LIPASAS

Drs. Alcántara y Sinisterra

Biotransformations Group
Faculty of Pharmacy
Universidad Complutense
www.biotransformaciones.com

Liasas, transferasas
e isomerasas

Células aisladas Enzimas aisladas

K. Faber,
Biotransformations in Organic Chemistry, 5th ed, 2004

LIPASAS
Lipasas (acilglicerolhidrolasas E.C.3.1.1.3): actúan como catalizadores en reacciones lipolíticas (catabolismo
de grasas y aceites) a través de la hidrólisis de los enlaces éster de acilgliceroles.

Son activas únicamente adsorbidas sobre una interfase oleo-acuosa, “activación interfacial.”

Características comunes de las lipasas con otras serin-hidrolasas:

1. Centro activo: tríada catalítica (Ser-His-Asp ó Glu)

2. Hueco oxianiónico: estabiliza el intermedio tetraédrico formado durante la catálisis enzimática a través de
la formación de puentes de hidrógeno.

1
LIPASAS E.C. 3.1.1.1

Lipasas no específicas.- hidrolizan todas las posiciones del triglicérido: Staphilococcus aureus,
Candida rugosa

Lipasa 1,3-específicas .- conducen a 2- acil – monoglicéridos : Rhizopus arrhizus

Lipasa 2-específicas.- conducen a 1,3-diacilgliceridos : Geotrichum candidum

Catalizan la hidrólisis de esteres insolubles en agua, mediante una activación interfacial

Modelo de Verger de activación

Interfacial de las lipasas

TIPO DE LIPASA

K. Faber,
Biotransformations in Organic Chemistry, 5th ed, 2004

Reconocimiento de alcoholes quirales

R2

OH O O
HO OH R1 O O R3
2 2
1 3 O 1 3 O

sn-glicerol sn-Triglicérido

HO H

m
Regla de Kazlauskas L
(J. Org. Chem., 1991, 56, 2656)

Alcoholes secundarios

2
 ENANTIÓMERO RECONOCIDO

K. Faber,
Biotransformations in Organic Chemistry, 5th ed, 2004

Residuos de aminoácidos en 11 lipasas mostrando la tríada catalítica, en el Hueco

Oxianiónico (en cursiva) y el sitio de unión propuesto (cursiva).

Secuencia de consenso
cercana de la Ser Asp/Glu Hueco
Lipasa His catalítica
nucleofila Catalítico Oxianiónico
Gly-X-Ser-X-Gly
-Gly85-His86-Ser87-Gln88-
CVL, PCL -His285-Leu286- -Asp263- -Gly16-Leu17-
Gly89-
-Gly142-His143-Ser144-
RML -His257-Leu258- -Asp203- -Gly81-Ser82-
Leu145-Gly146-
-Gly144-His145-Ser146-
HLL -His258-Leu259-
His258 Leu259 Asp201
-Asp201- -Gly82-Ser83-
Gly82 Ser83
L 147 Gl 148
Leu147-Gly148-
-Gly143-His144-Ser145-
PcamL -His259-Ile260- -Asp199- -Gly83-Ser84-
Leu146-Gly147-
-Gly143-His144-Ser145-
ROL -His257-Leu258- -Asp204- -Gly82-Thr83-
Leu146-Gly147-
-Gly150-His151-Ser152-
PPL -His263-Leu264- -Asp176- -Gly76-Phe77-
Leu153-Gly154-
Thr103-Trp104-Ser105-
CAL-B -His224-Ala225- -Asp187- -Gly39-Thr40-
Gln106-Gly107-
-Gly207-Glu208-Ser209-
CRL (lip1) -His449-Ser450-c -Glu341- -Gly123-Gly124-
Ala210-Gly211-
-Gly215-Glu216-Ser217-
GCL (lip II) -His463-Gly464- -Glu354- -Gly131-Ala132-
Ala218-Gly219-

MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS LIPASAS

O
O
H H
N N
N N
H H
NH HN NH HN
His O His O

O O
O O Ser O O H Ser
H O O
N Asp N N H
Asp H N
HN
- O
R2O C O
HN O (Glu)
(Glu) HN O
HN O
R2O INTERMEDIO
O C O O
TETRAÉDRICO #1
R1
HN
R1 HN
HO H2O
C O
R2O O
C O
O
R1 R OH
2

R1

O
O
H
N H
N N
H N
NH HN H
NH HN
His O
His O

O
O
O O H Ser
O O Ser
O
Asp N N H O
Asp H N N
- HN O
HO C O
(Glu) HN
HN O (Glu) O
HN O C O
O R1 H O
O
HN
R1
INTERMEDIO H HN

TETRAÉDRICO #2 ENZIMA ACILADA

O
O

3
 3. Tapadera:
Elemento estructural diferenciador de las lipasas.
Formada por una porción helicoidal anfipática.
Se coloca sobre el centro activo de la enzima cuando está inactiva.
Existen dos conformaciones:
Conformación cerrada o inactiva (medio acuoso)
Estructura 3D de la RML Conformación abierta (en interfase o medio orgánico)

Excepciones:
Lipasas de Pseudomonas glumae, Pseudomonas
aeruginosa y Candida antarctica B, fosfolipasas
pancreáticas A2, y la cutinasa de Fusarium solani
carecen de tapadera.
Lipasas pancreáticas de nutria y de cobaya:
tapadera sin activación interfacial.
Lipasa de Staphylococcus hycius: activación
interfacial sólo con algunos sustratos.

Representación 3D de la lipasa de Candida rugosa (CRL)

Triada Catalítica:

Ser209, His449, Glu341

Modelo de reconocimiento de alcoholes primarios

His ............. O His............. O His ............. O His ............. O

H H H M
M M H
L M L L L

a. Esquema general b. Permutación H/O c. Permutación M/L d. Permutación M/H

HO
m H OH
H

m
Alcoholes primarios
L
L

4
 Reconocimiento de ácidos quirales
Clasificación de las lipasas según la geometría del centro activo (Pleiss, Chem. Phys. Lipids, 1998, 93, 67):

1. en forma de cueva (lipasas de Rhizomucor y Rhizopus).

2. en forma de embudo (lipasas de Candida antarctica,

Pseudomonas y páncreas de mamífero y cutinasa). RML: 18 Å de longitud, 4,5 Å de
3. en forma de túnel (la lipasa de Candida rugosa). anchura en la base, y 6 Å en la superficie
de la proteína. La parte donde se localiza
la tapadera tiene una altura de 12 Å, y al
otro lado tiene una altura de 8 Å

A B C

Representación del centro activo de las lipasas de Rhizomucor miehei y Candida CRL: 22 Å de largo con un diámetro
rugosa. (A) Orientación lateral donde los residuos se encuentran perpendiculares a la
figura y se indican por una línea continua; (B) Forma del centro activo desde una visión de aproximadamente 4 Å.
frontal; (C) Forma del centro activo visto desde arriba.

Zona de reconocimiento del ácido de la RML

Ser 144 (catalítica)

Zona de reconocimiento del ácido de la CRL Ser 209 (catalítica)

5
 Phe296

Botta, Biochim. Biophys. Acta, 1997, 1337,

302.
Manetti, Biochim. Biophys. Acta, 2000, 1543,
146.

Phe296

Superposición de los centros de reconocimiento de los

ácidos arilpropiónicos de las lipasas de RML y CRL

Phe296

Modelo cinético de resolución de una mezcla racémica

Relación de velocidades. Medida de la enantioseletividad

=E

6
 Reacciones catalizadas por lipasas

HIDRÓLISIS DE ESTERES
O O
lipasa, H2O SÍNTESIS DE AMIDAS
R1 OR2 + HOR2
R1 OH O O
lipasa
+ H2NR3 + HOR2
ESTERIFICACIÓN R1 OR2 R1 NHR3
O O
lipasa
+ HOR2 SÍNTESIS DE TIOESTERES
R1 OH R1 OR2
O O
TRANSESTERIFICACIÓN lipasa
+ HSR3 + HOR2
((ALCOHOLISIS)) R1 OR2 R1 SR3
O O
lipasa
+ HOR3 + HOR2 SÍNTESIS DE PEROXIESTERES
R1 OR2 R1 OR3
O O
lipasa
ACIDOLISIS + HOOR3 + HOR2
O O O O R1 OR2 R1 OOR3
lipasa
R1 OR2 + R3 OH R3 OR2
+
R1 OH

INTERESTERIFICACIÓN
O O O O
lipasa
R1 OR2 + R3 OR4 R1 OR4
+
R3 OR2

Resolución Cinética de racematos con lipasas

Resolución cinética de compuestos quirales a través de una estrategía hidrolítica:
Hidrólisis de ésteres racémicos con el estereocentro en la zona del alcohol (sustratos tipo I).

R1 O O
lipasa, H2O R1 R2
R2 C O R3 R2 C OH + R3 C O R3
H H H

Hidrólisis de ésteres racémicos con el estereocentro en el grupo ácido (sustratos tipo II).

R1 R3 R3
lipasa, H2O R1 R2
O OH + R C C O
R2 C C R2 C C 1
O O H O
H H

Resolución cinética de compuestos quirales a través de transferencia de acilo.

O
R2 lipasa O
R2 R2
G R3
R1 C OH R1 C O R3 + R1 C OH
disolv.orgánico H H
H

R2 R3
lipasa HO R3 R2 R1
OH OH R C C O
R1 C C R1 C C + 1
H O O O
disolv.orgánico H H

APLICACIONES
lipasa de O
Rh. miehei
OH R
3
O Lipozyme IM20
OH O R3 HO
R1 R2
+ 4 1 2 + 1 2 +
O R disolvente orgánico R R R R R4
(R,S) (S) (R)
R1= Ph-, Bn-, 1-naftil, 2-naftil.
R2= Me-, Et-, Pr-.
R3= Me-, Et-, Pr-, Ph-, O
4
R = H-,
H Me-
M R4
lipasa de O
Rh. miehei
OH Me O OH O Me
Lipozyme IM20
Ph Me
+ i
+
O H Pr2O Ph Me Ph Me
(R,S) (S) (R)
REACCIÓN TEST
A. R. Alcántara y cols I. E. De Fuentes
Chem. Phys. Lipids, 1998, 93, 169 Tesis Doctoral, UCM, 2002

7
 FACTORES QUE DEBEN CONTROLARSE

1. VARIABLES CONTÍNUAS
1 
R OH DISOLVENTE
R2 (logP)
RELACIÓN AW
MOLAR
O
TEMPERATURA
R3 Nu
AGITACIÓN

2. VARIABLES DISCRETAS
ESTRUCTURA DEL ALCOHOL, DEL DONADOR DE
ACILO, PUREZA DE LA PREPARACIÓN ENZIMÁTICA,
NATURALEZA DEL SOPORTE

LIPASA DE Candida rugosa

MEZCLA DE ISOFORMAS. 7 GENES
Lotti y cols. Protein Eng., 7, 531-537, 1994.
Brocca y cols. Current. Genet., 28, 454-457, 1995.

CARACTERIZADAS: Lip1- Lip5

Lotti y Alberghina. Eng. of/with lipases. Ed. K. Academic. 1996.

Lipasa P.M. (Da) pI Puntos de glicosilación Secuencia N-terminal

Lip1 57223 4,5 291, 314, 351 APTA T LANGDTITGLNAI I NE
Lip2 57744 4,9 351 APTA T LANGDTITGLNAI V NE
Lip3 57291 5,1 291, 314, 351 APTA K LANGDTITGLNAI I NE
Lip4 57051 5,7 351 APTA T LANGDTITGLNAI I NE
Lip5 56957 5,5 314, 351 APTA T LANGDTITGLNAI I NE

ESTRUCTURA DE LA Lip1

CERRADA ABIERTA

TAPADERA

8
 INHIBICIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE
LIPASAS POR EFECTO DEL GLICEROL

Candida rugosa:
fermentación con aceite
de oliva

del Río y cols. Biotechnology Letters, 12, 835-838. 1990

LIPASAS COMERCIALES vs LIPASAS

UNIV. AUTÓNOMA BARCELONA

Isoformas
Inductor/ Fuente
Lipasa Procedencia
de Carbono Lip1 Lip2 Lip3
Sigma Comercial ¿? 73 ± 5 8 ± 1 19 ± 2
Roche Comercial ¿? 66 ± 5 13 ± 2 21 ± 2
UAB-II Fed-Batch Q baja Ácido Oleico --- 56 ± 5 44 ± 5
UAB-III Fed-batch Q baja Ácido Oleico --- 56 ± 5 44 ± 5
UAB-IV Fed-batch Q alta Ácido Oleico 33 ± 3 40 ± 4 27 ± 3

Dominguez de Maria et aCurrent Organic Chemistry : 10(10), :1053- :1066 ( 2006)

9
 ELECTROFORESIS SDS
SDS--PAGE

kDa 1.- Comercial Sigma

88-- 2.- Comercial Roche
60-- 3.- Ácido Oleico (0,5 %)
4.- Aceite de oliva (0,2 %)
4.
5.- Aceite de girasol (0,2 %)
43--
6.- 1-Dodecanol (0,2 %)
7.- Glicerol (0,2 %)
1 2 3 4 5 6 7

Intervalo: 57-62 kDa

Dominguez de Maria et aCurrent Organic Chemistry : 10(10), :1053- :1066 ( 2006)

ANÁLISIS DENSITOMÉTRICO

Lipasa de Sigma Lipasa de Roche

1.00

Lip1
1.00
Lip1
0.80 0.80

Lip3
Lip3
Proporción (%)

Proporción (%)

0.60 0.60

0.40 0.40 Lip2

Lip2
0.20 0.20

60.1 58.4 53.3 48.6 45.9 60.1 58.4 53.3 48.6 45.9
0.00 0.00
Peso Molecular (kDa) Peso Molecular (kDa)

Dominguez de Maria et aCurrent Organic Chemistry : 10(10), :1053- :1066 ( 2006)

10
 APLICACIÓN PRÁCTICA
Los beta-bloqueantes constituyen el grupo más importante dentro de los fármacos adrenérgicos.
utilizados en el tratamiento de: hipertensión
arritmias
angina de pecho
ciertos tipos de ansiedad.
Una familia de estos compuestos, muy vendidos, presentan estructura de ariloxiamino-propanol,
v.g.:Sumial, atenolol etc.

OH H
O 
N
Ar

con un centro estereogénico, de forma que la actividad biológica en los tratamientos mencionados
reside fundamentalmente en el enantiómero S presentando el isómero R efectos secundarios
indeseables en algunas ocasiones.
Dentro de este grupo de fármacos, el propranolol (1-isopropilamino-3(1-naftoxi)-2-
propanol) se considera el compuesto de referencia. Se ha comprobado que la actividad beta-
bloqueante de su isómero S es 100 veces superior a la del isómero R. Es más, el isómero R presenta
un efecto secundario como contraceptivo masculino.

OBJETIVO:
OH H Optimizar un proceso quimioenzimático de obtención
O  N de sintones quirales para obtener estos compuestos
Ar
enantioméricamente puros.
METODOLOGÍA:
Ar nombre
1.- Síntesis de los intermedios racémicos de estructura de
halohidrina.
propranolol O
1) OH
Cl ,
N O Cl
Ar-OH Ar
2) HCl (1h, 0-5ºC)
atenolol
2.- Resolución cinética de los racematos empleando
una lipasa OH
R2 O
pindolol O (R) Cl
OH Ar
O R1
N O Cl R-1
H Ar lipasa +
1 disolvente orgánico O
Ar = 1-naftilo,1a
oxprenolol O R1
2-naftilo,1b
o-tolilo, 1c O (S) Cl
O Ar
p-tolilo, 1d
S-2
I. Borreguero.Tesis Doctoral, UCM, 1999. R1 = Me, Et, Pr, -CH2Cl, -(CH2)10CH3
R2 = H, Me

1.- Síntesis de los intermedios racémicos de estructura de halohidrina 1

O N OH O
Ar-OH + Cl O Cl + Ar O
a Ar
b

HCl (0-5ºC)
(0 5ºC)

Ar = 1-naftilo, t = 46 h, conversión > 99%, rendimiento > 90%

Ar = 2-naftilo, t = 26 h, conversión > 99%, rendimiento > 90%
Ar = o-tolilo, t = 72 h, conversión > 99%, rendimiento > 90%
Ar = p-tolilo, t = 120 h, conversión > 99%, rendimiento > 90%

11
 2.- Resolución cinética de los racematos de 1 empleando una lipasa
O
O
1
OH OH O R
O +
O Cl O Cl O Cl
(R) (S)
lipasa
1 disolv. orgánico R-1 S-2

Conversion (%)
60
CONDICIONES ESTANDAR: SUSTRATO 1a,
AGENTE ACILANTE = ACETATO DE VINILO 50
(R1 = Me, R2 = H), RELACIÓN MOLAR 1/3, Lipozyme IM20

DISOLVENTE = iso-OCTANO, 40
HLL

T = 30ºC PPL

30
X Pto.1 ee1 ee3
CAT. mg t (h) Pto.1 Eb EFc
(%) 3 (%) (%)
20
R-(-
HLL 106 547 30 S-(+) >99 32 >100 0.73
) 10
R-(-
PPL 106 817 8 S-(+) 65 3 5 0.36
) 0
R-(- 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
IM20 15 340 53 S-(+) >99 78 >100 0.71 Tiempo (h)
)

2.3.- Condiciones optimizadas

O
O
OH OH O
O O Cl +
O Cl (R) O Cl
(S)
Lipozyme IM20
1a isooctano R-1a S-2a
T = 37ºC, t = 4 h
conversión = 55%, ee1 > 99%, E = 27

OH OH H
O Cl O N
(R) (S)

NH2 PROPRANOLOL
R-1a

Synthesis of nuleoside prodrugs

CH3 CH3
O O

N N NH
NH
H 3C N
N N NH 2 N NH 2
HO O
O O O
H H H H
H H H H
OH OH OH OH
Vinyl acetate
Candida antarct ica lipase

99% yield

Anti-leukaemic produg- Glxaxo-SmithKline

Raso & Voss Appl.Ctatal. A: Chemical 221,145-158(2001)

12
 Reacciones catalizadas por lipasas

HIDRÓLISIS DE ESTERES
O O
lipasa, H2O SÍNTESIS DE AMIDAS
R1 OR2 + HOR2
R1 OH O O
lipasa
+ H2NR3 + HOR2
ESTERIFICACIÓN R1 OR2 R1 NHR3
O O
lipasa
+ HOR2 SÍNTESIS DE TIOESTERES
R1 OH R1 OR2
O O
TRANSESTERIFICACIÓN lipasa
+ HSR3 + HOR2
((ALCOHOLISIS)) R1 OR2 R1 SR3
O O
lipasa
+ HOR3 + HOR2 SÍNTESIS DE PEROXIESTERES
R1 OR2 R1 OR3
O O
lipasa
ACIDOLISIS + HOOR3 + HOR2
O O O O R1 OR2 R1 OOR3
lipasa
R1 OR2 + R3 OH R3 OR2
+
R1 OH

INTERESTERIFICACIÓN
O O O O
lipasa
R1 OR2 + R3 OR4 R1 OR4
+
R3 OR2

Ejemplos de procesos estereoselectivos

K. Faber, Biotransformations in Organic Chemistry, 5th ed, 2004

Proceso regioselectivo

13
14
 Reconocimiento de alcoholes quirales
R2

OH O O
HO OH R1 O O R3
2 2
1 3 O 1 3 O

sn-glicerol sn-Triglicérido

HO H

m
Regla de Kazlauskas L
(J. Org. Chem., 1991, 56, 2656)

Alcoholes secundarios

Chemoenzymatic synthesis of (-)Paroxetine (Serotonine reuptake inhibitor)

F F
F F
E>100
O
O
OH O R'
OH CALB-B O
R'COOR" R' CAL-B

+
10eq H 2 O N
N N N
Organic solvent Org. solvent R
R R
R

(3R,4S) (3S,4R)

R= Cbz, Boc, Alloc

F
R’= Me
R R”=
R vinyl,i
vinyl i-propenyl
propenyl, Et N C(CH3)2
Et, -N=C(CH
R’= Ph R”= vinyl O

O O

N
H

(-) Paroxetine

Gotor-Fernandez et al. J.Mol.Catal.B: Enzymatic 2006,40,111-120

Chemoenzymatic synthesis of S (+) Zopliclone (hypnotic drug with similar

pharmacological profile that benzodiazepines)
S- isomer is more active and less toxic than R- counterpart
O
R
O Cl O
N O
N
N Cl
N N Cl
N
OH N N
O
O
O
R
spontaneous in situ
racemization ROH/CAL-B
O O
N N
N Cl N Cl
N N N N
O O
O O
O N-methylpiperazine N
R S-(+)Zopliclone
N
30% yield, E>100 CH3

Gotor-Fernandez et al. J.Mol.Catal.B: Enzymatic 2006,40,111-120

15
Chemoenzymatic synthesis of the analgesic U-50,488

N-acylation catalyzed by lipases

CH3
O
1.- CAL-B, EtOAc NH NHcBZ
NH 2 NH 2
+ +
N N N
N
2- Cbz-Cl
(1S,2S) trans
Trans
(1R,2R) trans

CH2 Cl
O
NH Cl

N
U-50,488

Gonzalez-Sabin et al. Chem.Eur.J. 2004,10,5788-5794

16
Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis

The process is equivalent to the esters hydrolysis/synthesis due to the nucleophilic

characteristics of the nitrogen

Gotor-Fernandez Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

Regioselective process

Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis

Chemoselective process

Ammonolysis is performed in ammonia

saturated t BuOH

Regioselective process Gotor-Fernandez .- Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

17
Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of chiral amines
Application to the synthesis of both enantiomers of Amphetamines

The synthesis is performed with ethyl acetate as acyl donor and as solvent

Gonzalez-Sabin et al. Tetrahedron Asymmetry 13,1315-1320 (2002)

Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of chiral amines

Resolution of cis- & trans-2-phenylcyclopentaneamines

(lactanamides).- hypoglycemis activity

Trans- antidepresant
Gonzalez-sabin et al. Terahedron:Asymmetry 15,481-488(2004)

Kinetic resolution using 1-butyl-2,3-dimethylimidazolium trifluormethane sulphonate

And CALB B.-Irinescu & Kato Tetrahedron Let.. 45,523-525(2004)
Gotor-Fernandez & Gotor Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of diamines

Azamacrocycles

The synthesis involves two two biocatalytic steps.

In both cases the enzyme shows a clear R-enantiopreference
Therefore the R,R- stereomer is achieved with 98% e.e. and 30% total yield.

Gotor-Fernandez Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

18
Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of diamines

Sequential kinetic resolution mechanism of trans- cyclohexane-1,2-diamine

Gotor-Fernandez & Gotor Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of diamines

Synthesis of key synthon for the preparation of 1S,2S- U-50,488. Analgesic

E= 170

Lipase-catalyzed aminolysis & ammonolysis: Resolution of aminoalcohols

Due to the intrinsic activity of lipases

OH is better substrate than NH2

Therefore the reaction can only take place

after chemical N-protection of amino group

Gotor-Fernandez & Gotor Current Org. Chem. 10,1125-1143(2006)

19
 RESOLUCIÓN DE ÉSTERES
RACÉMICOS
O O

lipasa
O H2N NH

(R,S) R oS

RESOLUCIÓN DE AMINAS RACÉMICAS

H
CH3
N
NH2
O H
lipasa
O

O
(R,S)
R

NH2

H
CH3

REACCIÓN DEL BUTILCARBONATO DE

VINILO CON LA p-CLORO-1-
FENILETILAMINA

O NH2

Lipasa (%) Conv. a % ee b O O

CRL 28 90
R
NOV 435
NOV-435 34 99 R = OCH3, Cl
LIPASA
SP523 0 n. d. 72h 25ºC
HEXANO
SP525 17 99
PS 0 n. d.
O N
a
Calculado por HPLC. b Determinado por 1H-RMN
H
R

20
21
 KR OPTIMISATION
CHANGING FROM VYNIL ACETATE TO VINYL BUTYRATE:
Better work up (better separation) but the oposite enantiopreference was observed
O

OH O OH

TEMPERATURE EFFECTS:
O R
Lipase
+ R O
THF +
O O O

Conv. time eep

After 4 hours at Acyl donor T (h) E
(%) (%)
50ºC there is
some enzyme Vinyl acetate r. t. 50 30 >99 > 200
deactivation
Vinyl butyrate r.t. 45 24 >99 > 200

Vinyl butyrate 37ºC 49 24 >99 > 200

Best experimental
conditions. Vinyl acetate 50ºC 49 4 >99 > 200

Vinyl butyrate 50ºC 50 4 >99 > 200

Hoyos, P.; Hernandez, M.; Sinisterra, J. V.; Alcantara, A. R., Dynamic kinetic resolution of benzoins by lipase-metal combo
catalysis. Journal of Organic Chemistry 2006, 71, (20), 7632-7637.

64

Lipase Dynamic Kinetic Resolution

Resolution??

OH
Ar
Ar
O O

?
Ar DYNAMIC KINETIC RESOLUTION
Ar Max. Theoretical yield = 50%

O O

OH O R
Ar Ar 100%
Ar Ar
( R) ( S)
O O
65

Lipase Dynamic Kinetic Resolution

SHVO’S CATALYST
It is widely described
O O
for DKR of alcohols Ph
H Ph

Pelliser Tetrahedron 2008,64,1563-1601 Ph Ph

Persson et al. J.A.C.S. 1999, 121, 1645- Ph Ph

Ru Ru
1650
Ph H CO Ph
OC
OC OC

Activation

by temperature

Shvo et el. J.Am.Chem.Soc 1986,108,7400

66

22
 Sequential Dynamic Kinetic Resolution
1. Vinyl butyrate evaporation
2. Add: thrifluoroethyl butyrate New enzyme
OH
Shvo’s catalyst addition
Lipase
O
100
O
KR
90
O 90
step 1

80
O 80 step 3
OH
+ O step 2 70
70
Concentration ((mM)

O
( )

O
Conversion
C i 92%
60
60
O
DKR CF 3 50

eep > 99%

50

40
O
t = 48h
40

O 30
30

20
O 20

10 10

0 0
Hoyos, et al. Journal of Organic Chemistry
0 6 12 18 24 30 36 42
2006, 71, (20), 7632-7637. t (h)

68

23
 De castro et al. Tetrahedron: Asymmetry 1997,8, pp 857-8

HIDRÓLISIS DE DIHIDROPIRIDINAS
PROQUIRALES EMPLEANDO LA LIPASA B DE C.
antarctica
Z Z

O O O O O O O 8 X = H, Z = H
C. antarctica 9 X = H, Z = NO
2
HO O O 20 X = CH
2OCH3, Z = H
O O O O
21 X = CH
2OCH3, Z = NO

N N Z = H, NO2
X X
R

Producto T (ºC) t (h) %PP a % PF b [] ee% c Configuración d

20 4 26 15 21 -26,25 54 R
20 23 3,75 10 45 -17,1 80 R
8 23 5,5 60 30 -24,21 86 R
8 23 11,5 46 16 -12,35 60 R
21 23 3,75 34 25 -5,37 50 R
9 23 10,5 6 19 -5,53 90 R
a
Producto de partida aislado. b Monoéster aislado por cromatografía. c exceso enantiomérico
del monoéster aislado. d Configuración del monoéster mayoritario

24