
4.2 ESTERILIZACIÓN CON CALOR SECO

El procedimiento de esterilización por aire caliente sólo se puede emplear con utensilios de
vidrio o metal.
a) Procedimiento para la esterilización en horno

- Ponga el termostato a l75ºC y encienda el horno.
- Si hay un ventilador verifique que esté funcionando.
- Vigile el termómetro. Cuando la temperatura llegue a l75ºC. sígase calentando
durante 60 minutos más.
- Apague el horno. Espere a que la temperatura descienda hasta 60ºC. Abra la puerta
del horno.
- El papel empleado para envolver deberá de haber tomado un color marrón oscuro,
si el color del papel es amarillo pálido indicará que el horno no se ha calentado
bastante. Si el papel se ha ennegrecido indicará que el horno se ha calentado
demasiado.
4.3 ESTERILIZACIÓN CON CALOR HÚMEDO
a) Procedimiento para la esterilización con autoclave

- Llene con agua el fondo de la autoclave (hasta el soporte de la canasta). Cerciórese
que el agua no toque la canasta. Elimine el exceso de agua abriendo la espita del
drenaje.
- Introduzca en la autoclave la canasta con los materiales que se van a esterilizar, se
pueden añadir indicadores de la esterilización, como ciertas piezas de papel especial
que ennegrecen al lograrse la temperatura adecuada.
- Cierre la tapa de la autoclave, cerciorándose de que la arandela de goma se
encuentra en su surco. Atornille a niveles iguales los sujetadores de la tapa, con
firmeza pero sin apretarlo demasiado.
- Abrir la válvula de salida del aire.
- Inicie el calentamiento de la autoclave.
- Vigile la salida de aire hasta que aparezca un chorro de vapor. Aguarde 3- 4 minutos
hasta que el chorro de vapor sea uniforme y continuo, esto indicará que todo el aire
ha sido expulsado de la autoclave.
- Cierre a continuación la válvula de salida del aire. Apriétense los sujetadores de la
tapa del autoclave y reduzca la temperatura ligeramente.
- Cuando se obtenga la temperatura adecuada 120ºC se deberá regular el calor para
conservarla. Y esperar por 15 minutos.
- Reduzca completamente el calor tan pronto como se cumpla el tiempo requerido.
- Cuando la temperatura descienda a menos de 80ºC abra la válvula de salida de aire
para igualar las presione dentro y fuera del autoclave.
- Deje enfriar la autoclave y a continuación retire cuidadosamente la canasta con los
utensilios estériles.
-
OBSERVACIONES
Figura 4.1 a) matraces y placas

Petri preparadas para la
esterilización. b) Grupo de 5 tubos
de ensayo preparadas para su
posterior esterilización, los matraces
y placas Petri fueron preparadas
para una esterilización por vapor
a) seco en un horno, para los matraces
se elaboró su propia tapa a base de
algodón y gaza. Por otra parte, los
tubos de ensayo se esterilizaron por
método vía húmeda.
b)
Figura 4.2. Autoclave para

esterilizar material por vía
húmeda.
El autoclave posee un manómetro

para poder controlar la presión
requerida, detrás de este se
encuentra una llave que libera
vapor para ajustes de presión.
Figura 4.3 Horno utilizado para la esterilización de material por vía seca.
CONCLUSIONES
 La esterilización es un método por el cual se mata a todos los

microorganismos sin dejar ni uno, es muy diferente a un procesos
de desinfección que reduce el número de microorganismos pero no
los elimina totalmente, esto es vital para los trabajos, estudios y
análisis, ya que habrá contaminación de muestras o medios de
estudio y así los resultados serán más exactos y veraces.
 Para evitar que una muestra o material no se contamine, esta debe

estar cerrada herméticamente y los microorganismos extraños no
deben tener contacto directo con estos de lo contrario
contaminaran los medios.

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2) Ejecutar con habilidad y destreza el acondicionamiento de materiales para el análisis

3) Justificar la importancia de los métodos de esterilización para el control microbiológico de los

II. MARCO TEÓRICO

2.1.- METODOS DE ESTERILIZACION POR CALOR

El calor actúa desnaturalizando y coagulando las proteínas.

2.1.1.- ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO

Se requiere temperaturas elevadas y un periodo más prolongado de calentamiento que la

En ausencia de agua, disminuye el número de grupos polares de la cadena peptídica y se

Se emplea el horno o estufa de esterilización, en la que se aplica una temperatura de 160-

2.1.2 ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO

El calor produce también una pérdida de la integridad funcional de la membrana y filtración

c) Vapor de agua con Presión. Se realiza en un autoclave a 15 libras de presión y 121ºC

c.1) Autoclave: es un equipo construido en acero inoxidable, de forma cilíndrica, paredes

♠ Caldera de material resistente, fondo cóncavo cubierta de una camisa metálica

2.2 ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

2.3 ESTERILIZACIÓN POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA

III. MATERIALES Y EQUIPO

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a) Preparación de tubos matraces

b) Preparación para proteger las pipetas

c) Preparación de las placas Petri

4.2 ESTERILIZACIÓN CON CALOR SECO

a) Procedimiento para la esterilización en horno

4.3 ESTERILIZACIÓN CON CALOR HÚMEDO

a) Procedimiento para la esterilización con autoclave

Figura 4.1 a) matraces y placas

Figura 4.2. Autoclave para

El autoclave posee un manómetro

 La esterilización es un método por el cual se mata a todos los

 Para evitar que una muestra o material no se contamine, esta debe

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