Electroforesis

Autor: KROSCHWITZ Jacqueline, Townshend Alan
Fecha de publicación:
Fecha de consulta: 08/10/2019
Título: Electroforesis
URL: https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6798/mod_resource/content/0/Electroforesis.pdf
ELECTROFORESIS
La electroforesis separa partículas en base al movimiento inducido por un campo eléctrico. El campo
eléctrico resulta en la aplicación de una fuerza sobre las partículas que es proporcional a su carga o
potencial de superficie. La fuerza resultante induce una velocidad diferente en las distintas
macromoléculas.
El estudio del movimiento electroforético se enfoca en el potencial eléctrico en la superficie de la

macromolécula, y la relación de ese potencial con la velocidad del objeto en el campo eléctrico. El
potencial de superficie está causado por la interacción de la superficie de la molécula con el medio
que la rodea. Una separación de carga entre una capa delgada en la superficie de la partícula y otra
capa delgada en el medio alrededor de ella resulta de una interface entre las dos superficies. Esta
separación de carga resulta a su vez en una cierta densidad de carga en cada capa y en consecuencia
en un potencial eléctrico entre capas. El campo eléctrico aplicado a la matriz actúa sobre esta densidad
de carga. Así, las moléculas de la muestra y del solvente se moverán en direcciones opuestas debido
a las cargas diferentes. Las macromoléculas pueden separarse también en base a la carga. Esto es
posible debido a que cuanto más grande sea una molécula mayor será su superficie y también el
potencial de superficie.
En la electroforesis en capilares deben ser tenidos en cuenta otros fenómenos, en especial el flujo
electroosmótico. La electroósmosis se da cuando el fluido migra con respecto a la carga inmovilizada,
en tanto que la electroforesis se da cuando la partícula migra con respecto al fluido. El flujo
electroosmótico generalmente esta minimizado en una matriz de polímero como un gel, pero es
significativa en canales abiertos como los capilares.
Tipos de análisis electroforético.

Los diferentes tipos de análisis pueden ser distinguidos por las propiedades físicas de la muestra que
se van a emplear para su separación o por el tipo de matriz usada. Los cuatro tipos básicos que se
fundamentan en diferentes propiedades físicas son: límite móvil (moving boundary), zona,
isoelectroenfoque e isotacoforesis.
Límite móvil (Moving Boundary)
En este método la muestra se coloca en una solución buffer en un tubo con forma de U. Se aplica un
campo eléctrico por medio de electrodos sumergidos en cada extremo del tubo. Las partículas de la
muestra pueden entonces migrar en relación al campo eléctrico. Este método usa solamente la carga
de la partícula y el potencial z resultante cuando la muestra se encuentra en contacto con el buffer. La
dirección y velocidad de migración está determinada por la movilidad electroforética de cada
componente. Una desventaja de este método es que la mayoría de los componentes no se separan
limpiamente sino que se superponen.
Electroforesis de zona
Este método es parecido al de límite de movilidad dado que cada componente migra de acuerdo con
su propia movilidad. La gran diferencia es que se realiza sobre un medio soporte para lograr la
completa separación de cada componente. Otra de las diferencias es que la muestra es aplicada en
una banda angosta o zona. En la electroforesis de zona los componentes son aplicados en una banda
angosta rodeada por buffer. Se aplica un campo eléctrico y cada banda migra con una velocidad
característica determinada por su movilidad electroforética. Cada componente se separa de su vecino
para formar una zona pura.
Este método da una rápida idea de la cantidad de componentes que tiene una mezcla biológica.
Isoelectroenfoque
El isoelectroenfoque separa componentes usando un gradiente de pH. El gradiente va desde un pH
bajo en el ánodo hasta un pH alto en el cátodo. Cuando se aplica un campo eléctrico la muestra migra
según su carga hasta que encuentra un pH igual a su punto isoeléctrico, donde la carga neta es 0 y
en consecuencia se detiene. La clave del método es lograr un buen gradiente de pH. Es un método
que lleva bastante tiempo, dado que cuanto más se acercan los componentes a su ph más lentamente
migran (poseen menos carga).
Agarosa
La agarosa es apropiada para electroforesis porque es prácticamente neutra. La agarosa
adopta una estructura tridimensional de doble hélice cuya cavidad central es suficientemente
grande como para acomodar agua. La agarosa es muy fácil de trabajar porque no necesita
de un entrecruzante u otros agregados para formar la matriz y es barata. La electroforesis en
agarosa se puede combinar con la transferencia de Southern, PCR, y fluorescencia.

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