Quispe Nina Olga Asuncion
Quispe Nina Olga Asuncion
Quispe Nina Olga Asuncion
TESIS
PRESENTADA POR:
PROMOCIÓN: 2014 - I
PUNO - PERÚ
2017
TESIS
PRESENTADA POR:
OLGA ASUNCIÓN QUISPE NINA
PRESIDENTE
PRIMER MIEMBRO
lng. M.Sc. Flor ntino V. CHOQUEHUANCA CÁCERES
PUNO - PERÚ
2017
Al Ing. Renzo Linares por contribuir y ser parte del presente trabajo de
investigación.
Agradezco la confianza y el apoyo brindado por parte de mis padres, por los
valores que me han inculcado y por su esfuerzo realizado para alcanzar mis
metas.
ÍNDICE DE TABLAS
ÍNDICE DE FIGURAS
ÍNDICE DE ANEXOS
ÍNDICE DE ABREVIATURAS
RESUMEN ............................................................................................................ 15
CAPÍTULO I .......................................................................................................... 16
INTRODUCCIÓN .................................................................................................. 16
CAPÍTULO II ......................................................................................................... 18
REVISIÓN DE LITERATURA ................................................................................ 18
2.1 Aspectos generales de ovinos ..................................................................... 18
CAPÍTULO IV ........................................................................................................ 55
RESULTADOS Y DISCUSIONES ......................................................................... 55
4.1 Resultados de la caracterización fisicoquímica y recuento microbiológico
de muestra inicial de la carne de ovino ...................................................... 55
CONCLUSIONES ................................................................................................. 84
RECOMENDACIONES ......................................................................................... 85
BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... 86
ANEXO ................................................................................................................. 93
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 15. Análisis de Varianza para la Variación total del color (E) .................. 94
Tabla 22. Resultados de variación total del color (E) en la carne de ovino ..... 100
Figura 8. Grafica de efectos principales para la variación total del color (E) ... 65
Figura 10. Gráfica de efectos principales para bacterias ácido lácticas .............. 67
Figura 16. Obtención de la velocidad de reacción (k) para n=0, a partir del
comportamiento del recuento de coliformes totales a través del
tiempo ................................................................................................ 76
Figura 17. Obtención de la velocidad de reacción (k) para n=1, a partir del
comportamiento del recuento de coliformes totales a través del
tiempo ................................................................................................ 77
Figura 20. Obtención de la velocidad de reacción (k) para n=1, a partir del
comportamiento del recuento de Pseudomona aeruginosa a través
del tiempo........................................................................................... 82
Aw Actividad de agua
Ea Energía de activación
g Gramos
L* Luminosidad
Log Logaritmo
min Minutos
ml Mililitros
N Normalidad de la solución
pH potencial de Hidrógeno
t Tiempo
T Temperatura
°C Grado Celsius
RESUMEN
15
CAPÍTULO I
INTRODUCCIÓN
16
mercado en el consumo de productos con ingredientes naturales. Las bacterias
ácido lácticas han sido utilizadas por muchos años como conservantes en la
industria de alimentos, ya que promueven la producción de sustancias
antimicrobianas como el ácido láctico, el etanol, el dióxido de carbono, y
sustancias proteicas denominadas bacteriocinas. Estas últimas se han utilizado
como bioconservantes en alimentos, ya que contribuyen favorablemente en la
preservación de éstos por su capacidad para inhibir el desarrollo de
microorganismos alterantes presentes en las materias primas, y que podrían
convertirse en la flora predominante de algunos productos fermentados. El
desarrollo de estos microorganismos ácido lácticos, y la ausencia de alterantes,
contribuyen favorablemente en la preservación de los alimentos permitiendo
reducir el uso de conservantes químicos y suavizar los tratamientos a los que
se someten los alimentos procesados, sin que esto afecte su calidad y
seguridad (Agudelo et al., 2015).
17
CAPÍTULO II
REVISIÓN DE LITERATURA
18
de embudo; las orejas son pequeñas, triangulares, ligeramente alargadas; tiene
patas cortas (Mujica, 2005).
REINO: Animal.
SUBREINO: Mamífero.
TIPO: Cordados.
CLASE: Mamíferos.
ORDEN: Ungulado.
SUBORDEN: Artiodáctilos (dedos en número par).
FAMILIA: Bóvidos.
SUBFAMILIA: Caprinae.
GÉNERO: Ovis.
ESPECIE: Ovis aries.
19
mayores cabezas de ovinos se encuentran Puno con 2,088,332, seguido de
Cusco con 1,251,524, Junín con 779,297, Ancash con 680,686, Huánuco con
706,006, Huancavelica con 640,242 y Ayacucho con 616,910, como las
principales regiones donde existe crianza de ovinos, estos departamentos
concentran el 71.0% de la crianza a nivel nacional.
20
cubiertas de pelo blanco, aunque a veces existen manchas negras. El peso
adulto de un carnero fluctúa entre 80 y 130 kg, presentando las hembras un
peso promedio mucho menor y que varía entre los 60 y 80 kg (Mujica, 2005).
2.3.1 La carne
22
Tabla 4. Composición química de 100 g de carne de ovino
23
elevadas. Estas condiciones de almacenamiento producen el crecimiento de
microorganismos que dan lugar al cambio de coloración, acompañada por la
presencia del limo superficial. Este problema es consecuencia directa de las
malas prácticas higiénicas y de las incorrectas condiciones de almacenamiento
de los productos (Pérez y Andújar, 2000).
24
departamentos con 17.5%. Todos estos departamentos concentran el 82.5% de
toda la producción nacional de carne de ovino (Muro, 2013).
25
reflejo de las condiciones medioambientales que rodean la carne y de la carga
microbiana presente en los distintos utensilios y superficies con que la carne
está en contacto, pudiendo ocurrir una contaminación cruzada durante su
procesamiento. También serán importantes las condiciones de almacenamiento
y las reacciones químicas que ocurran en la carne durante este período. La
velocidad de deterioro de la carne es mayor cuanto más alto sea el número
inicial de microorganismos, la temperatura de almacenamiento y la Aw de la
superficie de los tejidos (Delgado y Quartino, 2013).
Los microorganismos que alteran la carne, llegan a ella por infección del
animal vivo (contaminación endógena) o por invasión posmortem
(contaminación exógena). Aunque ambas son de gran importancia, la
alteración de la carne a consecuencia de la contaminación exógena es la más
frecuente, así el hombre puede sufrir graves infecciones o intoxicaciones por el
consumo de carne procedente de animales. Después del sacrificio y de la
evisceración del animal, la carne conserva las características microbianas
generales que tenía previo al sacrificio. La superficie del animal está
contaminada por microorganismos provenientes del suelo, el aire y el agua. Los
contaminantes comunes de las canales son bastones Gram negativos y
micrococos, incluidas Pseudomonas spp., Moraxella spp., Acinetobacter spp.,
Flavobacterium spp., entre otras. Adicionalmente pueden existir bacterias
productoras de ácido láctico, hongos, levaduras y virus entéricos en bajas
cantidades. La contaminación es muy variable y pueden incluirse algunos
microorganismos patógenos como Salmonella sp, Staphilococcus aureus,
Yersinia enterolitica/pseudotuberculosis, Campylobacter jejuni/coli, Listeria
monocytogenes, Escherichia coli, Bacillus cereus, Clostridium perfringens y
Clostridium botulinum, que provienen ya sea de la microflora intestinal o del
medio ambiente (Restrepo et al., 2001).
26
sean más favorables, generalmente solo es uno y rara vez más de tres, el o los
que se multiplican lo suficientemente rápido como para causar deterioro
(Mendoza, 2008).
Actividad de agua
pH
27
la mayor parte de las bacterias tienen su punto óptimo de crecimiento en pH
neutro (pH=7). Dependiendo de los cuidados antes del sacrificio del animal
(ayuno, estrés, descanso) y de las transformaciones subsecuentes. La
alteración de la carne se dará a mayor velocidad en cuanto más elevado sea el
pH. El ácido láctico formado en el proceso de trasformación de musculo a
carne, resultado de la quema de glucógeno influye decisivamente en el pH. Los
hongos se desenvuelven bien en valores de pH entre 2.0 y 8.0. Aunque se
reproducen mejor en un medio acido. Las levaduras tiene un buen desarrollo
en pH que oscila entre 4.0 y 4.5 pero su preferencia en un pH acido (Espinales,
2012).
28
microorganismos necesitan condiciones de reducción y otros de oxidación. Los
microorganismos aerobios se ven muy favorecidos por un alto potencial de
óxido reducción (reactividad oxidante), los potenciales bajos (reactividad
reductora) favorecen el crecimiento de los microorganismos anaerobios.
Después de la muerte del animal, el potencial redox va bajando paulatinamente
hasta que la masa cárnica en su interior se hace anaeróbica (Delgado y
Quartino, 2013).
Índice de Peróxidos
29
valor del peróxido puede indicar un potencial para la formación posterior de
descomposición con el tiempo. El valor de los peróxidos no debería ser
superior a 10 a 20 meq/Kg de grasa de muestra (Flores, 2012).
Humedad
30
Oxigeno
Estado Físico
31
homofermentativos y heterofermentativos, los primeros producen
exclusivamente ácido láctico, mientras que los segundos, producen además
ácido acético, etanol y dióxido de carbono. La actividad antimicrobiana de las
bacterias ácido lácticas ha sido atribuida a la acumulación de los productos
finales de los procesos de fermentación, como ácido láctico, dióxido de
carbono, peróxido de hidrógeno o a la producción de bacteriocinas (Martín del
Campo et al., 2008).
32
homofermentadores cuando originan ácido láctico y heterofermentadores al
producir ácido láctico, ácido acético, dióxido de carbono (CO2), etanol, ácido
fórmico o succínico. Los requerimientos nutricionales incluyen aminoácidos,
péptidos derivados de ácidos nucleicos, vitaminas, sales, ácidos grasos y
carbohidratos fermentables (Amorocho, 2011).
33
agentes químicos como los nitritos, los sulfitos o los ácidos propiónico, sórbico
y benzoico. De entre todas estas sustancias antimicrobianas cabe destacar a
las bacteriocinas, cuyo interés para la industria alimentaria se debe a que
inhiben a bacterias alterantes y patógenas resistentes a algunos métodos de
conservación tradicionales (como, por ejemplo, la refrigeración o la
acidificación). Además, son compuestos muy atractivos desde el punto de vista
tecnológico, dado que son efectivas a concentraciones muy bajas y no
modifican las características organolépticas del producto (Reviriego, 2009).
34
Los colores de los alimentos se deben a distintos compuestos,
principalmente orgánicos, algunos que se producen durante el manejo y
procesamiento y otros que son pigmentos naturales o colorantes sintéticos
añadidos. Las causas que definen la coloración de un alimento son los
siguientes: (1) la presencia de pigmentos o colorantes naturales, que son
sustancias que tienen una función biológica muy importante en el tejido, (2) la
formación de pigmentos colorantes como consecuencia de reacciones
químicas o enzimáticas, (3) la adición intencionada de sustancias químicas
colorantes para dar color y (4) el efecto físico de los sistemas fisicoquímicos
presentes en el alimento y relacionado con la dispersión de la luz (Retting y
Hen, 2014).
35
a) b) c)
Figura 1. Circulo Cromático: a) Tono, b) Saturación y c) Claridad
Los valores obtenidos por el equipo se dan en las coordenadas del espacio
CIELAB formado por un sistema cartesiano definido por tres coordenadas que
describen el color de un objeto. Así L* que indica luminosidad que va de negro
a blanco tomando valores de 0 - 100, a* significa un cambio de color rojo (+a*)
a verde (-a*) y b* un cambio de amarillo (+b*) a azul (-b*). Además de los
parámetros anteriormente descritos se encuentran dos parámetros adicionales,
ángulo de matiz (H*) y cromaticidad (C*), cuya similitud está íntimamente
relacionado con los parámetros a* y b*. El ángulo de matiz indica el tono o color
predominante y la cromaticidad (C*) indica la relación con la proporción del
color puro (Mora, 2014).
a) b)
Figura 2. a) Grafica de color CIELAB y b) el valor de L* se representa en el eje
central. Los ejes a* y b* aparecen sobre el plano horizontal
36
2.6 Envasado al vacío
El envasado al vacío consiste en la eliminación total del aire del interior del
envase sin que sea reemplazado por otro gas, existiendo una diferencia de
presión entre el exterior y el interior del envase. Esto inhibe consecuentemente
el crecimiento de algunos microorganismos alterantes, extendiendo la vida útil
del producto. La técnica del envasado de carne al vacío, ha significado un
avance importante en la conservación de este producto por un tiempo
prolongado. La función primordial del envasado de la carne y de los productos
cárnicos consiste en protegerlos de daños físicos, cambios químicos y de la
contaminación microbiana y presentar al consumidor de forma atractiva. El
envasado requiere con carácter esencial el conocimiento básico de la química y
de la biología de las carnes y sus productos, así como de las propiedades
físicas y químicas de los materiales de envasado. Debe tenerse en cuenta que
los envases sólo pueden retener, nunca mejorar la calidad del producto
envasado (Delgado y Quartino, 2013).
37
envasado al vacío y está directamente relacionado con la extensión de la vida
útil de la carne. Un envase de calidad debe cumplir con ciertas exigencias
como, alta resistencia a las perforaciones y buenas propiedades de sellado con
el propósito de mantener la impermeabilidad a los gases, produciendo una
reducción en la concentración de oxigeno residual al interior del envase,
producto del vacío (Hernández, 2013).
Para poder evaluar el tiempo de vida útil será necesario definir un indicador
de calidad. Este indicador varía en función del tiempo y puede ser medido a
38
través de pruebas fisicoquímicas, microbiológicas y sensoriales del alimento. El
estudio de la vida útil se basa en la evaluación de la calidad del indicador en
función del tiempo. El tiempo que demora el indicador al llegar al límite critico
es lo que se conoce como tiempo de vida útil. Pasado ese tiempo el alimento
se le considera deteriorado o no apto para el consumo. El indicador y su límite
crítico dependen de la naturaleza y composición del alimento y la normativa
sanitaria vigente (Alvarez, 2011).
(1)
39
constante universal de los gases). Usualmente, la velocidad de reacción se
determina a tres o más temperaturas y K sé grafica contra 1/T en papel
semilogarítmico o se emplea un ajuste por regresión lineal de la ecuación.
(Ci,Ej) (2)
kQn (3)
40
reacción es de orden cero, por lo tanto si en la ecuación anterior (3) se hace
n=0, tendremos:
(4)
Q0 –kt (5)
tu = Q0 – Qf (7)
K
2.7.2.2 Reacción de primer orden
(8)
Integrando se obtiene:
(9)
41
Donde Q es la cantidad de atributo que queda en el tiempo t.
(10)
(11)
(12)
(13)
42
2.8.1 Bacterias acido lácticas
2.8.2 Coliformes
43
hombre y de los animales, pero también en otros ambientes: suelo, plantas,
etc. Aunque su especificidad como indicadores no es buena, se suelen usar
como índice de contaminación fecal por su frecuencia en heces, su fácil
detección en laboratorio, y sus características semejantes, en algún aspecto, a
las de algunos miembros patógenos de la familia Enterobacteriaceae. Dentro
de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado sanitario, y
por consiguiente, los que más interesan en el análisis microbiológico de los
alimentos. Los Coliformes pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se
caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con producción de
ácido y gas, más o menos rápidamente, en un período de 48 horas y con una
temperatura de incubación comprendida entre 30 y 37°C (Delgado y Quartino,
2013).
No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como
indicadores de contaminación. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales
que comprende la totalidad del grupo y los coliformes fecales aquellos de
origen intestinal. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es el
Escherichia coli (Sueiro, 2001).
2.8.3. Pseudomonas
44
CAPÍTULO III
MATERIALES Y MÉTODOS
Glucosa
El insumo glucosa fue adquirida de la especería “Agroindustrias Puno” de
la ciudad de Puno.
3.3.3 Reactivos
Agua destilada
Solución valorada de Hidróxido de Sodio (NaOH) 0.1 N
Hipoclorito de sodio
Solución de fenolftaleína 1%
46
Agar Cetrimide, dosis 45.3 g / 1 Litro (autoclave 15°C - 121°C), pH: 7.4 ±
0.2 a 35°C.
47
3.4.1 Metodología para la evaluación de la conservación de carne de ovino
Corriedale con bacterias acido lácticas envasado al vacío
MATERIA PRIMA
RECEPCIÓN
LAVADO
INOCULACIÓN
ALMACENAMIENTO
Tiempo: 1, 2, 3, 4 y 5 días
48
DESCRIPCIÓN DE PROCESO
a) MATERIA PRIMA
Se utilizó carne de ovino de raza Corriedale adquirida de la provincia de Melgar
–departamento de Puno.
b) RECEPCIÓN
La carne fue envasada en un envase impermeable hasta su traslado al
laboratorio para evitar la contaminación en el trayecto.
c) LAVADO
La carne fue lavada con agua potable para eliminar restos de impurezas que
pudieron impregnarse a la carne.
d) OREO
La carne se dejó en reposo por un tiempo de 30 minutos con la finalidad de
eliminar agua de la superficie.
e) CORTADO
La carne se cortó en muestras de 10 gramos.
g) INOCULACIÓN
La inoculación se realizó en una solución de agua pasteurizada con glucosa y
cepas liofilizadas de bacterias ácido lácticas homofermentativas por un tiempo
de 30 minutos.
h) ENVASADO
La carne fue envasada con el equipo empacadora al vacío en bolsas de
polietileno de alta densidad.
i) ALMACENAMIENTO
El producto fue almacenado 5°C, 15°C y 25°C durante 5 días.
49
Luego se procedió a realizar el análisis de las propiedades fisicoquímicas
(acidez, pH y variación total del color) y recuento microbiológico (bacterias
ácido lácticas, coliformes totales y Pseudomona aeruginosa).
(14)
(15)
Donde:
t: Tiempo
50
3.5 Variables de estudio y variables de respuesta
Acidez titulable (% )
pH (0 -14)
Variación total del color (ΔE)
Bacterias ácido lácticas (ufc/g)
Coliformes totales (ufc/g)
Pseudomona aeruginosa (ufc/g)
51
3.6 Métodos de análisis
3.6.1 Análisis fisicoquímico
3.6.1.1 Determinación de la acidez titulable
Se siguió lo descrito por Merma (2014), primeramente se licuó 5 g de
muestra con 45 ml de agua destilada. Luego se tomó una alícuota de 9 ml al
cual se añadió 3 gotas de fenolftaleína como indicador. En seguida se procedió
a homogenizar. Finalmente se tituló con NaOH de 0.1 N, hasta que la muestra
presente un color rosado fucsia. Para el cálculo de la acidez titulable se aplicó
la siguiente formula:
Dónde:
√
52
3.6.2 Análisis microbiológico
3.6.2.1 Determinación de bacterias ácido lácticas
Se siguió la metodología de Flores (2012). Se pesó 5 g de muestra de
carne con 45 ml de agua destilada y se procedió a licuar por 2 minutos, esta
dilución representa 10-1. De la primera dilución se tomó una alícuota de 1 ml y
esta se colocó en un tubo de ensayo de 9 ml de agua destilada obteniendo la
dilución 10-2 y se procedió hasta obtener la dilución 10-5. De cada dilución se
pipeteó una alícuota de 1 ml y se sembró de placas Petri contenido con agar
MRS. Luego las placas Petri se llevaron a la estufa a 35°C por 48 horas.
Finalmente transcurrido este periodo se procedió a contar las colonias
formadas con el equipo cuenta colonias.
53
3.7 Diseño de la investigación
Modelo:
Donde:
Y = Variable de respuesta.
54
CAPÍTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIONES
ANÁLISIS RESULTADOS
pH 5.88
Acidez 0.20%
Color L*=37.0 , a*= 12.5, b*= 4.0,
Fuente: Elaboración propia
55
(2001) quien encontró en carne de cordero lechales Machengo, L*=46.62,
a*=13.40 y b*=6.26 y Desdémona et al. (2012) quienes encontraron en carne
de ovino L*=41.10, a*=9.14 y b*=7.62. Cano et al. (2003), estudiaron las
características de calidad de la canal de cordero de raza Segureña de 90 días
de edad y encontraron a 24 horas post morten en el corte Longissimus. dorsi
L*= 39.93, a*=12.65, b*=2.91. Estas variaciones encontradas en la
determinación de color puede ser atribuido a la proporción, distribución y
estado químico en que se encuentre la mioglobina, pigmento proteínico que
proporciona el color rojo característico. Por otro lado el consumidor en general
prefiere una carne de color rojo brillante (oximioglobina) mientras rechaza el
color apagado o pardo (metamioglobina).
56
mientras que la coordenada b* dependería más de los diferentes estados en
que ese pigmento se encuentra (oximioglobina y metamioglobina) (Benzzo,
2005).
ANÁLISIS RESULTADOS
Bacterias ácido lácticas 320 ufc/g
Coliformes totales 0 ufc/g
Pseudomona aeruginosa 0 ufc/g
Fuente: Elaboración propia
57
101 ufc/g de coliformes totales en carne de ovino. En el presente estudio
realizado, la no presencia de estos microorganismos patógenos puede deberse
a que la muestra evaluada era estéril (inocua) ya que se trabajó con la parte
interior del musculo como lo señalan Schobitz et al. (1990). Por otro lado
Hernández et al. (2011) indican que la contaminación microbiana proviene de
varias fuentes como puede ser por el agua, instalaciones, equipamiento y
personal de manipulación.
58
temperatura de almacenamiento, cantidad de las reservas de glucógeno en las
muestras, cepas de bacterias ácido lácticas (puro o mixto) y sus cantidades
adicionas a las muestras.
Por otro lado Signorini (2007) señala que el ácido láctico es el principal
metabolito producido por las bacterias ácido lácticas (BAL) homofermentativas
y ha sido utilizado como agente sanitizante en carnes, con el objetivo de
incrementar la seguridad de estos alimentos. El empleo de este ácido orgánico
puede reducir la población de microorganismos alterantes y generar menores
tasas de crecimiento de microorganismos patógenos como Escherichia coli,
Campylobacter jejuni, Clostridium botulinum, Listeria monocytogenes y
Salmonella spp. Este ácido ha sido usado para estos fines, debido a que es un
constituyente natural de la carne post-rigor y es una sustancia aceptada como
segura (GRAS).
0.38
0.34
Acidez
0.3
0.26
0.22
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
59
De la misma forma se puede apreciar de mejor forma estos resultados en
la superficie de respuesta en la Figura 5, donde se observa un incremento con
respecto a la temperatura y un incremento gradual con respecto a la
concentración de bacterias ácido lácticas, encontrándose el valor optimo
equivalente a 0.411382% de ácido láctico a una temperatura de 25°C y una
concentración de 0.05% de bacterias ácido lácticas. Este efecto puede ser
atribuido a que a mayor temperatura hay un mayor desarrollo de bacterias
acido lácticas por tanto el desarrollo de la acidez es mayor.
Acidez
0.14-0.19
0.19-0.24
0.24-0.29
0.55 0.29-0.34
0.34-0.39
0.45 0.39-0.44
0.44-0.49
Acidez
0.49-0.54
0.35 0.54-0.59
0.59-0.64
0.25
0.05
0.15 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
60
donde observaron una disminución del pH con respecto a la temperatura. Y
como resultado obtuvieron a 4°C a las 96 horas las muestras inoculadas
presentaron 5.54 y en el testigo 6.3. Mientras que a 20°C en muestras
inoculadas encontraron 4.79 y en testigo 5.98. Se puede apreciar del presente
estudio realizado y del autor antes mencionado que a menores temperaturas el
pH es alto y a mayores temperaturas el pH en más bajo. Este efecto puede ser
atribuido a la temperatura de almacenamiento, debido a que a mayor
temperatura el crecimiento de bacterias ácido lácticas es mayor y por tanto
producen mayor nivel de acidez lo que hace que las muestras disminuyan su
valor de pH.
61
muestras en condiciones de anaerobiosis (envasado al vacío) predominan las
bacterias acido lácticas creando un medio acido es decir disminuyendo el pH.
5.9
5.8
5.7
pH
5.6
5.5
5.4
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
62
mayor temperatura hay un mayor desarrollo de bacterias acido lácticas las
cuales acidifican el medio disminuyendo el pH.
pH
5.0-5.1
5.1-5.2
5.2-5.3
6 5.3-5.4
5.4-5.5
5.8 5.5-5.6
5.6-5.7
5.6 5.7-5.8
pH
5.8-5.9
5.4
5.9-6.0
5.2
0.05
5 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
63
significativo. Este efecto puede ser atribuido por diversos factores como la
temperatura, presencia de oxígeno, pH de la carne, corte de musculo,
presencia de microorganismos y tiempo de almacenamiento. A mayor
temperatura el producto se deteriora, porque hay un mayor desarrollo de
microorganismos patógenos quienes deterioran el color del producto
convirtiéndolos inaceptables. Asimismo Mateauda (2013) menciona que el color
de la carne fresca está determinado por la proporción y distribución de la
mioglobina, pigmento proteínico que proporciona el color rojo característico.
También señala que el color es un importante indicador de calidad de la carne
dado que durante el almacenamiento ocurren cambios visibles en la superficie
del musculo.
Por otro lado Mata (1999) menciona que el color es una de las
características más importantes de la carne ya que es el principal atributo que
juzga el consumidor antes de comprar cualquier producto cárnico. Los
pigmentos hemoglobina, mioglobina y hemoglobina hemática son proteínas
sarcoplasmicas que pueden encontrarse en distintos estados semiestables en
la carne y van a ser los principales responsables de la coloración final de la
carne.
64
siempre es total. También señala que el color de la carne se aclara lentamente,
a medida que transcurre el tiempo. Estos cambios pueden deberse a la
presencia de microorganismos que producto de su metabolismo forman nuevas
interacciones con la mioglobina, cambiando el color de la carne.
ΔE
Gráfica de Efectos Principales para E
11.1
9.1
7.1
E
ΔE
5.1
3.1
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
Figura 8. Grafica de efectos principales para la variación total del color (E)
EΔE
-1.0-0.8
0.8-2.6
2.6-4.4
17 4.4-6.2
14 6.2-8.0
8.0-9.8
11 9.8-11.6
11.6-13.4
8
ΔE
E
13.4-15.2
5 15.2-17.0
2
0.05
-1 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
65
Con los resultados obtenidos en la Tabla 22 del Anexo 2, se realizó el
análisis de varianza (ANOVA) en la Tabla 15 del Anexo 1, en donde se aprecia
que la temperatura y concentración de bacterias ácido lácticas afectaron
significativamente.
66
obtenidos en el presente estudio y del autor antes mencionado se aprecia que
a mayor concentración se obtiene mayor número de bacterias ácido lácticas
que a menor concentración. Este efecto puede ser atribuido a la concentración
utilizada de bacterias ácido lácticas en las muestras ya que a una mayor
concentración de bacterias ácido lácticas hay un mayor desarrollo. Al respecto
Zamora (2003) afirma que las bacterias ácido lácticas forman parte de la
microbiota inicial de muchos alimentos y no existe ninguna indicación de que
representa un riesgo para la salud del consumidor y son consideradas como
seguras. Además se sabe que pueden tener un efecto positivo en la salud del
consumidor.
Por otro lado, Gómez (2013) indica que las sustancias antimicrobianas
producidas por las bacterias lácticas, las bacteriocinas son las más
interesantes tecnológicamente para la bioconservación de los alimentos ya que
por su naturaleza proteica podría ser degradada por las enzimas proteolíticas
del tracto gastrointestinal mientras que permanecen activas en los sustratos
alimenticios. Del mismo modo Vásquez et al. (2009) mencionan que las
bacteriocinas se inactivan al menos por un enzima proteolítica de origen
pancreático (tripsina y alfa quimiotripsina) y gástrico (pepsina), característica
que hace de estos metabolitos bacterianos, sustancias seguras para ser
incluidas como biopreservantes de los alimentos, puesto que serían inactivadas
durante su paso por el tracto gastrointestinal sin ser absorbidos como
compuestos activos y sin causar por tanto los riesgos.
(X 100000)
41
31
Bacterias acido lacticas
21
11
-9
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
67
De la misma forma se puede apreciar de mejor forma estos resultados en
la superficie de respuesta en la Figura 11, donde se observa un incremento con
respecto a la temperatura y un incremento gradual con respecto a la
concentración de bacterias acido lácticas, encontrándose un valor optimo
equivalente a 5.83934 x 106 ufc/g a una temperatura de 25°C y concentración
de 0.05% de bacterias ácido lácticas. Este efecto puede ser atribuido a que a
mayor temperatura el desarrollo de bacterias ácido lácticas es mayor debido a
que se convierten en la flora predomínate en condiciones del envasado al
vacío.
Superficie de Respuesta Estimada
23 1.E7-1.3E7
1.3E7-1.6E7
18 1.6E7-1.9E7
1.9E7-2.2E7
13 2.2E7-2.5E7
8 2.5E7-2.8E7
3
0.05
-2 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
68
mantiene en nivel bajo, además el efecto más influyente en el recuento de
coliformes totales fue la temperatura seguido por la concentración de bacterias
ácido lácticas. Este efecto puede ser influenciado por diversos factores como;
la carga inicial, temperatura, presencia de oxígeno y tiempo de
almacenamiento. A temperaturas superiores a la refrigeración hay proliferación
de coliformes totales, mientras que a temperaturas bajas su crecimiento es
lento. Asimismo una mayor concentración de bacterias ácido lácticas afecta el
desarrollo de coliformes totales retardando su crecimiento.
(X 1000)
11
9
Coliformes totales
-1
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
69
De la misma forma se puede apreciar de mejor forma estos resultados en
la superficie de respuesta en la Figura 13, donde se observa un incremento con
respecto a la temperatura y una disminución gradual con respecto a la
concentración de bacterias ácido lácticas, encontrándose un valor óptimo de
915.54 ufc/g de coliformes totales a una temperatura de 7.58°C y una
concentración de 0.03% de bacterias ácido lácticas. Este efecto puede ser
atribuido a que a mayor temperatura y días de almacenamiento el desarrollo de
coliformes totales es mayor debido a que estas condiciones son favorables
para su desarrollo. Mientras que a mayor concentración de bacterias ácido
lácticas su desarrollo es lento debido a que se convierten en una barrera.
Coliformes totales
-4000.0-4000.0
4000.0-12000.0
(X 1000) 12000.0-20000.0
56 20000.0-28000.0
28000.0-36000.0
Coliformes totales
46
36000.0-44000.0
36 44000.0-52000.0
52000.0-60000.0
26 60000.0-68000.0
16 68000.0-76000.0
6
0.05
-4 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
70
línea con pendiente negativa lo que indica que hay un mayor desarrollo de
Peudomona aeruginosa cuando se mantiene en el nivel bajo, además el factor
más influyente fue la temperatura seguido por la concentración de bacterias
ácido lácticas. Este efecto puede ser debido a que temperaturas superiores a la
refrigeración favorecen a la proliferación de Pseudomona aeruginosa, mientras
que a temperaturas bajas con adición de bacterias ácido lácticas su crecimiento
es lento. El crecimiento de Pseudomonas es lento a temperatura bajas junto
con el envasado al vacío ya que hay una disponibilidad limitada de oxígeno
como lo afirman Mendoza (2008) y Puentes (2004). En condiciones de
refrigeración el crecimiento de microorganismos patógenos es inhibido ya que
las bacterias ácido lácticas se trasforman en el componente dominante de la
flora microbiana durante el almacenamiento de la carne.
Por otro lado Delgado y Quartino (2013) mencionan que la formación del
limo y la producción de malos olores se detectan cuando la población alcanza
un valor de 107 ufc/g. También indica que las Pseudomonas son una de las
principales responsables de la alteración de productos cárnicos almacenados
incorrectamente en condiciones de aerobiosis.
71
no encontraron presencia de Pseudomonas hasta los 30 días y posterior a ello
observaron un crecimiento gradual hasta obtener a los 120 días 2.33 log ufc/g
de Pseudomonas. Los resultados obtenidos del presente estudio y de los
autores antes mencionados se aprecia que a mayor tiempo de almacenamiento
su desarrollo se incrementa. Este efecto puede ser atribuido al tiempo de
almacenamiento, cuanto mayor sea la prolongación del tiempo mayor será su
desarrollo.
9400
Pseudomona aeruginosa
7400
5400
3400
1400
-600
5 25 0 0.050
Temperatura Concentracion
72
equivalente a 686.71 ufc/g de Pseudomona aeruginosa a una temperatura de
10.69 °C y una concentración de 0.05% de bacterias ácido lácticas. Este efecto
puede ser atribuido a que a mayor temperatura el desarrollo de Pseudomona
aeruginosa es mayor debido a que estas condiciones son favorables para su
desarrollo. Mientras que a mayor concentración de bacterias acido lácticas su
desarrollo es lento debido a que se convierten en una barrera.
Pseudomona aeruginosa
-3000.0-2000.0
2000.0-7000.0
(X 1000) 7000.0-12000.0
47
Pseudomona aeruginosa
12000.0-17000.0
17000.0-22000.0
37 22000.0-27000.0
27000.0-32000.0
27 32000.0-37000.0
37000.0-42000.0
17
42000.0-47000.0
7
0.05
-3 0.04
0.03
0 0.02
5 10 0.01
15 20 25 0 Concentracion
Temperatura
73
concentración de bacterias ácido lácticas presentó mayor tiempo de vida útil
como: a 0.000% se logró obtener 12.80 días, mientras con 0.025% se logró
alcanzar 16.71 días y con 0.050% 18.48 días.
De este trabajo se puede resaltar que la mayor vida útil (18.48 días) en
carne de ovino en función a coliformes totales es con una concentración de
0.050% de bacterias ácido lácticas a una temperatura de 5°C. Este resultado
es mayor a comparación con los estudios realizados por otros autores quienes
trabajaron en función a coliformes y Pseudomonas como de Flores, et al.
(2011) quienes determinaron la vida útil en carne de res picada empacada al
vacío obteniendo una vida útil de 14 días a una temperatura de 5°C. De la
misma forma Mendoza (2008) encontró una vida útil de 16 días a temperatura
de 4°C para carne de conejo empacada al vacío. Sin embargo nuestro
resultado obtenido es menor comparado con Puentes (2004) quien en carne de
res con pH de 5.8 – 6.1, envasado al vacío obtuvo una vida útil de 28 días
almacenada a 4°C. De la misma forma Delgado y Quartino (2013) evaluaron el
comportamiento microbiológico de cortes de bovinos envasado al vacío a
temperaturas de refrigeración de 0°C en donde encontraron que hasta el día 90
los recuentos totales de microorganismos como coliformes y Pseudomonas
eran inferiores de los límites de aceptación. Las diferencias encontradas en la
determinación de vida útil por autores mencionados, puede ser debido a
diferentes factores como: la temperatura, pH, Aw, carga microbiana inicial,
74
especie de animal, tipo de corte, edad del animal y condiciones de envasado
así como el envasado al vacío.
75
a) 0.000% Bacterias Acido Lácticas
5.5
5 y = 0.6907x + 1.4901
Colifromes Totales (log)
4.5 R² = 0.9412
4 y = 0.6335x + 0.8954
3.5 R² = 0.9671
5°C
3
2.5 15°C
1
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
3.7 R² = 0.9572
4 R² = 0.9244
3.5
y = 0.4662x + 1.1061
3 5°C
R² = 0.9039
2.5 15°C
2 25°C
y = 0.1623x + 1.6229
1.5
R² = 0.9534
1
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
Figura 16. Obtención de la velocidad de reacción (k) para n=0, a partir del
comportamiento del recuento de coliformes totales a través del
tiempo
76
a) 0.000% Bacterias Acido Lácticas
1.8
1.6 y = 0.187x + 0.6859
Ln Coliformes Totales 1.4 R² = 0.9205
y = 0.1832x + 0.4881
R² = 0.982
1.2
5°C
1
15°C
0.8
25°C
0.6 y = 0.0949x + 0.5301
R² = 0.984
0.4
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
1.2
y = 0.1437x + 0.5561
1 5°C
R² = 0.9292
15°C
0.8
y = 0.0773x + 0.535 25°C
0.6
R² = 0.9943
0.4
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
1.2
y = 0.1642x + 0.4217
1 5°C
R² = 0.85
15°C
0.8
y = 0.0709x + 0.5353 25°C
0.6 R² = 0.9603
0.4
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
Figura 17. Obtención de la velocidad de reacción (k) para n=1, a partir del
comportamiento del recuento de coliformes totales a través del
tiempo
77
a) 0.000% Bacterias Acido Lácticas
0
0.00330 0.00335 0.00340 0.00345 0.00350 0.00355 0.00360 0.00365
-1 y = -2841.9x + 7.9611
R² = 0.7892
-1.5
-2
-2.5
1/T
-0.5
-1
y = -3156x + 8.86
-1.5 R² = 0.8924
-2
-2.5
-3
1/T
-0.5
-1 y = -3324.7x + 9.4326
R² = 0.6965
-1.5
-2
-2.5
-3
1/T
78
Tabla 12. Valores de k y tiempos de vida útil de carne de ovino envasado
al vacío en función a valores de Pseudomona aeruginosa
2
VALORES DE K Y R TIEMPO DE
CONCENTRACION
TEMPERATURA VIDA (días)
DE BACTERIAS
(°C) K1 R
2
K2 R
2
K1 K2
LACTICAS (%)
5 0.3010 0.95 0.127 2 0.94 13.29 11.23
0.000% 15 0.4263 0.90 0.1436 0.81 9.38 9.07
25 0.6776 0.96 0.1925 0.96 5.90 7.44
5 0.2567 0.91 0.1112 0.90 16.21 12.85
0.025% 15 0.3937 0.90 0.1373 0.86 10.16 9.48
25 0.6837 0.94 0.2004 0.94 5.84 7.14
5 0.2029 0.92 0.0960 0.82 19.71 15.02
0.050% 15 0.4095 0.91 0.1452 0.76 9.77 9.92
25 0.6705 0.93 0.2018 0.93 5.97 6.73
79
animal, microorganismos en estudio, referencia de normas, temperaturas
sometidas, tipo de envase.
Por otro lado Mateauda (2013) indica que uno de los parámetros
fundamentales para asegurar la vida útil de la carne fresca es la temperatura
de refrigeración ya que tiene un efecto directo en la velocidad de crecimiento
microbiano el cual es acumulativo en el tiempo. Del mismo modo señala que
para tener éxito en la extensión de la vida útil de la carne al vacío y lograr un
almacenamiento de ocho a más semanas, la temperatura de la carne deberá
ser más cercana a los 0°C. Además los animales antes del sacrificio no deben
haber estado sometidos a ningún tipo de estrés y el enfriamiento post morten
debe haber sido adecuado.
80
ajuste de regresión lineal para cada temperatura y concentración, las cuales
fueron útiles para determinar la vida útil de la carne de ovino envasado al vacío.
4 R² = 0.9581
3.5 y = 0.4263x + 1.1615
R² = 0.9033
3 5°C
2.5 15°C
2 y = 0.301x + 1.2155
25°C
1.5 R² = 0.9512
1
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
4 y = 0.6837x + 1.0041
Pseudomonas (log)
R² = 0.9389
3.5
y = 0.3937x + 1.2141
3 R² = 0.9082
5°C
2.5
15°C
2 y = 0.2567x + 1.3365 25°C
1.5 R² = 0.9127
1
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
3.5 R² = 0.9281
y = 0.4095x + 1.0689
3 R² = 0.9073
5°C
2.5
15°C
2 y = 0.2029x + 1.4868 25°C
1.5 R² = 0.9242
1
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
1.4
y = 0.2018x + 0.4609
Ln Pseudomonas
R² = 0.9317
1.2 y = 0.1452x + 0.4057
R² = 0.7585
1 5°C
0.8 15°C
25°C
0.6 y = 0.0906x + 0.4663
R² = 0.8186
0.4
1 2 3 4 5
Tiempo de almacenamiento (dias)
82
a) 0.000% Bacterias Acido Lácticas
0
0.00330 0.00335 0.00340 0.00345 0.00350 0.00355 0.00360 0.00365
-1
y = -1709.1x + 4.0527
R² = 0.9364
-1.5
-2
-2.5
1/T
b)
0.025% Bacterias Acido Lacticas
0
0.00330 0.00335 0.00340 0.00345 0.00350 0.00355 0.00360 0.00365
Ln constante de velocidad (k)
-0.5
-1
y = -2433.2x + 6.5213
R² = 0.967
-1.5
-2
-2.5
1/T
-0.5
-1
y = -3326.1x + 9.5752
R² = 0.9932
-1.5
-2
-2.5
1/T
83
CONCLUSIONES
84
RECOMENDACIONES
85
BIBLIOGRAFÍA
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Sueiro, R. (2001). Evaluation of Coli-ID and MUG Plus media for recovering
Escherichia coli and other coliform bacteria from groundwater samples.
Water Science and Technology, 43, 213-216.
92
ANEXO
93
Tabla 15. Análisis de Varianza para la Variación total del color (E)
94
Tabla 17. Análisis de Varianza para Coliformes totales
95
Anexo 2. Resultados de análisis fisicoquímicos y recuento microbiológico en
carne de ovino envasado al vacío
Bact.
T °C DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3 DÍA 4 DÍA 5
Lact.
96
Tabla 20. Resultados del análisis de pH en la carne de ovino
Bact.
T °C DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3 DÍA 4 DÍA 5
Lact.
97
Tabla 21. Resultados del análisis de parámetros de color en la carne de ovino
DÍA 1 DÍA 2 DÍA 3
T °C Bact.
Lac. L a* b* C H L a* b* C H L a* b* C H
5°C 0.000% 37.4 14.3 4.7 15.0 18.2 38.5 10.4 6.4 12.2 31.8 39.9 11.5 5.9 12.9 26.8
5°C 0.025%
37.0 13.0 3.6 13.5 15.0 38.9 11.0 5.8 12.5 27.6 38.2 13.9 5.0 14.9 18.0
5°C 0.050%
37.0 12.3 3.5 12.7 15.6 37.2 10.9 5.2 12.1 25.5 38.8 12.9 3.6 13.7 15.7
15°C 0.000%
40.7 9.9 4.5 10.8 24.0 41.1 11.8 8.8 14.8 37.3 42.1 9.7 1.1 9.8 7.1
15°C 0.025%
39.6 12.8 5.8 14.0 24.1 42.6 12.1 2.9 12.4 13.6 40.4 12.7 2.9 13.1 15.3
15°C 0.050%
38.8 11.0 3.5 11.5 17.6 41.0 12.8 1.8 12.9 7.8 41.7 10.5 6.4 12.4 29.9
25°C 0.000%
43.4 12.0 6.2 13.5 27.0 46.6 8.2 6.1 10.2 36.8 45.4 11.1 2.2 11.3 15.2
25°C 0.025%
43.3 10.0 4.3 10.9 23.2 45.2 7.2 4.5 9.0 36.2 46.1 12.7 3.7 13.5 19.2
25°C 0.050% 43.0 13.4 1.8 13.5 7.3 45.0 13.0 1.2 13.1 5.3 46.0 12.8 2.8 13.3 15.2
15°C 0.025% 40.0 9.9 6.2 11.7 32.1 41.1 13.3 4.8 14.1 19.8 42.1 14.3 5.1 15.2 19.6
15°C 0.025% 40.1 11.8 2.8 12.1 13.3 41.8 12.1 5.9 13.2 26.0 42.9 12.7 3.4 13.1 15.0
15°C 0.025% 40.5 12.6 3.0 13.0 13.4 41.8 13.8 3.1 14.1 12.7 42.5 7.6 5.4 9.23 35.4
15°C 0.025% 40.6 13.4 7.1 14.2 27.9 42.1 13.7 3.0 14.0 12.4 41.1 7.2 7.8 10.6 47.3
15°C 0.025% 40.5 12.0 5.7 13.3 25.4 41.6 15.8 5.7 16.8 19.8 42.6 13.5 6.2 14.9 24.7
98
DÍA 4 DÍA 5
T °C Bact.
Lact.
L a* b* C H L a* b* C H
5°C 0.000% 39.5 12.3 7.6 14.4 31.9 39.6 14.2 8.0 16.3 39.5
5°C 0.025% 39.4 14.0 3.5 14.6 13.7 39.4 8.8 3.9 9.7 39.4
5°C 0.050% 39.2 12.7 3.9 13.2 16.9 39.0 13.7 2.8 13.9 39.2
15°C 0.000% 43.9 12.6 9.3 15.6 36.7 45.8 12.1 11.5 17.2 43.9
15°C 0.025% 43.8 14.7 3.6 15.5 15.3 44.9 12.3 6.8 14.2 43.8
15°C 0.050% 43.2 17.0 2.9 17.3 9.7 44.5 14.2 4.4 15.2 43.2
25°C 0.000% 48.6 12.6 7.3 14.6 29.1 52.1 11.0 7.5 13.9 48.6
25°C 0.025% 47.3 12.8 6.2 14.2 26.4 51.1 10.6 6.4 12.8 47.3
25°C 0.050% 47.7 12.7 2.3 12.9 11.3 50.4 11.5 6.9 13.6 47.7
15°C 0.025% 43.9 9.0 4.5 20.4 26.6 45.1 16.7 5.0 17.4 16.7
15°C 0.025% 44.9 19.8 6.1 30.4 17.1 43.0 12.2 11.7 16.9 43.8
15°C 0.025% 43.4 13.5 8.9 25.8 33.4 44.5 14.1 6.8 15.7 25.7
15°C 0.025% 43.0 14.6 6.7 25.9 24.7 44.3 10.9 5.4 12.2 26.4
15°C 0.025% 42.9 12.4 8.7 24.7 35.1 44.4 18.3 5.6 19.1 17.0
99
Tabla 22. Resultados de variación total del color (E) en la carne de ovino
100
Tabla 23. Resultados del recuento de Bacterias acido lácticas (ufc/g) en la
carne de ovino
101
Tabla 24. Resultados del recuento de coliformes totales (ufc/g) en la carne
de ovino
102
Tabla 25. Resultados del recuento de Pseudomona aeruginosa (ufc/g) en
la carne de ovino
103
GALERÍA DE FOTOS
104
Imagen 5. Plaqueado de agares Imagen 8. Siembra de las muestras en
placa
105