INFORME LABORATORIO UNISANGIL 2018

PREPARACION DE UN FROTIS, FIJACION Y TINCION BACTERIANA

ERIKA JULIETH CARREÑO SANDOVAL

FUNDACION UNIVERSITARIA DE SAN GIL
Correo: 1997erjks28@gmail.com

RESUMEN

En la realización de este laboratorio se desarrolló el procedimiento paso a paso de un frotis, con la

preparación de tinción simple y tinción compuesta de bacterias para análisis y respectivo
resultados; se preparó una muestra de secreción humana (sarro) y muestras con sustancias de
consumo humano (yogurt y vinagre ), se utilizó el microscopio como herramienta de
identificación bacteriana, con aprovechamiento de sus varias dimensiones para conseguir una
identificación de las bacterias, y también con la técnica de tinción ; se dejan apuntes y evidencias
fotográficas de lo visto.

ASTRACT
In the realization of this laboratory the step-by-step procedure of a smear was developed, with the
preparation of simple staining and compound staining of bacteria for analysis and respective results;
a sample of human secretion (tartar) and two samples with substances for human consumption
(yogurt and vinegar) were prepared, the microscope was used as a bacterial identification tool, with
use of its various dimensions to achieve an identification of the bacteria, they are left notes and
photographic evidence of the seen.

Palabras claves

Frotis, técnicas, microorganismo, procesos, bacterias.

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Introducción

En esta clase de procedimientos y procesos de la microbiología encontramos las diferentes técnicas

que se pueden utilizar para la identificación de cultivos bacterianos, pero como se hace difícil la
identificación de las bacteria, con solo la utilización del microscopio es necesario utilizar la técnica
tinción; que es el método de fijarlos y teñirlos en un frotis (4); el método de la tinción contribuye a
mejorar la imagen observada.

Las técnicas de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el
contraste (4), es por todo esto que en este informe de elaboración frotis hablaremos sobre las
diferentes técnicas que se elaboraron en la clase de laboratorio utilizando la tinción de frotis de
sarro simple y compuesto.

Objetivo General:

Como próximos ambientalistas debemos tener claro cuáles son las diferentes técnicas, procesos y
procedimientos de laboratorio enfocadas en el estudio de microorganismos de cultivo bacteriano
obtenidos en medios sólidos y líquidos y en su desarrollo.

Objetivos específicos:

Identificar las diferentes formas bacterianas, tener claro la preparación y desarrollo del proceso de
un frotis, la fijación y coloración más utilizadas.

Tener claro la identificación de las tinciones simples y compuestas en la caracterización

morfológica de estos microorganismos.

Marco retorico

Este marco nos ayuda a identificar y conocer más sobre los diferentes instrumentos para el
desarrollo de un frotis sarro utilizando una de las técnicas de tinción.

Conceptos

Un frotis consiste en la extensión de una muestra de fluido corporal (humano o animal) sobre
un portaobjetos para su análisis clínico.

Microscopio: Instrumento óptico para ampliar la imagen de objetos o seres, o de detalles de estos,
tan pequeños que no se pueden ver a simple vista; consta de un sistema de lentes de gran aumento.
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Técnica: Conjunto de procedimientos o recursos que se usan en un arte, en una ciencia o en una
actividad determinada, en especial cuando se adquieren por medio de su práctica y requieren
habilidad

Mechero de alcohol: Se utiliza cuando no se necesita un gran poder calorífico. Poseen una mecha
impregnada de alcohol, que es la que arde

Sarro: Es la placa bacteriana que se ha endurecido sobre sus dientes debido al depósito de minerales
sobre la placa bacteriana.

 Encontramos la técnica correcta para la elaboración de un frotis en la cual no dice cómo se

debe hacer:

Técnica:

El material biológico a examinar se extiende formando una capa muy fina sobre un portaobjetos. Se
fija al aire con calor o algún líquido especial, se somete a tinciones y generalmente se protege con
un cubreobjetos, lo que permite su estudio clínico mediante un microscopio.

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente
fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la
observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos
lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles
agrupaciones de células que pudiera haber. (5)

 Este informe también nos muestra las diferentes tipos de frotis que existen, en el que
nosotros elaboramos fue con (sarro) secreción humana.

Tipos de frotis: Sangre, secreciones exudado, aspirados, cultivos, etc.

Las tinciones

 Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una
composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de
forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno,
safranina) o no (nigrosina). (2).

El sarro dental

Es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido
principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias Junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias
saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos,
diplococos y bacilos. (6).
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Bacterias del yogurt

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial
se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas
bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y
el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar
dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos,
cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita
la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio. ( 2)

Metodología

Elaboración de Frotis tinción

MATERIALES:

1. Portaobjetos
2. Microscopio
3. Cubeta de tinción
4. Frasco lavador
5. Mechero
6. Papel filtro

REACTIVOS:

4. Cristal violeta
5. Lugol
6. Alcohol acetona
7. Safranina
8. Azul de metileno

Sustancias de investigación

1. Yogurt
2. Vinagre
3. Sarro
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Proceso Experimental

Tinción simple Bacteria Yogur:

1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos y etiquetarlos.

2. Los cultivos líquidos son colocados en el porta objetos, extender la suavemente en
un área circular y esterilizar el asa nuevamente.
3. Fijamos con metanol o xilol para eliminar parte de la grasa del yogurt
4. Pasamos el portaobjetos varias veces por el mechero para que este se fije.
5. Observamos en el microscopio
6. Observar al 40x
7. Añadimos un gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos y observamos al
100x
8.
Tinción compuesta

Con la misma muestra que de desarrollo anterior. Realizamos la tinción de Gram teniendo
en cuenta los siguientes pasos.

1. Añadimos a la muestra cristal violeta dejando 1 minuto.

2. Se removió el exceso de colorante agregando agua.
3. Agregamos lugol 1 minuto.
4. Lavar.
5. Descoloramos con alcohol o acetona hasta que la preparación deje de perder color
dejándolo actuar por 15 a 30 segundos.
6. Lo lavamos
7. Agregamos safranina dejando 1 minuto.
8. Lavamos
9. Dejamos secar la preparación
10. Finalmente observamos en el microscopio

Tinción simple bacteria del vinagre

1. Colocamos una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio

2. Tomar una muestra de vinagre y expandirla en el portaobjetos.
3. Dejamos secar y fijamos al calor
4. Se tiño con safranina dejándola en 15-30 segundos
5. Dejamos secar
6. Después flameamos la muestra pasando por la flama con mucha precaución de no
calentarla mucho.
7. Finalmente observamos en el microscopio al 10x y 40x.
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Tinción compuesta

1. Se realizó el mismo procedimiento que podemos observar en la muestra del yogurt.

Tinción simples bacteria del sarro

1. Colocar una gota de agua en un portaobjetos limpio

2. Agregar una muestra de sarro dental y expandirlo en el portaobjetos
3. Dejar secar y fijar a calor
4. Teñimos agregándole safranina dejando 15-30 segundos
5. Lavar el exceso de colorante
6. Dejamos secar
7. Esperamos a que el líquido se evapore acercando el portaobjetos a la flama con
cuidado de no romper las células
8. Observamos en el microscopio al objetivo 10x 40x y 100x
9. Por ultimo añadimos aceite de inmersión colocando el cubre objetos.
10. El enfoque 100 x no se realizó ya que el lente no captaba bien la imagen.
Tincion compuesta

1. Tinción Gram, mismo procedimiento que se realizó en las 2 muestras anteriores.

Resultados:

Bacterias del Yogurt Bacteria sarro Bacteria viangre

TINCION SIMPLE
En la muestra del sarro podemos
En la preparación del yogur en el TINCION SIMPLE
observar como abundan las bacterias
procedimiento de tención simple En la muestra del vinagre, en el objetivo 10 x
saprofitas, observando gran variedad
observamos la bacteria que las podemos decir mostrar que las baterías que se
de morfologías como son las
conforman la cuales son el coco que originan son aeróbicas, se tratan de bacilos rectos con
espiroquetas, cocobacilos, diplococos,
sus característica son como unos flagelos polares, todas ella son Gram negativas , son
y bacilos
puntitos de color morado oscuro que capaces de vivir en unas concentraciones de pH
se observa, diplococo se caracteriza ácidos, la principal bacteria que la origina es
por que sus punto son de mayor ACETOBACTER ACETI, y también
tamaños, y finalmente el estreptococo GLUCONOBACTER. observadas por el
se observa porque su caracteriza es microscopio.
alargada de color morado oscuro
observándolo a un enfoque de 40x,
estas pertenecen a la clasificación de
Gram positivas como en la imagen se
puede observar de color violeta.
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TINCION COMPUESTA
En esta preparación se pudieron
observar sus estructuras físicas de
cada bacteria, ya que en este tipo de
tinción tiene la capacidad de teñir
celular negativamente, ya que es un
colorante primario.

Análisis de resultados

La clave de las tinciones está en la fijación, y se debe hacer de forma cuidadosa para no dañar las
células.

Ser cuidadoso al retirar los excesos de tinta con el agua para que no se vea afectada la muestra.

Se encontraron bacterias (coco, diplococo) en el frotis de yogur .

Se encontraron bacterias en el frotis de sarro (espiroquetas, cocobacilos, diplococos) .

Se encontraron bacterias en el vinagre son aeróbicas, se tratan de bacilos rectos con flagelos
polares, todas ella son Gram negativas
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Conclusiones

 Se pudo reconocer la instrumentación requerida para la elaboración y desarrollo de procedimiento

de frotis de sarro.
 Se pudo entender y comprender el desarrollo de la técnica tinción para hallar un resultado
microbiano.
 Se comprende la diferencia entre la tinción simple y compuesta.

 Cuando utilizamos el lente del microorganismo podemos visualizar la placa bacteriana que se puede
encontrar en cualquier secreción del ser humano.

 Encontramos que existen varias clases de tinciones para el desarrollo del proceso frotis.

 Los lentes del microscopio nos permite visualizar las diferente y distintas estructuras,
reacciones, que provocan la elaboración de un frotis con las las secreciones (sarro) al aplicarle
sustancias

 Se pudo realizar correctamente el procedimiento de frotis (sarro dental).

 Se encontró microorganismos en el sarro.
 Como estudiantes podemos concluir que existen técnicas capaces de descubrir aquello que no se es
tangible y difícil al tacto.
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Referencia Bibliográfica

Se encontraron diferentes artículos, trabajos universitarios en los cuales me referencie para el

desarrollo del resumen.

1. CARREÑO, C. 2018. MANUAL PRÁCTICO DE LABORATORIO BIOLOGÍA

GENERAL. YOPAL, CASANARE. 34-41.

2. Laboratorio de Microbiologia: Observación de Bacterias

labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/observacion-de-bacterias.html

3. METODO DE ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS

aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/

4. Ricardo Vizuete, LABORATORIOS DE MICROBIOLOGIA,UNIVERSIDAD LATINA

FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE FARMACIA, 2014.

5. preparación de un frotis bacteriano por tinción simple - UV

https://www.uv.es/~jjmateo/microb/tincionsimple.do

6. CORTES J. (2003). PREPARACION DE UN FROTIS.TINCION SIMPLES. BACTERIAS

DENTAL. https://www.uv.es/~jjmateo/microb/tincionsimple.doc